孔雀石绿检测卡说明书——组织

鱼类药物残留检测卡有哪些鱼是一种富含矿物质、维生素和蛋白质的食物，鱼类中的蛋白质容易被吸收，对预防消化和心血管有益。

鱼还含有许多维生素A、D等必需的维生素、磷、镁、锌等。

因此，很多鱼类都是人们常见的盘中餐。

但同时，水产品药物残留问题也日益突出，食品安全事件层出不穷。

不少水产品都存在着超标现象，因此加强对水产品药物的监管与检测也刻不容缓。

下面，广州瑞森生物科技股份有限公司小编就来给大家介绍一下鱼类药物残留卡有哪些?鱼类药物残留检测卡在介绍鱼类药物残留卡之前，首先需要了解的是鱼类产品中残留的药物种类，其一般分为三种。

第一种是硝基呋喃类药物，在国内外均为禁用渔药，人体若长期大量摄食含硝基呋喃类药物的食品存在致癌可能。

第二种是孔雀石绿，是一种带有金属光泽的绿色结晶体。

它既可以杀菌，又可以作为染料使用。

一般来说，渔民用它来预防鱼的水霉病等，或是使鳞受损的鱼延长生命。

不过如果它在鱼体中残留时间太长，就有致癌、致畸、致突变的副作用，对人体绝对有害。

第三类是抗生素，如恩诺沙星、环丙沙星、氯霉素、红霉素均是抗生素类药。

那么，鱼类药物残留检测卡到底有哪些呢?呋喃类代谢物检测卡，呋喃类代谢物检测卡主要有呋喃唑酮代谢物快速检测卡、呋喃它酮代谢物快速检测卡、呋喃妥因代谢物快速检测卡、呋喃西林胶体金快速检测卡。

呋喃类检测卡主要用于鱼类产品中的硝基呋喃类药物。

孔雀石绿(MG)快速检测卡(水体)、孔雀石绿(MG)快速检测卡(组织)。

孔雀石绿检测卡主要用于检测鱼类药物中的孔雀石绿。

磺胺类药物(SAs)快速检测卡、喹诺酮类快速检测检测卡、氯霉素(CAP)j胶体金快速检测卡(水体)、氯霉素(CAP)j胶体金快速检测卡(组织)。

主要用于检测鱼类产品中的抗生素类。

水产品中孔雀石绿快速检测方法
组织检测步骤：
鱼虾等去皮、脂肪,用均质器均质样本，称取2±0。

05g均质物于15ml离心管；加入1瓶去脂试剂,振荡2min，室温4000rpm,离心3min。

倒掉上清液，把肉样弄松散（若要做添加实验，请在此刻加入添加物）；加入1瓶提取剂A，立即摇匀，然后加入1瓶提取剂B，充分振荡混合5min，室温4000rpm,离心5min；取上层有机层4ml到15ml离心管中,加入20ul衍生化试剂，涡旋1min，加入4ml净化剂，颠倒混匀1min,静置1min;取下层（溶液显紫红色)2ml，55℃下使用便携式空气吹干仪吹干；然后加入0.5ml缓冲液剧烈涡旋2min，待检。

检测:从包装中取出微孔，用移液器吸取待检液体80ul至微孔中充分吸打均匀，然后全部滴加至检测卡加样孔（检测卡平放）,静置8-15分钟,根据示意图判读结果（见彩图）水样检测步骤：
①用移液器吸取80µl样本液至样品孔中.
②静置5—8分钟，根据示意图判读结果。

结果判定及示意图：
在试纸卡的中央判读区喷有2条线,上面一条为对照线（C线），下面一条为测试线(T线）。

若样品液中孔雀石绿的浓度小于检测限时，则T线显色比C线强，或显色与C线相近；若样品液中孔雀石绿的浓度大于检测限时，则T线显色比C线浅很多或T线显绿色.
实验设备:
1、孔雀石绿快速检测卡；
2、PRO-12L空气吹干仪;
3、HH-1水浴锅；
4、80—2离心机;
5、均质器;
6、掌上电子天平。

水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测序列号：DM-P-049 1 适用范围本方法适用于水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测。

2 样品准备/提取1、称取已粉碎（已均质）的样品1 g于15 mL离心管中，加入1 mL 0.05 mol/L 苯磺酸溶液、1 mL0.25 g/mL盐酸羟铵溶液、0.4 mL0.1 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)和8 mL乙腈，涡旋混合2 min，4000 rpm离心1 min；2、将上清液转移至50 mL离心管中，残渣按照步骤1重复提取一次；3、合并两次提取液，并加入6 mL三氯甲烷和7 mL水，涡旋混合1 min，4000 rpm离心1 min；4、取下层清液于旋蒸瓶中，向上层清液加入6 mL三氯甲烷，重复提取一次；5、合并两次下层三氯甲烷溶液，40℃减压蒸至近干，加入5 mL乙腈待净化。

3 SPE柱净化——ProElut Al-N（1 g/6 mL）（Cat.#：65306）上层ProElut SCX（500 mg/3 mL）（Cat.#：63604）下层(1)活化：加入10 mL乙腈，流出液弃去；(2)上样：将待净化液加入小柱，流出液弃去；(3)淋洗：加入5 mL乙腈淋洗小柱，流出液弃去，并去掉上层Al-N小柱；(4)洗脱：加入5 mL5%氨水乙腈，收集洗脱液；(5)重新溶解：将洗脱液在40 ℃下减压蒸干，1 mL定容液*溶解残渣，过微孔滤膜供HPLC分析。

*定容液：乙酸铵缓冲液：盐酸羟铵溶液=2：1乙酸铵缓冲液：乙腈：0.05 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)=75:25；盐酸羟铵溶液：取1 mL0.25 g/mL盐酸羟铵溶液用水定容至100mL。

4 分析条件色谱柱：Platisil ODS，250 x 4.6 mm，5μm（Cat.# 99503）流速： 1.0 mL/min检测器：UV 591 nm和UV 266 nm柱温：30 ℃进样量：20 μL流动相：A：乙腈B：0.05 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)梯度：5添加回收结果5.1孔雀石绿和结晶紫检测图谱(UV 591nm)Tim e (m in)V o l t s5.2 鳕鱼中孔雀石绿和结晶紫(添加水平1.0 mg/kg)检测图谱(UV 591nm)Tim e (m in)V o l t s5.3 鳕鱼中孔雀石绿和结晶紫(空白)检测图谱(UV 591nm)2468101214Tim e (m in)0.000.020.040.06V o l t s5.4隐色孔雀石绿和隐色结晶紫检测图谱(UV 266nm)Tim e (m in)V o l t s5.5鳕鱼中隐色孔雀石绿和隐色结晶紫(添加水平1.0 mg/kg)检测图谱 (UV 266nm)Tim e (m in)V o l t s5.6鳕鱼中隐色孔雀石绿和隐色结晶紫(空白)检测图谱(UV 266nm)2468101214Tim e (m in)0.000.020.040.06V o l t s。

武汉欣泰扬生物科技有限公司孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂卡 使用说明书（Ⅱ）【产品简介】 本产品用于快速检测水产品组织样品中的孔雀石绿残留，整个检测过程只需要 40 分钟左右，适用于各类企业及检测机构。

表一 产品灵敏度【样品处理】 组织样品（虾要去掉头和壳后彻底清洗干 净，鱼要去鳞后洗干净）应当避光冷藏保存。

样品的处理方法如下：1. 取切碎的一定量的去脂肪组织样本，用均质机均质；2. 称取 3 g 均质物于 50 ml 离心管中；3. 向上述50ml 管中加入提取剂1 溶液 3 ml ，提取剂2溶液3ml,再加入 8 ml 乙腈，盖上盖子剧烈振荡2 min 后，室温下 4000 rpm 离心 5 min ；4. 移取4 ml 上清液于5 ml 离心管中，加入100μl 氧化剂，颠 倒 混 匀 1 0 秒 ，于 6 0 ℃ 环 境 下 ，利 用 氮气 或 空 气 吹 干。

（若管底剩余 少于10 0 微升吹不干液体为正常现象，可直接复溶使用，不影响检测结果）5.向吹干的离心管中加入 0.3 ml MG 复溶液，和正己6.烷 500μl ,于室温下 4000 rpm 离心 1 min ，用移液器移取下层 150 μl 溶液 ，待检。

(移液器枪头一定要抵着管底，取底层溶液，以免取到油脂，导致结果异常)【使用步骤】 测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和待检样本溶液恢复至室温（20℃~30℃）。

从原包装袋中取出试剂板，水平放置于观察者正面，如下图所示（打开后请立即使用）；吸取待检样品 150 微升加入到金标微孔中，等待反应2分钟后，用滴管吹打至完全溶解孔内红色物质； 吸取孔内所有溶液滴加到加样孔中，加样后开始计时；结果应在:8～10 分钟读取，其他时间判读无效。

T 线 明显显为绿色的，可判为阳性结果【结果判断】阴性（-）： T 线显色（测试线，靠近加样孔一端）比C 线（对照线）深或一样深，表示样品中待检 药物浓度低于2 ppb 或不含待检药物。

关于孔雀石绿快速检测卡的使用说明（组织）【概述】孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，其既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水，溶液呈蓝绿色。

长期以来，渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。

科研结果表明，孔雀石绿在鱼内残留时间太长，且其具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，鉴于此，许多国家均将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。

【用途】本试纸卡为定性检测,可用于检测组织，鱼、虾、以及鱼池或者鱼缸水样中的孔雀石绿残留。

适于现场监控和大量样本筛查，注意，去离子水不能作为阴性对照。

【试剂组份】需自备设备：搅拌器振荡器电子天平离心机空气吹干仪移液器【检测原理】本检测卡采用胶体金免疫层析方法，在NC膜上预包被偶联抗原和羊抗鼠IgG抗体，样本中残留的孔雀石绿药物和NC膜上预包被的偶联抗原竞争孔雀石绿抗体，抑制抗原和孔雀石绿抗体的结合。

从而通过对检测线和质控线的观察就可以判断样品中孔雀石绿药物是否超过检测限。

【技术指标】孔雀石绿快速检测试纸条技术指标为水样2ppb组织2ppb。

【样品处理】1. 鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等去皮、脂肪，用均质器均质样本，取1g去脂肪组织样本，加入到配套的15ml离心管中。

2．向离心管中准确加入2ml MG提取液1和2ml MG提取液2，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。

3．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液（空气吹干仪），然后用0.3ml MG复溶液复溶杯底固体。

此溶解液即为检测液.4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。

5．10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。

（ps：鱼池或鱼缸中水样检测前，需将采取的水样PH调节到中性后，直接进行检测）【使用步骤】1.在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和待检样本溶液恢复至室温(20℃~30℃)。

孔雀石绿的测定本实验主要目标是通过酶标仪测定水产品中的孔雀石绿以及其衍生物的含量1 试验试剂：乙腈，试剂A，试剂B，酶标记浓缩物，酶标记稀释液，孔雀石绿样品稀释液，孔雀石绿100ppb标准液，氧化铝，底物溶液，停止液，蒸馏水2 实验仪器分析天平，组织粉碎机，精密移液器，50ml离心管,均质振荡器，通风柜，离心机，10ml塑料蓝盖试管，2ml 带塞小试管，水浴锅，氮气机，微孔计数板，酶标仪3 实验步骤1 先将所有试验试剂从冰箱中拿出来，于25-28度室温中放置1到2个小时后待用2 样品处理：将所测水产品去头去尾，去皮去骨取可吃部位，称20克左右，放入组织粉碎机充分粉碎后待用3 样品前处理：用分析天平称取5克样品，准确到0.0001克，放至50ml试管内，在通风柜内打开通风柜后。

用精密移液器使用5ml 一次性塑料移液管移取共10ml的乙腈到样品试管，用均质振荡器震荡10分钟，使样品鱼肉和乙腈充分混合。

再通过离心机（4200转/分钟）离心5分钟，（注意：使用离心机的时候，需要再加多一个离心管装水10ml保持离心机平衡，以免损坏离心机）4 精确称取3克中性氧化铝，准确到0.0001克，加入离心好的样品试管，再用离心机进行离心5分钟5 离心后的样品溶液取上层清液2ml到新的10ml蓝盖试管中，打开氮气机，当水浴锅温度设置在68度，放入试管，用氮气将样液吹干为止6 试剂A配制用2ml的带塞小试管配制，先移0.5ml 的试剂A入带塞小试管，再加入1.5ml乙腈，比例为1:3配制7将配制好1:3的试剂A移0.5ml至吹干的样品试管中，用振荡器混合三秒，静置30分钟8 称0.1克的试剂B加入静置30分钟后的样品试管，再静置10分钟9 从加入试剂B静置10分钟后的样品试管中，移取50ul(微升)上清液到10ml 带塞试管后再加入0.95ml 样品稀释液10 酶标记物配制：先移2.9ml酶标记物至10ml带塞试管后再加入0.1ml酶标记浓缩物即可11 取5个10ml带塞分别用笔0.405,0.135,0.045,0.015,0.0 05数字(a) 配制0.405ppb溶液：3.69ml标准稀释液到试管后再移取15ul（微升）100ppb孔雀石绿标准溶液混合即可配制完成(b)配制0.135ppb溶液：先移1ml标准稀释液到10ml 试管，再加入配制好的0.405ml溶液0.5ml混合即可成为0.135ppb溶液(c) 配制0.015ml溶液：先移1ml标准溶液到10ml试管，再加入配制好的0.135 ml溶液0.5ml混合即可成为0.015 ppb溶液（d）配制0.005 ml溶液: 先移1ml标准溶液到10ml 试管，再加入配制好的0.015ml溶液0.5ml混合即可成为0.005 ppb溶液12 取出混合板后，按0.405,0.135,0.045,0.015,0.0 05数字从小到大顺序分别移120ul（微升）到混合孔，最后移取样品液共6个孔，再加入120ul（微升）酶标记物溶液混合，轻轻震荡10秒13 从铝箔袋中拿出新的两条微孔条（注意：铝箔袋装的微孔条应避光收藏），再从混合板中移取200ul（微升）到微孔条的测试孔中，25-28摄氏度避光孵育30分钟14 孵育后，将微孔条的测试孔中溶液倒到水槽中，再用多管移液器移蒸馏水到各个孔眼中，震荡后倒掉，重复三次，总共四次洗板后，再在吸水纸上拍打微孔条，尽量将水拍干15 拍干水后，在各个孔眼中加入100ul（微升）底物溶液，在5-28摄氏度避光孵育30分钟16 孵育好的测试孔加入100ul（微升）停止液即可进行读数17 酶标仪先提早预热半个小时，再把样板微孔条放入酶标仪测试平台，再按下PLATE键送至酶标仪机内，打开电脑点击酶标仪桌面图标—点击登录—点击新建文件夹---出现新建程序---点击光度测量---选择上次测定数据（6孔眼的为孔雀石绿测定，7孔目为兽药测定）---点击运行---出现数据---记录数据---复制至另外文件夹附：通风柜的遥控器操作，A开关机 B 通风C 调风D 开关灯。

商品名称：水溶性非食用色素（含孔雀石绿）的快速检测规格：50批次/盒检测项目：水溶性的非食用色素：罗丹明B、孔雀石绿产品简介：本产品利用水溶性食用色素被试棉吸附后，可以漂洗干净；而非食用色素被试棉吸附后，不容易去除的原理，快速筛查是食用色素还是非食用色素使用方法产品前处理：1液体食品直接备用。

汽水、色酒等加热除去二氧化碳或酒精后备用。

2辣椒粉、茶叶等粉叶状食物，取约10克置于烧杯中，加30ml水，振摇使色素溶于水中备用。

3表面有颜色的豆腐皮、豆腐干、黄花鱼等，取10克以上的样品，加入适量能够淹没样品的100℃的纯净水，放置2分钟，观察样品表面的颜色是否溶入水中，有溶出时，基本上可以判断加入了色素，即使是食用色素也是法规所不允许的。

4辣椒油或带有颜色的油状食物，采用“油溶性非食用色素速测盒”进行检测。

5取处理后的样品液10ml于试管中，滴入A试剂调PH到8～9之间，加入B试棉少许，将试管放入90℃以上的水浴中1分钟，搅拌试棉后将其取出，用清水漂洗试棉，试棉上的颜色不退为非食用色素。

为便于判断，可取B试棉少许，用水浸湿后对比观察。

孔雀石绿的检测：取10ml蓝色或绿色可疑液体放入试管中，滴入A试剂调PH 到10～11之间，将试管放入90℃以上的水浴中5分钟后，如果蓝色或绿色退去变为无色，再滴入C试剂调PH到2～3之间，放至室温，5分钟后又变回原有颜色，可初步判断样品中含有孔雀石绿。

此时，可用A试剂回调PH到7～8之间（不要高于9），加入B试棉少许，将试管放入90℃以上的水浴中1分钟，搅拌试棉后将其取出，用清水漂洗试棉，试棉上的颜色不退可进一步判断样品中含有孔雀石绿，有条件时将样品送实验室进一步确证。

注意事项：1.A试剂为饱和碱液,温度低时可能会有结晶出现,如果不易滴出时,可用滴管从中吸取液体使用。

2.罗丹明B检出浓度1.0µg/ mL，孔雀石绿检出浓度10µg/mL。

3.试剂闭光常温保存，有效期为2年。

附件1水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201701）1范围本方法规定了水产品及其养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的胶体金免疫层析快速检测方法。

本方法适用于鱼肉及养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的快速测定。

2原理样品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿经有机试剂提取，吸附剂净化，正己烷除脂后，加入氧化剂将隐色孔雀石绿氧化成为孔雀石绿，经浓缩复溶后，孔雀石绿与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。

通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量进行定性判定。

3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1 试剂3.1.1正己烷。

3.1.2乙腈。

3.1.3冰乙酸。

3.1.4盐酸。

3.1.5吐温-20。

3.1.6氯化钠。

3.1.7对-甲苯磺酸。

3.1.8无水乙酸钠。

3.1.9盐酸羟胺。

3.1.10无水硫酸钠。

3.1.11中性氧化铝：层析用，100目~200目。

3.1.12二氯二氰基苯醌。

3.1.13氯化钾。

3.1.14磷酸二氢钾。

3.1.15十二水合磷酸氢二钠。

3.1.16饱和氯化钠溶液：称取氯化钠（3.1.6）200g，加水500mL，超声使其充分溶解。

3.1.17盐酸羟胺溶液（0.25g/mL）：称取2.5g盐酸羟胺（3.1.9），用水溶解并稀释至10mL，混匀。

3.1.18乙酸盐缓冲液：称取4.95g无水乙酸钠（3.1.8）及0.95g对-甲苯磺酸（3.1.7）溶解于950mL 水中，用冰乙酸（3.1.3）调节溶液pH为4.5，用水稀释至1L，混匀。

3.1.19二氯二氰基苯醌溶液（0.001mol/L）：称取0.0227g二氯二氰基苯醌（3.1.12）置于100mL 棕色容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，混匀。

4℃避光保存。

3.1.20复溶液：称取8.00g氯化钠（3.1.6），0.20g氯化钾（3.1.13），0.27g磷酸二氢钾（3.1.14）及2.87g十二水合磷酸氢二钠（3.1.15）溶解于900mL水中，加入0.5mL吐温-20（3.1.5），混匀，用盐酸（3.1.4）调节pH为7.4，用水稀释至1L，混匀。

《水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法》江西省地方标准编制说明一、立项背景、意义孔雀石绿（Malachitegreen，MG）是一种三苯甲烷类化学物，可作为杀菌剂应用于水产养殖业，预防和治疗鱼类或鱼卵的寄生虫、真菌或细菌感染，也可作为商业运输的消毒剂使用。

在我国很多地方，尤其是河南、湖北等地的水产养殖业和水产品贩运中，孔雀石绿被普遍使用。

但是孔雀石绿具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，在水产体内有明显的残留现象，其残留时间达到100天以上。

欧盟法案2002/675/EC规定，动物源性食品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留总量限制为2 μg/kg。

日本肯定列表也明确规定在进口水产品中不得检出孔雀石绿残留。

我国农业部于2002年12月24日发布235号公告《动物性食品中兽药残留最高限量》，孔雀石绿被列为禁止使用药物，在动物性食品中不得检出。

尽管如此，由于作为抗菌药，孔雀石绿药物具有杀菌能力强、抗菌谱广、价格低廉和疗效好等优点，仍然有养殖户在水产养殖中用于预防和治疗鱼类或鱼卵的寄生虫、真菌或细菌感染，残留超标问题一次次困扰着水产品出口企业。

目前，水产品中孔雀石绿药物的残留检测主要是液质联用的分析手段，该方法虽然检测结果精确，但需要的仪器设备昂贵，分析方法前处理繁琐、溶剂消耗量大、检测周期长、检测成本高，不适于对大量样品进行低成本快速筛选、现场判定的需要。

快速检测技术相对于传统和经典的化学检测与仪器检测而言，其特点是检测所需时间相对较少，对仪器设备等条件要求不高，能携带到交易（生产）现场实施检测，既快速方便，又节约成本。

免疫胶体金快速检测技术被认为是最具应用价值和发展潜力的快速痕量分析技术之一，是二十世纪九十年代新兴的一种新型免疫学检测技术。

其反应所需的原料全部或大部分已整合到试剂中，当待测样品加入到样品膜上后，由于微孔膜的毛细管作用，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，整个反应仅需要８～10分钟，滴样后用肉眼直接判断结果无需特殊仪器设备。