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·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2014,22(5): 28-34猪圆环病毒2 型Cap 蛋白表达及免疫原性鉴定朱 鹏1,2，张小飞2，徐延伟2，尹秀凤2（1.安徽农业大学动物科技学院，合肥230036；2.南京天邦生物科技有限公司 生物技术研究所，南京211102）摘 要：以猪圆环病毒2型 (Porcine circovirus type 2，PCV2) WH 株基因组 DNA 为模板，扩增 ORF2 截短基因，经Bam H I /Not I 双酶切处理后与经相同酶切处理的 pET32a (+) 原核表达载体连接，获得重组质粒 pET32a-Cap2。
将重组质粒转化至 BL21（DE3），经IPTG 诱导，对表达产物进行 SDS-PAGE 和 Western blot 分析。
纯化的重组蛋白免疫小鼠，并对获得的血清进行间接 ELISA 检测和中和活性测定。
SDS-PAGE 分析表明，ORF2 截短基因在大肠杆菌中得到表达，蛋白分子质量大小为40 kDa ，重组 PCV2 Cap 蛋白主要以上清的形式存在。
Western blot 证实重组蛋白能够识别抗 PCV2 阳性血清。
经间接ELISA 检测，鼠抗PCV2 Cap 血清抗体效价能达到1:25 600，间接免疫荧光检测分析表明，鼠抗PCV2 Cap 血清能特异性识别PCV2感染细胞中的Cap 蛋白。
病毒血清中和实验证实，抗PCV2 Cap 血清抗体具有中和病毒的活性，中和效价为1:36。
猪圆环病毒2型 Cap 蛋白的表达，为进一步研究该蛋白的功能及Cap 蛋白亚单位疫苗和检测试剂盒的制备奠定了基础。
关键词：猪圆环病毒2型 ；Cap 蛋白；免疫原性；中和活性中图分类号：S852.659.2文献标志码：A文章编号：1674-6422（2014）05-0028-07EXPRESSION AND IMMUNOGENICITY OF RECOMBINANT CAP PROTEINOF PORCINE CIRCOVIRUS TYPE 2ZHU Peng 1,2, ZHANG Xiao-fei 2, XU Yan-wei 2, YIN Xiu-feng 2(1. College of Veterinary Medicine, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China; 2. Biotechnology Research Institute, Nanjing Tech-bank Bio-industry Co. Ltd., Nanjing 211102, China)Abstract: The truncated ORF2 of Porcine circovirus type 2(PCV2) WH strain was ampli fi ed and cloned into expression vector pET32a (+). The expression vector pET32a-Cap2 was then transformed into BL2 (DE3) for expression with induction of IPTG. The expressed pET32a-Cap products were analyzed in SDS-PAGE and Western blot. The recombinant Cap protein was a soluble protein with molecular weight of 40 kDa. The puri fi ed Cap protein was used to immunize mice to prepare antiserum. The resulting murine antiserum had ELISA titer at over 1:25 600 and reacted with PCV2 in infected PK-15 cells in indirect immuno fl uorescence assay (IFA). The murine antiserum also showed neutralizing titer at 1:36. The availability of the recombinant PCV2 Cap protein provides the basis for development of vaccine and diagnostic reagents.Key words: Porcine circovirus type 2; Cap protein; immunogenicity; neutralization收稿日期：2014-03-07作者简介：朱鹏，男，硕士，主要从事动物疾病研究通信作者：张小飞，E-mail：xiaofei0804@猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）为圆环病毒科圆环病毒属成员，由 Tischer 于1974年首先在 PK-15细胞中发现，并于1982年命名为猪圆环病毒。
Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白多克隆抗体的制备与鉴定王卓;卢玉婷;魏雪;张海斌;柯玉花;苗丽娟【摘要】利用制备好的PCV2 Cap蛋白,将其与弗氏佐剂乳化,免疫Balb/c鼠,制备多克隆抗体并对其抗体效价进行鉴定和分析抗体产生规律.结果表明,制备的多克隆抗体效价达到1:12800,该规律的发现为单克隆抗体制备免疫程序的制定奠定了试验基础.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2011(000)006【总页数】3页(P52-54)【关键词】PCV2 Cap蛋白;多克隆抗体;制备与鉴定【作者】王卓;卢玉婷;魏雪;张海斌;柯玉花;苗丽娟【作者单位】吉林农业科技学院,吉林吉林132101;吉林农业科技学院,吉林吉林132101;吉林农业科技学院,吉林吉林132101;吉林农业科技学院,吉林吉林132101;吉林农业科技学院,吉林吉林132101;吉林农业科技学院,吉林吉林132101【正文语种】中文【中图分类】S828;S85.65+9.1猪圆环病毒（PCV）是迄今发现的一种最小的动物病毒。
现已知PCV有两个血清型，即PCV1和PCV2。
PCV1为非致病性的病毒，PCV2为致病性的病毒。
PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原，并多发于5～16周龄的猪。
该病最早发现于加拿大，很快在欧美及亚洲一些国家包括我国发生和流行，除PMWS外，猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、增生性坏死性肺炎（PNP）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV2感染有重要关联。
PCV2及其相关的猪病，死亡率达10%～30%，较严重的猪场在暴发本病时死淘率高达40%，给养猪业造成严重的经济损失。
现已被世界各国的兽医与养猪业者公认为是继猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）之后新发现的引起猪攻毒障碍的重要传染病。
本试验利用制备好的原核表达的PCV2 Cap蛋白，免疫Balb/c鼠，制备Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白的多克隆抗体，根据其抗体产生情况分析其抗体产生规律，生产出的多抗可以作为标准阳性血清用于酶联免疫吸附试验等，且在制备多抗过程中检测出抗体产生的规律，为制备圆环病毒的单克隆免疫程序奠定技术基础。
猪圆环病毒2型去除NLS的cap蛋白基因的克隆与B细胞抗原表位的预测苗丽娟;张立春;唐艳林【摘要】本试验克隆了猪圆环病毒2型去除核定位信号的ORF2基因,并对其B细胞抗原表位进行预测.根据新分离毒株PCV2-871[1]的已知序列设计一对引物,PCR 扩增其去掉核定位信号的ORF2基因,命名为pcv-581,利用引入的双酶切位点BamH Ⅰ/HindⅢ将其连接到表达载体pQE-32中,命名为pQE-pcv581转化大肠杆菌M15中,同时采用DNAStar软件对去除NLS的ORF2基因进行B细胞抗原表位的预测,为单克隆抗体的制备和抗原表位的鉴定奠定基础.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2013(049)005【总页数】4页(P17-18,22,后插2)【关键词】猪圆环病毒2型;去NLS ORF2基因克隆;B细胞表位【作者】苗丽娟;张立春;唐艳林【作者单位】吉林农业科技学院动物医学学院,吉林吉林132101;吉林农业科技学院动物医学学院,吉林吉林132101;吉林农业科技学院动物医学学院,吉林吉林132101【正文语种】中文【中图分类】S852.65猪圆环病毒2型（PCV2）是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）等相关疾病的主要病原。
该病1991年在加拿大首次报道［2］，主要感染5～12周龄仔猪，致死率可达40%，PCV2在淋巴细胞增殖，可引起免疫细胞的凋亡，损伤猪体的免疫系统造成免疫抑制，易造成PPV、PRRS及其他疾病的继发感染，给全世界养猪业带来巨大的经济损失。
PCV2是圆环病毒科（Circoviridae）圆环病毒属成员，为单股环状负链无囊膜的DNA病毒，为已知的最小动物病毒之一，约17～20nm，二十面体对称。
根据病毒的抗原性和基因组成不同，可分为2种基因型或称血清型，即PCV1型和PCV2型。
PCV1型无致病性；PCV2型具有致病性，基因组全长1 767bp或1 768bp，包括11个读码框，其中ORF2编码病毒的主要结构蛋白－核衣壳蛋白（Cap），决定着PCV2的表型特异性，现在的基因工程疫苗是疫苗研究的热点，技术思路是通过分析病毒的基因序列来预测病原体的抗原信息，然后筛选出合适的候选抗原，进而研制出有效的疫苗，本文的目的就是在已获得的PCV－2基因组序列资料的基础上，运用计算机和分子生物学软件对其结构蛋白的二级结构和B细胞抗原表位进行预测，从而为PCV－2的反向疫苗学研究提供理论依据；为研制适合临床应用的ELISA诊断试剂盒和单克隆抗体的制备和抗原表位的鉴定工作奠定了基础。
仔猪感染圆环病毒2型的检测与分析作者：李明波，雷彬，董斌科，等来源：《湖北农业科学》 2014年第23期明波１，雷彬１，董斌科１，梅书棋１，陈明银２，刘心建３（１.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，武汉４３００６４；２.武汉市江夏区畜牧兽医局，武汉４３０２００；３.武汉市江夏区动物疫病预防控制中心，武汉４３０３００）摘要：通过ＰＣＲ方法对湖北某试验猪场３份疑似患断奶仔猪衰竭综合征（ＰＭＷＳ）的仔猪和一份死胎样本进行检测，结果４份组织病料中均扩增到４９４ｂｐ大小的ＰＣＶ２－ＤＮＡ片段，而伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）检测为阴性。
对扩增产物进行测序和Ｂｌａｓｔ同源性分析发现，所检测的ＰＣＶ２病毒为ＰＣＶ２ｂ亚型，其ＯＲＦ２基因全长为７０２ｂｐ，与ＰＣＶ２－ＷＨ株、ＰＣＶ２－ＨＢＷＨ２４毒株的核苷酸序列同源性分别为９４％和９９％。
通过试验研究，明确了该试验猪场猪群中保育仔猪的主要感染病原为ＰＣＶ２，为更好地应用疫苗防控该病和研究综合控制技术提供了依据。
关键词：猪圆环病毒２型；ＯＲＦ２基因；检测与分析中图分类号：Ｓ８５８.２８文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０14）23－5798-04ＤＯＩ：１０.１４０８８／ｊ.ｃｎｋｉ.ｉｓｓｎ０４３９－８１１４.２０１４.２３.044猪圆环病毒病（ＰＣＶ２）是由圆环病毒２型引起的一系列疾病的总称，包括断奶仔猪衰竭综合征（ＰＭＷＳ）、出生猪的先天震颤和生长猪的皮炎肾病综合征、增生性肠炎、青年母猪的流产及产死胎等。
断奶仔猪衰竭综合征（ＰＭＷＳ）是临床较常见、造成经济损失较大的猪圆环病毒病，临床患ＰＭＷＳ的仔猪表现为皮肤苍白、呼吸道症状、进行性消瘦、腹股沟淋巴结肿大和生长发育不整齐，容易继发细菌感染等。
ＰＣＶ２对环境的抵抗力较强，可经猪的唾液、鼻腔、粪尿、乳汁、胎盘和公猪精液等途径传播。
猪圆环病毒病严重影响了仔猪的生长性能，表现为养殖场内持续性感染，是其他猪病多发和频发的主要原因之一。
２０２３年第１０期（总第４１３期）畜禽业试验研究基金项目：江苏农林职业技术学院青年扶持项目（２０２２ｋｊ３２）；江苏省高等学校基础科学（自然科学）研究面上项目（２２ＫＪＢ１８０００１）猪圆环病毒２型快速检测方法研究进展申秋平，唐雨萌，沈静怡，庄林林通信作者江苏农林职业技术学院，江苏镇江２１２４００摘 要 猪圆环病毒２型（Ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２，ＰＣＶ２）可以引起猪生殖和呼吸道疾病、断奶仔猪综合征、皮炎和肾炎等，给全球养猪业造成了严重的经济损失。
快速、精准的检测方法对该病毒的防控尤为重要。
对近年来国内外已发表的ＰＣＶ２快速检测方法的原理、特点及检测应用进行综述，主要介绍了基于ＰＣＲ的检测方法（常规ＰＣＲ、巢式ＰＣＲ、荧光定量ＰＣＲ、多重ＰＣＲ、纳米ＰＣＲ、数字ＰＣＲ及其他基于ＰＣＲ的方法）、核酸等温扩增技术（环介导等温扩增、重组酶介导等温核酸扩增、重组酶聚合酶扩增）、基因芯片、原位杂交、液相芯片系统以及免疫学检测方法（免疫层析技术、酶联免疫吸附试验、琼脂扩散试验、斑点测点法、表面等离子体共振技术）。
此外，也对相关方法的未来发展方向进行了展望，以期为我国有效防控ＰＣＶ２传播和感染提供科学而全面的参考。
关键词 ＰＣＶ２；ＰＣＲ及其衍生技术；等温扩增技术；免疫学技术ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒＰｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２ＳＨＥＮＱｉｕｐｉｎｇ，ＴＡＮＧＹｕｍｅｎｇ，ＳＨＥＮＪｉｎｇｙｉ，ＺＨＵＡＮＧＬｉｎｌｉｎｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒＪｉａｎｇｓｕＶｏｃａｔｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ２１２４００，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ Ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２（ＰＣＶ２）ｃａｎｃａｕｓｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ，ｗｅａｎｉｎｇｐｉｇｌｅｔｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ，ａｎｄｎｅｐｈｒｉｔｉｓｉｎｐｉｇｓ，ｃａｕｓｉｎｇｓｅｒｉｏｕｓｅｃｏｎｏｍｉｃｌｏｓｓｅｓｔｏｔｈｅｇｌｏｂａｌｓｗｉｎｅｉｎｄｕｓｔｒｙ．ＡｒａｐｉｄａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｓｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｏｒｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆＰＣＶ２．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｒａｐｉｄＰＣＶ２ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｐｕｂｌｉｓｈｅｄａｔｈｏｍｅａｎｄａｂｒｏａｄｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｍａｉｎｌｙｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇＰＣＲ ｂａｓｅｄｍｅｔｈｏｄｓ（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌＰＣＲ，ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ，ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ，ｍｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ，ｎａｎｏ ＰＣＲ，ｄｉｇｉｔａｌＰＣＲ，ａｎｄｏｔｈｅｒＰＣＲ ｂａｓｅｄｍｅｔｈｏｄｓ），ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（ｌｏｏｐ ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅａｉｄｅｄａｍｐｌｉｆｉｃａ ｔｉｏｎ，ａｎｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ），ｇｅｎｅｃｈｉｐｓ，ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ｆｌｅｘｉｂｌｅＭｕｌｔｉ ＡｎａｌｙｔｅＰｒｏｆｉｌｉｎｇ，ａｎｄｉｍ ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓ（ｉｍｍｕｎｏｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ，ａｇａｒｇｅｌｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ，ｓｐｏｔａｓｓａｙ，ａｎｄｓｕｒｆａｃｅｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ）．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｉｓｐａｐｅｒａｌｓｏｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｏｕｔｌｏｏｋｏｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｒｅｌａｔｅｄｍｅｔｈｏｄｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆＰＣＶ２ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎａｎｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎＣｈｉｎａ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ＰＣＶ２；ＰＣＲ ｂａｓｅｄｍｅｔｈｏｄ；ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８ ０４１４．２０２３．１０．００１ 引言猪圆环病毒（Ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ，ＰＣＶ）可引起猪的生殖和呼吸道疾病、断奶仔猪综合征、皮炎和肾炎，给全球养猪业造成了严重的经济损失［１ ２］。
收稿日期：２０１３－１１－２６ 基金项目：山东省自然科学基金资助项目（ＺＲ２０１３ＣＱ００６） 作者简介：董 林（１９８０－），男，助理研究员，硕士。
＊通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｚｓｈｅｎｚｑ＠１６３．ｃｏｍ猪圆环病毒２型多表位串联体诱导表达及其免疫活性董 林１，２，王艳萍１，沈志强１＊，柳增善２ （１．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州２５６６００；２．吉林大学动物医学学院，吉林长春１３００６２）摘要：为了获得体外诱导表达的具有良好免疫原性的ＰＣＶ２多表位串联体。
本试验筛选ＰＣＶ２主要抗原表位，顺序组成多表位串联体，人工合成其ｃＤＮＡ序列，通过ＢａｍＨⅠ和ＳａｌⅠ定向克隆至原核表达载体ｐＥＧＸ－４Ｔ－１多克隆位点，转化ＢＬ２１感受态细胞，筛选阳性克隆，进行ＩＰＴＧ诱导表达。
使用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对目的基因表达情况进行分析，提取与纯化融合蛋白多肽，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定表达多表位串联蛋白免疫活性。
融合蛋白多肽免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，ＥＬＩＳＡ测定其抗体，评价其免疫原性。
结果显示，成功构建了含７个ＰＣＶ２抗原表位串联体的表达重组质粒ｐＥＧＸ－４Ｔ－１－ｅｐ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示，融合蛋白多肽在大肠杆菌中获得了有效表达，其分子量约３５ｋｕ，主要以可溶性形式存在。
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示，提取与纯化融合蛋白多肽与ＰＣＶ２阳性血清具有良好的反应原性。
ＥＬＩＳＡ检测结果显示，纯化的融合蛋白多肽可有效刺激机体产生ＰＣＶ２特异性抗体，具有良好的免疫原性。
结果表明，构建的ＰＣＶ２多表位串联体表达重组体具有良好的体外表达特性，表达蛋白具有良好的免疫原性。
该研究为ＰＣＶ２表位筛选，功能鉴定及多表位疫苗研究奠定了一定基础。
关键词：猪圆环病毒２型；多表位；诱导表达；免疫原性中图分类号：Ｓ８５２．６５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００５－４５４５（２０１４）１１－１７１６－０５Ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉ－ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｍｕｎｅａｃｔｉｖｉｔｙ ＤＯＮＧ Ｌｉｎ１，２，ＷＡＮＧ Ｙａｎ－ｐｉｎｇ１，ＳＨＥＮ Ｚｈｉ－ｑｉａｎｇ１＊，ＬＩＵ Ｚｅｎｇ－ｓｈａｎ２ （１．Ｂｉｎｚｈｏｕ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａｃａｄｅｍｙ，Ｂｉｎｚｈｏｕ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ２５６６００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００６２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｇｅｔ ｇｏｏｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｇｏｏｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｍｕｌｔｉ－ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２．Ｔｈｅ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｍｕｌｔｉ－ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｆ ＰＣＶ２ｍａｊｏｒａｎｔｉｇｅｎ ｗａｓ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｓｔａｌｌｅｄ ａｎｄ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｔｈａｔ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｐＥＧＸ－４Ｔ－１ｐｌａｓｍｉｄ ｂｙ ＢａｍＨⅠａｎｄ ｓａｌⅠ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ｉｎ ｗｈｉｃｈ ａｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ ＩＰＴＧ．Ｔｈｅ ｅｐｉｔｏｐｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ａｎａｌｙｓｅｄ ｂｙ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ＧＳＴ ａｆｆｉｎｉ－ｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔａｎｄｅｍ ｏｆ ｍｕｌｔｉ－ｅｐｉｔｏｐｅ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ．Ｔａｎｄｅｍ ｃｏｎ－ｔａｉｎｉｎｇ ７ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｏｆ ＰＣＶ２ｗａｓ ｓｅｔ ｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｐ ＥＧＸ－４Ｔ－１－ｅｐ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅｅｐｉｔｏｐｅ ｔａｎｄｅｍ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂｙ ｇｅｎｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｔｈｅ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ３５ｋｕ，ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｍａｉｎｌｙ ｉｎ ｓｏｌｕｂｌｅ ｆｏｒｍ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ＥＬＩＳＡ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｏｌｙｐｅｐ－ｔｉｄｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅａｃｔｅｄ ｔｏ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＰＣＶ２ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｏｆ ＰＣＶ２ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈａｓ ｇｏｏｄ ｉｍｍｕ－ｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｔｏ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＰＣＶ２ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｗｈｉｃｈ ｌａｉｄ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣＶ２ｅｐｉｔｏｐｅ ａｎｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｍｕｔｉ－ｅｐｉｔｏｐｅ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２，ｍｕｌｔｉ－ｅｐｉｔｏｐｅ，ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ６１７１ 中国兽医学报 ２０１４年１１月 第３４卷 第１１期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｖｅｔ Ｓｃｉ Ｎｏｖ．２０１４ Ｖｏｌ．３４ Ｎｏ．１１ ＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｚｓｈｅｎｚｑ＠１６３．ｃｏｍ 猪圆环病毒２型（Ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２，ＰＣＶ２）是引起断奶仔猪多系统衰歇综合症（Ｐｏｓｔｗ－ｅａｎｉｎｇ ｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍｉｃ ｗａｓｔｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＭＷＳ）主要病原，该病最早报道于加拿大，随后相继在美国、欧洲及亚洲广泛流行和爆发，成为严重危害养猪业的世界性传染病［１－３］。
猪圆环病毒2型检测技术及研究进展1. 引言1.1 猪圆环病毒2型概述猪圆环病毒2型（PCV2）是一种引起猪瘦弱综合征和猪圆环病毒病的病毒，属于环状病毒科。
PCV2是一种小型非包膜的双链DNA病毒，病毒颗粒直径约17-25nm。
PCV2主要感染猪，特别是生长发育中的猪，并可引起多种免疫抑制相关疾病，严重影响了猪的生长发育和生产性能。
PCV2感染广泛分布于全球范围内，给猪养殖业造成了巨大的经济损失。
PCV2感染的临床症状主要包括疲劳、厌食、呼吸困难等，重症时还可导致猪的死亡。
随着猪养殖业的快速发展和养猪密度的增加，PCV2感染的发病率也在逐渐上升。
加强PCV2的检测和研究对于控制和预防猪瘦弱综合征和猪圆环病毒病具有重要意义。
通过对PCV2的检测技术和研究进展的深入探讨，可以为疫苗研制和防疫工作提供重要的参考和支持。
【字数：276】1.2 研究意义猪圆环病毒2型是一种广泛存在于猪群中的病原体，能够引起猪圆环病毒病，严重危害猪的生产业。
猪圆环病毒2型检测技术的研究意义在于及早发现并控制病毒传播，保障猪群的健康和生产安全。
通过对猪圆环病毒2型检测技术的研究和应用，可以提高疾病的早期诊断率和治疗效果，降低疫情的传播风险，减少养猪业的经济损失。
研究猪圆环病毒2型的检测技术还可以为相关病毒的检测提供借鉴和参考，推动病毒学领域的发展。
加强对猪圆环病毒2型检测技术的研究具有重要的意义，有助于提高我国养猪业的竞争力和可持续发展能力。
【研究意义】2. 正文2.1 猪圆环病毒2型检测方法猪圆环病毒2型（PCV2）是一种严重危害猪只健康的病毒，因其高度变异性和传染性而备受关注。
为了及时发现和控制PCV2感染，研究人员开发了多种检测方法。
1. 病毒核酸检测：PCR技术是目前应用最广泛的检测方法之一。
通过设计特异性引物，可以实现对PCV2基因组的扩增和检测，具有高灵敏度和特异性。
2. 免疫学检测：病毒抗原检测通过检测病毒在体内产生的蛋白质来确认感染情况。
猪圆环病毒2型ORF3蛋白的表达及抗原性鉴定刘梦志;陈欣;金淑秀;张艺凡;蒋佳羲;刘宝山【摘要】为研究猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF3蛋白的免疫活性,对其进行了表达及初步鉴定.根据NCBI上PCV-2ORF3的基因序列(FR823451)设计特异性引物,扩增后将其插入pET28a表达载体构建了重组表达质粒pET-PCV-2-ORF3,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达后用SDS-PAGE和免疫印迹进行了鉴定.随后又用圆环病毒野毒感染猪和重组ORF2免疫小鼠的阳性血清对表达蛋白的免疫原性进行了检测.结果表明,构建成功的pET-PCV-2-ORF3表达菌被诱导后能大量表达PCV-2 ORF3蛋白.ORF3表达蛋白能与圆环病毒野毒感染猪的阳性血清发生特异性反应,与重组疫苗免疫鼠的阳性血清不能发生反应,表明ORF3蛋白具有很好的免疫原性和反应原性,有望作为圆环病毒野毒感染检测的靶抗原.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2017(053)010【总页数】4页(P55-58)【关键词】PCV-2;ORF3;表达;鉴定【作者】刘梦志;陈欣;金淑秀;张艺凡;蒋佳羲;刘宝山【作者单位】沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳110866【正文语种】中文【中图分类】S855.3猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV-2)感染引起的猪传染病，可表现为断奶仔猪多系统衰弱综合征、猪皮炎和肾病综合征、猪呼吸系统衰弱综合征、仔猪传染性先天性震颤等疾病类型，而且还与母猪繁殖障碍、育肥猪炎性呼吸道病综合征(PRDC)及仔猪肠炎有关[1-3]。
现已被世界各国的兽医与养猪业者公认为是继猪繁殖与呼吸综合征之后重要的猪传染病[2, 4]。
猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化及鉴定WANG Xi;LI Guopan;CHEN Qingqing;XU Baojuan;RONG Jun【摘要】为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2) Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap (PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-300 HR凝胶过滤层析、Capto Q离子交换层析、CsCl密度梯度离心等方法对其进行了纯化.通过Western blotting对纯化所得蛋白进行免疫反应性鉴定,透射电镜(TEM)观察纯化蛋白的粒径及形态,高效液相尺寸排阻色谱(HPSEC)检测其组分分布.结果显示,纯化后PCV2 rCap蛋白经SDS-PAGE检测,可见28 ku的目的蛋白带,灰度扫描法检测其纯度为97.53％.Western blotting结果显示,该处的特异性蛋白条带有明显的免疫反应性;TEM检测其为粒径17.35～19.24 nm的规则球形颗粒,表明所获得的PCV2 rCap蛋白在表达时能在菌体内自我装配成VLPs,且在纯化过程中没有被破坏而解聚,仍保持天然状态;HPSEC检测纯化样品中VILPs含量为92.67％.本试验结果为进一步研究PCV2 VLPs的空间结构及其免疫保护机制提供了参考依据.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2019(046)006【总页数】9页(P1792-1800)【关键词】猪圆环病毒2型(PCV2);病毒样颗粒(VLPs);纯化;鉴定;凝胶过滤层析;离子交换层析【作者】WANG Xi;LI Guopan;CHEN Qingqing;XU Baojuan;RONG Jun【作者单位】;;;;【正文语种】中文【中图分类】S852.65猪圆环病毒2型(PCV2)属于单股负链环状DNA病毒，无囊膜[1]，是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原体，对不同阶段的猪均可造成感染[2]，给全球养猪业造成了极大的经济损失[3]。
