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微茎尖培养法
植物微茎尖培养过程
一、病毒在植物体内成不均匀分布
病毒在植物体内成不均匀分布，越靠近生长点的部位，病毒含量越低，生
长点（约0.1-1.0毫米区域）则几乎不含
或含病毒很少。
二、微茎尖培养法
在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大又不能保证完全除去病毒。
茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。
茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响茎尖长
（mm）
叶原基
数
小植株
数
脱毒植株
数
脱毒率
（%）
0.121502448
0.272421842.9
0.646400
三、操作过程
1.幼苗的形态
2.剪取茎尖
3.倒入70%酒精处理1分钟
4.倒去酒精
5.倒入消毒液处理15分钟
6.倒去消毒液
7.无菌水冲洗5次8.滤纸吸干水分
解剖镜下，微茎尖剥离脱毒
剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。
思考题
1.微茎尖脱毒法的原理是什么？
2.简述微茎尖脱毒法的操作过程。
参考文献与网站
Thank You!。
植物的茎尖培养姓名: 李希东专业: 植物学学号: 200808201 日期: 2009.4.25 成绩:一、实验目的：1. 掌握茎尖培养的原理和方法；2. 练习使用实体显微镜剥离茎尖；二、实验原理：植物细胞具有全能性，即每个植物细胞含能产生完整植株的全部遗传基因。
理论上讲，只要条件合适，含全部遗传基因的细胞都能分裂分化，产生完整植株。
在茎尖和根尖的分生组织中一般是无毒或仅含极低浓度的病毒粒子，而较老的组织中，病毒含量随离茎尖距离的增加而提高。
据此原理采用茎尖组织培养可获得无毒植株。
三、实验材料、器皿：实验材料：冬青顶芽实验器皿：高压蒸汽灭菌锅、电子天平、微波炉、三角瓶、培养皿、超净工作台、实体显微镜、酒精灯、烧杯、量筒、移液器、pH试纸、橡皮筋、解剖针、滤纸、剪刀、容量瓶、长柄镊子、酒精四、实验步骤：1.培养基配制配制母液：（按照培养基配方，配置不同扩大倍数的培养基母液）大量元素：母液扩大20倍；微量元素：母液扩大1000倍；CaCl2·2H2O：母液扩大100倍；铁盐：母液扩大200倍。
培养基配制方案：1. MS2. MS+BA 0.5 mg/L3. MS+BA 0.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L4. MS+BA 1.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L5. MS+BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L6. MS+BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L按方案依次加入大量元素、微量元素、铁盐和有机物质，加入蔗糖30g/L，琼脂6.0g/L，肌醇50mg/L，水解乳清蛋白300 mg/L，和不同浓度的激素，定容到400ml，混合后微波炉加热溶解，再按配方加入各种激素，调节pH值为5.8-6.0，分装到锥形瓶中，每瓶20-25ml，用锡箔纸封口。
本实验选取1，4，6号培养基。
2. 灭菌：高压锅灭菌，121℃，保温20min，冷却，凝固，用于实验。
3. 接种（实体显微镜剥离茎尖－接种）（1）材料表面消毒：植物茎尖（顶芽或侧芽）用自来水水冲净，70％的酒精漂洗材料半分钟，然后放入0.1％的升汞中进行表面消毒8-10min，用无菌水冲洗材料3-5次。
一、实验背景植物组织培养技术是一种在无菌条件下，将植物的茎尖、茎段或叶片等切成小块，通过人工方法在特制的培养基上进行培养，使其逐渐发育成完整植物体的技术。
本实验旨在让学生了解植物组织培养的基本原理，掌握实验操作技能，培养学生的创新意识和实践能力。
二、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理及应用。
2. 掌握植物组织培养实验的操作步骤。
3. 培养学生的创新意识和实践能力。
三、实验材料与仪器1. 材料：植物茎段、叶片、茎尖等；培养基；植物激素；消毒剂等。
2. 仪器：无菌操作台、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、移液器、解剖刀、镊子、滤纸等。
四、实验步骤1. 准备实验材料：选取健康的植物茎段、叶片或茎尖，去除杂质，清洗干净。
2. 消毒：将实验材料用70%酒精浸泡30秒，再用无菌水清洗，用消毒剂处理1-2分钟。
3. 切割材料：用解剖刀将消毒后的实验材料切割成适当大小的小块。
5. 培养：将接种后的培养皿放入培养箱中，控制温度、光照等条件，进行培养。
6. 观察与记录：定期观察植物组织的生长状况，记录实验现象。
五、实验注意事项1. 实验过程中需严格无菌操作，避免污染。
2. 切割材料时要注意刀片的消毒和更换。
3. 培养过程中要定期观察，调整培养条件。
4. 实验结果可能存在差异，要注重数据分析与讨论。
教案编写仅供参考，具体实验操作请根据实际情况进行调整。
祝实验成功！六、实验拓展1. 探索不同植物激素对植物组织培养的影响。
2. 尝试用植物组织培养技术繁殖难生根或珍贵植物。
3. 研究植物组织培养在基因工程中的应用。
七、实验报告要求1. 描述实验材料、仪器和实验步骤。
2. 记录实验现象和结果。
3. 分析实验结果，探讨可能的原因。
4. 提出实验中存在的问题及改进措施。
八、实验评价1. 评价学生对植物组织培养原理的理解。
2. 评价学生对实验操作的熟练程度。
3. 评价学生对实验现象的观察与分析能力。
4. 评价学生在实验过程中的团队合作精神。
实训六菊花的茎尖培养（3学时）
一、目的要求
1、学习和掌握菊花外植体表面消毒技术
2、熟练掌握菊花茎尖切割及培养的基本操作技术。
二、材料、仪器与试剂
1、材料：菊花嫩茎；
2、仪器：超净工作台、灭菌锅、接种器械、烧杯、培养皿、显微镜、酒精灯等；
3、试剂：（1）MS培养基
(2) 洗涤液或洗衣粉水溶液
(3) 0.1% 升汞、70%酒精、95%酒精
三、方法步骤
1、剥取茎尖和腋芽。
切取植株的顶芽或腋芽3-5cm，去除叶片，保留互芽的嫩叶柄。
2、洗涤和消毒。
用洗涤液或洗衣粉水洗涤，尤其是腋芽的叶柄处用软毛刷涮擦，再用清水反复冲洗干净。
置于超净工作台无菌条件下，将材料用0.1% 升汞溶液进行表面消毒，轻轻地摇动，消毒彻底，再用无菌水冲洗数次，放到无菌的吸水纸吸干水分。
3、茎尖剥离。
在解剖镜下，将材料置无菌的盘子内，剥去端部的嫩苞叶，露出锥形体，切取0.3mm和0.5mm两个不同长度的茎尖，带两个叶原基。
4、接种。
将切取的茎尖迅速接种到培养基上，防止茎尖脱水。
接种时注意茎尖向上，不能倒置。
四、撰写实训报告
1、调查外植体表面消毒接种成功率。
2、分析接种不成功的原因。
3、调查0.3mm和0.5mm两个不同长度的茎尖接种成功率。
高中生物草莓茎尖问题教案一、教学目标：1. 了解草莓植物的生长结构，特别是茎尖的重要性。
2. 理解草莓茎尖在植物生长中的作用和功能。
3. 掌握观察和研究生物问题的方法和技巧。
二、教学重点：1. 草莓植物的生长结构和茎尖的特点。
2. 草莓茎尖在植物生长中的重要性。
三、教学难点：1. 理解茎尖在植物生长中的作用和功能。
2. 运用观察和研究方法探究植物生长问题。
四、教学准备：1. 草莓植物样本或图片。
2. 放大镜和显微镜。
3. 实验器材和化学药品。
4. 理论教材和相关资料。
五、教学过程：1. 引入：向学生介绍草莓植物的基本结构和生长过程，引出草莓茎尖的问题。
2. 观察实验：让学生观察草莓茎尖的结构特点，并提出问题和假设。
3. 进行实验：引导学生利用放大镜和显微镜进行实验，研究茎尖的细胞结构和功能。
4. 结果分析：让学生根据实验结果分析茎尖在植物生长中的作用和意义。
5. 问题探讨：引导学生讨论茎尖问题的相关知识和应用。
6. 总结归纳：总结本课学习的内容和成果，让学生对草莓茎尖的问题有更深入的理解。
六、作业布置：1. 撰写实验报告，总结草莓茎尖的重要性。
2. 收集更多关于植物生长和茎尖问题的相关资料。
七、教学反馈：1. 对学生的实验报告和讨论进行评价。
2. 对学生在观察和探究过程中的表现进行反馈。
八、拓展延伸：1. 组织学生参加植物生长实验或科技创新活动。
2. 探讨植物生长和茎尖问题的现实意义和应用。
以上教案仅供参考，实际教学中可根据学生的实际情况和教学需求做出适当调整和改进。
祝教学顺利！。
实验名称：茎尖培养实验课程名称：植物组织培养学学院：生命科学学院专业班级：植物科学专业姓名：[你的姓名]小组成员：[小组成员姓名]日期：[实验日期]指导老师：[指导老师姓名]一、实验目的1. 掌握植物组织培养技术的基本原理和方法。
2. 熟悉无菌操作技术，提高实验操作技能。
3. 观察茎尖在培养基上的生长和分化过程，了解植物细胞全能性及再生机制。
4. 分析影响茎尖培养的因素，为植物繁殖和育种提供理论依据。
二、实验原理1. 植物组织培养技术：通过在无菌条件下，将植物器官、组织或细胞等在人工培养基上进行培养，使其再生出完整植株的过程。
2. 茎尖培养：利用茎尖细胞的全能性，将其接种到含有植物激素的培养基上，诱导其分化成完整植株。
3. 植物激素：植物激素在植物生长和发育过程中起着重要作用，如生长素、细胞分裂素等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物茎尖、无菌水、70%酒精、无菌滤纸、无菌手术刀、镊子、培养皿、培养箱、显微镜等。
2. 试剂：MS培养基、生长素、细胞分裂素、琼脂、葡萄糖等。
四、实验步骤1. 材料准备：选取新鲜植物茎尖，用70%酒精消毒后，用无菌滤纸吸干水分。
2. 茎尖接种：将消毒后的茎尖用无菌手术刀切成约0.5cm长的小段，接种到含有生长素和细胞分裂素的MS培养基中。
3. 培养条件：将接种后的培养基放入培养箱中，保持温度25℃、光照12小时/天。
4. 观察记录：定期观察茎尖的生长和分化情况，记录生长速度、叶片颜色、根系发育等。
5. 数据分析：对实验数据进行统计分析，分析不同处理对茎尖培养的影响。
五、实验结果与分析1. 茎尖生长：接种后3-5天，茎尖开始生长，出现明显的芽点；接种后7-10天，芽点逐渐增多，茎尖高度达到1-2cm。
2. 茎尖分化：接种后10-15天，茎尖分化出叶片，叶片颜色逐渐变绿；接种后20-25天，茎尖分化出根系，根系发达。
3. 影响因素分析：生长素和细胞分裂素浓度对茎尖培养有显著影响。
农艺专业课教学设计
教学题目：茎尖脱毒培养
课时：1课时
教学目标
知识目标：掌握茎尖脱毒培养的原理、方法及影响培养效果的因素。
基本技能：通过本课的学习，能够对茎尖脱毒培养进行实际操作。
情感态度与价值观：通过本课，让学生对现代农业科技的发展及应用所了解，从而激发学生对于农业的热爱。
教学重点：
茎尖脱毒培养的过程
教学难点：
茎尖剥离
教学方法：
讲授法、自主学习法、练习法
教学手段：
多媒体、实物展示
教学过程：
一、组织教学
二、复习提问
1.热处理脱毒的原理是什么？
2.热处理脱毒方法有哪些？
3.热处理脱毒有哪些优缺点？
三、导入新课
1.茎尖脱毒培养的原理
由“为什么只选用茎尖作为植物脱毒培养的对象？”的问题来引出病毒在植物中的分布规律，以确定茎尖脱毒培养的原理。
原理：应选用几乎不含病毒的茎尖作为培养对象。
2.茎尖脱毒培养的方法
茎尖脱毒培养的过程：
过程详解：
材料的选择和预处理：选择具有原品种典型特征、病毒危害较轻的健壮植株，采集外植体。
根据需要将植株盆栽后进行热处理（这样可以切取较大的茎尖培养）。
外植体的表面消毒：选取 1.5～2cm的顶芽或侧芽为外植体，先用自来水冲洗半小时，用75%的酒精消毒30s，再用2%次氯酸钠溶液处理15min，取出后用无菌水清洗3次，用无菌滤纸吸去多余水分备用。
茎尖剥离：在超净台下，将茎尖切成1.5cm长，下端约1.0cm长留作夹持部分。
先用肉眼剥离外面的幼叶，至0.5cm大小时，再移至双筒解剖镜下，用镊子夹住茎部，用解剖针轻轻剥掉幼叶和叶原基，解剖针可蘸少许酒精，过火灭菌，但要注意解剖针的冷却，当剥到看见一个闪亮半圆球的顶端分生组织点，只剩两枚叶原基时，可用解剖刀将微茎尖切下来，然后接到培养基中。
茎尖培养：培养条件为25℃，光照16h，光照强度为2000Lx。
3.影响茎尖培养的因素
（1）茎尖大小茎尖大小与脱除病毒的效果成反相关，即剥取茎尖越小，脱毒效果越好。
但茎尖大小与茎尖的成活率成正相关，即茎尖越小培养难度越大，成活率越低。
考虑到脱毒效果及提高成活率，一般切取0.2～0.5mm带1～2个叶原基的茎尖为培养材料。
（2）培养条件在茎尖培养中，光下培养的效果通常比暗培养效果好。
（3）外植体的生理状态茎尖最好从活跃生长的芽上切取，一般地培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。
四、课堂小结
五、课堂练习
1．在无毒苗的组织培养中，外植体的大小与其成活率成_________，而与脱毒效果成_________。
2．在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以__________mm、带__________个叶原基为好。
3．病毒在植物体中的分布规律为（）。
A．从茎尖到底部含量越来越多 B．从茎尖到底部含量越来越少
C．病毒在植株体的分布是均匀的 D．茎尖含量最多，底部几乎没有
六、布置作业
作业：简述茎尖培养的过程。
思考：在外植体表面消毒时，为什么要使用酒精和次氯酸钠两种溶液？为什么浸泡的时间不同？
七、板书设计
茎尖脱毒培养
一、茎尖脱毒培养的原理
二、茎尖脱毒培养的方法
三、影响茎尖脱毒培养的因素
八、教学反思
茎尖脱毒培养
桦南县职教中心学校
张春丽。
