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第四章植物器官的培养1、器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。
以器官作为外植体进行离体培养。
器官培养的意义:研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成在生产实践上具有重要的应用价值,可在短期内提高繁殖速率,进行名贵品种的快速繁殖;利用茎尖培养可得到脱毒试管苗,解决品种的退化问题,提高产量和质量;将植物器官作诱变处理,用器官培养可得到突变株,进行细胞突变育种等。
第一节营养器官的培养一、茎尖的培养茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分,进行无菌培养。
这是组织培养中用得最多的一个取材部位。
茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥,其长度不超过0.5mm。
普通茎尖指较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽。
普通茎尖培养(1)取材: 挑选杂菌污染少,生长不久的茎尖。
(2)消毒接种: 将茎尖切成0.5-1.Ocm长将茎尖置于流水冲洗2-4h在75%的酒精中处理30s在稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min无菌水冲洗数次接种(3)接种: 为了减少污染,可在接种前再剥掉一些叶片,使茎尖为0.5cm左右大小。
(4)培养的方法和程序①培养基多数茎尖培养采用MS作为基本培养基,常用的其他培养基有White,Heller.培养基中生长素:2,4-D,IAA,NAA,浓度一般用0.1mg/L左右,高于此浓度,往往产生畸变芽或形成愈伤组织。
茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。
生长太慢:接种后茎尖不增大,只是茎尖逐渐变绿,出现绿色小点,细胞逐渐老化而进人休眠状态,或者逐渐变褐死亡。
引起的原因:生长素浓度太低,或是温度过低或过高;生长太快型是接种后茎尖迅速增大,在茎尖基部产生愈伤组织,并迅速增殖,而茎尖不伸长,久之茎尖也形成愈伤组织,从而丧失发育成苗的能力。
引起的原因:一是生长素浓度过高,引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。
马铃薯茎尖分生组织培养技术王航,刘江娜,陈英(兵团第六师农业科学研究所,五家渠831300)马铃薯种薯退化主要症状:植株矮小,叶面遍布病斑,结薯数量减少,块茎变小,产量下降,品质变劣,不耐贮藏,马铃薯种薯退化对马铃薯生产影响巨大。
马铃薯种薯退化是因植株体内有马铃薯卷叶病毒、马铃薯A病毒等病毒引起。
研究发现,马铃薯茎尖分生组织病毒含量很少,几乎为零。
所以,可以通过茎尖分生组织培养技术脱除马铃薯病毒,从而有效避免因马铃薯种薯退化带来的损失,恢复品种优良性状和提高产量。
兵团第6师农业科学研究所从事马铃薯脱毒苗生产5年,技术成熟,现将马铃薯茎尖分生组织培养技术总结如下:一、材料选择选择需要的品种,在秋季播种(高温会加速病毒积累),60~70天采收无病害优质薯块。
由于马铃薯纺锤块茎类病毒病很难用植物茎尖剥离法脱掉,应先检测入选的块茎,淘汰带病毒病的薯块。
将剩余薯块放入18±2℃通风良好的室内打破休眠后,在(25±2)℃条件下催芽,直到顶芽长至1厘米左右。
二、热处理热处理是利用温度处理使病毒丧失侵染力,消除马铃薯卷叶病毒。
将经过热处理的材料转入光照气候箱,在光照12小时/天、光照强度3000勒克斯、37℃条件下处理6~8周。
三、茎尖消毒准备好经高温灭菌过的烧杯2个、玻璃棒2个。
切取经高温处理块茎上的芽尖0.5~1.0厘米,放入烧杯中,用纱布封口,清水冲洗30分钟后,转移至超净工作台消毒。
先用0.1%升汞浸泡10分钟,再用蒸馏水冲洗5次,注意前2次冲洗用1套烧杯和玻璃棒,后3次换另1套。
为了防止升汞残留,冲洗过程中要不断搅拌,冲洗完后放入灭过菌的培养瓶内待用。
四、茎尖剥离和接种1.准备无菌培养皿和滤纸,将消过毒的茎尖放到滤纸上,滤纸放进培养皿里,倒几滴蒸馏水保持滤纸湿润,防止茎尖组织被热气流吹干失去活性。
2.在40倍显微镜下,用2根解剖针小心地将茎尖叶片剥掉,直至露出圆亮的生长点,小心切取0.3厘米以下的带有1个叶原基的茎尖,接种至组织脱毒培养基上,要以切面接触琼脂。
