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植物组织离体培养-组织培养实验室的建立(2)摘要：组织培养实验室实际上就是从组培材料进到合格商品苗出的生产线，实验室的各个分区单元就是生产车间，各个分区单元就是按组培体系建立的要求顺序排列的。
实验室是一个无菌系统，是一个光、温、湿、气可控系统，这都是建立组培体系的必要保证系统。
无论实验室的性质和规模如何，实验室设臵的基本原则是：科学、节能、减排、低耗、高效、经济和实用。
组织培养实验室布局的总体要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察、适合于生产技术路线。
关键词：基本实验室、辅助实验室、温室、组培室通用仪器设备、组培室药品试剂、学校组培室、家庭组培室、企业组培室、常用设备仪器组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。
规模化生产的组织培养实验室应建在交通方便的地方，便于培养物料和产品的运送。
实验室的建设均需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费和实验性质。
设计组织培养实验室时，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。
实验室的大小取决于工作的目的和规模。
以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。
在设计时，应按组织培养程序来没计，避免环节倒排，引起日后工作混乱。
植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。
要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
组织培养实验室实际上就是从组培材料进到合格商品苗出的生产线，实验室的各个分区单元就是生产车间，各个分区单元就是按组培体系建立的要求顺序排列的。
实验室是一个无菌系统，是一个光、温、湿、气可控系统，这都是建立组培体系的必要保证系统。
无论实验室的性质和规模如何，实验室设臵的基本原则是：科学、节能、减排、低耗、高效、经济和实用。
第二章(2)植物组织培养操作技术1 灭菌用物理或化学方法，杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体，即所有生命的物质全部杀死。
2 灭菌方法2.1培养基灭菌一般高压湿热灭菌，某些激素、维生素采用过滤灭菌。
2.2玻璃器皿灭菌干热灭菌：160～180℃,1.5～2.0h；湿热灭菌：121℃, 20～40min。
接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
2.3接种工具灭菌用前干热灭菌：160～180℃,1.5～2.0h；用前湿热灭菌：121℃, 20～30min。
接种前用酒精棉球擦试，浸入95%酒精液中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
2.4实验服、口罩、滤纸灭菌湿热灭菌：121℃,20～30min。
实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。
2.5接种室灭菌紫外灯照射(接种室、超净台、接种箱)：波长260nm，距离小于1.2m，20～30min。
臭氧灭菌机：1～2h；熏蒸灭菌：5～8ml/m3甲醛+5g/ m3高锰酸钾；冰醋酸；1～3%高锰酸钾或3%来苏儿。
接种台喷雾消毒：75%酒精。
2.6接种材料灭菌灭菌步骤：①流水冲洗或洗衣粉漂洗②用化学灭菌剂浸润灭菌，最好加吐温-80等表面活性剂(灭菌液的0.5%)，一般70%酒精30S，0.1～1%升汞5～8 min。
③无菌水冲洗3～5次。
2.7物体表面灭菌2.7.1灭菌方式：喷雾、涂抹杀菌2.7.2范围：桌面、墙面、双手、材料表面2.7.3消毒剂：70%酒精；1～2%来苏水；0.25～1%新洁尔灭；洗衣粉；吐温-802.8培养室灭菌新建培养室用前一定要彻底熏蒸1次。
隔2～5天用洗衣粉水或来苏水拖地1次，用高锰酸钾擦架1次。
3无菌操作3.1作好接种前准备3.1.1接种室的灭菌3.1.2超净工作台的灭菌3.1.2.1 开风机前将紫外灯打开30min以上3.1.2.2 之后开风机15min3.1.2.3 用95%酒精洗工作台面3.1.3接种器皿、用具的灭菌用具先用95%酒精浸泡，后于酒精灯外焰灼烧。
植物组织培养一．实验原理根据植物细胞具有全能性，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。
再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。
二．实验药品及仪器试剂：氯化钙(CaCL2.2H2O) 硫酸亚铁 (FeSO4 .7H2 O) 硝酸钾(KNO3)硫酸铜(CuSO4 .5H2 O) 硫酸镁(MgSO4.7H2O) 氯化( CoCL2 .6H2 O)硫酸铵(NH4NO3 ) 甘氨酸磷酸二氢钾(KH2PO4) 盐酸硫胺素硫酸锰(MnSO4.4H2O) 盐酸吡哆素硫酸锌(ZnSO4.7H2O) 烟酸硼酸(H3BO3) 肌醇碘化钾(KI) 蔗糖钼酸钠(Na2MoO4.2H2O) 琼脂乙二胺四乙酸二钠盐Na2-EDTA.2H2O仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，烧杯，量筒，培养皿，棉线，超净工作台，分析天平，长镊子，容量瓶，移液管。
三．实验步骤1.培养基的配方：化合物数量化合物数量氯化钙(CaCL2.2H2O) 440 硫酸亚铁 27.80(FeSO4 .7H2 O)硝酸钾(KNO3) 1900 硫酸铜 0.025(CuSO4 .5H2 O)硫酸镁(MgSO4.7H2O) 370 氯化钴 0.025( CoCL2 .6H2 O)硫酸铵(NH4NO3 ) 1650 甘氨酸 2磷酸二氢钾(KH2PO4) 170 盐酸硫胺素 0.1硫酸锰(MnSO4.4H2O) 22.3 盐酸吡哆素 0.5硫酸锌(ZnSO4.7H2O) 8.6 烟酸 0.5硼酸(H3BO3) 6.2 肌醇 100碘化钾(KI) 0.83 蔗糖 30000钼酸钠(Na2MoO4.2H2O) 0.25 琼脂 10000乙二胺四乙酸二钠盐 37.25 氢离子浓度 1.585微摩/升(Na2-EDTA.2H2O) (PH5.8)按上述配方制作培养基2.培养基灭菌将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 培养瓶中，每瓶约15 mL 。
中国海洋大学实验报告2015 年 4 月23 日姓名###云年级BBB专业UUUUUU学号HHHHHHHHHHHH课程细胞工程学实验题目植物愈伤组织诱导实验一、实验目的1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理；2、掌握植物组织接种培养的整个无菌操作的过程；3、熟悉超净工作台的使用。
二、实验原理植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
超净工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备。
三、实验仪器试剂1、仪器：镊子、解剖刀、烧杯、酒精灯、试剂瓶、含有培养基的培养瓶、培养皿、金属盘、记号笔2、用品：胡萝卜、75%酒精、10%次氯酸钠、无菌水四、实验步骤：（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用准备好的自来水冲洗后,用酒精棉擦拭取材部位表面, 于70%酒精中浸沾数秒钟。
（3）将材料放入已灭菌的100ml试剂瓶中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。
（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。
（5）弃次氯酸钠浸泡液，用准备的无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。
（6）将已灭菌的植物材料置于平板内，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm 厚的薄片，弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散。
（7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。
《植物组织培养》试题(一)一、填空题(每空1分,共20分，)1、一般培养室控制的温度是________，培养基常选用的pH值是________。
2、在组织培养中，培养基常用____________法灭菌，不耐热物质用_________法灭菌。
3、非洲菊的叶片_______,故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用________法繁殖。
4、1962年，Murashige 和Skoog为培养烟草细胞设计了____培养基，其特点是__________浓度较高，且为较稳定的_______________。
5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织，大致要经历 ______、____和＿＿＿期。
6、6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时________，比值低时_______________。
7、脱毒苗培养的常用两种方法是_______和__________。
8、菊花在生产实践中常用 _______法繁殖，在组织培养可用______作为外植体进行培养。
9、草莓属于_____科植物，用微尖培养草莓主要使其＿＿＿＿，从而提高产量和质量。
二、判断题（每题2分,共10分，）（）1、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。
（）2、菊花属于球根花卉，而兰花属于宿根花卉。
（）3、诱导愈伤组织重新脱分化出各种不同的器官和组织，这个过程称为脱分化。
（）4、MS0培养基是没有激素的培养基。
（）5、受精卵和体细胞都具有全能性。
三、名词解释（每题2分，共10分）1、细胞全能性2、灭菌3、玻璃化现象4、指示植物5、驯化四、选择题（每题1分,共10分）（）1、下列哪种不是原生质体分离所用的酶A 纤维素酶B 半纤维素酶C果胶酶D淀粉酶（）2、下列哪种不是组织培养常用的维生素A：维生素B2 、B：维生素B1 、C：维生素B6、 D：维生素C（）3、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。
A营养细胞发育途径 B 生殖细胞发育途径C 胚状体发育途径D 花粉均等分裂途径（）4、下列哪种激素不属于生长素类①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA（）5、在未成熟胚胎培养中下列哪种不常见的生长方式A“胚性”生长B早熟萌发C先胚根后胚芽D先形成愈伤组织再分化（）6、适于花粉培养的最佳时期是＿＿A双核期B单核期C多核期D无核期（）7、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂A 硫酸镁B 硫酸亚铁C硫酸锌 D 硫酸铜（）8、下列哪种不是在MS培养基起作用的有机物A氨基酸 B 肌醇 C 维生素 D 琼脂（）9、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基A①②③④B①④③②C①③②④D①④②③（）10、和组织培养相似的代名词是A 克隆B有性生殖C孤雌生殖 D 单性生殖五、简答题（共50分）1、6-BA在组织培养中有何作用？(6分)2、述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分)3、什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分)4、尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？(6分)5、移栽驯化香石竹时怎样选用基质和搭配基质？(6分)6、接种室有哪些技术要求？(6分)7、用湿热法进行高压灭菌的大致步骤有哪些？(7分)8、怎样用指示植物法鉴定草莓是否含有病毒？(7分)《植物组织培养》试题 (二)一、填空题(每空1分,共20分)1、在分离原生质体酶溶液内，需加入一定_____稳定剂，其作用是_______________。
植物组织培养第2章培养基及其配制培养基及其配制目的要求：1、了解几种常用培养基的特点；2、掌握培养基的主要成分及其作用；3、掌握培养基的配制方法。
培养基(culture medium) :---是植物组织培养的重要基质。
(土壤+自养条件) ---不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。
因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。
一、培养基的种类最早的培养基: 是Sacks(1680)和Knop(1681),根据植物从土中主要是吸收无机盐营养，设计出了由无机盐组成的Sacks和Knop溶液.常用的培养基及特点如下：(1) MS培养基1962年，Murashige和Skoog,培养烟草细胞。
特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸盐含量较其他培养基为高；应用广泛―基本培养基。
(2) B5培养基1968年，Gamborg等，培养大豆根细胞。
特点：含有较低的铵，对有些植物的生长有抑制作用；适宜于双子叶植物特别是木本植物。
(3) White培养基1943年，White,培养番茄根尖。
特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
(4)N6培养基1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培养。
特点：成分较简单，KNO3和(NH4)2SO4含量高。
在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。
(5) KM―8P培养基1974年，原生质体培养。
特点：有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。
二、培养基的成分水、无机盐、有机物、天然复合物、植物激素、培养体的支持材料、抗生素、活性炭等。
(一)水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。
它是生命活动过程中不可缺少的物质。
配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。
