下载文档原格式
猪圆环病毒II型抗原(PCVⅡAg)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中圆环病毒II型抗原(PCVⅡAg)水平。
实验原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中猪圆环病毒II型抗原(PCVⅡAg)。
用纯化的圆环病毒II型抗原(PCVⅡAg)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中圆环病毒II型抗原(PCVⅡAg)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的圆环病毒II型抗原(PCVⅡAg)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪圆环病毒II型抗原(PCVⅡAg)的存在与否。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存阴性对照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存阳性对照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
【产品名称】猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒说明书加入100μL阳性对照品。
盖好封板膜，37℃避光反应30分钟。
4.洗板：甩去孔内液体，每孔注满（若用洗板机每孔加250μL）工作浓度洗涤液洗涤3通用名称：猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒英文名称：Porcinecircovirus（PCV）Type2AntibodyTestKit【包装规格】96份/盒、192份/盒【预期用途】本试剂盒采用间接ELISA方法定性检测猪血清或血浆中的特异性猪圆环病毒2 型抗体，可作为猪圆环病毒2型疫苗的免疫监测及该病的辅助检测指标。
【检测原理】如果待检样品中含有猪圆环病毒2型抗体，就会与包被板上的猪圆环病毒2型重组抗原及第二步加入的抗猪二抗酶标结合物特异性结合。
间接结合在包被板上的抗猪二抗酶标结合物与底物反应的显色状况即可反映出样品中是否含有保护水平的猪圆环病毒2 型抗体。
【主要组成成份】【储存条件及有效期】2~8℃保存，防止冷冻，有效期为12个月。
【适用仪器】含450nm和630nm波长酶标仪；37℃恒温设备；可调微量移液器。
【样品要求】1.本试剂仅适用于检测猪血清或血浆。
2.为取得最佳实验效果，避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品；3.短期（3天内）将进行检测的血清样品可存放于2～8℃；如需长期保存，应置于-20℃以下，避免反复冻融。
【检验方法】1.洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×（2号液）按1：10稀释（例如，取100mL洗涤液10×，加900mL蒸馏水或去离子水混合），充分混匀即为工作浓度洗涤液。
2.样品稀释：用样品稀释液（5 号液）将待检血清按1:40 稀释（血清稀释板使用方法详见说明书背面），充分混匀。
阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。
3.加样反应：样品孔，每孔仅加入100μL待检样品；空白对照2孔，每孔仅加入100μL样品稀释液；阴性对照2孔，每孔仅加入100μL阴性对照品；阳性对照2孔，每孔仅次，每次均需停留1分钟；最后一次甩净，拍干。
猪圆环病毒2型检测技术及研究进展猪圆环病毒2型（PRRSV-2）是一种重要的猪类病毒，它会引起猪的严重疾病，并对全球猪业产生了极大的经济影响。
对猪圆环病毒2型的检测技术和研究进展一直备受关注。
本文将从PRRSV-2的检测技术和研究进展两个方面进行介绍。
一、猪圆环病毒2型检测技术1. 实时荧光RT-PCR技术实时荧光RT-PCR技术是目前用于PRRSV-2检测的主要方法之一。
该技术通过分离RNA，然后利用逆转录酶将RNA转化为cDNA，再利用聚合酶链式反应（PCR）进行扩增，最后通过荧光探针实时检测扩增产物的数量。
这种技术具有灵敏度高、特异性好、快速准确等优点，已经成为PRRSV-2检测的金标准。
2. 基因组测序技术随着生物技术的不断发展，基因组测序技术在PRRSV-2的检测中也得到了广泛应用。
通过对PRRSV-2的基因组进行测序，可以对该病毒的进化特征、毒株变异等进行深入研究，为疫苗研发、病毒溯源等提供重要参考。
3. 免疫学检测方法除了分子生物学方法外，免疫学检测方法也是PRRSV-2检测的重要手段之一。
ELISA、免疫荧光法等免疫学检测方法可以通过检测猪血清中的抗体水平，来进行PRRSV-2感染的诊断和流行病学调查。
4. 快速检测试剂盒随着POCT（ Point of Care Testing）技术的发展，一些快速检测试剂盒也逐渐应用于PRRSV-2的检测中。
这些试剂盒可以在实验室外、无需专业设备的情况下进行快速检测，为疫情监测、动物交易等提供了便利。
以上几种技术各有优缺点，但在实际应用中可以根据需要进行选择和结合，以提高PRRSV-2的检测效率和准确性。
1. 病毒进化特征研究随着基因组测序技术的广泛应用，人们对PRRSV-2的毒株进化特征有了更深入的了解。
研究表明，PRRSV-2存在着较高的遗传多样性和进化速度，不同地区、不同时间和不同种类的PRRSV-2之间存在着较大的遗传差异，这对疫苗的制备和疫情防控提出了更高的要求。
猪圆环病毒2型检测技术及研究进展猪圆环病毒2型（PRRSV-2）是一种严重危害猪健康的病毒，对猪场养殖业造成了严重的经济损失。
猪圆环病毒2型检测技术及研究的进展备受关注。
本文将对猪圆环病毒2型检测技术及研究进展进行介绍。
猪圆环病毒2型是一种RNA病毒，主要感染猪的肺泡巨噬细胞和树突细胞，引起猪的呼吸道疾病。
该病毒具有高变异性和抗原异质性，使得对其检测和控制具有一定的困难。
目前，针对猪圆环病毒2型的检测技术主要包括病毒抗原检测、病毒核酸检测和抗体检测。
病毒抗原检测是目前应用最为广泛的检测技术之一，其原理是利用酶联免疫吸附试验（ELISA）或荧光素酶免疫吸附测定（FIA）等方法检测猪血清、血浆或组织样品中的猪圆环病毒2型抗原。
病毒核酸检测则是通过聚合酶链式反应（PCR）技术检测病毒在猪体内的核酸含量，可快速、准确地检测猪圆环病毒2型的感染情况。
抗体检测则是通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法检测猪血清或血浆中的病毒抗体水平，用于评估猪圆环病毒2型的感染和免疫情况。
近年来，针对猪圆环病毒2型的检测技术不断得到改进和提高，使得对该病毒的检测更加快速、准确和灵敏。
新型ELISA检测试剂盒的开发，可以大大缩短检测时间，提高检测的准确性；PCR技术的改进也使得对病毒核酸的检测更为灵敏和快速；抗体检测方面也出现了更加精准的检测方法，能够更好地评估猪圆环病毒2型的感染和免疫情况。
除了检测技术的不断改进之外，针对猪圆环病毒2型的研究也在不断深入。
研究人员对猪圆环病毒2型的传播途径、致病机制、病毒变异性等方面进行了深入研究，为更好地控制和防治该病毒提供了重要的理论支持。
研究人员还不断寻找新的疫苗和药物来应对猪圆环病毒2型的感染，为猪场养殖业的健康发展提供有力的支持。
国内5种猪圆环病毒PCV2抗体检测试剂盒的比较试验吴华伟;高金源;邓永;范鹃;郎洪武;陈晓春【摘要】为了解国内PCV2灭活疫苗效力检验用PCV2抗体检测试剂盒的质量,参照农业部第683号公告有关规定,对国内5个厂家生产的5种PCV2抗体检测试剂盒进行了敏感性、特异性和符合率测定,并比较了试剂盒间的符合率.结果表明:5个PCV2抗体检测试剂盒特异性检测结果均在90%左右,但敏感性差异较大(57.7%～100%),且各试剂盒间检测结果的符合率较差(仅为63.2%).总体来看,国产PCV2抗体检测试剂盒质量参差不齐,仅2个试剂盒适合用于PCV2抗体检测.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2011(045)006【总页数】3页(P11-12,15)【关键词】猪圆环病毒;抗体检测试剂盒【作者】吴华伟;高金源;邓永;范鹃;郎洪武;陈晓春【作者单位】中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;扬州优邦生物制药有限公司,江苏扬州,225008;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)，属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属的成员，是目前发现的最小的动物病毒。
自20世纪90年代发现该病毒以来，PCV2病毒在世界各国迅速蔓延。
我国于2000年检测到了该病毒的存在［1］。
PCV2抗体检测对于进行PCV2流行病学调查、疫苗效果评价及试验用阴性猪的筛选等具有重要意义。
目前，PCV2抗体检测的常用方法有病毒中和试验(SN)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA)。
鉴于SN方法费时耗力，且PCV2病毒在细胞上很难出现细胞病变，常需借助免疫荧光试验(FA或IFA)进行结果判定。
仅供科研使用，不得用于临床检验。
猪圆环病毒Ⅱ型抗体(PCV2-Ab)定性检测试剂盒（ELISA）说明
书
【产品名称】
通用名称：猪圆环病毒Ⅱ型抗体(PCV2-Ab)定性检测试剂盒（ELISA）
英文名称：Test Kit for Antibodies to Porcine Circovirus 2 ELISA KIT
【包装规格】
96人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用，猪圆环病毒病是由猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine Circovirus 2，PCV2）引起的猪的一种多系统功能障碍性疾病，其临床表现多种多样，主要为断奶仔猪多系统衰竭综合症、猪皮炎与肾病综合征、母猪繁殖障碍等。
本试剂用于检测猪血清中猪圆环病毒Ⅱ型抗体，可用于猪圆环病毒Ⅱ型疫苗免疫效果评价。
【检验原理】
本试剂盒系由预包被猪圆环病毒Ⅱ型重组cap蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪圆环病毒Ⅱ型抗体。
实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪圆环病毒Ⅱ型抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪圆环病毒Ⅱ型抗体。
【主要组成成分】
主要成分
需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、无粉一次性乳胶手套
【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，
其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
【适用仪器】
半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。
所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。
在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。
样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。
样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。
阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。
置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A 值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。
【参考值】实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。
【检验结果的解释】
1.样品A值≥0.38为阳性；样品A值在0.2到0.38之间为可疑；样品A值＜0.2为阴性。
2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪圆环病毒Ⅱ型抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【保存条件】
2℃-8℃保存，有效期6个月。
【注意事项】
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。
戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。
技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
废物处理
所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。
