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4 茎尖分生组织培养
概念：
茎尖分生组织：切取茎的先端部分或茎的分生组织部分（小至几十微米）进行无菌培养，使其发育成无菌植株的过程。
体细胞无性系变异：
表观遗传变异、
种质超低温保存
●利用茎尖培养生产无病毒苗木的主要步骤。
●影响茎尖培养脱毒效果的因素
●简述体细无性系变异的概念及变异来源。
●影响植物体细胞无性系变异的因素，如何筛选变异株系。
●植物种质资源离体保存有何意义？比较低温保存和超低温保存的差异。
●超低温保存的原理是什么？它的基本操作程序有哪些？
●影响种质离体保存遗传稳定性的因素有哪些？如何减少种质离体保存过程中的变
异？
5 单倍体细胞培养
●概念：单倍体培养、孤雄生殖、孤雌生殖、单倍体加倍
●单倍体的发生途径及在育种中的作用
●离体培养中小孢子发育途径
●比较花药和花粉培养的特点，说明单倍体产生的关键因素。
●单倍体的加倍途径及在育种中的应用
6 细胞培养
●简述植物单细胞分离的方法
●比较单细胞培养方法的特点。
●悬浮细胞培养的关键技术。
●如何使悬浮培养的细胞同步化？
●简述植物细胞培养的应用。
7原生质体培养与体细胞杂交
8 植物遗传转化
●简述植物转基因方法的主要方法。
●农杆菌介导的转化体系原理与方法。
●以拟南芥为例，设计可行的转基因方案。
●转基因瞬时表达和稳定表达的特点。
●如何进行转基因植物的筛选与鉴定？
9 植物基因克隆
●基因克隆的含义
●简述基因克隆的“分、切、接、转、筛”。
●基因克隆的载体及特点
●基因克隆中的工具酶及用途。
第四章植物器官的培养1、器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。
以器官作为外植体进行离体培养。
器官培养的意义:研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成在生产实践上具有重要的应用价值,可在短期内提高繁殖速率,进行名贵品种的快速繁殖;利用茎尖培养可得到脱毒试管苗,解决品种的退化问题,提高产量和质量;将植物器官作诱变处理,用器官培养可得到突变株,进行细胞突变育种等。
第一节营养器官的培养一、茎尖的培养茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分,进行无菌培养。
这是组织培养中用得最多的一个取材部位。
茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥,其长度不超过0.5mm。
普通茎尖指较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽。
普通茎尖培养(1)取材: 挑选杂菌污染少,生长不久的茎尖。
(2)消毒接种: 将茎尖切成0.5-1.Ocm长将茎尖置于流水冲洗2-4h在75%的酒精中处理30s在稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min无菌水冲洗数次接种(3)接种: 为了减少污染,可在接种前再剥掉一些叶片,使茎尖为0.5cm左右大小。
(4)培养的方法和程序①培养基多数茎尖培养采用MS作为基本培养基,常用的其他培养基有White,Heller.培养基中生长素:2,4-D,IAA,NAA,浓度一般用0.1mg/L左右,高于此浓度,往往产生畸变芽或形成愈伤组织。
茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。
生长太慢:接种后茎尖不增大,只是茎尖逐渐变绿,出现绿色小点,细胞逐渐老化而进人休眠状态,或者逐渐变褐死亡。
引起的原因:生长素浓度太低,或是温度过低或过高;生长太快型是接种后茎尖迅速增大,在茎尖基部产生愈伤组织,并迅速增殖,而茎尖不伸长,久之茎尖也形成愈伤组织,从而丧失发育成苗的能力。
引起的原因:一是生长素浓度过高,引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。
第二章细胞工程实验室组成及无菌操作技术1、目前，常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特点？1）MS培养基特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的平衡溶液。
2）5B培养基其主要特点是含有较低的铵，这是因为铵对不少培养物的生长有抑制作用。
3）White培养基其特点是无机盐数量较低，适于生根培养N培养基其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。
4）65）KM8P培养基其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合培养。
2、简要说明MS培养基的基本组成。
1）大量元素母液配制MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸镁（MgSO4•7H2O）和氯化钙（CaCl2,CaCl2•2H2O）五种化合物。
2）微量元素母液配制MS培养基的微量元素由7种化合物（除Fe外）。
3）铁盐母液配制MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4•4H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2•EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。
4）有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸吡哆素。
5）激素母液配制MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素3、配制培养基时，为什么要先配制母液？如何配制母液？为了避免每次配制时都要称量各种化学药品，常常把培养中必需的一些化学药品，以10倍、50倍或100倍的量，配制成一种浓缩液，这种浓缩液被称为母液。
配制母液不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移去，而且还便于低温保藏。
确定培养基--按照扩大倍数称量--溶解--按顺序混合--定容--母液分装--贴标签--保存于冰箱。
大量元素应配成浓度为10倍的母液，--般将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
配置时化合物应分别称量，分别溶解;混合时注意先后顺序，防止产生沉淀;混合时要边搅拌边混合。
4、常用的灭菌方法有哪些，各有哪些优缺点？（一）物理灭菌1）湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）优点：高温高压蒸汽对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡，是一种最有效的灭菌方法。
甘薯茎尖分生组织培养的研究进展
张雅琼;郭华春
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2005(21)3
【摘要】综述了甘薯茎尖分生组织培养的原理、方法、影响因素及其研究进展,指出了茎尖组织培养存在的未被广泛认识、由于品种差异造成的培养基成分不同、病毒再侵染、生产成本高等问题。
茎尖组织培养前景广阔,具有繁殖系数高、增产幅度大等特点。
【总页数】4页(P74-76)
【关键词】茎尖组织培养;分生组织;甘薯茎尖;增产幅度;繁殖系数;品种差异;侵染;研究进展;病毒;影响因素
【作者】张雅琼;郭华春
【作者单位】云南农业大学薯类研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S531.038;S532
【相关文献】
1.甘薯茎尖分生组织培养及快繁技术的研究 [J], 阮先乐;陈璨
2.生长素类物质对甘薯茎尖分生组织培养成苗的影响 [J], 孔祥生;张妙霞;陈明灿
3.提高甘薯茎尖分生组织培养成苗率的研究 [J], 孔祥生;张妙霞
4.甘薯茎尖分生组织培养 [J], 高书颖;张妙霞
5.甘薯茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究 [J], 关崇梅;秦静远;徐志英;刘玉凤;张西丽;龙金娟
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高唐栝楼茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究作者：彭向前李光勇刘辉来源：《安徽农业科学》2018年第25期摘要[目的]采用茎尖分生组织培养脱毒技术培育高唐栝楼的脱病毒试管苗。
[方法]对添加不同浓度外源生长调节剂的培养基进行一系列优化试验，筛选出高唐栝楼脱毒试管苗最佳繁殖培养基。
[结果]在MS+2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA+0.10 mg/L KT培养基中诱导效果较好，技术上达到了快速繁殖规模生产的要求。
经反复的病毒检测，证明脱毒试管苗脱病毒彻底。
[结论]最终获得了高唐栝楼茎尖培养脱毒与诱导、增殖和生根的培养基，及其生长所需要的外部环境条件和相关配套技术。
关键词高唐栝楼；脱毒；茎尖分生组织；组织培养；快速繁殖中图分类号S567.23文献标识码A文章编号0517-6611（2018）25-0081-03Technology System for Stemapex Meristem Culture and Rapid Propagation of Trichosanthes kirilowii Maxim.PENG Xiangqian，LI Guangyong，LIU Hui et al（College of Pharmaceutical Sciences，Liaocheng University，Liaocheng，Shandong 252059）Abstract[Objective]Virusfree seedling in test tube of Trichosanthes kirilowii Maxim. was obtained from stemapex meristem culture in vitro. [Method]A series of optimization experiments for propagative medium composition and concentration of phytohormones were investigated with a view to accelerate the propagation of virusfree seedling in test tube of T. kirilowii Maxim. [Result]The most suitable rapid propagative medium of T. kirilowii Maxim. was MS+2.0 mg/L 6BA +0.1 mg/LNAA+0.10 mg/L KT. These results could meet the technology requirements of rapid propagation in large scale production. Virusfree seedlings in test tube were tested repeatedly，which had no virus completely. [Conclusion]The cultural mediums of detoxification and induction，proliferation and rooting were obtained as well as the external environmental conditions for the plant growth and matching technology.Key wordsTrichosanthes kirilowii Maxim.；Virusfree；Stemapex meristem；Tissue culture；Rapid propagation高唐栝楼（Trichosanthes kirilowii Maxim.）为葫芦科栝楼属多年生攀缘草本植物，有润肺化痰、养胃生津、利气宽胸等作用[1]。
