果蝇唾腺染色体的制备和观察

果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告一、实验原理双翅目昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体。

这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约400um，相当于普通染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色体。

唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。

并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体。

多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。

各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心；横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列。

唾腺染色体广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。

二、实验材料果蝇的三龄幼虫三、实验器材双目解剖镜，生物显微镜，解剖针，载玻片，盖玻片，滤纸条，废物缸，托盘等。

四、实验试剂生理盐水，盐酸，蒸馏水，改良苯酚品红染色液等。

五、实验步骤1.剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。

每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。

由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。

剔除脂肪体并弃除无关物质。

2.解离：加一滴45%乙酸溶液于腺体上，作用5-7s。

用滤纸吸干溶液。

在唾腺组织上滴一滴1mol/lLHCl，解离30-40s，以松软组织，利于染色体的分散。

3.吸去 HCl，用水冲洗2-3次.4.染色：滴加改良苯酚品红染液染色30min,染色时间不可过长，否则背景也着色。

果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。

二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。

果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。

由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。

三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1. 幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。

在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。

A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。

B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。

果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。

在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。

实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。

2. 剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。

将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。

首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。

解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。

在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。

实验二：果蝇唾液腺染色体的制备与观察一、实验目的1、练习果蝇唾液腺的分离方法2、掌握唾液腺染色体的制片技术3、观察了解果蝇唾液腺染色体的形态特征二、实验原理1、双翅目昆虫（果蝇）幼虫期的唾液腺细胞很大，其中的染色体称唾液腺染色体，相当于一般普通染色体的100－150倍，又称巨大染色体。

2、在幼虫发育过程中，唾液腺染色体仍进行复制，但细胞只生长不分裂，从而产生多线染色体。

多线染色体经染色后，出现深浅不一、宽窄不同的横纹，这些横纹的数目和位置是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。

如果染色体缺失、重复、倒位、易位等结构变异时，很容易在唾腺染色体上识别出来。

3、多线染色体的特征：a 巨大；b体细胞配对，所以染色体只有半数（n=4）；c 各染色体的异染色质多份额着丝粒部分相互靠拢形成染色中心；d 横纹有深浅、疏密的不同，各自相应排列，这意味着基因的排列。

三、实验材料和用品实验材料：黑腹果蝇的三龄幼虫（选择行动迟缓、肥大、爬上管壁、就要化蛹了的三龄幼虫观察最佳）实验用品：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸。

0.9%生理盐水、1％醋酸洋红。

四、实验步骤1、载玻片置于显微镜下，上面滴加一滴生理盐水，放上果蝇幼虫（有一钝尾和带黑色口器的尖头，可根据其在盐水中爬行方向确定头部），两手各拿一枚解剖针，左手解剖针按住幼虫的后端1/3, 右手解剖针按住头部(尽量靠近口器)用力后拉，把头部从身体拉出，唾液腺随之而出。

（一对双叉形透明的囊状腺体）。

2、除去幼虫其他组织部分，把唾液腺周围脂肪组织（不透明）剥离干净，然后将多余生理盐水吸走，滴一滴醋酸洋红在载玻片上。

3、染色10 分钟，盖上盖玻片，用滤纸轻压一下吸去多余的染色液，然后平放在桌子上，用大拇指适当均匀用力压住，并横向揉几次（勿使盖玻片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉！）。

4、显微镜观察，先在低倍镜下观察，找到分散好的染色体图像，再高倍镜观察。

用显微镜可以看到四对染色体，第一对染色体（X-）组成一个长条，第二和第三对各自组成了具有左右两臂的染色体对，它们都以中部的着丝区聚集，而第四对染色体很小，分布在着丝区呈点状或盘状。

果蝇唾腺染色体标本的制备和观察摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。

目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。

了解唾腺染色体的作用和意义。

１．引言果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。

因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。

1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。

Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。

２．实验材料和方法２．１实验材料受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油生理盐水、香柏油、镜头纸。

２．２实验方法２．２．１实验材料的获取和处理（1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。

（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。

唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。

幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。

拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。

去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。

果蝇唾腺染色体的制片与观察果蝇唾腺染色体的制片与观察一、实验目的1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法；2、观察果蝇的唾腺染色体。

二、实验原理1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型染色体。

唾腺染色体的显著特征是：（1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍；（2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；（3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。

唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。

横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。

横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记；（4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。

唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani 环。

一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。

许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。

果蝇唾液腺：2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，构成一个永久间期系统。

唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。

由于细胞分裂停止在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约2000um，是其体细胞中期染色体长度的100—200倍。

实验六果蝇唾液腺染⾊体的观察及制备实验五果蝇唾液腺染⾊体的观察及制备⼀．⽬的1．了解果蝇唾液腺染⾊体的形态学及遗传学特征。

2．习分离果蝇幼⾍唾液腺的技术。

3．掌握唾液腺染⾊体制⽚⽅法。

⼆、原理蝇、摇蚊幼⾍唾液腺细胞中的巨⼤染⾊体。

双翅⽬昆⾍的唾液腺细胞发育到⼀定阶段之后就不再进⾏有丝分裂，⽽永久停留在分裂间期。

但随着幼⾍的⽣长，唾液腺染⾊体仍不断地进⾏⾃我复制⽽且不分开，经过许多次的复制形成约1 000—4 000拷贝的染⾊体丝，合起来直径达5µm，长度达400µm，⽐普通细胞中期染⾊体约⼤100～150倍，所以⼜称为多线染⾊体（polytene chromosome）或巨⼤染⾊体（giant chromosome）。

唾液腺染⾊体的另⼀特点是体细胞中同源染⾊体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。

在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋⽩纤维丝唾液腺染⾊体（salivary gland chromosome）是⼀类存在于双翅⽬昆⾍，如果结合在⼀起，紧密盘绕。

所以细胞中染⾊体只呈单倍数。

⿊腹果蝇的染⾊体数⽬2n=8其中第Ⅱ、第Ⅲ染⾊体为中部着丝粒染⾊体，第Ⅳ染⾊体和第IX染⾊体为端着丝粒染⾊体。

唾液腺染⾊体形成时，染⾊体着丝粒和近着丝粒的异染⾊质区聚于⼀起形成⼀个染⾊中⼼（chromo-center），所以在光学显微镜下可见从染⾊中⼼处伸出6条配对的染⾊体臂，其中5条为长臂，l条为紧靠染⾊中⼼的很短的臂。

唾液腺染⾊体经染⾊后，呈现深浅不同，疏密各异的横纹（band）。

这些横纹的数⽬，位置，宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。

研究认为这些横纹与染⾊体的基因是有⼀定关系的。

通过⼀定的实验⽅法使果蝇唾液腺染⾊体各臂分散开，并且使带纹、膨突等特征不受杂质影响清晰地显⽰出来，是进⾏果蝇遗传学研究的很重要的⼀个环节．果蝇唾液腺染⾊体在不同种间的共同点是染⾊体的着丝点位于⼀个染⾊区域，但不同的种类往往其染⾊体臂数⽬不同．每条染⾊体臂上分布着染⾊深浅不同、粗细各异的磺纹(band)，这些横纹的宽窄疏密程度以及排列顺序和数⽬⼜都有种的特异性和种内的差异．由此，果蝇唾液腺染⾊体近⼏⼗年来，已⼴泛⽤于种内系统发⽣和种间亲缘关系的研究中，因为种间及种内不同品系和近缘种中的遗传差异经常反映在唾液腺染⾊体的不联会、形成泡(puff)、缢虞(constriction)和间带区的伸缩性以及顶体(telomere)的形态等多⽅⾯的差异，⽽特别重要的是研究它的基因序列的差异(观察是否产⽣了例位以及染⾊体的断裂、融合和重排)．因此，⽆论从细胞遗传学的⾓度研究基因与突变性状之间的联系，还是从进化遗传遗传学⽅⾯研究染⾊体的系统发⽣，探讨种间以及近缘种间的遗传差异和⽣殖隔离的机制等，唾液腺染⾊体的分析研究都是⼗分重要的．从其横纹分布特征可对物种的进化特征进⾏⽐较分析，⽽⼀旦染⾊体上发⽣了缺失，重复，倒位。

实验八果蝇唾液腺染色体制备和观察
一、实验目的
1．学习剖取果蝇三龄幼虫唾液腺并制作果蝇唾液腺染色体玻片标本；
2．观察唾液腺染色体结构特征并绘制染色体图；
3．分析果蝇唾液腺染色体结构变化动态。

二、实验准备
（按每实验小组2人准备）
1．仪器
显微镜1台、解剖镜1台、培养箱1台（通用）、消毒锅1台（通用）、冰箱1（通用）、干燥箱1（通用）
2．器械均放在小磁盘内）
镊子2、解剖针2、玻片架1、广口瓶2、玻璃板（10×10cm）2、
3．药品（2人一套）
醋酸洋红、1mol HCl、生理盐水、二甲苯（通用）[均分装在60ml滴瓶]、蒸馏水10L（通用）
4．耗材
载玻片4、盖玻片6、滤纸2、擦镜纸1本（通用）、棉花、纱布、果蝇培养基
5．材料
大果蝇（常年培养）
三、实验原理
果蝇唾液腺染色体特征：
1．同源染色体在体细胞联会配对，
2．染色体只复制，不分裂，导致染色体非常大。

3．染色体上有许多带纹（螺旋紧密区）
4．所有的染色体着丝粒都聚集在一起。

四、实验步骤
大果蝇低温高糖饲养→三龄幼虫→生理盐水洗涤→在玻片上滴半滴水放果蝇幼虫→拉唾液腺→在解剖镜下辨认唾液腺→清除杂质→洋红染色30min（搅拌）→盖盖片→覆盖滤纸→带液速压→吸余液→低倍观察→高倍绘图
五、作业
1．绘果蝇唾液腺染色体图。

实验果蝇唾腺染色体的制备与观察一、实验目的1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染色体的制片方法2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学特征二、实验原理1．果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体是巨大的唾液腺染色体；2．唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5mm宽，400mm长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体；3．唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。

三、实验材料与器具•三龄幼虫•0.9%生理盐水•改良苯酚品红 1N盐酸•解剖镜解剖针吸水纸四、实验步骤(1)剥离唾腺在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。

每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。

果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，左手持解剖针按压住虫体后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。

唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）。

去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。

(2)染色：吸去生理盐水，注意操作时要边观察边吸湿，最好用解剖针轻压，防止连同唾腺一起吸走；滴加胭脂红染色液，染色20-30min(3)压片：染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。

将片子放在实验台上，用大拇指均匀用力压片。

（注意不要使盖片移动。

）(4)观察：1、将制片置低倍镜下找到分散好的标本，移至视野中心，然后转到高倍镜下观察。

2、对分散良好、染色体臂充分伸展的片子，应仔细观察染色体的横纹数量、形状和排列顺序，对照模式照片辨认出不同的染色体臂五、注意事项1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。

2. 将脂肪组织清除干净3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃4. 染色时间不可过长，否则背景也着色5. 压片时要揉，用力要均匀6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片7. 吸水时勿将唾腺一起吸走六、实验结果七、分析讨论1.请画一个有代表性的果蝇唾腺染色体图。

果蝇唾腺染色体的标本制备和观察果蝇(Drosophila melanogaster)是生物学研究中常见的模式生物之一，其唾腺染色体是生物学中经常使用的标本之一。

本文将介绍如何制备果蝇唾腺染色体标本，并展示如何观察这些标本。

制备标本材料制备果蝇唾腺染色体标本需要的材料如下：•果蝇成虫•酒精•醋酸•乙醇•0.5% 的乙酸-洋红溶液•1% 的氧化铬酸钾溶液•100% 的甘油•盖片•显微镜步骤1.将成虫放入酒精中，浸泡5分钟至失去活性。

2.用镊子将成虫头部部分取下，然后将其剪开，将唾液腺取出。

3.将唾液腺置于醋酸中浸泡2分钟，然后转移到乙醇中浸泡2分钟，最后放入1%的氧化铬酸钾溶液中浸泡1-2分钟。

4.从氧化铬酸钾溶液中将唾液腺转移到100%的甘油中浸泡1-2分钟，以使其变色，然后将其取出，并放入盖片上。

5.加入0.5%的乙酸-洋红溶液，然后用另一个盖片覆盖，压扁唾液腺。

6.将盖片放入显微镜，用40倍或100倍放大倍数观察。

观察标本染色体结构果蝇唾腺染色体呈现为极细线状，可根据其结构分为两类：•染色体较长的一端为钩状，称为钩端。

•另一端较短，称为非钩端。

染色体数量成虫染色体数目为8条，如下：•一对#1染色体•一对#2染色体•一对#3染色体•两对#4染色体染色体组成果蝇唾腺染色体由DNA和蛋白质组成，其中蛋白质主要为组蛋白和非组蛋白。

通过以上步骤，我们可以轻松制备果蝇唾腺染色体标本，并通过显微镜观察其结构和数量。

这对于生物学研究和遗传学研究具有重要意义。

果蝇唾腺染色体的标本制备和观实验报告
实验目的：
通过制备果蝇唾腺染色体标本，观察果蝇的染色体结构，了解染色体的基本性质和遗
传学规律。

实验材料：
果蝇幼虫、0.5% KCl溶液、氯仿、乙醇、木棒、荧光显微镜。

实验步骤：
1、将果蝇幼虫放入酒精中，使其身体僵硬；
2、用木棒将其身体对称裂开，取出唾腺进行制片；
3、将唾腺放入0.5% KCl溶液中，加热至65℃，使细胞膜破裂；
4、倒入等量的氯仿，轻轻摇匀，放置5-10分钟；
5、离心，移去上层液体，加入冰醋酸铅，固定标本；
6、取出标本，放入70%、95%和绝对乙醇中，依次脱水；
7、将脱水后的标本放在载玻片上，滴上染色液，加热至70℃，并静置5分钟；
8、冲洗并抽干，加入透明胶进行封片；
9、通过荧光显微镜观察唾腺染色体的结构。

实验结果：
在进行染色体标本制备后，通过荧光显微镜观察，果蝇唾腺染色体呈现出沿着中心轴
对称排列、长度相等的形态。

每个染色体被分为两个亚单元，其中有着明显的染色体节间。

每个亚单元又被分成数个不同长度的染色体节，节与节之间也有着清晰可见的连接。

实验结论：
染色体是生物遗传信息的主要携带者，表现出其特定的形态和结构。

通过制备果蝇唾
腺染色体标本，观察了果蝇染色体的基本结构和形态，了解了染色体的基本性质和遗传学
规律。

对于研究生物遗传学以及进行基因工程，染色体的结构和功能有着重要的意义。