六种抗EB病毒抗体检测在鼻咽癌血清学诊断中的比较

ｒＯＤ 值范围
ｒＯＤ 均值
０．１７７０～２．０４００ ０．１０８０～２．２３６０
关键词 鼻咽癌 ＥＢ 病毒 血清学 诊断 中图分类号： Ｒ７３９．６ 文献标识码： Ａ 文章编号： １０００－ ８１７９（ ２００６） １４－ ０７９５－ ０４
Ｃｏｍｐａｒ ｉｓｏｎ ｏｆ ６ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｓｓａｙｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｅｐｓｔｅｉｎ－ Ｂａｒ ｒ Ｖｉｒ ｕｓ ｆｏｒ Ｓｅｒ ｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｎａｓｏｐｈａｒ ｙｎｇｅａｌ Ｃａｒ ｃｉｎｏｍａ
! 本文课题受国家自然科学基金资助（ 编号： ３９７３０２００－ ＩＩ） ① 中山大学中山医学院病理学教研室 ② 广东省第二人民医院病理科 ③ 中山市生物技术公司 通讯作者： 宗永生 ｙｓｚｏｎｇ＠ｔｏｍ． 年第 ３３ 卷第 １４ 期
ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ， ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｕｓａｇｅ ｏｆ ２ ＥＬＩＳＡｓ， ｎａｍｅｌｙ， Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ ｏｒ Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ， ｗａｓ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ． Ｔｈｒｅｅ ＥＬＩＳＡｓ ｕｓｅｄ ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ， ｂｕｔ ａｌｓｏ ｍｅｅｔ ｔｈｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｃｌｕｄｉｎｇ ｓｕｓｐｉｃｉｏｕｓ ＮＰＣ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ． Ｔｗｏ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ３ ＥＬＩＳＡｓ， ｎａｍｅｌｙ， Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ ａｎｄ Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ／Ｚｔａ－ ＩｇＡ ｗｅｒｅ ｒｅｃｏｍ－ ｍｅｎｄｅｄ．
Ｈｕ Ｗｅｉｗｅｉ Ｚｏｎｇ Ｙｏｎｇｓｈｅｎｇ Ｌｉ Ｆｏｎｇｐｉｎｇ ｅｔ ａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， Ｆｏｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｓｕｎ ｙａｔ－ ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
（Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｆｏｓｈａｎ Ｃｉｔｙ）， Ｆｏｓｈａｎ
按照方积乾主编 《医学统计学与电脑实验》［８］， 计算确立灵敏度（ Ｓｅｎ） 、特异度（ Ｓｐｅ） 、（ 准确率） （ л） 、 Ｙｏｕｄｅｎ 指数 （ Ｊ） 、阳性似然比 （ ＬＲ＋） 以及优势比 （ ＯＲ） 。 ２ 结果
８５ 例鼻咽 癌 患 者 及 １３２ 例 健 康 成 人 血 清 六 种 ＥＬＩＳＡ 的 ｒＯＤ 值范围、ｒＯＤ 均值和临界值（ 或称诊断 界点， ｃｕｔ－ ｏｆｆ ｐｏｉｎｔ） 见表 １。
收集中山大学附属佛山医院门诊 ８５ 例组织学 确诊为鼻咽癌的未经治疗患者的血清， 同时收集 １３２ 例祖籍广州、经全面体检证实身体健康的成年 人血清。 １．２ 酶联免疫吸附检测（ ＥＬＩＳＡ）
检 测 ＥＢＮＡ１ － ＩｇＡ、ＥＢＮＡ１ － ＩｇＧ、Ｚｔａ － ＩｇＡ、Ｚｔａ － ＩｇＧ、ＶＣＡ－ ｐ１８－ ＩｇＡ 和 ＶＣＡ－ ｐ１８－ ＩｇＧ 的 ＥＬＩＳＡ 试剂 均由香港神农有限公司（ Ｓｉｎｏｃｌｏｎｅ Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ Ｌｔｄ．） 提供。所用抗原是 ＥＢＮＡ１、Ｚｔａ 和 ＶＣＡ－ ｐ１８ 的谷胱 甘肽转移酶纯化重组融合蛋白。按 ＥＬＩＳＡ 两步法操 作检测。血清标本用含有 ２％小牛血清的 ＰＢＳ 缓冲 液稀释。每个孔 １００μｌ 稀释血清。经孵育、缓冲液冲 洗后加入辣根过氧化物酶标记的抗血清。再孵育、再 冲 洗 后 ， 加 １００μｌ 的 ＴＭＢ（ ３， ３’， ５， ５’－ 四 甲 基 联 苯 胺） 。加入 １００μｌ 的 ０．３Ｍ Ｈ２ＳＯ４ 终止显色反应。在 ４５０ｎｍ 对 ６２０ｎｍ 的条件下检测吸光度。 １．３ 相对光密度与临界值
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ： Ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ６ ｅｎｚｙｍｅ － ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙｓ （ＥＬＩＳＡ）， ｎａｍｅｌｙ， ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ， ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ， Ｚｔａ－ ＩｇＡ， Ｚｔａ－ ＩｇＧ， ＶＣＡ－ ｐ１８－ ＩｇＡ ａｎｄ ＶＣＡ－ ｐ１８－ ＩｇＧ， ｆｏｒ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ （ＮＰＣ）， ａｎｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｗｈａｔ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＥＬＩＳＡｓ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ． Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ｔｈｅ ｓｅｒａ ｏｆ ８５ ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ ＮＰＣ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ １３２ ｈｅａｌｔｈｙ ａｄｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ． Ｓｉｘ ＥＬＩＳＡｓ ｕｓｉｎｇ Ｅｐｓｔｅｉｎ－ Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ （ＥＢＶ） － ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ａｐ－ ｐｌｉｅｄ ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌ ａｇａｉｎｓｔ ＥＢＶ． Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ， ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ， ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐａｒａｍ－ ｅｔｅｒｓ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ ＮＰＣ． Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ｗｈｅｎ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｉｎｄｉｖｉｄｕ－ ａｌｌｙ， ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｚｔａ － ＩｇＧ ａｎｄ ＥＢＮＡ１ － ＩｇＡ ｃｏｕｌｄ ｂｏｔｈ ｒｅａｃｈ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ０．８１０６． Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｄｕａｌ ｐｏｓｉｔｉｖｅｓ ｆｏｒ Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ ａｎｄ Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｏ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ０．９６２１． Ｔｈｅ ｔｒｉｐｌｅ ｐｏｓｉｔｉｖｉｔｙ ｆｏｒ Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ ａｎｄ Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ／Ｚｔａ－ ＩｇＡ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｏｗａｒｄ ０．９８２４ ｂｕｔ ａｌｓｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｌｅｖａｔｅ ｔｈｅ ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ （２０６．４２４２ ａｎｄ １９６．５０００ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）． Ｎｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ８５ ＮＰＣ ｐａｔｉｅｎｔｓ＇ ｓｅｒａ ｗｅｒｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｗｈｅｎ ｔｈｅ Ｚｔａ－ ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１ － ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１ － ＩｇＧ ｔｅｓｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ： Ｗｈｅｎ ｕｓｉｎｇ ａ ｓｉｎｇｌｅ ＥＬＩＳＡ ｍｅｒｅｌｙ ｆｏｒ ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＮＰＣ， ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｈｏｉｃｅ ｉｓ ｅｉｔｈｅｒ ｔｈｅ Ｚｔａ－ ＩｇＧ ｏｒ ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ． Ｉｎ ｏｒｄｅｒ
Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｅｐｓｔｅｉｎ－ Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ Ｓｅｒｏｌｏｇｙ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
鼻咽癌的发生与 ＥＢ 病毒感染相关， 鼻咽癌患 者血清中抗 ＥＢ 病毒抗体水平升高［１］。近年来， 临床 上在利用血清学协助诊断鼻咽癌方面， 以重组 ＥＢ 病毒蛋白制备的酶 联 免 疫 吸 附 检 测 （ ＥＬＩＳＡ） ［２］ 正 在 取代传统的 ＶＣＡ－ ＩｇＡ 和 ＥＡ－ ＩｇＡ 的酶标检测［３］。国 内已有数篇采用 ＥＬＩＳＡ 血清学诊断鼻 咽 癌 ［４～６］ 和 评 估患鼻咽癌风险［７］的报道。由于鼻咽癌中大多数 ＥＢ 病毒持续表达核抗原 １ （ Ｅｐｓｔｅｉｎ－ Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ １， ＥＢＮＡ１） 以 及 少 数 ＥＢ 病 毒 可 表 达 ＢａｍＨ１Ｚ 转录因子 Ｚｔａ（ ＢａｍＨ１ Ｚ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ） 和病 毒 壳 抗 原 ＶＣＡ（ Ｖｉｒａｌ ｃａｐｓｉｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ） 等 ， 又 由 于 鼻 咽癌患者主要产生 ＩｇＡ 与 ＩｇＧ 两种免疫球蛋白； 因 此 ， 本 研 究 设 计 六 种 ＥＬＩＳＡ， 即 ＥＢＮＡ１ － ＩｇＡ、 ＥＢＮＡ１ － ＩｇＧ、Ｚｔａ － ＩｇＡ、Ｚｔａ － ＩｇＧ、ＶＣＡ － ｐ１８ － ＩｇＡ、 ＶＣＡ－ ｐ１８－ ＩｇＧ， 比较其血清学诊断鼻咽癌方面的意 义。 １ 材料与方法 １．１ 标本
２００６ 年第 ３３ 卷第 １４ 期
中国肿瘤临床
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六种抗 ＥＢ 病毒抗体检测在鼻咽癌血清学诊断中的比较 ＊
胡维维 宗永生① 李凤萍 李广民 钟碧玲② 张 敏① 梁英杰① 顾耀亮③ 陈跃龙③ 中山大学附属佛山医院病理科 （ 广东省佛山市 ５２８０００）
摘要 目的： 评估 ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ， ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ， Ｚｔａ－ ＩｇＡ， Ｚｔａ－ ＩｇＧ， ＶＣＡ－ ｐ１８－ ＩｇＡ 和 ＶＣＡ－ ｐ１８－ ＩｇＧ 六种酶联免疫吸 附检测（ ＥＬＩＳＡ） 在血清学诊断鼻咽癌中的应用， 探讨哪种 ＥＬＩＳＡ 组合更有功效。方法： 收集 ８５ 例治疗前鼻咽癌患者 和 １３２ 例健康成人血清。应用六种 ＥＢ 病毒特异性重组融合蛋白 ＥＬＩＳＡ， 检测血清抗 ＥＢ 病毒的抗体水平。采用灵敏 度、特异度、优势比等参数来评估它们在诊断鼻咽癌中的效率。结果： 单独采用 一 种 检 测 时 ， Ｚｔａ－ ＩｇＧ 和 ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ 的灵敏度与特异度均可达 ０．８１０６ 以上。Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ 和 Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ 两种检测双阳性的特异度提高 至 ０．９６２１ 以上。Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ 或 Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ ／Ｚｔａ－ ＩｇＡ 三种检测均阳性者， 其特异度不 仅可达 ０．９８２４， 优势比也明显升高（ 分别为 ２０６．４２４２ 和 １９６．５０００） 。８５ 例患者血清中无 １ 例同时呈 Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ 阴性者。结论： 临床血清学诊断鼻咽癌， 首选 Ｚｔａ－ ＩｇＧ 或 ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ。同时检测两种 ＥＬＩＳＡ， 宜采用 Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ 或 Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ。三种 ＥＬＩＳＡ 同时检测， 可以提高特异度。推荐 Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＡ ／ ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ 或 Ｚｔａ－ ＩｇＧ ／ＥＢＮＡ１－ ＩｇＧ ／Ｚｔａ－ ＩｇＡ 三项。