胡萝卜素含量的测定(精)

水果、蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定1 主题内容与适用范围本标准规定了水果、蔬菜汁中类胡萝卜素的分离提取方法及提取物中类胡萝卜素总量的测定方法。

本标准适用于水果、蔬菜汁中类胡萝卜素总量的测定。

2 原理果蔬滤液通过溶剂萃取,分离提取类胡萝卜素,在特定波长下用分光光度法测其吸光度。

该吸光度与类胡萝卜素含量成线性关系,通过换算即可得知类胡萝卜素之含量。

3 试剂和溶液本标准所用试剂除特殊规定外,均使用符合国家标准的分析纯试剂,均采用蒸馏水。

3.1 石英砂(Q/HG 22--467)；3.2 萃取剂,2/1(v/v)氯仿(GB 682)-甲醇(GB 683)混合。

4 仪器设备4.1 抽滤器；4.2 无灰分滤纸；4.3 分液漏斗：250mL；4.4 容量瓶,100mL；4.5 移液管,20mL；4.6 烧杯,50mL；4.7 分光光度计,使用的测量波长为440±10nm。

5 分析步骤注：由于类胡萝卜素本身性状的不稳定性,即见光易氧化分解,建议所有操作应避光进行。

5.1 试样的制备5.1.1 液体样品：混合均匀后取样。

5.1.2 固体样品：捣碎机捣碎后,纱布挤汁。

5.2 用移液管吸取20mL样液置50mL烧杯中。

5.3 过滤：在烧杯(5.2)中加入3g石英砂,摇动后用布氏漏斗过滤(布氏漏斗预先铺有无灰滤纸,纸上铺有2g石英砂),然后再用5mL水冲洗滤渣3次。

5.4 萃取：在250mL的分液漏斗中倒入滤液(5.3),再加入20mL萃取剂(3.2),振摇后静置,收集下部分有机相,再用20mL萃取剂提取两次,将三次萃取所得有机相合并,用萃取剂定容为100mL。

注：对果胶含量大的果蔬,萃取时,将三次合并的有机相重新倒回原分液漏斗,继续用20mL萃取洗涤一次,然后用萃取剂定容至100mL。

5.5 测定：在440±10nm波长下测定提取液的最大吸光度A。

6 结果的计算和表示类胡萝卜素总量用mg/L表示,按下式计算：类胡萝卜素(mg/L)＝A×20式中：A——测定的最大吸光度；20——换算系数。

一、实验目的1. 学习胡萝卜素的提取方法。

2. 掌握胡萝卜素含量的测定方法。

3. 了解胡萝卜的营养价值。

二、实验原理胡萝卜素是一种脂溶性色素，广泛存在于胡萝卜、菠菜、甘蓝等植物中。

胡萝卜素具有丰富的营养价值，对人体健康具有重要作用。

本实验采用有机溶剂提取胡萝卜素，并通过比色法测定胡萝卜素的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜胡萝卜、无水乙醇、蒸馏水、三氯甲烷、无水硫酸钠、硅胶、标准胡萝卜素溶液等。

2. 实验仪器：电子天平、离心机、分光光度计、研钵、烧杯、试管、漏斗、滤纸等。

四、实验步骤1. 胡萝卜素的提取（1）将新鲜胡萝卜洗净，去皮，切成小块，放入研钵中。

（2）加入适量无水乙醇，研磨成匀浆。

（3）将匀浆倒入漏斗中，用滤纸过滤，收集滤液。

（4）将滤液倒入烧杯中，加入适量无水硫酸钠，搅拌均匀，静置。

（5）待滤液分层后，取出上层清液，用分液漏斗分离。

（6）将分离出的上层清液倒入试管中，加入适量硅胶，搅拌均匀，静置。

（7）待硅胶沉淀后，取出上层清液，用分光光度计测定其吸光度。

2. 胡萝卜素含量的测定（1）将标准胡萝卜素溶液稀释成一系列浓度，分别测定其吸光度。

（2）以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（3）根据实验测得的胡萝卜素吸光度，从标准曲线上查得胡萝卜素含量。

五、实验结果与分析1. 胡萝卜素的提取通过实验，成功提取了胡萝卜素，提取率为（此处填写提取率）。

2. 胡萝卜素含量的测定根据标准曲线，计算出实验样品中胡萝卜素的含量为（此处填写含量）mg/g。

六、实验结论1. 本实验成功提取了胡萝卜素，提取率为（此处填写提取率）。

2. 通过比色法测定，实验样品中胡萝卜素的含量为（此处填写含量）mg/g。

3. 胡萝卜中含有丰富的胡萝卜素，具有很高的营养价值。

七、实验讨论1. 实验过程中，提取胡萝卜素的关键步骤是研磨、过滤和分离。

在研磨过程中，要注意研磨时间不宜过长，以免胡萝卜素氧化降解。

2. 在分离过程中，要注意分液漏斗的使用，避免混合液分离不完全。

新鲜蔬菜中β-胡萝卜素的提取、分离和测定
班级：临五一班（2小班）姓名：任依梦学号：5117119051
【实验目的】
●掌握从新鲜胡萝卜中提取、分离β-胡萝卜素的方法
●掌握应用紫外-可见吸收光谱法测定β-胡萝卜素的紫外光谱图
●了解共轭多烯化合物π→π*跃迁吸收波长的计算方法及共轭多烯化合物的紫
外吸收光谱特征
【实验原理】
简介胡萝卜素是维生素A的前体，具有类似维生素A的活性，有α、β、γ异构体，其中以β-胡萝卜素生理活性最强。

β-胡萝卜素的结构如下：
β-胡萝卜素是长链多烯化合物，它的π-π*跃迁吸收带处于可见光区，因此纯β-胡萝卜素是橘红色晶体。

提取胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂，故可用有机溶剂来提取。

分离采用柱层析法将提取液中β-胡萝卜素分离出来。

测定经分离提纯的β-胡萝卜素含量可以直接用紫外-可见分光光度法测定。

【实验步骤】
1.β-胡萝卜素的提取
20g新鲜胡萝卜+40mL1：1丙酮-石油醚混合溶剂研磨5min（研钵）萃取（分液漏斗）
2.柱层析
在层析柱中加入少许浸有石油醚的脱脂棉→加入一半层析柱高的石油醚→加入20g中性氧化铝→在氧化铝上面加一圆形滤纸→加入β-胡萝卜素提取液→用9:1（体积比）石油醚-丙酮溶液洗脱，进行层析
3.β-胡萝卜素的紫外-可见吸收光谱的测定
将层析分离得到的橙黄色试样稀释后加到1cm的比色皿中，以石油醚作空白试剂，用分光光度计测定400~600nm范围内的吸收
【实验结果】
β-胡萝卜素的吸收曲线。

食品安全国家标准食品中β-胡萝卜素的测定1范围本标准规定了食品中β-胡萝卜素的测定方法。

本标准适用于食品中β-胡萝卜素的测定。

2原理试样经皂化后，使β-胡萝卜素完全变为游离态。

用石油醚萃取后，反相色谱法分离，外标法定量。

3试剂和材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。

3.1试剂3.1.1α-淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。

3.1.2氢氧化钾（KOH）。

3.1.3无水硫酸钠（Na2SO4）。

3.1.4抗坏血酸(C6H8O6)。

3.1.5石油醚：沸程30 ℃～60 ℃。

3.1.6甲醇(CH4O)：色谱纯。

3.1.7乙腈(C2H3N)：色谱纯。

3.1.8三氯甲烷(CHCl3)：色谱纯。

3.1.9正己烷(C6H14)：色谱纯。

3.1.10甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]：色谱纯。

3.1.11乙醇：体积分数为95 %。

3.2试剂配制3.2.1氢氧化钾溶液：称固体氢氧化钾250 g，加入200 mL 水溶解。

临用前配制。

3.3标准品3.3.1β-胡萝卜素标准品，CAS：7235-40-7。

3.3.2α-胡萝卜素标准品，CAS：7488-99-5。

3.4标准溶液的配制3.4.1β-胡萝卜素标准储备液（500 g/mL）：准确称取β-胡萝卜素标准品50 mg（精确到0.1mg），用正己烷定容至100 mL 棕色容量瓶中。

注：β-胡萝卜素标准储备液需要-10 ℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。

标准储备液用前需校正，具体操作见附录A。

3.4.2β-胡萝卜素标准中间液（100 μg/mL）：从β-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0 mL 溶液于50 mL 棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度。

3.4.3β-胡萝卜素标准工作液：从β-胡萝卜素标准中间液中分别准确移取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL 溶液至5 个100 mL 棕色容量瓶。

（一）检测原理：类胡萝卜素含量测定(酶标仪96T)叶绿体中所含色素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合体，其含量多少及其组成决定了植物对不同光的吸收、利用效率，常常作为研究光合生理的重要指标。

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，在649nm和665nm处测定叶绿素提取物的吸光值，在470nm处测定类胡萝卜素；然后利用经验公式计算出样品中叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素总含量及类胡萝卜素含量。

（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求试剂一粉剂×1瓶4℃保存乙醇（自备）1000mL×1瓶4℃保存抽提Buffer配制：（体积比）乙醇：丙酮=95:5（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、天平、10mL玻璃试管、锡箔纸、无水乙醇，丙酮。

（四）测定步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备（1）取新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉。

（2）称约0.1g剪碎，用蒸馏水洗干净，然后加入1mL抽提Buffer，少量试剂一（约50mg），叶绿素对光敏感，务必在黑暗或弱光条件下充分研磨（难磨叶片可以添加少量石英砂助磨），然后转移至10mL玻璃试管。

（3）用抽提Buffer冲洗研钵，将所有冲洗液及研钵中所有的绿色物质转入10mL玻璃试管，用抽提Buffer补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。

2、上机检测分别取200μL浸提液和200μL抽提Buffer于96孔板，记为测定管和空白管，分别于665nm 和649nm和470nm处读取吸光值A，△A665=(A测定-A空白)665，△A649=(A测定-A空白) 649，△A470=(A测定-A空白)470。

食物中胡萝卜素的测定方法Method for determination of carotene in foods1 主题内容与适用范围本标准规定了食物中胡萝卜素的测定方法——纸层析法。

本标准适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定，其最小检出限为0.11μg。

2 原理以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色纱分离；剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。

3 试剂3.1 石油醚（沸程30～60℃）：同时是展开剂。

3.2 丙酮：分析纯。

3.3 丙酮-石油醚混合液：3：7（V/V）。

3.4 无水硫酸钠：分析纯。

3.5 5%硫酸钠溶液。

3.6 1：1氢氧化钾溶液：取50g氢氧化钾溶于50mL水。

3.7 无水乙醇：需经脱醛处理。

3.8 β-胡萝卜素标准溶液：取5mgβ-胡萝卜素标准品，溶于10mL三氯甲烷中，浓度约为500μg/mL，准确测其浓度。

取标准溶液10.0μL，加正己烷3.00mL，混匀，测吸光值，比色杯厚度1cm，以正己烷为空白，入射光波长450nm，平行测定三份，取均值。

计算公式： (1)式中：X1——胡萝卜素标准溶液浓度，mg/mL；A——吸光值；E——β-胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度为1cm，溶液浓度为1ppm的吸光系数，为0.2638；——将ppm,换算成mg/mL;——测定过程中稀释倍数的换算。

3.9 β-胡萝卜素标准使用液：将已标定的标准液用石油醚准确稀释后，每毫升溶液相当50μg，避光保存于冰箱中。

4 仪器和设备4.1 实验室常用设备。

4.2 玻璃层析缸。

4.3 分光光度计。

4.4旋转蒸发器：具150mL球形瓶。

4.5 恒温水浴锅。

4.6 皂化回馏装置。

4.7 点样器或微量注射器。

4.8 新华滤纸：定性，快速或中速，101号。

5 样品的采集和处理5.1 粮食：样品用水洗三次，置60℃烤箱中烤干，磨粉，储于塑料瓶内，放一小包樟脑精，盖紧瓶塞保存，备用。

食品中胡萝卜素含量的检测及分析胡萝卜素是一类存在于植物中的天然色素，在食物中具有重要的营养价值和健康功效。

它们不仅能够赋予食物丰富的颜色，还是人体合成维生素A的前体物质。

因此，食品中胡萝卜素含量的检测和分析对于保证食品质量和人类健康至关重要。

一、胡萝卜素的种类与功能胡萝卜素是一类存在于植物中的化合物，主要包括β-胡萝卜素、α-胡萝卜素、β-葡萄糖胡萝卜素等。

其中，β-胡萝卜素是最常见和最具代表性的一种。

胡萝卜素具有激活细胞免疫、抗氧化、抗癌、维护皮肤健康等多种功效，对人体健康有着重要影响。

二、食品中胡萝卜素的检测方法1. 高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前检测食品中胡萝卜素含量的常用方法之一。

它利用样品中胡萝卜素的特定波长进行检测，通过与标准品进行比对，确定胡萝卜素的含量。

这种方法操作灵活方便，且对小样品量的检测效果也很好。

2. 气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的胡萝卜素检测方法。

它通过将样品中的胡萝卜素蒸发成气态，在色谱柱中分离和检测各种胡萝卜素的含量。

这种方法准确性较高，但需要较复杂的操作和设备。

3. 光谱法光谱法是一种非常简便的胡萝卜素检测方法。

通过测量胡萝卜素在特定波长下的吸光度，可以快速确定其含量。

这种方法操作简单、快速，并且适用于大规模食品样品的快速筛查。

三、食品中胡萝卜素含量的分析食品中胡萝卜素含量的分析对于了解其营养价值和确定食品质量具有重要意义。

1. 不同食物中胡萝卜素含量的比较通过对不同食物中胡萝卜素含量的分析，可以比较不同食物的营养价值和选择合适的食物摄入。

例如，某些深色蔬菜和水果，如胡萝卜、甜椒、南瓜等，富含高量的胡萝卜素，适合作为人体补充维生素A的来源。

2. 食品加工对胡萝卜素的影响食品加工和烹饪过程中会对胡萝卜素含量产生影响。

例如，高温烹饪和长时间煮沸会导致一部分胡萝卜素被破坏或丢失，降低食品中胡萝卜素的含量。

因此，在食品加工过程中需要注意合理选择烹饪方法，以保留食物中的胡萝卜素。