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冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法本附录规定了集中空调通风系统冷却水、冷凝水及其形成的沉积物、软泥等样品中嗜肺军团菌的检验方法。
A1原理待测水样经过滤膜或离心浓缩后，一部分样品经酸处理与热处理，以减少杂菌生长，一部分样品不作处理。
将上述处理与未处理样品分别接种BCYE琼脂平板并进行培养，生成典型菌落并经生化培养和血清学实验鉴定确认则判定为嗜肺军团菌。
A2 主要仪器设备A2.1 平皿：90mmA2.2 培养箱：35~37℃A2.3 紫外灯：波长360±2nmA2.4 滤膜滤器A2.5 滤膜：孔径0.22～0.45µmA2.6 蠕动泵A2.7 离心机A2.8 涡旋振荡器A2.9 普通光学显微镜、荧光显微镜、体式镜A2.10 水浴箱A3 采样A3.1 采样容器：可选择玻璃瓶或聚乙烯瓶，沉积物与软泥需用广口瓶，容器均需螺口或磨口，用前灭菌。
A3.2 采样量：每个采样点依无菌操作取水样（或沉积物、软泥等样品）约200ml。
A3.3 中和：经氯或臭氧等消毒的样品，采样容器灭菌前加入硫代硫酸钠溶液以中和样品中的氧化物。
A3.4 样品运输与贮存：样品最好2天内送达实验室，不必冷冻，但要避光和防止受热，室温下贮存不得超过15天。
A4 方法与步骤A4.1 样品处理A4.1.1 沉淀或离心：如有杂质可静置沉淀或1000r/min离心1min去除。
A4.1.2 过滤：将经沉淀或离心的样品通过孔径0.22～0.45µm滤膜过滤，取下滤膜置于15ml灭菌水中，充分洗脱，备用。
A4.1.3 热处理：取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。
A4.1.4 酸处理：取5ml洗脱样品，调pH至2.2，轻轻摇匀，放置5min。
A4.2 接种与培养：取A4.1.2洗脱样品、A4.1.3 热处理样品及A4.1.4 酸处理样品各0.1ml，分别接种GVPC平板。
将接种平板静置于CO2培养箱中，温度为35~37℃，CO2浓度为2.5%。
集中空调冷却塔军团菌污染卫生管理措施探讨集中空调冷却塔系统的冷却水是嗜肺军团菌的主要污染源。
冷却塔系统管理不善可能使得军团病在我国人群中爆发的风险日益增加，因此应该加强集中空调冷却塔系统的卫生管理。
本文综述分析报道近年来有关集中空调冷却塔系统的卫生管理措施的研究进展。
标签：集中空调冷却塔军团菌卫生管理集中空调冷却塔系统是集中空调运行的重要组成部分，而其冷却水是嗜肺军团菌的主要污染源，可通过集中空调系统传播至室内空气[1]。
嗜肺军团菌是一种革兰阴性菌，能引起军团菌病，又名“城市文明病”，随着城市经济的发展，大型建筑的兴建及随之而来的大型空调设备的增加，可能导致军团菌病的发生和流行，有关文献报导已证实空调冷却塔、冷凝水等是引发军团菌病并造成其流行暴发的主要来源[1] [2] [3] [4]。
世界范围内已有多起事件证明集中空调冷却塔水的污染是军团菌病暴发流行的原因。
军团菌病是一种急性呼吸道传染病，具有病程进展快、病死率高、易暴发流行的特点。
军团菌病症状主要分为肺炎型【称军团菌肺炎（Legionnaires’Disease）】和非肺炎型【称庞蒂克热（Pontiac Fever）】两种基本类型，如1976年，美国美国费城饭店召开退伍军人大会军团菌感染即是军团菌肺炎，而1968年，美国庞蒂克（Pontiac）市卫生局办公大楼里工作流行性感冒样症状即是庞蒂克热。
如果对冷却塔系统不进行及时和定期的清洗和消毒，会导致军团菌的生长和繁殖，一旦通过气溶胶、空气形成交叉污染，极有可能引起人群感染，甚至可能引起军团菌暴发[5]。
一、冷却塔中军团菌污染原因分析军团菌的生命力虽然很强，但在自然环境中浓度一般较低，在自然环境中大量繁殖的重要因素是对营养的特殊要求，以及一定的嗜热性。
冷却塔循环水内含无机盐、有机物和微生物等，在某些季节水温能达到35℃以上，若冷却水长期使用不更换或更新的水量补充不足，以及长时间不清洗消毒或消毒清不彻底则为军团菌提供了理想的生存环境，在空调冷却塔的冷却水中大量繁殖并形成微生物气溶胶，部分直接飘逸到冷却塔周围的空气中。
利用生态透析技术控制空调冷却塔冷却水嗜肺军团菌生物量的研究吴丹;卓陈雅;陈步丹;林荣斌【摘要】本文以冷却塔冷却水中的嗜肺军团菌为研究对象,研究了利用生态透析技术控制空调冷却塔冷却水中嗜肺军团菌生物量的方法.生态透析技术对被军团菌寄生的寄生虫的宿主一藻类具有降解作用,因而藻类的去除便削减了军团菌的庇护所,从而在一定程度上控制冷却水中军团菌的增殖.通过设立A、B实验组和C对照组,经过48天的观察和取样实验,结果表明：A、B在生态透析持续进行48天后藻类去除率分别达到76.9%、80.5%,对应的嗜肺军团菌的生物量分别降低78.1%、76.1%,同时未作任何处理的C在48天后藻类生物量没有减少反呈增多趋势,但嗜肺军团菌的生物量在实验段内变化不大,依然保持着较高的浓度.因此,生态透析技术通过控制冷却水中的藻类生物量,能够在一定程度下降低嗜肺军团菌的生物量.【期刊名称】《生物技术世界》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】3页(P16-18)【关键词】生态透析;嗜肺军团菌;冷却塔;生物量【作者】吴丹;卓陈雅;陈步丹;林荣斌【作者单位】[1]广州地铁集团有限公司,广东广州510640;[2]广州赛特环保工程有限公司,广东广州510640【正文语种】中文【中图分类】TB6嗜肺军团菌（Legionella pneumophila，Lp）是一种革兰阴性杆菌，嗜热怕冷，属兼性胞内寄生菌。
嗜肺军团菌广泛存在于水、土壤中，特别是与日常生活密切相关的自来水、空调、冷却塔、淋浴器等供水系统中。
国外有“有水即有军团菌”之说。
嗜肺军团菌为专性需氧菌，在2.5%～5%的二氧化碳环境中生长良好；当温度在25℃～43℃时繁殖，最适宜生长温度为35℃；最适宜生长pH为6.7～7.0［1］。
它的生存方式与其它大多数细菌不同，军团菌是与阿米巴原虫形成共生的关系。
军团病（Legionella disease）是由嗜肺军团菌引起的一种以肺炎为主的全身性疾病，无论是冷、暖气产生含有军团菌的气溶胶被人体吸入后可引起以肺部为主的全身性感染，病死率为7%～24%［2］。
警惕集中空调冷却水与淋浴水中的嗜肺军团菌夏天要到了，我们在办公室或公共场所享受夏季集中空调的凉爽时，是否考虑到可能潜在的健康风险？我们的家庭及宾馆、酒店的淋浴水安全吗？您知道使用集中空调及淋浴水的致病微生物吗？让我们来认识一下嗜肺军团菌。
1976年，在美国宾夕法尼亚州费城的贝尔维尤斯特拉特福酒店举办了一次退伍军人会议，参加者中爆发了一种以发热、咳嗽、腹泻及呼吸困难为主的疾病，导致221发病，其中34人死亡。
因当时原因不明，被称为“退伍军人病”，亦称“军团病”。
该病发生几个月后元凶被找到，从宾馆集中空调的冷却塔水中分离到一种新的细菌-嗜肺军团菌(Legionella pneumophila, LP)。
我国于1982年首次从一例肺炎患者中分离到嗜肺军团菌。
1.军团菌病的流行嗜肺军团菌引起军团病(legionnaires’ disease, LD)，为急性呼吸道传染病，以发热和呼吸道症状为主。
军团菌病全年均可发生，以夏秋季节为发病高峰，6-10月发病最多，成人发病高于儿童，主要通过呼吸道飞沫 (气溶胶)传播，饮水传播罕见。
目前尚无证据表明感染者或病人作为本病的传染源。
军团病潜伏期是2-10天，易感人群是40-70岁，吸烟者，癌症患者，慢性呼吸系统疾病，肾病和免疫系统低下者患此病的风险更高。
军团病主要有流感样型和肺炎型两种临床类型，流感样型预后良好，肺炎型死亡率较高(大于15%)。
2.军团病有哪些症状？高烧，发冷，头痛和肌肉疼痛，伴随干咳和呼吸困难。
个别病人还会出现腹泻或呕吐，并可以发展为意识混乱或神志不清。
庞蒂亚克热：症状类似中度至重度流感(头痛、疲劳、发烧、肌肉痛)，潜伏期：1-2天，康复期5-10天，未见报道死亡病例。
3.嗜肺军团菌病原体嗜肺军团菌是一种有鞭毛，革兰氏阴性，需氧菌，胞内寄生菌的多形态性短小球杆菌。
经美国CDC确认的军团菌已达到39种61个血清型，其中36个血清型具有致病性。
嗜肺军团菌是最主要致病菌型，已经分离出14个血清型，目前文献报道较多与人类患病有关的是血清1型、4型和6型。
空调冷却水嗜肺军团菌的分离及鉴定报告
罗隆泽;谢仁栋;兰纪康;吕强;孙莉;祝小平;任红宇;邱琼;卢锡华;万超群
【期刊名称】《预防医学情报杂志》
【年(卷),期】1999(15)2
【摘要】四川省在外环境中分离到嗜肺军团菌，尚未见于以往文献。
１９９７年１１月自空调冷却水中分离到两株细菌（编号为９７００４、９７００８），其菌体形态、培养特性、生化反应及ＰＣＲ分析均符合嗜肺军团菌鉴定要求，经试管凝集、间接免疫荧光鉴定证实为嗜肺军团菌血清１型。
【总页数】2页(P67-68)
【关键词】嗜肺军团菌;分离;鉴定;空调冷却水
【作者】罗隆泽;谢仁栋;兰纪康;吕强;孙莉;祝小平;任红宇;邱琼;卢锡华;万超群【作者单位】四川省卫生防疫站;中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所【正文语种】中文
【中图分类】R378.99
【相关文献】
1.广东省惠州市集中空调系统冷却水及冷凝水中嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳分型分析 [J], 刘思超;罗泽燕;徐励琴;杨剑英;冯伟明;邬军军
2.四川省首次从空调冷却水中分离到嗜肺军团菌 [J], 罗隆泽;谢仁栋;吕强
3.广州市环境及空调冷却水中釜山军团菌的分离与鉴定 [J], 范晓姗;胡朝晖;顾全;赵利伟;严慧;朱庆义
4.集中空调冷却水中分离出多种血清型嗜肺军团菌 [J], 刘继倩;宋驰萍;骆玲飞;王小光;汪萍;王海青;张颖华;欧阳霖
5.深圳市首例中央空调冷却塔水嗜肺军团菌分离及鉴定报告 [J], 段永翔;温群文;俞慕华;陈辉;黄锐敏
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[作者简介] 马永(1966-),女,工程师,主要从事微生物检测和产品杀菌性能的测定。
【综述】空调冷却水中军团菌污染状况和检测方法探讨马 永,吴清平,张菊梅,杨小鹃(广东省微生物研究所,广东省微生物分析检测中心,广州 510070)[中图分类号] R12311 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2005)02-0255-02 近两年,我国境内爆发的冠状病毒感染的非典型肺炎和禽流感两种呼吸道传染病,提醒我们对呼吸道传染性疾病要有足够的重视,呼吸道传染病与其它疾病相比具有更强的传染性,隔离困难,对社会群体危害更严重。
同属于呼吸道传染性疾病的军团菌(L egionella)病,是70年代发现的一种急性细菌性传染病。
1976年7月美国退伍军人组织(美国兵团宾西法尼亚分团)在费城召开大会,与会4400人聚集于该市一旅馆期间相继有221人患全身感染,伴突出的呼吸道和消化道症状和体征,34人死亡,因此称“退伍军人病”,后定名为“军团病”。
军团菌自发现以来,国内外陆续有从病人及在外环境水中分离出军团菌的报道。
它在临床缺乏独特的症状和体征,不易诊断,传染性强,严重可致人死亡。
军团菌最可能的传播途径为空气,国内外关于军团菌的流行病学调查表明,空调冷却水与军团菌感染和流行有着密切关系,这类设施与生产、生活的接触较密切,引起军团菌流行爆发的可能性很大,近年来随着高大建筑的不断崛起,高层庞大的空调设施越来越多,这些地方的空调冷却水源正是军团菌生长和繁殖的良好环境。
近几年军团菌的检出率呈上升趋势。
1 国内外空调冷却水中军团菌污染状况据Ravi1Vel oo报道,在新加坡因空调冷却水引发的军团菌病,仅1992年1～5月报告病例37例,死亡5例。
澳洲的调查表明超过50%的空调水冷却塔内部有军团菌生长;在国内也有相关报道,成都市1997年11月在宾馆中央空调冷却水中分离到军团菌,上海地区有关军团菌环境污染的监测资料表明,冷却塔水军团菌的检出率高达50%左右,而且很多监测点的含菌量已超过104cfu/m l;1997年6月北京某写字楼员工暴发上呼吸道感染108例,嗜肺军团菌感染率达45194%,因发现及时,疫情得以控制。
影响冷却水中嗜肺军团菌生长的环境因素探讨作者：彭军华来源：《华夏地理中文版》2015年第11期摘要：随着经济水平的不断提升，建筑工程施工技术的不断进步，在大型建筑工程中，集中空调的运用范围越来越广，人们也希望通过运用集中空调来有效地调节空气质量，以期达到净化空气的目的，但从另外一方面，集中空调的运用也在一定程度上为嗜肺军团菌的生长提供了可能。
文章将着重探讨影响冷却水中嗜肺军团菌生长的环境因素。
关键词：冷却水；嗜肺军团菌；环境因素；生长一、实验过程（一）筛选对象。
在研究影响冷却水中嗜肺军团菌生长的环境因素时，需要广泛地涉猎被采集对象，同时还应该强调季节因素对嗜肺军团菌生长的影响。
因此在研究过程中，我们特意选择了20家大型宾馆或餐厅的集中空调，并将集中空调的运行年限也一并考虑在内，连续2年采集冷却塔中搅拌均匀的冷却水进行水质检测。
同时在实验过程中，还需要加强对这些场所集中空调冷却塔周边环境及通风系统的维护保养等问题的研究，以此来获得科学的结论。
（二）采集样品。
明确实验的方法及场所后，还需要明确整个实验应该在无菌的环境下进行操作，通过选用科学的无菌的玻璃瓶来作为实验的器皿，进行冷却水的采集，在采集的过程中，同样需要确保在无菌的环境下进行作业。
样品采集完成后，要加强对冷却水的成分分析，明确冷却水中的污染元素及微生物。
在样品采集的过程中，还需要注意一个问题，在冷却水采集完成后，要对冷却水进行一定的遮光处理，然后及时送到科学实验室进行详细的分析与实验。
（三）检测项目。
因本次检测主要是明确影响冷却水中嗜肺军团菌生长的环境因素，因此除需要对冷却水微生物的种类及特点进行科学的分析外，还需要着重检测不同水温条件下、不同的水质条件下，不同的PH值、导电率、溶解性总固体等来全盘分析，以确保结论的科学性。
（四）检测方法。
在实验过程中，为确保实验结论的科学性，我们在2013年、2014年连续两年在同一场所进行了反复的检测。
嗜肺军团菌血清1型基因检测及分子分型研究杨梦;程慧键;熊长辉;徐晓倩;陈福辉;刘晓青;周海建;袁辉【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2010(026)012【摘要】目的了解南昌市宾馆业中央空调冷却塔水中分离的嗜肺军团菌菌株的基因特征.方法 6株分离嗜肺军团菌菌株分别经血清学凝集试验、胶乳凝集试验确定为Lp1型嗜肺军团菌后,利用PCR技术对军团菌属5SrRNA基因和嗜肺军团菌mip毒力基因的特异序列进行扩增, 应用多位点测序(SBT)分析, 获得相应的SBT型别.使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术,对菌株进行全染色体DNA酶切电泳分型,并用BioNumerics数据库软件进行分型分析.结果所有的菌株均带有属特异性5S rRNA基因及mip毒力基因, SBT分型6株菌均为ST1型,PFGE聚类分析结果显示菌株带型之间有差异,6株菌可分为4种带型.结论南昌市公共场所冷却塔水中分离的Lp1型嗜肺军团菌菌株基因呈多样性.【总页数】4页(P1151-1153,1156)【作者】杨梦;程慧键;熊长辉;徐晓倩;陈福辉;刘晓青;周海建;袁辉【作者单位】江西省疾病预防控制中心,南昌,330029;江西省疾病预防控制中心,南昌,330029;江西省疾病预防控制中心,南昌,330029;江西省疾病预防控制中心,南昌,330029;江西省疾病预防控制中心,南昌,330029;江西省疾病预防控制中心,南昌,330029;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,102206;江西省疾病预防控制中心,南昌,330029【正文语种】中文【中图分类】R126.4【相关文献】1.四川省嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LP1)基因分型研究 [J], 曾林子;廖虹瑜;祁腾;刘谊;刘莉莉;罗隆泽2.温泉水中嗜肺军团菌污染调查及分子分型研究 [J], 章乐怡;李毅;上官智慧;吴跃进;谢爱蓉;王良怀;陈文斌3.福建省嗜肺军团菌血清1型及血清6型菌株PFGE分型研究 [J], 原灵;陈爱平;杨劲松;林震宇4.嗜肺军团菌毒力岛分子分型及其致病性研究进展 [J], 朱庆义;胡朝晖5.嗜肺军团菌基因检测及分子特征研究 [J], 张政;朱水荣;徐宝祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
