2016年《步步高》高考生物新课标一轮复习学案55植物组织培养技术及
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高考生物大一轮复习 55 植物组织培养技术及学案1、植物组织培养技术的应用。
2、DNA的粗提取与鉴定。
一、植物组织培养1、脱分化:由________的植物组织或细胞产生______的过程。
2、愈伤组织:细胞排列________而无规则,是一种____________的呈____________的________。
3、再分化:脱分化产生的____________继续培养,重新分化出________和________等器官的过程。
4、植物组织培养的理论基础:植物细胞的________。
5、基本过程:离体的植物组织____________________→________→移栽成活二、DNA的粗提取与鉴定1、提取原理:(1)利用DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的________中溶解度不同进行分离。
在2 mol/L的该溶液中________溶解而________析出,在0、14 mol/L溶液中________溶解而________析出。
(2)DNA不溶于酒精,而________等杂质分子溶于酒精。
2、鉴定原理:在沸水浴条件下,DNA遇________试剂会被染成________。
三、多聚酶链式反应扩增DNA片段1、PCR技术的原理:利用了________原理。
通过控制________来控制DNA双链的解聚和结合。
2、PCR反应的条件:一定的________,DNA模板,分别与两条模板链相结合的两种________,四种__________,耐热的________,同时控制______使DNA复制在体外反复进行。
想一想细胞内DNA复制与细胞外DNA复制必需的酶是什么酶?四、血红蛋白的提取和分离1、分离方法________法和电泳法。
2、纯度鉴定一般用____________________方法对血红蛋白进行纯度鉴定。
探究点一植物的组织培养1、填表比较花粉植株的产生与植物茎的组织培养菊花茎的组织培养月季的花药培养理论依据细胞的______基本过程脱分化、再分化影响因素选材、营养、____、pH、温度、光照等材料选取未开花植株的茎上部新萌生的侧枝通常选择完全未开放的____光照状况每日用日光灯照12h开始____光照,幼小植株形成后____光照操作流程制备MS固体培养基→______消毒→接种→____→移栽→栽培选材→材料消毒→接种和培养→____和诱导→移栽→栽培选育结果____植株______植株2、生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素,其作用及特点如下表,请补充完整。
限时集训(四十四) 植物的组织培养技术(限时30分钟满分60分)非选择题(共60分)1.(15分)下图是用胡萝卜根细胞进行组织培养的某些过程示意图。
请据图回答:(1)把组织培养的过程按正确顺序排列________(以字母表示)。
(2)实验前试管和培养基应经________处理。
(3)培养基中除加入各种营养物质外,还应加入______、________等植物激素。
(4)图D上的细胞团是________。
(5)从理论上讲,植物细胞有形成再生植株的可能性,这是____________________的表现。
2.(15分)下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途径,请据图回答有关问题:(1)选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素,一般来说选用________期的花粉可提高成功率。
选择花粉时,一般要通过________来确定花粉是否处于合适的发育期,这时需要对花粉的细胞核进行染色,常用的染色剂是________ 。
(2)上图中花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中___________。
(3)胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于愈伤组织的细胞排列疏松无规则,是一种高度的________薄壁细胞。
胚状体与________发育形成的胚有类似的结构,即具有胚芽、胚轴和胚根。
(4)无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素,请说明下列各项需要消毒,还是需要灭菌。
①培养基,②培养皿,③接种环,④花蕾,⑤实验操作者的双手,⑥三角锥形瓶。
________(填编号)需要灭菌, ________(填编号)需要消毒。
(5)试管苗移栽到土壤前,通常要进行壮苗处理,应如何壮苗?________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
专题3 植物的组织培养技术【高考目标导航】植物的组织培养【基础知识梳理】一、植物组织培养的原理与基本过程1、原理:细胞全能性。
2、基本过程:离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织胚状体新植物体二、菊花的组织培养1、影响植物组织培养的因素(1)材料的选取:一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
(2)营养供应:常用的培养基是MS培养基,一般需要添加生长素和细胞分裂素两种植物激素。
2、实验操作过程(1)制备MS固体培养基:配制各种母液,配制培养基,灭菌(2)外植体消毒:先用70%的酒精消毒,然后无菌水清洗,再用0.1%的氯化汞溶液消毒,再用无菌水清洗(3)接种:始终在酒精灯火焰旁进行,对接种工具要用火焰灼烧灭菌。
将菊花茎段插入培养基中时不要倒插。
(4)培养与移栽:在18℃~22℃的无菌箱中培养,得到试管苗后进行移栽。
三、月季的花药培养(1)被子植物花粉的发育过程:花粉母细胞(小孢子母细胞)→四分体时期→单核期→双核期→花粉粒。
(2)产生花粉植株的两种途径(3)影响花药培养的因素:主要因素是材料的选择和培养基的组成。
一般月季的花药培养选在五月初到五月中旬,即月季的初花期。
(4)培养过程及成功的关键材料的选取:挑选完全未开放的花蕾,确定花粉发育时期最常用发放是醋酸洋红法接种:灭菌后的花蕾,在无菌条件下除去萼片和花瓣,并立即将花药接种到培养基上。
剥离花药时尽量不要损伤花药。
培养:温度控制在25℃左右,幼小植株形成后才需要光照。
如果花药开裂释放出胚状体,就要在花药开裂后尽快将幼小植株分开【要点名师透析】一、植物组织培养技术1、植物组织培养过程比较2、菊花茎与月季花药组织培养的比较【典例】(2011·深圳模拟)如图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途径,请据图回答有关问题:(1)选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素,一般来说选用______期的花粉可提高成功率。
选择花粉时,一般要通过______来确定花粉是否处于合适的发育期,这时需要对花粉的细胞核进行染色,常用的染色剂是______。
综合测评(二)植物的组织培养技术·酶的研究与应用(考试时间45分钟,本试卷满分100分)一、选择题(每题2分,共40分)1.(2015·遂宁高二测试)下图为植物组织培养流程图解,以下相关叙述不正确的是( )A.上述过程中脱分化发生在b步骤,形成愈伤组织,在此过程中植物激素发挥了重要作用B.再分化发生在d步骤,是愈伤组织重新分化出根或芽等器官的过程C.b过程中进行诱变处理后培养,将来可能筛选出抗逆性强的突变体D.人工种子可以解决有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题【解析】上述过程中脱分化形成愈伤组织或胚状体的过程,发生在图中的b步骤,在此过程中植物激素发挥了重要作用。
胚状体的细胞已经经过了再分化,图中再分化发生在c 步骤,是愈伤组织重新分化出根或芽等器官的过程。
b过程中进行诱变处理后培养,可能会产生抗逆性强的突变体,因此可用于筛选抗逆性强的突变体。
人工种子可以解决有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题。
【答案】 B2.下列不属于植物组织培养特点的是( )A.快速繁殖B.培养脱毒植株C.不改变原植物的基因型D.操作简单,易于推广【解析】植物组织培养的特点:不受生长季节的限制、不携带病毒、培养周期短、可诱导分化成需要的器官(如根和芽)、不存在变异等。
植物组织培养的操作复杂,不易推广。
【答案】 D3.在下列叙述中,需要采用植物组织培养技术的是( )①利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗,获得多倍体植株②获取大量的脱毒苗③无子西瓜的快速大量繁殖④单倍体育种A .①②③B .②③④C .①②④D .①③④【解析】 植物组织培养指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞等,通过无菌操作,在人工控制条件下进行培养以获得完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术,主要用于获取脱毒苗、单倍体育种、快速大量繁殖植株等方面。
利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗,获得多倍体植株属于多倍体育种,不需要植物组织培养技术。
2018年《步步高》高考生物大一轮复习教案+作业第十一单元教案55植物组织培养技术及部门: xxx时间: xxx制作人:xxx整理范文,仅供参考,勿作商业用途学案55植物组织培养技术及DNA和蛋白质技术1.植物组织培养技术的应用。
2.DNA的粗提取与鉴考纲要求定。
一、植物组织培养1.脱分化:由________的植物组织或细胞产生______的过程。
2.愈伤组织:细胞排列________而无规则,是一种____________的呈____________的________。
b5E2RGbCAP 3.再分化:脱分化产生的____________继续培养,重新分化出________和________等器官的过程。
p1EanqFDPw 4.植物组织培养的理论基础:植物细胞的________。
5.基本过程:离体的植物组织错误!____________错误!________→________→移栽成活DXDiTa9E3d二、DNA的粗提取与鉴定1.提取原理:(1>利用DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的________中溶解度不同进行分离。
在2mol/L的该溶液中________溶解而________析出,在0.14 mol/L溶液中________溶解而________析出。
(2>DNA不溶于酒RTCrpUDGiT精,而________等杂质分子溶于酒精。
2.鉴定原理:在沸水浴条件下,DNA遇________试剂会被染成________。
三、多聚酶链式反应扩增DNA片段1.PCR技术的原理:利用了________原理。
通过控制________来控制DNA双链的解聚和结合。
5PCzVD7HxA 2.PCR反应的条件:一定的________,DNA模板,分别与两条模板链相结合的两种________,四种__________,耐热的________,同时控制______使DNA复制在体外反复进行。
jLBHrnAILg 想一想细胞内DNA复制与细胞外DNA复制必需的酶是什么酶?四、血红蛋白的提取和分离1.分离方法——________法和电泳法。
第45讲 生物技术在其他方面的应用[考纲要求] 1.植物的组织培养。
2.PCR 技术的基本操作和应用。
3.蛋白质的提取和分离。
4.从生物材料中提取某些特定的成分。
5.实验:DNA 的粗提取与鉴定。
考点一 植物组织培养1. 植物组织培养的过程外植体――→脱分化愈伤组织――→再分化幼苗―→移栽植物组织培养常用的培养基是MS 培养基,一般需要添加生长素和细胞分裂素两种植物激素。
2. 植物组织培养的实验操作(1)菊花的组织培养过程制备MS 培养基(配制母液、配制培养基、灭菌)→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培。
(2)月季的花药培养过程①过程:材料的选取→材料的消毒→接种和培养→鉴定和筛选。
②影响花药培养的因素主要有材料的选择和培养基的组成。
③要挑选完全未开放的花蕾,确定花粉发育时期最常用的方法是醋酸洋红法。
3. 影响植物组织培养的因素(1)菊花的组织培养,一般选择开花植株的茎上部新萌生的侧枝( × ) (2)植物激素的浓度可影响细胞分化,但使用的先后顺序及比例不影响组织培养的过程( × )(3)pH 、温度和光照等也影响植物组织培养( √ )易错警示 实验操作中易错的几个问题(1)材料的选取:菊花的组织培养实验中,应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝;月季的花药培养实验中,应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。
(2)外植体消毒:所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液,所使用的清洗液是无菌水。
(3)培养过程:在初期,菊花的组织培养需光照,月季的花药培养不需光照;而在后期均需光照。
1. 植物的花药培养在育种上有特殊的意义。
植物组织培养可用于无病毒植株及细胞产物的工厂化生产等方面。
请回答相关问题:(1)利用月季的花药离体培养产生单倍体时,选材非常重要。
一般来说,在____________期花药培养的成功率最高。
为了选择该期的花药,通常选择____________的花蕾。
(6)植物的组织培养技术——2023届高考生物一轮复习生物技术实践小题通关练【通用版】学校:___________姓名:___________班级:___________考号:___________一、单选题1、下列有关月季花药离体培养的说法,错误的是( )A.对材料的选择最常用的方法是焙花青—铬矾法,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色B.接种花药后一段时间内不需要光照,但幼小植株形成后需要光照C.接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体后,要适时转换培养基,以便进一步分化成再生植株D.理论上经花药离体培养得到的植物均为单倍体2、下列有关影响植物组织培养的因素的叙述,错误的是( )A.同一种植物材料的年龄、保存时间的长短等都会影响实验结果B.无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键,所以外植体要进行高温灭菌C.植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等都会影响实验结果D.培养过程中的pH、温度、光照等条件也是影响植物组织培养的重要因素3、培养胡萝卜根组织可获得试管苗,获得试管苗的过程如图所示,下列叙述错误的是( )A. 胡萝卜根段进行组织培养可以形成试管苗,是因为植物细胞具有全能性B. 步骤③切取的组织块中要带有形成层,原因是形成层容易诱导形成愈伤组织C. 步骤⑥要进行照光培养,其作用是诱导叶绿素的形成D. 步骤⑤和步骤⑥的培养基中所需的生长素和细胞分裂素的比例不同4、某植物有甲、乙两品种。
科研人员在设计品种乙组织培养实验时,参照品种甲的最佳激素配比(见下表)进行预实验。
为确定品种乙的Ⅱ阶段的最适细胞分裂素浓度,参照表中a2(a2>2.0μmol/L),以0.5μmol/L为梯度,设计5个浓度水平的实验,其中细胞分裂素最高浓度设为M。
下列有关叙述错误的是( )B.确定品种乙Ⅱ阶段最适细胞分裂素浓度的实验中,M为a2+2μmol/LC.生长素和细胞分裂素协调促进细胞分裂的完成,表现出协同作用D.生长素和细胞分裂素的配比是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键因素5、植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等,在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其形成完整植株的技术。
【2015高考考纲解读】1.从生物材料中提取某些特定的成分Ⅱ2.植物的组织培养Ⅱ3.蛋白质的提取和分离Ⅱ4.PCR技术的基本操作和应用Ⅰ【2014高考在线】1.(2014·北京卷)在25 ℃的实验条件下可顺利完成的是()A.光合色素的提取与分离B.用斐林(本尼迪特)试剂鉴定还原糖C.大鼠神经细胞的培养D.制备用于植物组织培养的固体培养基2.(2014·四川卷)下列有关实验方法或检测试剂的叙述,正确的是()A.用改良苯酚品红染色观察低温诱导的植物染色体数目变化B.用健那绿和吡罗红染色观察DNA和RNA在细胞中的分布C.用纸层析法提取菠菜绿叶中的色素和鉴定胡萝卜素提取粗品D.用标志重捕法调查田鼠种群密度及农田土壤小动物的丰富度3.(2014·江苏卷)下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述,错误的是()A.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料B.DNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水C.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌,可见玻棒上有白色絮状物D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热,冷却后变蓝【答案】C【解析】酵母和菜花都含DNA物质,都可用来提取DNA,A项正确。
DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小,所以DNA在2 mol/L的NaCl溶液或者蒸馏水中都能溶解,B项正确。
鸡血细胞加水搅拌,细胞吸水涨破释放出DNA,DNA存在于溶液中,C项错误。
DNA与二苯胺在沸水浴条件下反应,冷却后变蓝,D项正确。
4.(2014·福建卷)[生物——现代生物科技专题] Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。
科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。
其技术流程如图:(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的________。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到________期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。
学案55 植物组织培养技术及DNA 和蛋白质技术 考纲要求 1.植物组织培养技术的应用。
2.DNA 的粗提取与鉴定。
一、植物组织培养1.脱分化:由________的植物组织或细胞产生______的过程。
2.愈伤组织:细胞排列________而无规则,是一种____________的呈____________的________。
3.再分化:脱分化产生的____________继续培养,重新分化出________和________等器官的过程。
4.植物组织培养的理论基础:植物细胞的________。
5.基本过程:离体的植物组织――→脱分化____________――→再分化________→________→移栽成活二、DNA 的粗提取与鉴定1.提取原理:(1)利用DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的________中溶解度不同进行分离。
在2mol /L 的该溶液中________溶解而________析出,在0.14 mol/L 溶液中________溶解而________析出。
(2)DNA 不溶于酒精,而________等杂质分子溶于酒精。
2.鉴定原理:在沸水浴条件下,DNA 遇________试剂会被染成________。
三、多聚酶链式反应扩增DNA 片段1.PCR 技术的原理:利用了________原理。
通过控制________来控制DNA 双链的解聚和结合。
2.PCR 反应的条件:一定的________,DNA 模板,分别与两条模板链相结合的两种________,四种__________,耐热的________,同时控制______使DNA 复制在体外反复进行。
想一想 细胞内DNA 复制与细胞外DNA 复制必需的酶是什么酶?四、血红蛋白的提取和分离1.分离方法——________法和电泳法。
2.纯度鉴定——一般用____________________方法对血红蛋白进行纯度鉴定。
探究点一 植物的组织培养 1.填表比较花粉植株的产生与植物茎的组织培养菊花茎的组织培养 月季的花药培养 理论依据 细胞的______基本过程 脱分化、再分化影响因素 选材、营养、____、pH 、温度、光照等材料选取 未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 通常选择完全未开放的____光照状况 每日用日光灯照12h 开始____光照,幼小植株形成后____光照操作流程 制备MS 固体培养基→______消毒→接种→____→移栽→栽培 选材→材料消毒→接种和培养→____和诱导→移栽→栽培选育结果 ____植株 ______植株如下表,请补充完整。
1.实验操作中应注意的几个问题:(1)材料的选取:菊花的组织培养实验中,应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝;月季花药的培养实验中,应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花药进行培养。
(2)外植体消毒:所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液,所使用的清洗液是无菌水。
(3)培养过程:在初期,菊花的组织培养需光照,月季花药的培养不需光照,而在后期均需光照。
2.花药培养过程中,确定花粉的发育时期可进行镜检,镜检前染色处理,染色方法有醋酸洋红法和焙花青—铬矾法两种,后者能将花粉细胞染成蓝黑色。
探究示例1 下列关于植物组织培养的叙述,错误的是( )A .培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压B .培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化C .离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织D .同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同听课记录:探究点二 DNA 的粗提取与鉴定1.简述DNA 粗提取与鉴定的基本原理。
2.完成该实验的实验步骤与鉴定图表:(1)步骤:提取血细胞核物质(______涨破)→溶解(2mol /L 的NaCl)→过滤(除杂质)→析出(滴蒸馏水,降NaCl 浓度至______ mol/L)→过滤→再溶解(______mol/L 的NaCl)→过滤→进一步提纯(体积分数为________的冷却酒精)→鉴定。
1.本实验用鸡血细胞作实验材料,不能用哺乳动物的成熟红细胞,原因是哺乳动物的成熟红细胞内无细胞核,但它可以作为血红蛋白提取和制备细胞膜的理想材料。
2.实验过程中两次用到蒸馏水,第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA ,第二次目的是稀释NaCl 溶液,使DNA 从溶液中析出。
3.预冷的酒精溶液具有以下优点:(1)抑制核酸水解酶活性,防止DNA 被降解。
(2)降低分子运动;易于形成沉淀析出。
(3)低温有利于增加DNA 分子柔韧性,减少断裂。
探究示例2 (2011·江苏卷,19)在利用鸡血进行“DNA 的粗提取与鉴定”的实验中,相关叙述正确的是( )A .用蒸馏水将NaCl 溶液浓度调至0.14mol/L ,滤去析出物B .调节NaCl 溶液浓度或加入木瓜蛋白酶,都可以去除部分杂质C .将丝状物溶解在2mol/LNaCl 溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色D .用菜花替代允鸡血作为实验材料,其实验操作步骤相同听课记录:探究点三 PCR 扩增技术1.简述PCR 原理。
2.补充完整PCR 的反应过程(1)________:当温度上升到90℃以上时,双链DNA 解聚为单链,如下图:(2)________:温度下降到50℃左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA 结合,如下图:(3)________:温度上升到72℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸(A ,T ,C ,G)在________________的作用下,根据________________原则合成新的DNA 链,如下图:思维拓展1.DNA 复制需要引物的原因:DNA 聚合酶不能从头开始合成DNA ,而只能从3′端延伸DNA 链。
2.PCR 结果:(1)PCR 一般要经历三十多次循环,每次循环都包括变性、复性、延伸三步。
(2)两引物之间的固定长度的DNA 序列呈指数扩增。
3规手段,其原理是利用DNA 半保留复制,在试管中进行DNA 的人工复制(如图),在很短的时间内,将DNA 扩增几百万倍甚至几十亿倍,使实验所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。
(1)加热使DNA 双链打开,这一步是打开________键,称为________,细胞中是在________的作用下使此键断裂的。
(2)当温度降低时,引物与模板______端结合,在DNA 聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最终合成2个DNA 分子,此过程中原料是________,遵循的原则是______________。
(3)PCR 技术的必要条件,除了模板、原料、ATP 、酶以外,至少还需要三个条件,即:液体环境、适宜的________和________。
(4)下图为某一次循环的产物,请据图回答问题。
①PCR 一般要经历三十多次循环,每次循环可分为________、________、________三个步骤。
②DNA 的羟基(—OH)末端称为________,图中所示的羟基端为________。
(填字母) ③以引物为标记,可判断出此产物最早为第________次循环的产物。
探究点四 血红蛋白的提取与分离掌握血红蛋白的提取与分离操作,完成下列填空:12.样品的处理⎩⎪⎨⎪⎧——离心去除血清→释放血红蛋白—— →分离血红蛋白——↓粗分离——透析(去除小分子杂质)↓ ______——凝胶色谱法进行分离和纯化↓纯度鉴定——SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子量思维拓展1.凝胶色谱操作:包括凝胶色谱柱制作、凝胶色谱柱的装填、样品的加入和洗脱。
注意事项如下:(1)为了加快干凝胶的膨胀,可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热,通常只需1~2h ,还可除去凝胶中可能带有的微生物,排除胶粒内的空气。
(2)在色谱柱中填凝胶的时候要尽量紧密,以降低凝胶颗粒之间的空隙。
在装填凝胶柱时,不得有气泡存在,因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。
在凝胶色谱操作过程中,不能发生洗脱液流干,露出凝胶颗粒的现象。
一旦发生上述两种情况,凝胶色谱柱需要重新装填。
(3)滴加样品时,吸管管口贴着管壁环绕移动加样,不要破坏凝胶面。
2.检测血红蛋白的分离是否成功的方法:如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话,能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整,随着洗脱液缓慢流出;如果红色区带歪曲、散乱、变宽,说明分离的效果不好,这与凝胶色谱柱的装填有关。
探究示例4 (2011·淮安模拟)红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O 2或CO 2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。
请回答下列有关问题:(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:________、__________、__________和________________。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。
①加入柠檬酸钠的目的是____________________________________________________。
②在样品处理中包括红细胞的洗涤、______________、分离血红蛋白溶液、透析。
③洗涤红细胞的目的是________________,你如何知道红细胞已洗涤干净?________________________________________________________________________。
④分离红细胞时对离心速度和离心时间的要求是_________________________________________________________________________________________________________。
⑤若离心速度过高和时间过长结果会怎样?____________________________________________________________________________________________________________。
(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析,这就是样品的粗分离。
①透析的目的是_______________________________________________________。
②透析的原理是____________________________________________________________。
(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
①样品纯化的目的是_______________________________________________________。