益髓生血颗粒血清UPLC特征图谱研究_孙玉雯
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骨髓移植修复辐射损伤小鼠卵巢的实验研究页数:2
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益髓生血颗粒特定指纹图谱及特征峰分析
益髓生血颗粒特定指纹图谱及特征峰分析孙玉雯;刘起华;文谨;吴志奎【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2014(036)001【摘要】目的建立益髓生血颗粒(山茱萸,何首乌,阿胶等)UPLC色谱指纹图谱,为其质量控制提供可参考依据.方法采用UPLC法,Acquity UPLC BEH C18色谱柱(50mm×2.1 mm,1.7 μm),柱温30℃,体积流量0.25 mL/min,进样量3μL,检测波长254 nm,乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱.结果用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对10批样品的指纹图谱进行峰匹配,标定了16个共有峰,选取的共有峰在单味药材中均找到归属,并确定了其中9个共有峰的化学结构.10批益髓生血颗粒中共有峰的相对保留时间RSD小于1％,指纹图谱的相似度在0.80以上.结论该法建立的指纹图谱灵敏度高,稳定性好,可以作为益髓生血颗粒的质量控制手段并为其有效成分的研究提供依据.【总页数】6页(P125-130)【作者】孙玉雯;刘起华;文谨;吴志奎【作者单位】中国中医科学院广安门医院,北京100053;中国中医科学院广安门医院,北京100053;中国中医科学院广安门医院,北京100053;中国中医科学院广安门医院,北京100053【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.益髓生血颗粒对AA大鼠CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞的影响 [J], 田晨;赵宗江;张丰丰;张新雪;程明秀;王颖超;赵敬;杨美娟2.β0纯合子β地中海贫血基因分析及益髓生血颗粒治疗的效果 [J], 陈艳霞;黄欣秋;张新华;王琳;吴志奎;柴立民;杜华;王荣新3.益髓生血颗粒对辐射损伤小鼠骨髓细胞C/EBPα、GM-CSF、 GM-CSFRα、MAFB mRNA表达的影响 [J], 岳竹君;王文娟;贾富霞;王佳佳;马赟;王丽娜;张群秀4.益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血的分析 [J], 韦金华;韦爱芳;张发恩;蓝川;韦嵩5.益髓生血颗粒中西医治疗慢性再生障碍性贫血临床观察 [J], 吉兆奕;吴洁;张丽娜;孙岸弢因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血患者自身对照比较研究
益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血患者自身对照比较研究吴志奎;张新华;刘咏梅;李敏;陈玉英;吕鑫霞;柴立民;王文娟;王荣新;黄有文;刘文军;朱欲英【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2007(014)003【摘要】目的观察补肾益髓法的代表方益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血临床效果.方法以高发区患者为观察对象,采用自身对照方法,30例重型、中间型β-地中海贫血患者先12/服安慰剂再口服益髓生血颗粒,疗程均为3个月.观察服药前后患者临床症状、中医证候变化,并做血液指标血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、胎儿血红蛋白(Ret)、网织红细胞(HbF)动态检测;中医临床证候表现按评分量表观察,记录不良反应.结果患者自服安慰剂1个月至疗程结束,主要疗效性指标Hb、RBC均无升高,Hb在口服安慰剂第1个月有明显降低(P＜0.05),而改服益髓生血颗粒自第1个月起至疗程结束患者Hb、RBC与服安慰剂第3个月比均有非常明显提高(P＜0.001);中医临床证候量表统计分析显示:口服安慰剂3个月后,患者临床中医证状无任何改善;经益髓生血颗粒治疗3个月后,患者除"面色萎黄"一项无明显改善外,"头晕目眩"、"心悸"、"气短","食少纳呆"、"倦怠乏力"等症状均有明显改善(P＜0.05);无任何不良反应.结论患者服安慰剂后改服益髓生血颗粒3个月后,血液指标Hb、RBC、Ret、HbF与服安慰剂第3个月比均有非常明显提高.两个阶段β-地中海贫血患者疗效比较有非常显著性差异.【总页数】3页(P9-11)【作者】吴志奎;张新华;刘咏梅;李敏;陈玉英;吕鑫霞;柴立民;王文娟;王荣新;黄有文;刘文军;朱欲英【作者单位】中国中医科学院广安门医院分子生物学研究室,北京100053;中国人民解放军第303医院,广西,南宁530003;中国中医科学院广安门医院分子生物学研究室,北京100053;中国中医科学院广安门医院分子生物学研究室,北京100053;中国中医科学院广安门医院分子生物学研究室,北京100053;中国中医科学院广安门医院分子生物学研究室,北京100053;中国中医科学院广安门医院分子生物学研究室,北京100053;中国中医科学院广安门医院分子生物学研究室,北京100053;中国人民解放军第303医院,广西,南宁530003;中国人民解放军第303医院,广西,南宁530003;中国中医科学院广安门医院分子生物学研究室,北京100053;中国人民解放军第303医院,广西,南宁530003【正文语种】中文【中图分类】R556.61【相关文献】1.益髓生血颗粒对β-地中海贫血患者SCF及EPOR mRNA表达的影响 [J], 易杰;黄启福;吴志奎2.益髓生血颗粒夏季治疗地中海贫血患者57例临床观察 [J], 程艳玲;张新华;方素萍;王文娟;孙玉雯;褚娜利;黄洁;吴志奎3.益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血的分析 [J], 韦金华;韦爱芳;张发恩;蓝川;韦嵩4.中药益髓生血颗粒治疗地中海贫血的临床研究 [J], 夏爱军;周天红;王丽;罗瑞贵;李平萍;张天郎;尹晓林;周亚丽;刘咏梅;王荣新;吴志奎;张新华5.中药益髓生血颗粒对β地中海贫血患者骨髓α血红蛋白稳定蛋白及红系转录因子GATA-1基因表达的影响 [J], 刘咏梅;吴志奎;柴立民;张新华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
补髓生血颗粒对失血性贫血小鼠骨髓及外周血细胞的影响
补髓生血颗粒对失血性贫血小鼠骨髓及外周血细胞的影响孙伟正;王磊;王巍;孙嫚丽【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2005(022)003【摘要】目的:观察补髓生血颗粒对失血性贫血小鼠骨髓及外周血的影响,为临床应用提供实验依据.方法:将实验用小白鼠,通过眶静脉放血法造成失血性贫血动物模型,然后分组经口给予补髓生血颗粒治疗,并以再障生血片作对照组,观察两组骨髓有核细胞数(BMC)、网织红细胞(RC)、白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)和血小板(PLT)的水平及两组疗效的差异.结果:补髓生血颗粒能够增加失血性贫血小鼠的BMC、RC、WBC、RBC、Hb及PLT.结论:补髓生血颗粒对小鼠失血性贫血的恢复有显著促进作用.【总页数】2页(P57-58)【作者】孙伟正;王磊;王巍;孙嫚丽【作者单位】黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江,哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江,哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江,哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.补髓生血颗粒对溶血性贫血小鼠骨髓及外周血细胞的影响 [J], 孙嫚丽;孙劲晖;王磊;王巍;孙伟正2.补髓生血颗粒对再生障碍性贫血模型大鼠外周血细胞影响的实验研究 [J], 孙伟正;侯淑峰;孙岸韬3.不同剂量补髓生血颗粒对再生障碍性贫血模型大鼠外周血及骨髓的影响 [J], 孙巍巍;孙强;王巍;孙伟正4.左归补髓生血方对再生障碍性贫血r小鼠骨髓有核细胞凋亡的影响 [J], 张鹏;何春玲;郭雨晨;李玮;董昌虎5.左归补髓生血方对再生障碍性贫血小鼠骨髓有核细胞凋亡的影响 [J], 张鹏;何春玲;郭雨晨;李玮;董昌虎;;;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
UPLC-MS快速测定蒙古黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量方法的建立
供 试 仪 器 有 超 高 效 液 相 色 谱 仪 （Ｕｌｔｉ Ｍａｔｅ３０００美国 ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公 司）、三 重 四 极杆 质 谱 仪 （ＴＳＱ Ｑｕａｎｔｕｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍａｓｓ 美 国 ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公 司 ）、超 声 波 清 洗 器 （ＳＢ２５ １２ＤＴＤＮ 型宁 波 新 芝 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司 ）、
物，ＴｈｅｎｍｏＣ１８（ＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤａＯ，１００ｍｍ×２．１ｍｍ，１．９μｍ）色 谱 柱 检 测，在 多 反 应 监 测（ＭＲＭ）模 式 下， 以４４７／１４２．９８ｍ／ｚ和４４７／２８４．６４ｍ／ｚ为定性 离 子 对，４４７／１４２．９８ ｍ／ｚ为 定 量 离 子 对，用 外 标 法 进 行 定 量。 结 果 表 明 ：毛 蕊 异 黄 酮 葡 萄 糖 苷 在 ０．０１８７５～０．６００００μｇ·ｍＬ１ 浓 度 范 围 内 有 良 好 的 线 性 关 系 （ｒ＝０．９９２），平 均加样回收率为９６．６％，ＲＳＤ 为２．７０１％。不同产地药材中毛蕊异 黄 酮 葡 萄 糖 苷 含 量 测 定 结 果 显 示，通 辽 市 奈曼旗产的含量为０．０３１％，赤峰市林西县 产 的 含 量 为 ０．０３３％，呼 和 浩 特 市 产 的 含 量 为 ０．０６５％，呼 和 浩 特 市显著高于通辽市和赤峰市。可见，超声波辅助甲 醇 ＵＰＬＣＭＳ法 具 有 操 作 简 单、灵 敏、快 捷，结 果 稳 定 可 靠 的 特 点 ，适 合 蒙 古 黄 芪 药 材 中 毛 蕊 异 黄 酮 葡 萄 糖 苷 含 量 的 快 速 测 定 。
收 稿 日 期 ：２０２１０７０７ 基金项目：内蒙古科技重大专项“饲药两用道地蒙药材标准 化 种植产业体 系 研 究”（ｚｄｚｘ２０１８０４９）；国 家 中 药 标 准 化 项 目“玉 屏风颗粒的全过程控制与标准化研究”（ＺＹＢＺＨＣＧＤ０８）。 第一作者：李晓杰（１９９５－ ），女，在 读 博 士，从 事 饲 草 生 产 与 药 用 植 物 栽 培 研 究 。Ｅｍａｉｌ：９１６５６２００２＠ｑｑ．ｃｏｍ。 通信作 者：王 俊 杰 （１９６２－），男，博 士，教 授，博 导，从 事 药 用 植 物 与 牧 草 种 质 资 源 育 种 研 究 。Ｅｍａｉｌ：ｊｊｗ６２＠１６３．ｃｏｍ。
物，ＴｈｅｎｍｏＣ１８（ＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤａＯ，１００ｍｍ×２．１ｍｍ，１．９μｍ）色 谱 柱 检 测，在 多 反 应 监 测（ＭＲＭ）模 式 下， 以４４７／１４２．９８ｍ／ｚ和４４７／２８４．６４ｍ／ｚ为定性 离 子 对，４４７／１４２．９８ ｍ／ｚ为 定 量 离 子 对，用 外 标 法 进 行 定 量。 结 果 表 明 ：毛 蕊 异 黄 酮 葡 萄 糖 苷 在 ０．０１８７５～０．６００００μｇ·ｍＬ１ 浓 度 范 围 内 有 良 好 的 线 性 关 系 （ｒ＝０．９９２），平 均加样回收率为９６．６％，ＲＳＤ 为２．７０１％。不同产地药材中毛蕊异 黄 酮 葡 萄 糖 苷 含 量 测 定 结 果 显 示，通 辽 市 奈曼旗产的含量为０．０３１％，赤峰市林西县 产 的 含 量 为 ０．０３３％，呼 和 浩 特 市 产 的 含 量 为 ０．０６５％，呼 和 浩 特 市显著高于通辽市和赤峰市。可见，超声波辅助甲 醇 ＵＰＬＣＭＳ法 具 有 操 作 简 单、灵 敏、快 捷，结 果 稳 定 可 靠 的 特 点 ，适 合 蒙 古 黄 芪 药 材 中 毛 蕊 异 黄 酮 葡 萄 糖 苷 含 量 的 快 速 测 定 。
收 稿 日 期 ：２０２１０７０７ 基金项目：内蒙古科技重大专项“饲药两用道地蒙药材标准 化 种植产业体 系 研 究”（ｚｄｚｘ２０１８０４９）；国 家 中 药 标 准 化 项 目“玉 屏风颗粒的全过程控制与标准化研究”（ＺＹＢＺＨＣＧＤ０８）。 第一作者：李晓杰（１９９５－ ），女，在 读 博 士，从 事 饲 草 生 产 与 药 用 植 物 栽 培 研 究 。Ｅｍａｉｌ：９１６５６２００２＠ｑｑ．ｃｏｍ。 通信作 者：王 俊 杰 （１９６２－），男，博 士，教 授，博 导，从 事 药 用 植 物 与 牧 草 种 质 资 源 育 种 研 究 。Ｅｍａｉｌ：ｊｊｗ６２＠１６３．ｃｏｍ。
补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血细胞黏附作用影响的研究
补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血细胞黏附作用影响的研究孙伟正;王金环;马智刚;孙岸弢;俞亚琴【期刊名称】《中华中医药杂志》【年(卷),期】2005(20)2【摘要】目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(chronicaplasticanemia,CAA) 患者骨髓造血细胞相关黏附分子表达水平的影响。
方法:采用免疫荧光法及流式细胞技术分别对使用该颗粒治疗前后的CAA患者骨髓造血干(祖)细胞受体c kit、CXCR4、骨髓基质细胞的淋巴细胞归巢受体(HCAM/CD44)、细胞间黏附分子(ICAM 1/CD54)表达进行检测,并与再障生血片对照组(简称对照组)及正常组做比较研究。
结果:两组患者治疗前 c kit/CD117表达明显高于正常组,而CXCR4、HCAM/CD44、ICAM 1/CD54水平明显低于正常组,治疗后两组患者CXCR4、HCAM/CD44、ICAM 1/CD54表达均有所升高,并且补髓生血颗粒实验组(简称实验组)CXCR4水平优于对照组,治疗后c kit/CD117与正常组比较无显著差异,亦优于对照组。
结论:CAA患者骨髓造血干(祖)细胞受体c kit、CXCR4、骨髓基质细胞HCAM/CD44、ICAM 1/CD54表达异常,补髓生血颗粒可能是通过提高CXCR4、 HCAM/CD44、ICAM 1/CD54的表达以及降低c kit/CD117的表达而促进骨髓造血的。
【总页数】3页(P89-91)【关键词】补髓生血颗粒;慢性再生障碍性贫血;骨髓造血细胞;黏附作用;中医药疗法【作者】孙伟正;王金环;马智刚;孙岸弢;俞亚琴【作者单位】黑龙江中医药大学附属第一医院血液内科;黑龙江中医药大学;山东烟台市毓璜顶医院【正文语种】中文【中图分类】R259.565【相关文献】1.补髓生血颗粒对于慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞粘附分子CD11b水平影响的研究 [J], 王金环;柳思佳;赵伟;王倩2.补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞粘附分子VLA-6/CD49f水平影响的研究 [J], 孙伟正;王金环;孙岸弢3.补髓生血冲剂对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血干细胞bax、C-myc、Bcl-2基因表达水平影响的实验研究 [J], 孙伟正;钟玉林;潘桂华;王金环;赵新广;蒋宁4.补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓基质细胞碱性成纤维细胞生长因子及其受体的影响 [J], 施海涛;王金环;孙岸弢;刘娜;雍延礼;孙伟正5.补髓生血颗粒剂对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血祖细胞c-kit、CXCR_4受体表达的影响 [J], 孙伟正;马智刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
益髓生血颗粒中西医治疗慢性再生障碍性贫血临床观察
治疗组
为 1 个疗程，
拟治疗 2 个疗程。
感染，此时应用抗感染药或中药清热解毒法进行治疗；当患者
△
治愈
显效
0（0）
6（30.00）
0（0）
6（30.00）
有效
9（45.00）
13（65.00）
*
注：
与对照组比较，
P < 0.05。表 2 同。
无效
总有效
义。
2
结果
结果见表 1 至表 3。治疗组治疗后中医证候积分为（11.26±
5.41）分，
明显低于对照组的（14.73±3.05）分。
表 1 两组患者中医证候疗效比较［例（%），
n=20］
组别
北制药集团有限责任公司）50 μg ，均每日 4 次。两组均以 12 周
对照组
支持治疗：治疗过程中，如有患者因白细胞的减少而导致
药新药临床研究指导原则（试行）》判定。治愈，各项症状、体征
消失，证候积分降低 ≥ 95%；显效，各项体征均显著改善，70% ≤
证候积分降低 < 95%；有效，各项体征均存在一定好转现象，且
30% ≤ 证候积分降低 < 70%；无效，各项体征无好转，或病情加
重，
症状积分降低 < 30%。
总有效=治愈+显效+有效。
准》判定。治愈，随访 1 年以上未复发；缓解，贫血和出血症状消
失，后续 3 个月的随访表明病情稳定；明显进步，贫血与出血逐
渐好转，且血红蛋白与治疗前对比，1 个月增加 30 g/L 以上，并
且可有效维持 3 个月；
无效，治疗后各项症状无明显改善。注意，
上述标准判定时必须 3 个月未进行输血。2）中医疗效，根据《中
裸花紫珠醇提物UPLC指纹图谱建立及抗呼吸道合胞病毒谱效关系研究
裸花紫珠醇提物UPLC 指纹图谱建立及抗呼吸道合胞病毒谱效关系研究Δ邵冰梅 1＊，李小锋 2，闫蓓蓓 3，刘启峰 4，秦焕云 1，赵祥君 1，侯林 1 #（1.山东中医药大学青岛中医药科学院，山东 青岛 266000；2.江西普正制药股份有限公司国家企业技术中心，江西 吉安 343100；3.山东中医药大学药学院，济南 250300；4.泰安市立医院神经外科，山东 泰安 271000）中图分类号 R 917；R 978.7 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）20-2465-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.20.04摘要 目的 建立裸花紫珠醇提物的指纹图谱，分析其体外抗呼吸道合胞病毒（RSV ）活性并进行谱效关系研究。
方法 以10%、30%、50%、70%、90%乙醇为溶剂，制备4批裸花紫珠药材的20批醇提物。
采用超高效液相色谱法，利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》绘制20批裸花紫珠醇提物的指纹图谱并进行相似度评价；采用致细胞病变效应法和MTT 法考察裸花紫珠醇提物对RSV 的体外抑制活性；运用Pearson 相关性分析、灰色关联度分析、正交偏最小二乘（OPLS ）分析进行谱效关系研究。
结果 20批裸花紫珠醇提物有25个共有峰，相似度为0.912～0.998，共有峰峰面积的RSD 为33.54%～162.28%。
20批裸花紫珠醇提物对RSV 的平均半数抑制浓度为9.55～272.23 μg/mL ；Pearson 相关性分析、灰色关联度分析、OPLS 分析结果表明，共有峰8、10、12、16、18～19、22～24与药效指标的Pearson 相关系数（P ＜0.05）和回归系数均为负值，关联度均大于0.6，变量重要性投影值均大于1。
结论 20批裸花紫珠醇提物成分相似但含量差异明显，且具有不同程度的体外抗RSV 活性，其中共有峰8、10、12、16、18～19、22～24对应成分可能是裸花紫珠抗RSV 的特征成分。
基于UPLCQTOFMSMS技术的酸枣仁汤颗粒化学成分分析
；流速为0.3 mL/min；进样量为5 μL。质谱条件：电喷雾离子源（ESI）， 正离子模式；喷雾电压为2.5 kV；干燥气流量为650 L/h；加热温度为600℃； 质谱扫描范围为m/z 100-1700。
实验结果
UPLCQTOFMSMS分析法半夏中甘草化学成分的实验结果如下表所示。
实验分析
2、药效成分分析
根据药效成分的作用机制和相关文献报道，发现酸枣仁皂苷A具有明显的镇静 催眠作用，而酸枣仁皂苷B则具有抗炎和抗氧化作用。甘草素具有抗炎、抗过 敏和免疫调节作用，而知母皂苷则具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用。这些成 分在酸枣仁汤颗粒中起到了综合治疗的作用。
讨论
本研究采用UPLCQTOFMSMS技术对酸枣仁汤颗粒的化学成分进行分析，成功鉴 定出12种化学成分，并对其药效成分进行了探讨。结果表明，酸枣仁汤颗粒中 的多种化学成分具有明显的药效作用，这些成分的综合作用可能与其在临床上 的广泛应用有关。此外，不同化学成分之间的相互作用可能产生协同或拮抗作 用，进一步影响药效。
背景
酸枣仁汤颗粒作为一种传统中药方剂，在临床应用中具有悠久的历史和广泛的 治疗范围。然而，关于其化学成分的分析研究较少，制约了对酸枣仁汤药效的 深入理解和优化利用。因此，本次演示采用UPLCQTOFMSMS技术对酸枣仁汤颗 粒的化学成分进行分析，旨在揭示其化学成分种类、含量及其药效成分，为其 临床应用提供理论依据。
总之，UPLCQTOFMS技术在经典名方竹茹汤的化学成分鉴定及网络药理学研究 中发挥了重要作用。该技术的应用不仅让我们更加深入地了解了竹茹汤的化待着这一技术在更多经典名方的研究中得到应用，为中医药的现代化发展贡献 力量。
引言
根据实验结果，法半夏中甘草化学成分主要包括黄酮醇苷类、三萜皂苷类和苯 丙素苷类等。这些化学成分具有不同的药理作用，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤等。 其中，黄酮醇苷类和苯丙素苷类是甘草的主要药效成分，具有祛痰止咳、解毒 抗炎等作用。而三萜皂苷类则具有抗肿瘤、抗病毒等作用，对于法半夏的药效 发挥具有重要意义。
UPLC-Q-TOF-MSMS方法鉴定
摘要：[目的]利用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱技术（U PLC-Q-TOF-MS/M S ）对血必净注射液中的化学成分进行快速鉴定。
[方法]采用ACQUITY UPLC 誖BEH C 18（2.1mm ×100mm,1.7μm ）色谱柱，以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱，在负离子模式下进行数据采集，通过与对照品对比保留时间、相对分子量、二级质谱碎片离子的方法确定化学成分。
[结果]在负离子模式下，45min 内鉴定出血必净注射液中20种化学成分。
[结论]建立了一种简单、准确的UPLC-Q-TOF-MS/MS 方法对血必净注射液中的化学成分进行鉴定。
关键词：血必净注射液；UPLC-Q-TOF-MS/MS ；定性分析中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1673-9043(2017)03-0209-05UPLC-Q-TOF-MS/MS 方法鉴定血必净注射液中20种化学成分*屠亚茹1，欧阳慧子2，孙梦杰1，常艳旭1，何俊1（1.天津中医药大学中医药研究院，天津市现代中药重点实验室，天津300193；2.天津中医药大学第一附属医院，天津300193）*基金项目：国家自然科学基金项目资助（81303140）。
作者简介：屠亚茹（1991-），女，硕士研究生，研究方向为药物分析。
通讯作者：何俊，E-mail:****************。
·中药研究·血必净注射液是由王今达教授以血府逐瘀汤组方为基础研制的复方中药制剂[1]，由红花、赤芍、川芎、丹参、当归5味中药组成，其有效成分包括红花色素、黄酮苷、酚酸和苯乙基苷等[2]。
研究表明，血必净注射液具有降低内毒素水平、调节免疫及炎性介质的作用[3-4]，临床上主要用来治疗脓毒症和多器官功能障碍综合症[5-10]，并可与抗生素联合用药用于治疗肺部感染[11]。
在以往的研究当中，对于血必净注射液的研究多集中于药理、药效方面，而有关药效成分的研究则相对较少。
补髓生血颗粒及其制备方法[发明专利]
专利名称：补髓生血颗粒及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：孙伟正
申请号：CN03132465.7
申请日：20030627
公开号：CN1471956A
公开日：
20040204
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种补髓生血颗粒及其制备方法，该药物组分的重量配比是：熟地黄2000－3000g，山萸肉1000－2000g，枸杞子1500－2500g，淫羊藿2000－3000g，黄芪4500－5500g，鸡血藤1500－2500g，白花蛇舌草1500－2500g，鹿茸200－300g，红参1000－
2000g，丹参2500－3500g，茯苓1500－2500g。
本发明经过黑龙江中医药大学附属医院血液内科对111例再障的疗效研究和215例再障的生存率及远期疗效的观察，总有效率为79.35％，临床治愈率为28.83％，五年生存率达88％，远期疗效为71.64％。
申请人：孙伟正
地址：150040 黑龙江省哈尔滨市动力区和平路26号中医药大学附属第一医院
国籍：CN
代理机构：哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司
代理人：朱恒孝
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“973 ”计 划 （ 2010CB530406 ） ； 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 （ 81173167） 作者简介： 孙玉雯（ 1979 － ） ，女，执业药师，博士，研究方向： 中药制剂及 药效物质基础研究。 通讯作者： 吴志奎，研究员，主要从事地中s of human ovarian cancer［J］． Proc Natl Acad Sci USA，2007， 104（ 9） ： 3360 － 3365． ［2］ Hirano F，Kaneko K，Tamura H，et al． Blockade of B7 － H1 and PD － 1 by monoclonal antibodies potentiates cancer therapeutic immunity ［J］． Cancer Res，2005，65（ 3） ： 1089 － 1096． ［3］ Xiao H，Huang B，Yuan Y，et al． Soluble PD － 1 facilitates 4 － 1BBL － triggered antitumor immunity against murine H22 hepatocarcinoma in vivo ［J］． Clin Cancer Res，2007，13（ 6） ： 1823 － 1830． ［4］ 吴远文，吴勋，孙红祥． 白藤梨提取物抗肿瘤作用的研究［J］． 医学 信息，2010，11（ 23） ： 157 － 159． ［5］ Xu HS，Wu YW，Xu SF，et al． Antitumor and immunomodulatory activity of polysaccharides from the roots of Actinidiaeriantha ［J］． J Ethnopharmacol，2009，125（ 2） ： 310 － 317． ［6］ 白吉庆，王小平，叶峥嵘． 藤梨根提取物对人胃癌 SGC － 7901 细 胞凋亡及 Bcl － 2 的影响［J］． 陕西中医学院学报，2012，35（ 1） ： 59 － 61． ［7］ 王小平，白吉庆，叶峥嵘． 藤梨根提取物对裸鼠移植人胃癌 SGC － 7901 细胞瘤 p53 基因蛋白的影响［J］． 现代中医药，2012，32（ 1） ： 56 － 57． ［8］ 孙雪飞，裴艳涛，尹秋伟，等． 藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌 A549 细胞凋亡的诱导作用［J］． 山东医药，2011，51（ 37） ： 19 － 21． ［9］ Wang S，Chen L． Immunobiology of cancer therapies targeting CD137 and B7 － H1 / PD － 1 cosignalpathways［J］． Curr Top Microbiol Immunol，2011，344： 245 － 267． ［10］ Topalian SL，Hodi FS，Brahmer JR，et al． Safety，activity，and immune correlates of anti － PD － 1 antibody in cancer［J］． N Engl J Med， 2012，366（ 26） ： 2443 － 2454．
但是其毒 副 作 用 大，大 部 分 的 中 晚 期 患 者 无 法 耐 受。 中药的毒副作用小，能否下调 PD － L1、PD － L2 分子表 达，在肿瘤 免 疫 逃 逸 方 面 发 挥 作 用，目 前 研 究 鲜 有 报 道。本研究 结 果 表 明，白 山 毛 桃 根 提 取 物 可 以 抑 制 M21 增殖，同时可以下调 M21 细胞 PD － L1、PD － L2 mRNA 和蛋白的表达，但是其在体内的疗效还不清楚， 接下来还要构建动物模型继续研究； 除此之外，白山毛 桃根提取物是否可以诱导 M21 细胞凋亡、阻滞 M21 细 胞周期，目前也在研究当中。此外，白山毛桃根提取物 除了对黑色素瘤 M21 细胞有增殖抑制作用以外，对脑 胶质瘤细胞 U251、乳腺癌 MCF － 7 细胞也均有增殖抑 制作用，那么其分子机制又如何呢？ 还不清楚； 是否也 是通过影响 PD － L1、PD － L2 分子表达而起作用，还需 要进一步的研究。
关键词： 益髓生血颗粒; 特征图谱; 化学成分; 血清 中图分类号： R285． 5 文献标志码： B 文章编号： 1000 － 1719（ 2013） 10 － 2104 － 03
UPLC Characteristic Chromatograms of Serum with Yisui Shengxue Granule
SUN Yuwen，ZOU Yang，LIU Li，CHENG Yanling，LI Junli，WU Zhikui （ Guang’anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China）
Abstract： Objective： To establish the characteristic chromatograms of serum with Yisui Shengxue Granule，and analyze and identify its chemical compositions absorbed into blood． Methods： SD rats were orally given Yisui Shengxue Granule of various concentrations． The medicinal serum samples were separated and detected with UPLC． The analysis methods of UPLC characteristic chromatograms of Yisui Shengxue Granule and medicinal serum were established． The characteristic chromatograms of the whole formula of Yisui Shengxue Granule and medicinal serum were analyzed，and the chemical compositions，original crude medicinal and metabolites in blood were compared and identified． Results： It showed the drug concentration was increased； the transitional
辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 10 期
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type of component that could be detected in blood was increased，increasing the content of component． The types of chemical compositions in the blood of rat fed high concentration’s Yisui Shengxue granule were more 13 than the types of chemical compositions of the control group，among them 4 were original compositions and 9 were metabolites． The results of UPLC showed that the original compositions were kaempferol and isopsoralen，which came from Radix Astragali． Conclusion： The chemical compositions and metabolites in blood may be the drug － like compositions with the directactions in vivo，which come from the ingredients of Yisui Shengxue Granule．
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辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 10 期
益髓生血颗粒血清 UPLC 特征图谱研究
孙玉雯，邹阳，刘莉，程燕玲，李俊丽，吴志奎
（ 中国中医科学院广安门医院，北京 100053）
摘 要： 目的: 建立益髓生血颗粒的血清特征图谱，并分析鉴定其体内吸收入血化学成分。方法: 取 SD 大鼠，灌胃给 予不同浓度的益髓生血颗粒，分离含药血清，UPLC 法测定，建立益髓生血颗粒含药血清的 UPLC 图谱分析方法; 分析益 髓生血颗粒提取物及其含药血清特征图谱; 比对鉴定血中成分及其代谢产物。结果: 随着药物浓度的提高，血中可检出 的移行成分的种类增加，含量提高。高浓度益髓生血颗粒灌胃给药后与空白血清相比，多了 13 个移形成分，其中 4 个为 原型成分，9 个为代谢产物，原型成分有来源于补骨脂的补骨脂素、异补骨脂素。结论: 血中成分及代谢产物可能为益髓 生血颗粒体内直接作用的类药成分，其分别来源于益髓生血颗粒的组成药味。
参考文献 ［1］ Hamanishi J，Mandai M，Lwasaki M，et al． Programmed cell death 1
ligand 1 and tumor-infiltratingn CD8 + T lymphocytes are prognostic
收稿日期： 2013 － 04 － 16 基金项目： 中药新药大平台研发品种（ 2009ZX0931 － 005 － 2 － 7 ） ； 国家
Key words： Yisui shengxue Granule； characteristic chromatogram； chemical composition； serum
“血清药物化学”的概念［1］ 由日本学者田代真一 提出，随后，我国学者王喜军教授［2］进一步完善了中药 血清药物化学的概念，其目的在于研究血清中的化学 成分，阐明中药复方的药效物质基础［1 － 3］。益髓生血 颗粒是中国中医院研究院广安门医院吴志奎教授依据 中医“肾生髓、髓生血”理论，以补肾益髓法组方而成， 该药具有滋阴补肾、益髓生血、补气健脾之功效，主治 肾脾两虚，精血不足证。目前临床上用于各种贫血症 特别是地中海贫血的治疗，在广西地贫高发区用药近 30 年，取得肯定的可重复的临床疗效［4 － 8］。本文采用 血清药物化学的研究方法，通过与对照品及益髓生血 颗粒提取物 UPLC 谱图的比较，探讨益髓生血颗粒的 入血成分，寻找可能的药效物质基础，为该药的作用机 制研究奠定基础。 1材料 1. 1 仪器与试剂 Waters Acquity H － Class UPLC 超 高效液相色谱仪： 四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二 极管阵列检测器以及 Empower 2 工作站（ 美国 Waters 公司） ； 甲醇、磷酸（ 均为分析纯，北京化学试剂公司） ； 乙腈（ 色谱醇，fisher chemical，4 L） ； 屈臣氏蒸馏水。 1. 2 样品 实验用的益髓生血颗粒系中国中医科学 院广安门医院制剂中心生产提供，批号： 20110801，深 褐色颗粒，含 2. 36 g 生药 / g 药粉。 1. 3 对照品 补骨脂素（ 批号： 110739 － 200613） 、异 补骨脂素（ 批号： 110738 － 201012） 均购自中国药品生 物制品检定所。 1. 4 动物 健康雄性 SD 大鼠，体重（ 200 ± 20） g，军 事医学科学院实验动物中心提供，实验动物生产条件 许可证编号为 SYXK － （ 军） 007 － 004，实验动物合格 证号 SCXK － （ 军） 007 － 004。 2 实验方法及结果 2. 1 益髓生血颗粒灌胃样品溶液的制备 取益髓生 血颗粒，加水溶化，调整颗粒加入量，分别配成高、中、 低剂 量 组，各 灌 胃 样 品 组 含 生 药 量 分 别 为： 0. 944 g / mL、0. 708 g / mL、0. 354 g / mL。 2. 2 对 照 品 溶 液 的 制 备 分 别 取 补 骨 脂 素 （ 0. 13 mg / mL） 0. 5 mL、异补骨脂素（ 0. 176 mg / mL） 对照品 0. 5 mL 加甲 醇 定 容 至 10 mL，0. 2 μm 的 微 孔 滤 膜 滤 过，滤液作为混合对照品溶液。 2. 3 血清样品的制备 80 只 SD 大鼠随机分为 4 组。 各给药组分别以 2 mL /200 g 体重量灌胃上述益髓生 血颗粒各 浓 度 灌 胃 药 液，正 常 组 给 予 等 量 生 理 盐 水。 每次间隔 12 h，连续给药 3 d。于最后一次给药 1 h 后， 用乙醚麻醉心脏采血，离心分离血清，分别得益髓生血 颗粒各浓度含药血清和空白血清样品。血清样品置 － 20℃ 冷冻备用。 2. 4 血清供试品的制备 取 1 mL 各浓度血清样品及
但是其毒 副 作 用 大，大 部 分 的 中 晚 期 患 者 无 法 耐 受。 中药的毒副作用小，能否下调 PD － L1、PD － L2 分子表 达，在肿瘤 免 疫 逃 逸 方 面 发 挥 作 用，目 前 研 究 鲜 有 报 道。本研究 结 果 表 明，白 山 毛 桃 根 提 取 物 可 以 抑 制 M21 增殖，同时可以下调 M21 细胞 PD － L1、PD － L2 mRNA 和蛋白的表达，但是其在体内的疗效还不清楚， 接下来还要构建动物模型继续研究； 除此之外，白山毛 桃根提取物是否可以诱导 M21 细胞凋亡、阻滞 M21 细 胞周期，目前也在研究当中。此外，白山毛桃根提取物 除了对黑色素瘤 M21 细胞有增殖抑制作用以外，对脑 胶质瘤细胞 U251、乳腺癌 MCF － 7 细胞也均有增殖抑 制作用，那么其分子机制又如何呢？ 还不清楚； 是否也 是通过影响 PD － L1、PD － L2 分子表达而起作用，还需 要进一步的研究。
关键词： 益髓生血颗粒; 特征图谱; 化学成分; 血清 中图分类号： R285． 5 文献标志码： B 文章编号： 1000 － 1719（ 2013） 10 － 2104 － 03
UPLC Characteristic Chromatograms of Serum with Yisui Shengxue Granule
SUN Yuwen，ZOU Yang，LIU Li，CHENG Yanling，LI Junli，WU Zhikui （ Guang’anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China）
Abstract： Objective： To establish the characteristic chromatograms of serum with Yisui Shengxue Granule，and analyze and identify its chemical compositions absorbed into blood． Methods： SD rats were orally given Yisui Shengxue Granule of various concentrations． The medicinal serum samples were separated and detected with UPLC． The analysis methods of UPLC characteristic chromatograms of Yisui Shengxue Granule and medicinal serum were established． The characteristic chromatograms of the whole formula of Yisui Shengxue Granule and medicinal serum were analyzed，and the chemical compositions，original crude medicinal and metabolites in blood were compared and identified． Results： It showed the drug concentration was increased； the transitional
辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 10 期
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type of component that could be detected in blood was increased，increasing the content of component． The types of chemical compositions in the blood of rat fed high concentration’s Yisui Shengxue granule were more 13 than the types of chemical compositions of the control group，among them 4 were original compositions and 9 were metabolites． The results of UPLC showed that the original compositions were kaempferol and isopsoralen，which came from Radix Astragali． Conclusion： The chemical compositions and metabolites in blood may be the drug － like compositions with the directactions in vivo，which come from the ingredients of Yisui Shengxue Granule．
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辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 10 期
益髓生血颗粒血清 UPLC 特征图谱研究
孙玉雯，邹阳，刘莉，程燕玲，李俊丽，吴志奎
（ 中国中医科学院广安门医院，北京 100053）
摘 要： 目的: 建立益髓生血颗粒的血清特征图谱，并分析鉴定其体内吸收入血化学成分。方法: 取 SD 大鼠，灌胃给 予不同浓度的益髓生血颗粒，分离含药血清，UPLC 法测定，建立益髓生血颗粒含药血清的 UPLC 图谱分析方法; 分析益 髓生血颗粒提取物及其含药血清特征图谱; 比对鉴定血中成分及其代谢产物。结果: 随着药物浓度的提高，血中可检出 的移行成分的种类增加，含量提高。高浓度益髓生血颗粒灌胃给药后与空白血清相比，多了 13 个移形成分，其中 4 个为 原型成分，9 个为代谢产物，原型成分有来源于补骨脂的补骨脂素、异补骨脂素。结论: 血中成分及代谢产物可能为益髓 生血颗粒体内直接作用的类药成分，其分别来源于益髓生血颗粒的组成药味。
参考文献 ［1］ Hamanishi J，Mandai M，Lwasaki M，et al． Programmed cell death 1
ligand 1 and tumor-infiltratingn CD8 + T lymphocytes are prognostic
收稿日期： 2013 － 04 － 16 基金项目： 中药新药大平台研发品种（ 2009ZX0931 － 005 － 2 － 7 ） ； 国家
Key words： Yisui shengxue Granule； characteristic chromatogram； chemical composition； serum
“血清药物化学”的概念［1］ 由日本学者田代真一 提出，随后，我国学者王喜军教授［2］进一步完善了中药 血清药物化学的概念，其目的在于研究血清中的化学 成分，阐明中药复方的药效物质基础［1 － 3］。益髓生血 颗粒是中国中医院研究院广安门医院吴志奎教授依据 中医“肾生髓、髓生血”理论，以补肾益髓法组方而成， 该药具有滋阴补肾、益髓生血、补气健脾之功效，主治 肾脾两虚，精血不足证。目前临床上用于各种贫血症 特别是地中海贫血的治疗，在广西地贫高发区用药近 30 年，取得肯定的可重复的临床疗效［4 － 8］。本文采用 血清药物化学的研究方法，通过与对照品及益髓生血 颗粒提取物 UPLC 谱图的比较，探讨益髓生血颗粒的 入血成分，寻找可能的药效物质基础，为该药的作用机 制研究奠定基础。 1材料 1. 1 仪器与试剂 Waters Acquity H － Class UPLC 超 高效液相色谱仪： 四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二 极管阵列检测器以及 Empower 2 工作站（ 美国 Waters 公司） ； 甲醇、磷酸（ 均为分析纯，北京化学试剂公司） ； 乙腈（ 色谱醇，fisher chemical，4 L） ； 屈臣氏蒸馏水。 1. 2 样品 实验用的益髓生血颗粒系中国中医科学 院广安门医院制剂中心生产提供，批号： 20110801，深 褐色颗粒，含 2. 36 g 生药 / g 药粉。 1. 3 对照品 补骨脂素（ 批号： 110739 － 200613） 、异 补骨脂素（ 批号： 110738 － 201012） 均购自中国药品生 物制品检定所。 1. 4 动物 健康雄性 SD 大鼠，体重（ 200 ± 20） g，军 事医学科学院实验动物中心提供，实验动物生产条件 许可证编号为 SYXK － （ 军） 007 － 004，实验动物合格 证号 SCXK － （ 军） 007 － 004。 2 实验方法及结果 2. 1 益髓生血颗粒灌胃样品溶液的制备 取益髓生 血颗粒，加水溶化，调整颗粒加入量，分别配成高、中、 低剂 量 组，各 灌 胃 样 品 组 含 生 药 量 分 别 为： 0. 944 g / mL、0. 708 g / mL、0. 354 g / mL。 2. 2 对 照 品 溶 液 的 制 备 分 别 取 补 骨 脂 素 （ 0. 13 mg / mL） 0. 5 mL、异补骨脂素（ 0. 176 mg / mL） 对照品 0. 5 mL 加甲 醇 定 容 至 10 mL，0. 2 μm 的 微 孔 滤 膜 滤 过，滤液作为混合对照品溶液。 2. 3 血清样品的制备 80 只 SD 大鼠随机分为 4 组。 各给药组分别以 2 mL /200 g 体重量灌胃上述益髓生 血颗粒各 浓 度 灌 胃 药 液，正 常 组 给 予 等 量 生 理 盐 水。 每次间隔 12 h，连续给药 3 d。于最后一次给药 1 h 后， 用乙醚麻醉心脏采血，离心分离血清，分别得益髓生血 颗粒各浓度含药血清和空白血清样品。血清样品置 － 20℃ 冷冻备用。 2. 4 血清供试品的制备 取 1 mL 各浓度血清样品及