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小鼠原始生殖细胞在生殖嵴的定位

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小鼠胚胎操作分析

小鼠胚胎操作分析

2.卵子发生的过程
第四节 排卵
1.排卵的过程 • 少数卵泡在FSH的刺激下，积累液体，体积膨胀，向卵巢外周移动，为卵母细胞最后的成熟和排放做好准备
• 卵母细胞在LH的刺激下，发生核的成熟，即：细胞核失去核膜，染色体组装在纺锤体中 ，向细胞外周移动， 完成第一次减数分裂
. 第一次减数分裂后的阻滞时期，卵母细胞最终从卵泡中排放出来，知道受精以后，才能刺激第二次减数分裂
即将排除的卵子
第五节 受精
1.精子的获能：精子进入输卵管壶腹部以后，经过一段时间的成熟，获得了受精的能力。精子获能后将穿透卵丘 团和透明带，达到卵母细胞表面
2.顶体反应：顶体是覆盖于精子头部细胞核前方、介于核与质膜间的囊状细胞器。顶体与精子头部质膜融合，释 放出各种水解酶，称之为顶体反应
3.受精：精子头后区与卵母细胞膜的融合促进了一系列反映的级联发生，称之为受精 4.透明带反映：受精后，卵母细胞表面发生阻止后来精子入卵的变化，这有助于阻止多精受精的发生
15dpc
7~9mm，后肢 板
16dpc
12 17~20mm
18dpc 19.5~22.5mm
19dpc 23~27mm
第一节 生殖细胞系的起源
1
PGC起源于临近前原条期胚胎表胚层区域
2
在7.0dpc可以在原肠期的后羊膜褶区域检测到PGC
3 在10.5dpc-11.5dpc，PGC到达生殖嵴
1.神经嵴是起源于神经管背侧、神经上皮和表皮外胚层连接部的一个临时细胞群体。神经嵴细胞以单细胞形式进 行广泛的迁移，从神经管迁移到背部和腹部的很多部位，并同时分化为多种细胞类型
2.它们的衍生物包括肾上腺髓质细胞、骨和软骨、黑色素细胞、神经胶质细胞和雪旺细胞，以及不同类型的神经 元

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

第20卷第3期中 国 兽 医 学 报V o l.20,N o.3 2000年5月Ch inese　Jou rnal　of　V eterinary　Science M ay2000性成熟前小鼠生精细胞的发育过程张学明,文兴豪,赖良学,李德雪3,李子义,杨盛华,杜惜明,曾发贵　　(解放军军需大学动物科技系,吉林长春130062)摘要:用光镜、电镜观察了生后1～18d昆明白小鼠的生精上皮。

结果显示,生后1～3d,曲细精管内只有生殖母细胞和支持细胞2类形态结构截然不同的细胞,前者位于管中部;生后4～5d,少数生殖母细胞已附着在基膜上;生后6～7d,原始A型精原细胞大量出现并附着在基膜上;生后8d,A型精原干细胞大量出现,B型精原细胞开始出现;生后10d,B型精原细胞大量出现;生后12～13d,前初级精母细胞出现,少数曲细精管的管腔开始出现;生后14～15d,多数曲细精管管腔基本形成,前初级精母细胞大量出现。

本试验的结果表明,7～8d小鼠的睾丸最适于分离精原干细胞。

关键词:精原干细胞;形态结构;小鼠中图分类号:S852116 文献标识码:A 文章编号:100524545(2000)0320293205 精原干细胞的异体及异种移植是当前干细胞领域的一个新的研究热点。

但目前用于移植的细胞都是混合细胞,效率很低[1]。

若能将精原干细胞分离纯化,即可克服上述不足。

分离纯化精原干细胞必须选取合适日龄的睾丸,才能获取较多的细胞。

目前有关性成熟前小鼠生精上皮细胞生长发育所经历的形态结构的变化,尚缺乏系统的研究报道。

本试验系统观察了小鼠性成熟前各级生精细胞发育分化进程,以为选择合适日龄的小鼠睾丸分离纯化小鼠精原干细胞提供依据。

1　材料与方法111　动物的选择及饲养　昆明白小鼠,由本校实验动物中心提供,按常规方法饲养管理。

选择自然发情母鼠与公鼠合笼,次日8:00检查阴道栓,见栓日中午记为交配后(PC)0.5d,PC19d后确切记录幼鼠出生时间。

原始生殖细胞的发生、发育与EG细胞

原始生殖细胞的发生、发育与EG细胞

农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13(3):382~387*基金项目：国家自然科学基金项目(No.30200137)，国家基础研究发展(973)项目(No.G199954304-3)，国家高技术研究与发展计划(863)项目(No.2002AA216161)和教育部重大科技项目(No.03160)资助。

华进联:男,1971年生,助理研究员。

E-mail:<jlhua2003@>.**通讯作者。

Author for correspondence.E-mail:<douzhongying@>.收稿日期：2004-05-19接受日期：2004-06-03·综述·原始生殖细胞的发生、发育与EG 细胞*华进联刘雨潇董武子杨炜峰窦忠英**(西北农林科技大学国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心，杨凌712100)摘要：对原始生殖细胞(PGCs)的起源和发生，PGCs 发生和发育的相关基因，原始生殖细胞与性别分化，PGCs 的分离培养和EG 细胞等作一简述。

关键词:原始生殖细胞;胚胎生殖细胞;生殖细胞;哺乳动物Specification and Development of Primordial Germ Cellsand Embryonic Germ CellsHUA Jin-LianLIU Yu-Xiao DONG Wu-Zi YANG Wei-Feng DOU Zhong-Ying**()This paper reviews the origin ,specification and the genes related to the origin ,specification of primordial germ cells(PGCs)and sex differentiation,isolation and culture of PGCs and embryonic germ cells(EG)cells and its relatedproblems.primordial germ cells(PGCs);embryonic germ(EG)cells;embryonic stem(ES)cells;mammal生殖细胞是精子和卵细胞的前体细胞，来源于原始生殖细胞(primordia germ cells,PGCs)。

第二章 生殖细胞发生

第二章 生殖细胞发生

一、生殖质与生殖细胞的分化
1 线虫 (C. elegans)
线虫的P颗粒均匀分布于未受精卵卵质中，受精后集中位于 预定胚胎的后部。第一次卵裂形成一个AB细胞和一个含有P颗 粒的P1细胞。
雌原核
雌雄原核
AB细胞
A
P
雄原核
P颗粒
P1细胞
线虫卵裂时，P颗粒和PIE-1蛋白全部分配到P细胞中，由 P4细胞产生全部生殖细胞。PIE-1蛋白由Pie-1基因编码，与生 殖干细胞的特性维持有关。
精子细胞头部的分化
精子尾部的线粒体
精子形成过程是形态分化阶段。早期精子细胞为圆形，与精
子形态完全不同。圆形精子细胞经过独特的分化过程，形成细长 有尾能活动的成熟精子, 这个过程称为精子形成(spermiogenesis) 。 这种转化，包括顶体的形成，核染色质的聚缩，细胞质和细胞器 的重组，多余胞质的脱落和尾部的发育。顶体为一较大的空泡， 来自于高尔基体，内含水解酶，为精子穿透卵子透明带所必需。 精子细胞核内DNA紧密浓缩以减少核的体积，染色体上的组蛋 白由鱼精蛋白替代，染色体变成致密的染色质纤维，使细胞核不 再具有转录活性。尾部由精子细胞变为长形后的下极所形成。线 粒体在精子尾部近端融合，形成线粒体鞘，为精子运动提供能量。 精细胞在经过精子形成的变迁中，不断移动到曲细精管的管腔部， 当精子形成完成后，成熟精子被释放到管腔内，这一过程称为精 子释放（spermiation）。成熟精子脱离曲细精管上皮进入管腔 时，精细胞的一部分细胞质被残留下来，这部分细胞质称为残体。 在大多数情况下，它将被相邻的支持细胞吞噬，经溶酶体降解。
秀丽新小杆线虫（C. elegans）生殖腺末端的远端细胞决 定生殖干细胞的维持与分化。靠近它的干细胞进行有丝分裂。

《哺乳动物生殖细胞的形成》 学习任务单

《哺乳动物生殖细胞的形成》 学习任务单

《哺乳动物生殖细胞的形成》学习任务单一、学习目标1、理解哺乳动物生殖细胞形成的过程，包括减数分裂的各个阶段。

2、掌握生殖细胞形成过程中的关键事件和细胞变化。

3、了解生殖细胞形成过程中的调控机制。

二、学习重难点1、重点（1）减数分裂过程中染色体的行为和变化。

（2）生殖细胞的特化和分化过程。

2、难点（1）减数分裂中同源染色体的配对、交换和分离机制。

（2）生殖细胞形成过程中的基因调控网络。

三、学习内容（一）生殖细胞的起源哺乳动物的生殖细胞起源于早期胚胎发育阶段的原始生殖细胞（PGCs）。

这些原始生殖细胞在胚胎发育的特定部位形成，并通过迁移到达生殖嵴，进而发育为生殖细胞。

（二）减数分裂前期 I1、细线期染色体开始浓缩，呈细线状。

此时，染色体上的染色粒开始清晰可见。

同源染色体开始配对，但此时的配对并不紧密。

2、偶线期同源染色体开始紧密配对，形成联会复合体。

这种配对使得同源染色体之间能够进行遗传物质的交换，增加了遗传多样性。

3、粗线期染色体进一步浓缩变短变粗。

在这一阶段，同源染色体之间发生基因交换，也就是交叉互换。

这一过程对于增加遗传变异非常重要。

4、双线期同源染色体开始相互分离，但在某些部位仍然相连，形成交叉。

染色体进一步去浓缩。

5、终变期染色体高度浓缩，核仁消失，核膜破裂。

此时，染色体已经准备好进行分离。

（三）减数分裂中期 I同源染色体成对排列在赤道板上，纺锤体微管与着丝粒相连。

（四）减数分裂后期 I同源染色体分离，分别向细胞的两极移动。

（五）减数分裂末期 I染色体到达细胞的两极，胞质分裂，形成两个子细胞。

每个子细胞中的染色体数目只有原来的一半。

（六）减数分裂前期 II与有丝分裂前期相似，但染色体已经是经过减数第一次分裂后的减半状态。

（七）减数分裂中期 II染色体再次排列在赤道板上。

（八）减数分裂后期 II姐妹染色单体分离，分别向细胞的两极移动。

（九）减数分裂末期 II染色体到达细胞的两极，胞质分裂，形成四个单倍体生殖细胞。

第二章 生殖细胞发生

第二章 生殖细胞发生
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哺乳动物精子的分化过程
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哺乳动物精子的分化过程
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四、精子发生过程的同源群现象 精子发生过程从精原细胞到精子形成， 中间经过多次分裂，早期的几次分裂是完全 的，后面几次分裂是不完全的，彼此间由细 胞质间桥相连。间桥将由同一母细胞分裂来 的同族细胞连成一个细胞群，小型的线粒体 和细胞器可以通过间桥在细胞间穿过，起到 营养物质和激素相互沟通的作用，使同族细 胞群进行严格的同步发育。这种同族细胞同 步发育和成熟的现象称为同源群现象。
42
滋养细胞对卵细胞的发育有着重要的作用，它为 卵细胞提供mRNA、核糖体、中心粒，并通过胞质连桥 运输到卵细胞中。
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2、两栖动物卵的发育 与果蝇不同，蛙卵在发育中自身进行细胞 器的构建，还为未来合成DNA、RNA、蛋白质所需 要的酶。积蓄mRNA、结构蛋白和调控早期胚胎发 育的形态发生因子。蛙的卵黄物质合成于肝脏， 通过血液运输到卵细胞，这些卵黄物质成分经过 改造形成卵黄颗粒分布在卵细胞的皮质区域，并 逐渐积累移向植物极，最终75%的卵黄物质分布 在这一区域。同时糖原颗粒、核糖体、脂滴、内 质网集中到动物极，由高尔基体产生的皮质颗粒 、以及线粒体、黑色素颗粒分布于卵细胞周围。
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二、不同物种卵细胞的发育 1、昆虫卵的发育 昆虫卵巢中，每个卵原细胞经过4次分 裂，形成一个相互之间有细胞质通连的16个 细胞组成的细胞群，这个细胞群中，除一个 发育为成熟卵细胞外，其余细胞均分化为滋 养细胞，并继续维持与卵细胞相连。伴随着 卵细胞的发育，滋养细胞周围还有体细胞起 源的滤泡细胞，逐渐向卵巢前端推进形成一 个卵泡，同时卵细胞逐渐定位在滤泡顶端的 位臵。
27
哺乳动物性成熟时，睾丸内精原细胞周期 性地发育成为精子。精子的发生包括精原干 细胞的增殖和更新，精母细胞经过一次复制 和两次连续的成熟分裂，形成单倍体的精子 细胞，再经变态形成精子。这个过程有着严 格的同源群现象和周期性变化规律。 精原细胞紧靠曲细精管的基膜，由基膜 向管腔依次排列为不同发育时期的生精细胞 ：初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞 和分化中的精子。

2019干细胞生物学真题

一、名词解释（共２０题，每题２分）1、干细胞：是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，能够产生至少一种类型的、高度分化的子代细胞，是个体发育和组织再生的基础。

2、干细胞自我更新：指干细胞通过对称或者不对称分裂产生至少一个保留干细胞特性子细胞的过程，自我更新能够维持干细胞具有多分化的潜能，对于组织特异性干细胞而言，自我更新是维持其终生具有分化潜能的基础。

3、IPSC induced pluripotent stem cells：借助基因导入技术将某些特定因子导入动物或人的体细胞，同时可选择性地在培养液加入特定的小分子物质（如wnt3a），将体细胞重编程为多潜能干细胞。

此类细胞在克隆形态、生长特征、表面标记物、基因表达模式、表观遗传学特征、拟胚体形成、畸胎瘤形成和嵌合体形成等方面与ESC相似。

有分化出多种细胞组织的潜能，但失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制；它可以分化成三胚层所有的细胞，进而形成身体的所有组织和器官，在器官再生、修复和疾病治疗方面极具应用价值。

4、PGC：(primordial germ cell)是产生雄性和雌性生殖细胞的早期细胞，通常比其周围的其他细胞大，细胞内碱性磷酸酶、酯酶及糖原都呈阳性，易和其他细胞区分。

分布：多数脊椎动物原肠胚期的原始生殖细胞分布于肠道、卵黄囊或尿囊基部的内胚层细胞间。

迁移：在发育中借变形运动或进入血流而沿肠壁迁移，或进入背肠系膜，最终达到正在发育的生殖嵴处，并和生殖嵴的中胚层细胞共同组成睾丸或卵巢。

分化：原始生殖细胞在未进入生殖嵴之前，既可分化为精原细胞，又可分化为卵原细胞，这种分化是由其和不同的生殖嵴细胞的结合所决定的。

5、减数分裂：性细胞分裂时染色体只复制一次，细胞连续分裂两次，染色体数目减半的一种特殊分裂方式，是保证物种染色体数目稳定的机制。

减数分裂的结果是：成熟生殖细胞中的染色体数目比原始生殖细胞的减少一半。

6、肿瘤干细胞：肿瘤干细胞是肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞。

哺乳动物生殖细胞的发育与分化

哺乳动物生殖细胞的发育与分化在哺乳动物的生殖系统中，生殖细胞是非常重要的一部分。

它们负责繁殖后代，并且在发育过程中扮演着重要的角色。

本文将从生殖细胞的发育和分化两个方面探讨哺乳动物生殖系统的相关知识。

生殖细胞的发育生殖细胞的发育起源于胚胎发育过程中原始生殖细胞的形成。

在哺乳动物胚胎发育的早期，原始生殖细胞从胃肠板上触须形成的背肠系膜中迁移至生殖嵴。

生殖嵴位于胚胎的中线处，是生殖系统的原始结构。

随着胚胎的发育，生殖嵴分化成原始性生殖器官，同时原始生殖细胞开始分裂和增殖。

在生殖细胞的发育过程中，有三个关键时期：生殖细胞分化、性别决定和卵母细胞发育。

在哺乳动物体内，性别决定是由XY（雄性）或XX（雌性）染色体的存在决定的。

所有的胚胎在发育早期都有男性和女性结构，但在第6周才会出现性别差异。

在这时，男性的心肺和肾脏开始形成，并且分泌睾丸激素。

女性则开始分泌雌激素和孕激素，并且卵巢和子宫开始形成。

生殖细胞的分化是指原始生殖细胞向成熟的精子或卵子分化的过程。

在雄性中，原始生殖细胞向精子分化，而在雌性中则向卵子分化。

在哺乳动物体内，原始生殖细胞的发育必须受到复杂的调控，因为它们必须分化成成熟细胞，从而发挥它们在生殖过程中的重要作用。

卵母细胞发育是指哺乳动物体内卵子的生长和分化过程。

在雌性哺乳动物体内，卵巢中的原始生殖细胞向卵母细胞分化，然后形成一个称为卵泡的结构。

在卵泡内，卵母细胞被卵丘细胞包围。

在卵泡的生长过程中，卵泡不断向外扩张，形成一个成熟的卵泡。

在哺乳动物女性的周期性排卵过程中，成熟的卵泡会破裂，释放出一个成熟的卵子，然后卵子通过输卵管进入子宫，等待着精子的到来。

生殖细胞的分化在生殖细胞的分化过程中，关键的是细胞分裂和受精。

在雄性哺乳动物中，生殖系统中的特化细胞繁殖出韧带、精浆腺和附睾等器官，其中精浆腺和附睾中形成的精子负责受精。

在卵子受精过程中，精子进入卵子中并与其合并，形成新的生命。

在哺乳动物体内，有一些非常重要的分化事件，例如染色体减数分裂。

发育学期末复习1

一、名词解释紧密化：在8-细胞后，卵裂球细胞挤成紧密的细胞球体，细胞间接触面积增大，小分子物质和离子在细胞间交流精子获能：指射出的精子在若干生殖道或能因子作用下，精子膜发生变化（膜表面精液蛋白的去除，表面蛋白的重组），产生生化和运动方式的改变。

这样精子才能穿越卵母细胞周围的滤泡细胞和透明带生殖新月区：一部分向更深层迁移达腹部，同时把胚胎前区的下胚层细胞挤到明区前部的一个区域构成原肠作用：胚胎细胞的重新组合，是胚胎细胞剧烈的、高速有序的运动过程，通过细胞运动实现囊胚细胞的重新组合神经胚：进行神经管形成的胚胎自主特化;通过胞质隔离——自主特化：细胞质内的胞质决定子分离到特定的卵裂球，于是卵裂球上的细胞有不同的、独立的命运。

即受精卵分裂时卵细胞质组分分隔到特定的裂球中，从而决定裂球的分化方向原条；是鸟类和哺乳类发育初期的胚盘上先于器官原基在明区内暂时出现的，沿中线走行的线条状隆起附肢场：由有能力形成一个肢体的中胚层细胞所组成的区域快封闭反应; 精子进入卵细胞触发细胞膜电位势迅速改变，引起膜外精子与卵细胞识别和融合障碍，这可能与精子中存在一种与电荷敏感的蛋白有关胞质定域:形态发生决定子在卵细胞质中呈一定形式分布，受精时发生运动，被分隔到一定区域，并在卵裂时，分配到特定的裂球中，决定裂球的发育命运二、填空题复习要点1、发育的特征——具有严格的时间和空间的次序性。

各细胞相互协调，共同完成细胞分裂，细胞分化，细胞迁移，细胞凋亡，生长，衰老和死亡等生命现象2、动物发育的基本规律——受精；卵裂；囊胚；原肠胚；三个胚层建立；神经胚；器官形成；生长；繁殖；衰老和死亡。

3、生殖质（P颗粒）是什么物质，得到生殖质的细胞将发育什么细胞。

主要由蛋白质和RNA构成，卵裂时被分配到一定的细胞中，得到生殖质的细胞将发育成原生殖细胞（PGC）。

4、生殖干细胞涉的两种决定——一、是有丝分裂形成更多的生殖干细胞还是进行减数分裂形成配子；二、如果进行减数分裂，是发育形成精子还是卵子。

小鼠精原干细胞生物学特征及其体外培养

１９ ９ ４年 Ｂｉｓ ｒ ［创 立 的 Ｓ Ｃ 移 植 技 术 不 仅 证 ｒ ｔ 等 １ ｎｅ ］ Ｓｓ
１ 自我增殖与分化潜能 ．
Ｓ Ｃ 在睾丸 曲细精 Ｓｓ
管 的基 底 膜 上进 行 自我更 新 和 分 化 。小 鼠 Ａｓ 原 精
细胞就是干细胞 ， 存在着两种分化潜能 ， 通过不对称
有丝分裂产生新 的干细胞和子代细胞 Ａ ｒＡ ａ ｅ） ｐ（ ｐｉ ｄ ｒ 精原细胞 。 ｐ 精原细胞通过细胞 间桥成对存在 ， Ａｒ 并
收稿 日期 ：０ ７０ —４ 修回 日期 ：０ ８０ —４ ２ ０ —９０ ２０ —３０
ａ ｉ ｅｒ ＋ Ｄ ＋ Ｇ Ｒ ２ ］ Ｃ ９ ￣ ６ｎ ｇ ｎ， ９和 Ｐ １５［。但 Ｄ ｑ 睾丸其他 －ｔ ｉ Ｃ 加 Ｅ 细胞也表达 ， 不是睾丸 中 ＳＣ 表面特异标志物。其 Ｓｓ 外这些表面标志物在其他成体干细胞也有表达 ， 因 此也不是 Ｓ Ｃ 的特异的标志物 。 Ｓｓ 但为 Ｓ Ｃ 富集、 Ｓｓ 鉴 定提供依据Ⅲ］ 。
维普资讯
国 际生殖 ／ 健康 计划生 育杂志２ ８ 月第２ 卷第４ ＪｎＲｐ ｄ ｅｔＦ ０ 年７ ０ ７ 期 ｔｅ ｏＨａ ／ Ｉ ｒ ｌ ａ ｈ
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２ １ ２ ・
小 鼠精原干细胞 生物学特征及其体外培养
侧 的一百多个原始生殖细胞。原始生殖细胞在迁移 到生 殖 嵴过 程 中数 目迅 速 扩 增 到 二 千 五百 个 左 右 ， 在 １． ｄ ５ 胚龄左右进入生殖嵴后原始生殖细胞就停 １ 止增殖 ， 保持相对静止状态 （ 其时又称为性原细胞） ， 出生后才由曲细精管中央向基底膜迁移 ，到达基膜 的性原细 胞转化 为 ＳＣ ， Ａ （ ｓ ｇｅ细胞［。 Ｓ ｓ即 ｓＡ ｉ ｌ） ｎ 随后 Ａｓ 胞增 殖 和分 化 ， 而开 始 了青 春 期前 的首 次生 细 从 精 细胞分化波 。 成年小鼠睾丸 中约有 １ ０个细胞 ， 其中约有 ２ ｌ４ ｘ０ 个是 Ｓ Ｃ ，仅 占睾丸生精上皮细胞总数的 ０ ２ Ｓｓ ． ％～ ０ ０ ３ Ｓ Ｃ 数量太少不利体外培养Ｅ］ Ｓ ｓ ． ％，Ｓ ｓ ０ ｖ 。 Ｃ 分离和 －Ｓ ｓ
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胚胎于 Bouinps固定液中固定 24 h后进 行常规 石蜡包 埋与 切片, 切片厚度为 5 Lm, 行 HE 染色后, 以树胶封片。 11 3 小鼠胚胎冰冻切片的制作 11 311 固定
将采集的胚胎在滤纸上吸 去多余的水分和血渍后, 置于现 配制的 4% 多聚 甲醛 中, 于 4 e 过夜, 再转 入 25% 蔗 糖液 中 4 e 保存。 11 312 切片
弃去蔗糖 液, 将胚 胎 在滤 纸上 展开, 再用 冰 冻固 定液 包
收稿日期: 2006-08-14 基金项目: 国家自然科学基金 ( 30270958 ) 和 江苏省 自然科 学基 金 ( BK 2002108) 提供资助。 作者简介: 谢冰 ( 1979-) , 女, 硕士研究生。 * 通讯作者。
畜牧与兽 医 2007年 第 39卷 第 4期
# 53#
支持细胞分化不明显, 但可见支持细胞 的细胞核位于管腔基底 部, 呈梭形。若是雌性, 其性腺分化比雄性稍晚 , 此期仍 不易 辨出典型的卵巢特征 结构。
21 2 不同胎龄生殖嵴中 PGCs的增殖 鼠胚的冰冻切片, 经 A P 染色后, 不同日 龄胚胎 生殖嵴 内
[ 4 ] D en is H. A parallel betw een d evelopm ent and evolut ion: G erm cell recru itm en t by th e gonads [ J]. B io E ssays, 1994, 16: 933-938.
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该期鼠胚体长 8~ 9 mm, 宽 6~ 7 mm。肉眼观察, 后肢 分 节并有足板形成, 颈部、面部也开始形成, 胚体开始伸直 。光 镜下生殖嵴前后端萎 缩, 中部膨 大成为 明显的 椭圆形 生殖腺, 边缘增厚, 内含圆形 深染 的 PGC s, 聚 集分布。 生殖嵴 表面 由 体腔上皮, 即细胞体积小、染色深、矮立方形细胞组成, 实 质 由细胞体积大、染色深的原始性索和细胞体积小、染色浅 、细 胞排列疏松的 间充 质细 胞组 成, 此 时仍 无明 显的 性别 分化 形 态。因此, 性腺为未分化性腺。此期的生殖腺增大变厚, 明 显 凸入腹腔。 21113 131 5 dpc鼠胚的生殖嵴 形态
发现性别分化特征。一 般认为, PG Cs是通 过趋 化性向 生殖 嵴 迁移的, PGCs在迁移过 程中 及到达 生殖 嵴后 2 d内, 增殖 十 分活跃; 其数目可由 81 0 dpc的不 足 100 个增加到 1310 dpc 的 25 000个 [5] 。
利用 PGC s的 A P 活性, 通 过 AP 染色 追踪定 位 PGC s的 分 布, 是识别 PGC s的常 规 方法。 M o lyneaux 等 [6] 也采 用绿 色 荧 光蛋白 ( GFP ) 标记的方 法, 追踪 小鼠 PG Cs在体内 的迁移 过 程。结果发现, 815 dpc时大部分 PG Cs位于尿囊 蒂和原条尾端 的卵黄囊脏层, 即后肠 开口的边 缘并 与之结 合处; 91 5 dpc 时 少量的 PGC s位于卵黄囊和尿囊 底部, 大部分 细胞埋 藏于后 肠 中; 至 101 5~ 1215 dpc阶段, PGCs沿背肠系膜迁移至生殖嵴。 到达生殖嵴定居的 PGCs, 在性腺 分化 前与体 细胞 一样, 行 有 丝分裂增殖。这些研究结果与本试验结果基本一致。综合考 虑 小鼠 PGC s迁移至生殖嵴的数量 和性别分 化的时 间, 我们认 为 111 5~ 1215 dpc阶段为采集小鼠 PGC s的最佳时间。
( PG Cs) 在生殖嵴中的碱性磷酸酶 ( A P) 染色定位观察, 比较 其数量的增殖规 律。结果表明, 111 5 ~ 121 5 dpc ( 配后天数 ) 阶段 为采集 PG C s的
最佳时间。
关键词: 小鼠; 生殖嵴; 原始生殖细胞; 定位
中图分类号: S86511
文献标识码: B
文章 编号: 0529-5130( 2007) 04- 0052-02
[ 2 ] 戴建军, 梁阳秋, 吴悦婷, 等. O PS 法与 细管法冷 冻小鼠胚 胎 的研究, 畜牧与兽医, 2006, 38: 29-30.
[ 3 ] Buehr M. Th e prim ordial germ cells of m amm als: som e cu rren t perspect ives [ J] . E xp C ell R es, 1997, 232: 194-207.
3 讨论
PGC s是各级生殖细胞 与雌 雄配子 共同 的祖细 胞, 其 体积 大、胞质中含有丰富的糖元颗粒、 PA S染色呈深粉红 色、且具 有 A P 活性, 易与 组织 中的 其他 细胞 相区 别。 PGCs在 生殖 嵴 的分布与定位, 关系 到 EG 细胞 分离 建系 的成 效。小 鼠 PGC s 的迁移过程可分 为两个 阶段: 第 1 阶段 (约 从 71 5 dpc至 910 dpc), PGC s从原条的后 端, 即 形成后 肠的 区域, 随 着后 肠的 内卷被带入胚胎内部 , 并到达 后肠内胚层, 此种迁移属被动卷 入; 第 2阶段 (约从 91 5 dpc至 1215 dpc), PG Cs离开后 肠内 胚层, 沿背肠系膜迁移, 最终 进入生 殖嵴。此期 的 PGC s有伪 足等特征结构, 以阿米巴运动 方式主动向生殖嵴迁移 [ 3] 。
埋, 放入 - 20 e 冰 冻切 片机内; 待组织 完全 冰冻后, 用冰 冻 切片 机 切 片, 切 片 厚 度 为 20 Lm; 切 片 后 即 迅 速 贴 片, - 20 e 保存, 待染色。 11313 AP 染色
染色时, 将现配制的 A P 染色液细心 滴于切 片上, 以完 全 覆盖组织切片为准, 避光染色 20~ 30 m in。 11 4 试验观察
参考 H, M oyer AL, et a.l A ttem pts to enhance produ ct ion of porcine ch im eras from em bryon ic germ cells and preim p lan tat ion emb ryos [ J]. Theriogenology, 2004, 61: 1225-1235.
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A n ima lH usbandry & V e terinary M edicine 2007 V ol1 39 N o14
小鼠原始生殖细胞在生殖嵴的定位
谢 冰, 芮 荣* , 卢 晓, 剧世强, 黄国庆, 杨 倩
(南京农业大学动物医学院, 江苏 南京 210095)
摘要: 试验以昆明小鼠胚胎为材料, 采 用普通 石蜡切 片和 冰冻切 片技术, 对 不同胚 龄小 鼠生殖 嵴进行 形态学 比较研 究。通 过对原 始生 殖细 胞
尽管胚胎的性别在受精时 就已在遗传上确定, 但是小鼠性 腺分化一般要 到 1310 dpc才 可开 始出 现。正 常情 况下, 只 有 细胞表面无 H-Y 抗原的 PG Cs, 才能 出现性 腺向卵 巢方向 的分 化。进入精巢 的 PG Cs都 成为 精原 细胞; 而 进 入卵 巢的 PGC s 则发育成卵原 细胞, 进 入卵 子发 生过 程。 XY 型 PG Cs若进 入 卵巢也能最终发育 成有功 能的卵 子, 而精 巢中 XX 型 PGCs虽 能进入精子发生过 程, 但一般 会在成 熟分裂 开始前 发生退化, 表明 Y 染色体上 存在精 子发 生所必 需的 基因 [4] 。生 殖嵴来 源 于间介中胚层, 靠 近中 肾, 在 大 约 1010 dpc时, 方可 见到 明 显的小鼠生殖嵴。在本试验中 , 1115 dpc小鼠胚胎已可见 典型 的生殖嵴形态, 1215 dpc生殖嵴尚无分化迹象, 到 1315 dpc则
PGCs的增殖情况如图 1所示。
a. 111 5 dpc; b. 1215 dpc; c. 1315 dpc
图 1 不同胎龄鼠胚生殖嵴冰 冻切片的 AP 染色 ( @ 40 )
从图 1可以看出, AP 染色后 PGCs呈深色。随着胚龄的增 长, 生殖嵴的形态发生改变, 生 殖嵴内 PGCs的密 集度也 呈现 增长的趋势。 1115 dpc 生殖 嵴呈长 条状 纵行 隆起, PGCs分 布 于 其内, 但 靠近腹侧面 PG Cs密度较背 侧面密集; 到 1215 dpc, 生殖嵴前后端萎缩, 中部膨大 成为明显的椭圆形生殖腺, 其内 PGC s分布与 1115 dpc生 殖嵴 内 PGCs分 布相 同, 但细 胞密 度 增加; 1315 dpc 生殖 嵴 明显 变短, 变粗, 呈 现 明显 的 性别 分 化。与 1115 dpc和 121 5 dpc生殖嵴内 PGCs相比, 131 5 dpc胚 龄生 殖嵴内 PGCs分布 较均匀, 但靠近背 侧面 PGCs多于 腹侧 面, PGC s分布密集。
原始生殖细 胞 ( PGC s) 的 发育与 迁移, 是 哺乳 动物 配子 发生和发育生物学 的基本 问题 之一。 PGC s的分离 培养, 是进 行胚胎生殖 ( EG ) 细 胞建系 的基础。 EG 细胞因 在形 态功能、 分子标志和 体内 外 发育 潜能 诸 方面 与 ES 细 胞具 有 相 似的 特 征, 并被证实具有种系传递能 力, 已被 看成是获得多能干细胞 的一条替代来源 [ 1] 。本 试验 以 小鼠 胚胎 为 材料, 对不 同胚 龄 的小鼠生殖嵴进行形 态学比较研究, 通 过对 PG Cs在生殖 嵴中 的碱性磷酸酶 ( A P) 染色定位观察, 比较其数量 的增殖规律, 以期为小鼠 EG 细胞的分离培养提供实验 参考。
于普通光镜下观察各组切片, 拍摄、记录观察结果。