孔雀石绿ELISA

ELISA试剂盒法值得推广的孔雀石绿、结晶紫类物质检测法王莹【摘要】@@ 孔雀石绿(Malachite Green,MG),结晶紫(Crystal Violet,CV)作为杀真菌剂和消毒剂被广泛应用于水产养殖.【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2010(000)002【总页数】3页(P31-33)【作者】王莹【作者单位】北京华安麦科生物技术有限公司【正文语种】中文孔雀石绿（Malachite Green,MG）、结晶紫（Crystal Violet,CV）作为杀真菌剂和消毒剂被广泛应用于水产养殖。

其被鱼体吸收后，会代谢为危害更大的隐性孔雀石绿（LMG）和隐性结晶紫（LCV），并沉积于脂肪组织，对人畜具有致畸、致癌和致突变的影响，因而在许多国家已被禁用，如欧盟、美国已宣布禁止其在经济鱼类（观赏鱼除外）养殖过程中使用；我国质检总局、国家标准委则共同发布实施了GB/T 19857—2005《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》国家标准；韩国孔雀石绿、结晶紫的限量标准为2μg/kg。

鉴于隐性孔雀石绿和隐性结晶紫危害更大，因而同时检测孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫更为科学。

目前，检测水产品中孔雀石绿、结晶紫类物质的常见方法有ELISA试剂盒、胶体金试纸和仪器检测三类，本文从灵敏度、特异性、准确度和精密度、检测时间、检测成本、所需设备等方面比较了ELISA方法与其他两种方法，以期为孔雀石绿、结晶紫类物质检测提供借鉴。

试验方法选取市面上具有代表性的一种可检测孔雀石绿的胶体金检测卡，本公司的孔雀石绿检测试剂盒（I）、一种进口ELISA试剂盒(Ⅱ)、一种国产ELISA试剂盒（Ⅲ）以及仪器方法（HPLC和HPLCMS）进行试验。

阴性样本通过高效液相色谱（HPLC）检测后定值。

试验结果灵敏度的比较用ELISA试剂盒进行20组阴性样本的检测，检测限是通过20份空白样品的测定平均值加3倍标准差计算而来；胶体金检测卡进行阴性样品添加实验，包括该浓度、50%该浓度、150%该浓度以及300%该浓度，检测限为使用说明书上标注的浓度；仪器检测由于费用较高，检测限参考国标。

Ｇ Ｌ一 ２ ０ Ｇ—ｌ Ｉ 高速离 心机 、上海 安亭 科学 仪 器有
限公 司 ；Ｄ Ｓ Ｙ—Ｉ Ｉ Ｉ 氮 吹仪 、北 京金 科精 华 苑科 技 有 限公 司 ；Ｑ Ｌ一 ９ ０ １ 漩 涡混合 器 、海 门市其林 贝 尔仪器 制 造 有 限公 司 ；ＭＫ ３酶 标 仪 、微 量 移 液
第３ ５卷第 ２期
２ ０ １ ３年 ４月
福 建 水 产
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ ｉ ｅ ｓ
Ｖｏ １ ． ３ ５ Ｎｏ ． ２
Ａｐ ｒ ． ２ ０１ ３
文章 编号 ： １ ０ ０ ６— ５ ６ ０ １ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２— ０ ｌ １ 灭鱼 体寄 生虫 和鱼卵 中霉 菌 等 作 用 ，在 水 产 养 殖 上 被 广 泛 应 用 Ｊ 。
ＭＧ的化学 官 能团三 苯 甲烷 是 一种 致 癌物 质 ，能 在 动物体 内长 时 间残 留 ，可通过 生物 转化 蓄积 于
二 甲基 苯胺 、二 甲基 甲酰胺 、碳 化二 亚胺 、乙
＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｍ
第 ２期
何方洋等：应用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试剂盒检测鱼肉中孔雀石绿和结晶紫
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１ ／ ２ ，ｖ ／ ｖ ） ； 将其溶于 ２ ０ ｍ Ｌ吡啶中，加入琥珀 酸酐 ０ ． ７ ４ ｇ（ 与 底 物摩 尔 比为 １ ： １ ． ２ ） 。在 ８ ０ ℃
摘要 ：开发了一种用于检测 鱼肉中孔雀石绿 （ ＭＧ ） 和结 晶紫 的间接竞争酶联免疫 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ）检 测试 剂 盒 ，并对试剂盒性能进行了验证。结果表 明 ，Ｍ Ｇ浓度在 ０ ． ２—５ ． ４ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ范 围内有较好线性 关系 ，５ ０ ％ 竞 争抑制率为 ０ ． ５ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ ，试剂盒检测鱼 肉中 ＭＧ的最低检测限为 ０ ． １ ７ ｎ ｇ ／ ｇ 。鱼 肉中分别添加 ０ ． ２ 、０ ． ４ 、０ ． ８ ｎ ｇ ／ ｇ的 ＭＧ标准 品，回收率均在 ７ ２ ． ４ ％ 以上 ，批 内变异系数小于 １ ２ ． ４ ％ ，批 问变异 系数小于 １ ２ ． ９ ％ 。本方 法灵敏度高 ，重复性好 ，检测时间短 ，可 同时检测 鱼肉中孔雀石绿 、结 晶紫 、隐性孔 雀石绿 、隐性 结晶紫 等 四种药物 的残 留总量 。 关键词 ：孑 Ｌ 雀石绿 ；结晶紫 ；酶联 免疫法 ；鱼

Ｍａｓ ｎ ｌ Ｌ ｘｉ ａ￣ 雀石绿 Ｅ ＩＡｉ 剂盒 ， Ｌ ｇ ＬＳ ． ￣ ＨＰ ｃ法引用国标 Ｇ ／２ ３ １２ ０ ， ＢＴ ０ ６ — ０ ６ 对得出的检测结果进行 比较分析 ， 结果显示 ：Ｅ ＩＡ ＬＳ
成本
较低 、 检测迅速 ，可用 于待测品的初筛 ；Ｈ Ｌ Ｐ ｃ法添加 回收率较高 ， 检测结果准确 ， 但检测费用较高， 适用Ｔ － 雀石绿残 留的确证。 －Ｌ ｆ
格把好检验 检疫关 ， 迎接出 １食 品安 全的挑 战。 ： ３
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
商 品鱼 去鳞 ， 皮 ， 背脊 取肌 肉部分 ， 去 沿 样品切成不大
于 ０５ｍ ０５ｍ ｘ ． ｍ 的 小块 后 混 合 。 ． ｍ ｘ ． ｍ ０５ｍ
１１１ 仪 器 ．．
为此 ， 农业部制定 了水产行业标准 《 水产 品中孔雀石绿残 留
Ｃ Ａ Ｓ Ｖ 高 效 液相 色谱 仪 配荧 光检 测 器 ；匀 浆机 ； Ｌ Ｓ— Ｐ 离心机：４ ０ ｍｎ ０ｒ ｉ；漩涡振荡器 ；固相萃取装置；真空泵 一 ０ ／ 旋 转蒸 发仪 ；超声波清洗器 ；酸性氧化铝 ；固相萃取小柱 ；
０４ ｍ 微孔 滤膜 ；离心管 ：２ Ｌ ．５Ｌ Ｉ ５ｍ ；电子天平 ；微量 加样 器 （ ０ ２ 、 １０ｕ， Ｌ） １ 、 ０ 和 ０ ｌ １ｍ ；试 剂盒 ；酶标仪 ；３ 恒 温 ７Ｃ ｏ 培养箱 ； ２ ℃冰箱； 一０ 二氯 甲烷； 乙腈 、 己烷； 正 旋转蒸发仪；
除冷有规定外 ， 所有试剂均为分析纯 ， 试验用水应符合
Ｇ ／６ ８ 一级水 的标准 。乙腈 ：色谱 纯 ；二氯 甲烷 ；酸性 ＢＴ ６ ２
氧化铝 ：分析纯 ， 粒度 ０ ７～ ． ０ ． １０１ ｍｍ。 ０ ５ 二甘醇；硼氰化钾；

Ｅ ＩＡ 试剂盒法 值得推广的 ＬＳ 孔雀石绿 结晶紫类物质检测法
口 王莹 北京华安麦科生物技术有限公司
孑雀石绿 （ａ ｃｉ ｒ ｎＭ ） 结 Ｌ Ｍ ｌ ｈｅ Ｇｅ ， Ｇ 、 ａ ｔ ｅ
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的孔雀石绿检测试剂盒 （ 、 种进 口 １ 一 ）
消毒剂被广泛应用于水产养殖。 其被鱼体
吸收 后 ． 会代 谢为危害 更大 的隐性孔 雀石
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交 叉 反应 率 胶 体 金 检 测 卡 可 直 接 检 测 孔 雀 石
判断某产品是否含 有可疑物质的准确性， 而提 高执法工作 从 效率。 由此也可 以看出， 人们对快速 筛查的最初认识是 ： 主要 应用于执法部门。 而食品行业多数人认 为快速 筛查手段 主要
就 是试 剂盒 及便携 式检 测仪 器。 随 着科 研人 员 分析检 测 但 对
技 术与设备 研 究的 深 入 ， 更多的 分析检 测技 术与设备 得 到完
试 验结果
灵 敏 度 的 比较
欧盟、 美国已宣布禁止其在经济鱼类 （ 观 赏鱼除外） 养殖过程中使用； 我国质检总