双分子荧光互补技术

双色荧光互补原理1. 基本概念双色荧光互补是一种利用两种荧光染料的互补性质来实现荧光成像的技术。

通过将两种互补的荧光染料标记在不同的分子或细胞结构上，可以同时观察到两种荧光信号，从而实现对不同生物分子或细胞结构的高分辨率成像。

2. 荧光染料的选择双色荧光互补的关键是选择具有互补荧光光谱的荧光染料。

通常选择在不同波长范围内发射荧光的染料，例如绿色荧光染料和红色荧光染料。

常用的绿色荧光染料有荧光素（fluorescein）和吖啶橙（Acridine Orange），常用的红色荧光染料有罗丹明（Rhodamine）和荧光素同工体（Fluorescein isothiocyanate）。

3. 光源和激发波长为了激发荧光染料的发射，需要选择适当的光源和激发波长。

常用的光源包括氙灯和激光器。

根据荧光染料的吸收光谱，选择适当的激发波长，使荧光染料能够吸收到光子能量并发射荧光。

4. 荧光显微镜成像双色荧光互补的成像通常使用荧光显微镜进行。

荧光显微镜包括激发光源、物镜、滤光片和荧光探测器等部分。

激发光源用于产生适当波长的激发光，物镜用于聚焦光线和放大样品图像，滤光片用于选择特定的激发和发射波长，荧光探测器用于接收和记录荧光信号。

5. 双色荧光互补的原理双色荧光互补的原理基于两种荧光染料的互补性质。

互补性质是指两种荧光染料的发射光谱之间存在较大的重叠区域，但吸收光谱之间几乎没有重叠。

这样，在选择适当的激发波长和使用适当的滤光片时，可以使两种荧光染料的发射信号分离并同时观察到。

6. 实验步骤双色荧光互补的实验步骤如下：1.准备样品：将需要观察的生物分子或细胞结构标记上两种互补的荧光染料。

2.设置荧光显微镜：选择适当的激发波长和滤光片，调整显微镜的对焦和放大倍数。

3.激发荧光：打开激发光源，照射样品，使荧光染料吸收光子能量。

4.观察荧光信号：通过荧光探测器接收和记录荧光信号，并观察样品的荧光成像。

5.分析数据：根据荧光信号的强度和分布，对样品中的生物分子或细胞结构进行分析和定量。

研究蛋白质相互作用的九种方法，写标书用得上寒风凛冽，又到了一年一度写标书的季节，你开始准备了么？在分子机制的研究中，蛋白和蛋白之间的互作研究可以说是非常经典了，研究蛋白互作的方法有很多，今天我们来介绍九种。

1、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）CoIP其实就是两个蛋白相互的IP（免疫沉淀反应）实验，在已知蛋白B和C之间有相互作用的前提下，这种前提一般需要有一个酵母双杂实验或者Pulldown实验来作为支持。

IP就是用来验证蛋白C和蛋白B之间相互作用的。

如果在Agarose珠上的Protean A/G所结合的抗体，可以结合并拉下蛋白B，那用Western Blot即可检测出蛋白C的表达，反之亦然，通过这种相互间免疫共沉淀的实验，就可以明确地验证出，B与C之间的相互作用了。

比如这份标书：PYK2促进肝癌细胞迁移的一个新的分子机制研究：结合并磷酸化E-cadherin？（百度检索题目可查到全文）2、Pull-down实验这个实验跟免疫共沉淀实验很像，不同的是免疫共沉淀是在细胞里进行的，在众多的蛋白里，拉住A蛋白的同时,把B蛋白也给拉出来了，这还不能证明是直接的结合，很有可能是A 拉住了C，而C拉住了B，这样拉住A蛋白的同时也能把B蛋白也给拉出来。

要证明直接的结合就是Pull-down实验。

提纯所要研究的两个蛋白（一般是在BL21等菌种表达提纯），这两个蛋白带上不同的标签（提纯蛋白一般带GST或者HIIS标签），然后将他们放在同一个体系里，使用GST-beads或者NI-beads,把其中一个蛋白拉下来，用WB检测另一个蛋白的存在。

比如这份标书：恶性肿瘤的发生、发展的细胞表观遗传学机制。

（同样可以百度检索到全文）3、免疫荧光（Immunofluorescence，IF）——共定位将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。

由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。

双分子荧光互补技术(BiFC)分析玉米SSⅠ与PPDK1之间的蛋白互作崔喜艳;张继晓;窦瑶;孙小杰;尹悦佳;刘相国【摘要】[目的]分析玉米胚乳可溶性淀粉合成酶(SSⅠ)与质体型糖酵解途径关键催化酶丙酮酸磷酸双激酶(PPDK1)的蛋白互作关系,揭示可能发生互作的亚细胞位置.[方法]采用酶切连接的方法构建326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1双分子荧光互补表达载体,转化农杆菌EHA105,瞬时浸染烟草叶片组织,激光共聚焦显微镜下观察SSⅠ和PPDK1相互作用产生的荧光信号.[结果]双酶切试验鉴定表明,326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1重组载体构建正确；PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中；双分子荧光互补试验中,可观测到SSⅠ和ppDK1相互结合而产生的黄色荧光信号.[结论]证实SSⅠ和PPDK1能够在植物活体细胞内发生真实的蛋白互作.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(041)007【总页数】6页(P49-53,59)【关键词】SSⅠ;PPDK1;双分子荧光互补技术(BiFC);瞬时转化;蛋白质互作【作者】崔喜艳;张继晓;窦瑶;孙小杰;尹悦佳;刘相国【作者单位】吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118;吉林省农业科学院农业生物技术研究所,吉林长春130124;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118;吉林大学生命科学学院,吉林长春130012;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118;吉林省农业科学院农业生物技术研究所,吉林长春130124;吉林省农业科学院农业生物技术研究所,吉林长春130124【正文语种】中文【中图分类】Q753淀粉是玉米籽粒贮藏的主要物质，玉米淀粉的生物合成是一个复杂的代谢过程，主要发生在胚乳造粉质体内，其合成的数量多少直接影响玉米的产量[1]。

淀粉合成过程是蔗糖合成酶首先分解蔗糖为果糖和UDP-葡萄糖，进而形成1-磷酸葡萄糖(G-1-P)[2]。

专利名称：一种基于双分子荧光互补技术的NT-proBNP检测试剂盒、制备及使用方法
专利类型：发明专利
发明人：徐林
申请号：CN201711272731.1
申请日：20171127
公开号：CN108226529A
公开日：
20180629
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的NT‑proBNP诊断试剂盒。

所述试剂盒包括：抗NT‑proBNP抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗NT‑proBNP抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的NT‑proBNP诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗NT‑proBNP抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗NT‑proBNP抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有特异性好、操作方便、检测快速、线性范围宽、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，其应用于心衰疾病的监测，可以提高心衰疾病诊断的准确率，具有极大的市场价值。

申请人：南京天纵易康生物科技股份有限公司
地址：210031 江苏省南京市高新区星火路10号人才大厦E座2楼
国籍：CN
更多信息请下载全文后查看。

双分子荧光互补开放分类：生物技术科学编辑词条分享• 1 BiFC技术原理• 2 BiFC技术缘起• 3 BiFC技术研究进展• 4 BiFC技术的优缺点• 5 BiFC技术的应用将荧光蛋白在某些特定的位点切开，形成不发荧光的N和C端2个多肽，称为N片段(N-fragment)和C片段(C-fragment)。

这2个片段在细胞内共表达或体外混合时，不能自发地组装成完整的荧光蛋白，在该荧光蛋白的激发光激发时不能产生荧光。

但是，当这2个荧光蛋白的片段分别连接到1组有相互作用的目标蛋白上，在细胞内共表达或体外混合这2个融合蛋白时，由于目标蛋白质的相互作用，荧光蛋白的2个片段在空间上互相靠近互补，重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，并在该荧光蛋白的激发光激发下，发射荧光。

简言之，如果目标蛋白质之间有相互作用，则在激发光的激发下，产生该荧光蛋白的荧光。

反之，若蛋白质之间没有相互作用，则不能被激发产生荧光。

蛋白质片段互补技术蛋白质片段互补BiFC起源于蛋白质片段互补技术。

所谓蛋白质片段互补技术(protein fragment complementation)是将某个功能蛋白切成2段，分别与另外2种目标蛋白相连，形成2个融合蛋白。

在1个反应体系中，2个目标蛋白的相互作用使得2个功能蛋白质片段靠近、互补，并重建功能蛋白质的活性，通过检测功能蛋白质的活性来判断目标蛋白质的相互作用。

已经尝试用于该目的的功能蛋白包括泛素蛋白(ubiquitin)，β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)，二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase)，β-内酰胺酶(β-lactamase)，以及几种荧光素酶，如萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)，海肾萤光素酶(renilla luciferase)，甲虫荧光素酶(beetle luciferase)和长腹水蚤荧光素酶(gaussia luciferase)。

双分子荧光互补开放分类：生物技术科学编辑词条分享• 1 BiFC技术原理• 2 BiFC技术缘起• 3 BiFC技术研究进展• 4 BiFC技术的优缺点• 5 BiFC技术的应用将荧光蛋白在某些特定的位点切开，形成不发荧光的N和C端2个多肽，称为N片段(N-fragment)和C片段(C-fragment)。

这2个片段在细胞内共表达或体外混合时，不能自发地组装成完整的荧光蛋白，在该荧光蛋白的激发光激发时不能产生荧光。

但是，当这2个荧光蛋白的片段分别连接到1组有相互作用的目标蛋白上，在细胞内共表达或体外混合这2个融合蛋白时，由于目标蛋白质的相互作用，荧光蛋白的2个片段在空间上互相靠近互补，重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，并在该荧光蛋白的激发光激发下，发射荧光。

简言之，如果目标蛋白质之间有相互作用，则在激发光的激发下，产生该荧光蛋白的荧光。

反之，若蛋白质之间没有相互作用，则不能被激发产生荧光。

蛋白质片段互补技术蛋白质片段互补BiFC起源于蛋白质片段互补技术。

所谓蛋白质片段互补技术(protein fragment complementation)是将某个功能蛋白切成2段，分别与另外2种目标蛋白相连，形成2个融合蛋白。

在1个反应体系中，2个目标蛋白的相互作用使得2个功能蛋白质片段靠近、互补，并重建功能蛋白质的活性，通过检测功能蛋白质的活性来判断目标蛋白质的相互作用。

已经尝试用于该目的的功能蛋白包括泛素蛋白(ubiquitin)，β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)，二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase)，β-内酰胺酶(β-lactamase)，以及几种荧光素酶，如萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)，海肾萤光素酶(renilla luciferase)，甲虫荧光素酶(beetle luciferase)和长腹水蚤荧光素酶(gaussia luciferase)。