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丁苯酞治疗帕金森病研究进展
胡琪;陶雪;蒋敏;刘雨蒙;郭文玫;龙恩武;边原;童荣生
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2023(42)2
【摘要】丁苯酞(NBP)为多靶点抗脑缺血药物,具有保护线粒体、抗氧化、抑制神经炎症等作用。
NBP主要用于治疗轻、中度急性缺血性脑卒中,可改善缺血性脑卒中患者的神经功能、认知功能和生活能力,疗效确切且安全性好。
近年来大量研究显示,NBP的作用靶点与帕金森病(PD)的主要病理途径吻合,能显著改善患者临床症状和生命体征,治疗PD具有巨大潜力。
该文对NBP治疗PD的临床前研究及临床试验研究进行总结,以期为治疗PD提供新思路。
【总页数】5页(P203-207)
【作者】胡琪;陶雪;蒋敏;刘雨蒙;郭文玫;龙恩武;边原;童荣生
【作者单位】电子科技大学医学院;西南医科大学药学院;电子科技大学医学院附属妇女儿童医院·成都市妇女儿童中心医院;四川省医学科学院·四川省人民医院/电子科技大学附属医院药学部·个体化药物治疗四川省重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R974.3;R562.1
【相关文献】
1.丁苯酞注射液及丁苯酞胶囊治疗急性脑梗死患者的临床疗效对比
2.丁苯酞注射液及丁苯酞胶囊治疗急性脑梗死患者的临床疗效对比
3.丁苯酞注射液序贯丁苯酞胶
囊治疗急性脑梗死后认知功能障碍的临床效果分析4.丁苯酞注射液及丁苯酞胶囊治疗急性脑梗死患者的临床疗效对比5.丁苯酞注射液及丁苯酞胶囊治疗急性脑梗死患者的临床疗效对比
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干细胞的基础知识干细胞的基础知识干细胞的概念干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。
它包括胚胎干细胞和成体干细胞。
干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。
目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。
最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其他类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础。
在胚胎的发生发育中，单个受精卵可以分裂发育为多细胞的组织或器官。
在成年动物中，正常的生理代谢或病理损伤也会引起组织或器官的修复再生。
胚胎的分化形成和成年组织的再生是干细胞进一步分化的结果。
胚胎干细胞是全能的，具有分化为几乎全部组织和器官的能力。
而成年组织或器官内的干细胞一般认为具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织。
然而，这个观点目前受到了挑战。
最新的研究表明，组织特异性干细胞同样具有分化成其他细胞或组织的潜能，这为干细胞的应用开创了更广泛的空间。
干细胞具有自我更新能力（Self-renewing），能够产生高度分化的功能细胞。
干细胞按照生存阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。
1.1 胚胎干细胞胚胎干细胞（Embryonic Stem cell, ES细胞）当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团（Inner Cell Mass）的细胞即为胚胎干细胞。
胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。
早在1970年Martin Evans已从小鼠中分离出胚胎干细胞并在体外进行培养。
而人的胚胎干细胞的体外培养直到最近才获得成功。
进一步说，胚胎干细胞（ES细胞）是一种高度未分化细胞。
它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。
研究和利用ES细胞是当前生物工程领域的核心问题之一。
ES细胞的研究可追溯到上世纪五十年代，由于畸胎瘤干细胞（EC细胞）的发现开始了ES细胞的生物学研究历程。
目前许多研究工作都是以小鼠ES细胞为研究对象展开的，如：德美医学小组在去年成功的向试验鼠体内移植了由ES细胞培养出的神经胶质细胞。
胚胎干细胞在动物模型疾病治疗中的应用随着现代医学的发展，胚胎干细胞已成为越来越多地疾病治疗领域的研究热点。
尤其是在动物模型疾病治疗中，胚胎干细胞有着非常重要的应用价值。
胚胎干细胞具有较强的分化和自我复制能力，可以区分成各种不同种类的细胞，这些特性使其可以被用来治疗许多目前没有有效方法可治疗的疾病。
胚胎干细胞在疾病治疗中的应用有很多方面，如神经疾病、心血管疾病、新生儿疾病等。
其中，神经疾病的治疗利用胚胎干细胞较为常见。
许多神经系统疾病目前仍缺乏有效的治疗手段，如神经退行性疾病、帕金森症、脊髓损伤等。
而胚胎干细胞能够诱导分化成神经元，并代替或修复受损的神经细胞，从而成为治疗这些疾病的有效手段。
以传统的帕金森症为例，该疾病的发生是由于大脑中涉及运动控制的部位的神经元发生死亡，从而导致行动不能、震颤等症状。
但是，利用胚胎干细胞将其诱导分化成神经元可以协助替代患者神经元的功能，从而实现疾病治疗。
另一方面，胚胎干细胞的治疗效果也受到动物模型的影响。
动物模型是研究人类疾病机制和治疗方法的原型，在胚胎干细胞治疗前期受到广泛应用。
模型动物的选择和处理方法将直接决定胚胎干细胞治疗效果是否良好。
针对不同的疾病，选择不同模型动物才能得到更为准确的结果。
比如在学习利用胚胎干细胞治疗脊髓损伤方面，常用的模型动物有小鼠和大鼠等。
这些模型动物会在其背髓中造成局部损伤，然后通过移植胚胎干细胞或通过养分供应维持其生长发育，观测和记录其恢复状况。
通过不同实验方案，比较各种移植胚胎干细胞手段的开展情况。
知道了模型动物的选择对于胚胎干细胞治疗的重要性，我们就要注意到动物伦理问题。
在做实验的时候，我们应该尽量减少动物数量，并在全过程中注意动物的饮食和生活环境等辅助措施。
这些尽可能的措施能在不影响实验结果的前提下，起到保护动物的作用。
综上所述，胚胎干细胞在动物模型疾病治疗中的应用具有广泛的前景和重要的意义。
在研究胚胎干细胞的特性和应用方面，我们也要高度关注伦理问题和动物保护。
α-突触核蛋白原纤维诱导的帕金森病小鼠模型的行为表型及病理特征田静;侯志东;任湘鹏【摘要】目的:研究A53T突变型α-突触核蛋白(A53TαS)原纤维诱导的帕金森病(PD)小鼠模型的行为表型及病理学特征。
方法:小鼠脑内黑质致密区(SNpc)定位注射5μgA53TαS建立PD小鼠模型,造模3个月后,通过旷场试验、悬挂试验和Y迷宫检测模型小鼠的运动和认知行为学表型。
分别使用抗磷酸化α-突触核蛋白(pSyn)、抗酪氨酸羟化酶(TH)及小胶质细胞特异性蛋白抗体IBA-1作为评价模型小鼠脑内的路易小体包涵体、多巴胺能神经元变性死亡及神经炎症的分子标记,通过免疫组织化学染色法研究模型小鼠脑内典型的病理特征。
结果:旷场试验中,模型组小鼠的总运动距离较对照组差异无统计学意义(P>0.05);悬挂试验显示模型组小鼠四爪抓杆持续时间较对照组小鼠显著缩短(P<0.05);Y迷宫检测表明模型组小鼠的自发转换正确率较对照组差异无统计学意义(P>0.05)。
与对照组比,模型组小鼠中脑SNpc区的pSyn阳性包涵体数量显著增多(P<0.01),同时TH阳性神经元数量显著减少(P<0.05),IBA-1阳性胶质细胞数量异常增加(P<0.01)。
结论:脑内注射A53TαS原纤维可稳定诱导出PD小鼠模型,该模型小鼠表现出一定程度的肌力和平衡力下降;且可同时模拟出PD的路易小体包涵体、多巴胺能神经元缺失及过度激活的神经炎症等病理特征。
【期刊名称】《温州医科大学学报》【年(卷),期】2019(049)003【总页数】5页(P157-161)【关键词】帕金森病模型;α-突触核蛋白原纤维;行为学;路易小体;多巴胺能神经元;小鼠【作者】田静;侯志东;任湘鹏【作者单位】[1]温州医科大学附属眼视光医院实验室中心,浙江温州325027;[1]温州医科大学附属眼视光医院实验室中心,浙江温州325027;[1]温州医科大学附属眼视光医院实验室中心,浙江温州325027;【正文语种】中文【中图分类】Q953帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是第二大常见的进行性神经退行性疾病，其主要临床表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势不稳等运动症状；典型的病理特征为中脑黑质致密区（substantia nigra pars compacta，SNpc）多巴胺（dopamine，DA）能神经元进行性变性缺失，残存的DA能神经元胞质内出现路易小体（Lewy bodies，LBs），即α-突触核蛋白（α-synuclein，αS）包涵体。
第五章神经营养因子第一节神经营养因子的生物学基础一、神经营养因子的发现与发展历史1、定义一般将神经营养物质(neurotrophins)和对神经细胞存活具有调节作用的生长因子统称为神经营养因子(neurotrophic factors, NTFs)。
2、发现与发展历史50年前神经生长因子(nerve growth factor，NGF)的发现开辟了肽类生长因子的纪元。
具有神经元特异性的NGF成为第一个被发现的细胞生长因子，也是最典型的神经营养因子。
二十世纪五十年代初，Levi-Montalcini利用鸡胚背根节组织培养技术建立了检测该活性分子生物活性的经典方法(图5-1)。
不久她又和Cohen一起相继找到了两种富含这种物质的生物材料——蛇毒和小鼠颌下腺。
1959和1960年先后从中分离纯化出这种促神经生长的、可溶性蛋白质，之后命名为神经生长因子(NGF)。
NGF的发现使人们认识到，在神经系统的发生过程中，需要一些能促进神经元发育、生长和维持其活性的因子，由此开辟了神经生物学的新领域，Levi-Montalcini和Cohen也因此获得了1986年度诺贝尔生理学奖。
图1神经生长因子(NGF)的神经营养活性左侧未加NGF的鸡胚背根节，右侧加入NGF的鸡胚背根节，可观察到NGF的促进突起生长的作用。
由于NGF只选择性地对几类神经细胞有作用，人们推测还有其它类型的神经营养因子存在。
近二十年来又陆续发现九种新的神经营养因子。
1982年Barde等从脑中分离到脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)。
1989年，BDNF的基因被克隆。
1990年，根据BDNF和NGF中保守性最强部分的序列，利用PCR等技术，几个实验室几乎同时发现了NGF基因家族的第三个成员，如脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor)、神经营养素-3(neurotrophin-3 NT-3)、神经营养物质－4/5(neurotrophin-4／5，NT4／5)、神经营养素-6(neurotrophin-6，NT-6)、睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor，CNTF)和胶质细胞源性神营养因子(glia cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)。
诱导性多能干细胞的制备、生物学特性、优势及临床应用前景摘要：2012年10月8日，John B. Gurdon与Shinya Yamanaka 因制备出诱导性多能干细胞〔induced pluripotent stem cells，iPSCs〕及相关领域的研究被授予诺贝尔生理学或医学奖。
两位科学家在相差40多年的时间内，探索着一个共同科学问题。
1962年，戈登教授发现细胞的特化是可以逆转的。
在一项经典实验中，他将美洲爪蟾的皮肤细胞核注入去核的卵细胞中，结果发现部分卵细胞依然可以发育成蝌蚪，其中的一部分蝌蚪可以继续发育成为成熟的爪蟾。
戈登爵士做出这一重大发现之时，正是山中伸弥出生之年。
2007年，山中博士所在的研究团队通过小鼠实验，发现诱导表皮细胞使之具有胚胎干细胞特征的方法。
此方法诱导出的干细胞可转变为心脏和神经细胞，为研究治疗多种心血管绝症提供了巨大助力。
诺贝尔奖委员会认为，他们精彩的成果完全颠覆了人们对发育的传统观念，关于细胞命运调控和发育的教科书内容已被重新改写。
关键词：诱导性多能干细胞、制备方法、生物学特性、与ES细胞相比的优势、临床应用前景与试行治疗方案引言：诱导性多能干细胞〔iPSCs〕具有类似于胚胎干细胞(ESC)的全能性，又无道德伦理争议，而且来源广泛，防止了免疫排斥反应，为整个干细胞生物学领域和临床再生医学提供了新的研究方向，因而被评为2008年年度十大进展之首。
山中博士亦因在细胞重编程领域的杰出奉献，获得了2012年诺贝尔生理学或医学奖。
诱导性多潜能干细胞在疾病的模型建立与机制研究、细胞治疗、药物的发现与评价等方面有着巨大的潜在应用价值，因此在用于临床治疗前，国内外学者针对其安全性问题进行了广泛深入的研究，采取了多种措施提高诱导性多潜能干细胞的安全性。
本文重点对诱导性多能干细胞的制备方法、生物学特性、与ES细胞相比具有的优势、临床应用前景和面临的问题及从理论上设计应用诱导性多能干细胞临床治疗帕金森病方案进行论述。
XBP-1稳转神经干细胞移植对PD大鼠模型的治疗作用冯玉华;汤佳佳;何春珂;章圆;贾丽君【期刊名称】《吉林医学》【年(卷),期】2012(033)031【摘要】目的:通过测定XBP1-NSCs移植对帕金森大鼠模型黑质内单胺类递质水平的影响,研究XBP1-NSCs移植对PD的治疗作用.方法:将18只PD大鼠模型随机分为3组,每组6只大鼠.对照组侧脑室内移植入20 μl 的PBS,NSCs组移植空白神经干细胞悬液20 μl,XBP1-NSCs组移植XBP-1基因修饰神经干细胞悬液20 μl.于移植后第28天对各组大鼠进行神经功能评分,并取黑质脑组织高效液相色谱法测定单胺类递质多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸的含量.结果:XBP1-NSCs组大鼠黑质内多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸水平明显增加,且移植后大鼠行为学评分明显改善.结论:XBP1-NSCs移植可通过增加黑质内多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸水平从而改善帕金森症状起到治疗目的.【总页数】3页(P6725-6727)【作者】冯玉华;汤佳佳;何春珂;章圆;贾丽君【作者单位】吉林医药学院神经内科,吉林,吉林,132013;吉林大学白求恩第一医院内镜中心,吉林,长春,130021;吉林省中西医结合医院骨科,吉林,长春,130021;吉林大学白求恩第一医院新生儿科,吉林,长春,130021;中国人民解放军第208医院神经内科,吉林,长春,130062【正文语种】中文【相关文献】1.神经干细胞移植对帕金森病模型大鼠的治疗作用 [J], 郑敏;王亚平;裴雪涛2.XBP-1稳转神经干细胞移植对PD大鼠模型的治疗作用 [J], 冯玉华;汤佳佳;何春珂;章圆;贾丽君3.鼠胚神经干细胞移植对帕金森模型大鼠的治疗作用 [J], 蒋明;陈新成;吴旻;邓引生;陶轶4.丹参酮ⅡA磺酸钠对老年COPD模型大鼠的治疗作用及其机制 [J], 王志敏;林纯意;易高5.大鼠胚脑皮质和中脑神经干细胞移植治疗PD模型鼠的比较研究 [J], 黄镇;沈春升;金国华;田美玲;秦建兵;徐慧君因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人类胚胎干细胞诱导分化为多巴胺能神经元的实验研究的开题报告一、开题背景帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种常见的神经系统退行性疾病，其特征为多巴胺能神经元的死亡和功能丧失。
目前的治疗方法是使用多巴胺替代剂或深部脑刺激，但这些方法只能缓解症状，不能治愈疾病。
因此，发现治疗帕金森病的新方法是非常必要的。
人类胚胎干细胞（human embryonic stem cells，hESCs）因其具有自我更新和分化成各种不同类型细胞的能力，被广泛应用于再生医学领域。
近年来，许多研究表明，可以通过将hESCs诱导分化为多巴胺能神经元来治疗帕金森病。
但是，这种方法存在一些难以克服的挑战，如细胞生长和营养问题、免疫排斥、治疗效果不稳定等。
因此，在此背景下，我们开展了人类胚胎干细胞诱导分化为多巴胺能神经元的实验研究，以探索更有效的治疗帕金森病的方法。
二、研究目的本研究的主要目的是使用hESCs诱导分化为多巴胺能神经元，以验证其治疗帕金森病的潜力，并评估其治疗效果和稳定性，为开发帕金森病治疗新方法提供实验基础。
三、研究内容和方案1. 研究内容本研究将使用hESCs为前体细胞，通过一系列化学和生物学处理，诱导其分化成多巴胺能神经元。
同时，我们将研究多巴胺能神经元的生长情况、生理功能特性及其治疗效果和稳定性，以验证其治疗帕金森病的潜力。
2. 研究方案2.1 细胞培养使用hESCs进行培养和扩增，制备前体细胞。
应用化学因子和生物工程技术将其定向分化为中间前体细胞和多巴胺能神经元。
2.2 鉴定和筛选多巴胺能神经元使用分子生物学、细胞生物学和荧光显微镜技术鉴定和筛选多巴胺能神经元，并评估其生长至稳定状态和生理功能特性。
2.3 治疗效果和稳定性评估在体内和体外研究多巴胺能神经元的治疗效果和稳定性，例如使用帕金森病模型小鼠，观察多巴胺能神经元的移植效果和治疗效果。
四、预期结果本研究期望获得成功将hESCs诱导分化成多巴胺能神经元，并评估其治疗帕金森病的效果和稳定性。
中国组织工程研究与临床康复 第15卷 第49期 2011–12–03出版Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research December 3, 2011 Vol.15, No.49P .O. Box 1200, Shenyang 110004 9178Department of Neurosurgery,Affiliated Hospital of Jiangsu University, Zhenjiang 212001, Jiangsu Province, ChinaJiang Ming ★, Master, Attending physician, Department of Neurosurgery,Affiliated Hospital of Jiangsu University, Zhenjiang 212001, Jiangsu Province, Chinajjmm750727@ Correspondence to: Wu Min, Chiefphysician, Master’s supervisor, Department of Neurosurgery,Affiliated Hospital of Jiangsu University, Zhenjiang 212001, Jiangsu Province, Chinawumin650822@ Supported by: Social Development Fund of Zhenjiang, No. SH2002036*Received: 2011-09-19 Accepted: 2011-10-21鼠胚神经干细胞移植对帕金森模型大鼠的治疗作用*★蒋 明，陈新成，吴 旻，邓引生，陶 轶Effects of engrafted neural stem cells derived from fetal rat on model rat with Parkinson's diseasesJiang Ming, Chen Xin-cheng, Wu Min, Deng Yin-sheng, Tao YiAbstractBACKGROUND: Stem cells transplantation is one of the potential methods for the treatment of Parkinson's diseases (PD). OBJECTIVE: To investigate the effect of neural stem cells engrafted into the striatum on rotational behavior and dopamine concentration of rat model with PD.METHODS: Rat models of PD were established by point injection with 6-hydroxy dopamine to damage nigrostriatal, the 1×106 (total 20 μL) passage 3 fetal rat neural stem cells or normal saline were injected into the striatum of the established rat model. RESULTS AND CONCLUSION: After neural stem cells were transplanted into the striatum, the rotational behavior of the PD rat was improved obviously. Three weeks later, the results of immunohistochemistry detection showed that the number of tyrosine hydroxylase-positive cells in the substantia nigra of transfected PD rat was increased obviously, and the tyrosinehydroxylase-positive cells could be seen in the striatum. Fluorescence microscope observation showed that the Hoechst 33324d marked stem cells were more intensive near the site of transplantation and migrated to distant part. Eight weeks later, high performance liquid chromatography analysis showed that dopamine concentration in the striatum of stem cells transplanted PD rats was significantly higher (P < 0.01). It indicates that intracerebral neural stem cells transplantation can reduce the rat substantia nigra dopaminergic neuronal damage caused by 6-hydroxy dopamine, and improve the rotational behavior of PD rat.Jiang M, Chen XC, Wu M, Deng YS, Tao Y. Effects of engrafted neural stem cells derived from fetal rat on model rat with Parkinson's diseases.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(49): 9178-9181. [ ]摘要背景：干细胞移植是治疗帕金森的有潜力的方法之一。
目的：观察神经干细胞纹状体移植对帕金森模型大鼠旋转行为及脑内多巴胺含量的影响。
方法：采用6-羟基多巴胺定点注射毁损黑质纹状体的方法构建帕金森大鼠模型；向造模成功的大鼠纹状体内分别移植1×106(共计20 μL)的第3代胚鼠神经干细胞或等量生理盐水。
结果与结论：神经干细胞移植后，帕金森大鼠的旋转行为明显改善。
干细胞移植后3周，免疫组化检测发现移植干细胞的帕金森大鼠脑黑质部位酪氨酸羟化酶阳性细胞数增多，纹状体内可见酪氨酸羟化酶阳性细胞；荧光显微镜下观察发现Hoechst 33324d 标记神经干细胞在移植针道附近最为密集，并向远隔部位迁徙。
干细胞移植后8周，高效液相色谱检测显示移植干细胞的帕金森大鼠纹状体内多巴胺含量明显增高(P < 0.01)。
说明神经干细胞脑内移植能够减轻6-羟基多巴胺引起的大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的损伤，改善大鼠的旋转行为。
关键词：帕金森；神经干细胞；大鼠模型；多巴胺；酪氨酸羟化酶；旋转行为 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.49.013蒋明，陈新成，吴旻，邓引生，陶轶. 鼠胚神经干细胞移植对帕金森模型大鼠的治疗作用[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(49):9178-9181. [ ]0 引言目前治疗帕金森病的主要方法有药物治疗、细胞移植和基因治疗。
其中细胞移植越来越被帕金森患者及其家属所接受，并成为治疗帕金森的最有潜力的方法之一[1-4]。
虽然已经证明成人脑存有神经干细胞且其可塑性很强，但它们在对神经元损伤应答时再生为新的神经元的能力是有限的。
在较低程度或少量神经元损伤时，这些脑内现存的神经干细胞可以起到自我修复的作用，但在帕金森脑内较大量神经元死亡时，仅依靠自身的神经干细胞将没有足够能力完成自我修复。
因此必须移植入新的干细胞来代替那些因退行性疾病而丧失的神经元。
实验将鼠胚神经干细胞移植入6-羟基多巴胺毁损的帕金森模型大鼠黑质纹状体，观察帕金森大鼠旋转行为的改变、移植细胞的存活以及移植后脑内神经递质的变化情况，探讨神经干细胞移植治疗帕金森的可行性。
1 材料和方法设计：随机对照动物实验。
时间和地点：于2011-06在江苏大学实验动物中心完成。
材料：实验动物：孕14~17 d 的SD 大鼠5只，用于蒋明，等.鼠胚神经干细胞移植对帕金森模型大鼠的治疗作用ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH9179 江苏大学附属医院神经外科，江苏省镇江市212001蒋明★，男，1975年生，江苏省镇江市人，1999年江苏大学毕业，硕士，主治医师，主要从事神经干细胞的基础与临床研究。
jjmm750727@ 通讯作者：吴旻，主任医师，硕士生导师，江苏大学附属医院神经外科(曾在镇江市第四人民医院工作)，江苏省镇江市212001 wumin650822@ 中图分类号:R394.2文献标识码:B文章编号:1673-8225 (2011)49-09178-04收稿日期：2011-09-19 修回日期：2011-10-21 (20110903010/WLM ·C)获取胚鼠脑组织制备神经干细胞。
成年SD大鼠40只，雌雄不限，体质量200 g左右，用于帕金森模型的制备。
以上动物均由江苏大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(苏)2009-0002。
方法：神经干细胞的分离培养：取孕14~17 d的SD 大鼠，乙醚麻醉后断颈处死，分离胎鼠，取出脑组织置于冰冻的D-Hank’s液中，剥除表面脑膜和血管等组织，剪碎，1.25 g/L的胰酶消化15 min，加入含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12终止消化，800 r/min离心5 min，去上清，加入DMEM/F12冲洗，200目的滤网过滤，制成单细胞悬液，锥虫蓝染色计数活细胞，调整细胞浓度为2×106后加入150∶的B27和20 μg/L的碱性成纤维细胞因子，放入37 ℃，体积分数5%CO2的恒温箱中培养，每隔2 d半量换液1次，胰酶消化细胞进行传代。
