苯并[a]芘的测定

附件10食用油中苯并（a）芘的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201910)1 范围本方法规定了食用油中苯并（a）芘的胶体金免疫层析快速检测方法。

本方法适用于食用油中苯并（a）芘的快速测定。

2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。

样品中的苯并（a）芘经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。

通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苯并（a）芘进行定性判定。

3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1 试剂3.1.1正己烷：色谱纯。

3.1.2乙腈：色谱纯。

3.1.3二甲基亚砜（DMSO）。

3.1.4NaH2PO4•2H2O。

3.1.5Na2HPO4•12H2O。

3.1.6氯化钠。

3.1.7吐温-20。

3.1.8氢氧化钠溶液（2 mol/L）：称取80g氢氧化钠用水溶解，并定容至1L。

3.1.9PBST溶液：称取0.2965 g NaH2PO4•2H2O、2.9 g Na2HPO4•12H2O、8.76 g氯化钠与0.55 g 吐温-20用水溶解并定容至1 L。

3.2 参考物质苯并（a）芘参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥95%。

表1 苯并（a）芘参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。

3.3 标准溶液的配制苯并（a）芘标准储备液（0.1mg/mL）：精密称取适量苯并（a）芘标准品（3.2），置于10 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1mg/mL的苯并（a）芘标准储备液；或可直接购买苯并（a）芘标准储备液。

0 ℃~5 ℃避光保存备用，有效期1年。

3.4 材料苯并（a）芘胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为食用油。

3.4.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。

动植物油脂中苯并(a)芘测定方法的制定及应
用
1 苯并(a)芘
苯并(a)芘（PAHs）是一类有毒多环芳香烃，包含一个或多个六元
环结构，通常以芘为主。

具有易燃性、有毒性和难降解等特点，能够
进入生物体，其中芘是16种重要的苯并(a)芘化合物之一，具有致癌、致畸、致突变、免疫毒性和其他潜在危害。

2 植物油脂中的苯并(a)芘
植物油脂中的苯并(a)芘是与农药运用、农作物栽培过程和烹调方
式有关的，可随植物油脂中脂肪吸收，存在机械污染也会使其含量增加。

而植物油脂一般都会在生活中消费，长期摄入会对人体产生危害。

3 植物油脂中苯并(a)芘测定方法
植物油脂中苯并(a)芘测定方法一般采用色谱-质谱联用仪，利用
柱质谱原理液相色谱婆罗门芘离子（m/z 212）测定植物油脂中苯并(a)芘含量。

测定方法要求用户必须熟悉色谱-质谱联用仪操作程序，准确
掌握柱层析原理及操作技术。

4 植物油脂中苯并(a)芘测定方法的使用
植物油脂中苯并(a)芘的检测标准建立后，植物油脂中苯并(a)芘
测定方法得到了广泛的应用，它可以用来监测植物油脂中苯并(a)芘的
分布，并可以帮助相关部门科学决策，防治环境污染，保护民众的健康。

大气中苯并(a)芘的测定方法苯并〔a〕芘是多环芳香烃类化合物，又名3，4－苯并芘，简称Bap，分子式C20H12；分子量253.23；沸点475℃；熔点179℃；相对密度1.351。

3，4－苯并芘纯品为无色或微黄色针状结晶，在水中溶解度较小，易溶于苯、氯仿、乙醚、丙酮、环己烷、二甲苯等有机溶剂。

在苯中溶解呈蓝色或紫色荧光，在浓硫酸中呈桔红色并伴有绿色荧光。

3，4－苯并芘是环境中普遍存在的对动物致癌性很强的一种物质，主要是含碳燃料及有机物热解过程中的产物。

煤炭、石油等在无氧加热裂解过程中产生的烷烃、烯烃，经过脱氢、聚合，常可产生一定数量的3，4－苯并芘。

工厂烟气中的悬浮颗粒物上吸附有3，4－苯并芘，散布在大气，一部分降落到水面和陆地上，从而污染水源和土壤。

炼焦、化工、染料等工厂排出的工业废水中以及熏制食品、香烟烟雾中均含有3，4－苯并芘。

3，4－苯并芘对动物具有局部和全身的致癌作用，对猴子反复皮下注射可在局部形成肿瘤，从气管反复滴注可形成肺癌，在小鼠身上涂抹可使小鼠诱发皮肤癌。

流行病学调查认为人的肺癌与环境中3，4－苯并芘的含量之间有着极为密切关系。

虽然目前各国尚无公认3，4－苯并芘的最高容许浓度，但通过动物试验和现场调查提出了一些建议，例如：车间空气中3，4－苯并芘最高容许浓度为0.14μg/m3；居民区大气最高容许浓度为10－3μg/m3。

飘尘上有机物的组分异常复杂，仅其中多环芳烃(简称PAH)就有几百种之多。

测定3，4－苯并芘的方法很多，主要是将3，4－苯并芘与其他多环芳烃分开，常用的有柱层、纸层、薄层、气相色谱、高压液相色谱、气质联机等一系列分离体系。

其中以气相色谱法分离PAH尤为重要。

利用气相色谱法分离迅速、效能高，再与薄层层析结合起来，可以迅速判断提取物中某些PAH的存在。

特别是用毛细管色谱与质谱及核磁共振谱联用，从城市悬浮颗粒物、烟草焦油及汽车废气中，可分离出100多种PAH，极大地发挥了气相色谱的分离效能。

生活饮用水苯并[a]芘的测定高压液相色谱法1. 适用范围本方法规定了用高压液相色谱法测定生活饮用水及其水源水中的苯并[a]芘。

本法适用于生活饮用水及其水源水中苯并[a]芘的测定。

本法最低检测质量为0.07ng，若取500mL水样测定，本法最低检测质量浓度为1.4ng/L。

2. 原理水中苯并[a]芘及其他芳烃能被环己烷萃取，萃取液经活性氧化铝吸附净化，以苯洗脱、浓缩后，可用液相色谱一荧光检测器定量。

3. 试剂所用试剂和材料应进行空白试验，即通过全部操作过程，证明无干扰物质存在。

所有试剂使用前均应采用0.45µm过滤膜过滤。

3.1 活性氧化铝：取250g100目~200目层析用中性氧化铝(A12O3)于140℃活化4h，冷却后装瓶，储于干燥器内，备用。

3.2 盐酸溶液(1+19)：取5mL盐酸(ρ20=1.19g/mL)，加至95mL纯水中，混匀。

3.3 玻璃棉：用盐酸溶液浸泡过夜，然后用纯水洗至中性。

用氢氧化钠溶液浸泡过夜，再以纯水洗至中性，于105℃烘干备用。

3.4 甲醇：HPLC级。

3.5 超纯水：电阻率大于18.0MΩ。

3.6 活性炭：取50g(20目~40目)活性炭用盐酸溶液浸泡过夜，用纯水洗至中性，于105℃烘干。

再用环己烷浸泡过夜，滤干后在氮气流下于400℃活化4h，冷后储于磨口瓶中备用。

3.7 环己烷：通过活性炭层析柱后重蒸馏，取此环己烷70mL浓缩至1.0mL，浓缩液必须测不出苯并[a]芘的存在，方可使用。

3.8 苯：重蒸馏。

3.9 无水硫酸钠：40℃烘烤4h，冷却后储于磨口瓶中备用。

3.10 氢氧化钠溶液：称取5g氢氧化钠，用纯水溶解，并稀释至100mL。

4. 仪器4.1 髙压液相色谱仪：4.1.1 荧光检测器。

4.1.2 记录仪。

4.1.3 色谱柱。

A色谱柱类型：不锈钢柱，长150mm，内径3.9mm。

B 填充物：用Spherisorb C18(5µm)。

4.2 微量注射器：25µL，针头锥度为90度。

食品中苯并（a）芘的测定前言苯并（a）芘是一种多环芳香族碳氢化合物，是已发现的200多种多环芳烃中最主要的环境和食品污染物，是一种强烈的致癌物质，对机体各器官，如对皮肤、肺、肝、食道、胃肠等均有致癌作用。

被国际癌症研究机构列为I类致癌物。

苯并（a）芘在食物中也有，谷类食物、蔬菜、脂肪和油类是摄入苯并（a）芘的主要膳食来源，食物在高温、长时间烹调中会产生苯并（a）芘我们按照国标《GB 5009.27-2016食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》中提供的食品中苯并（a）芘检测的方法对黄豆样品进行苯并（a）芘的测定。

使用LabTechSePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统和MV5多通道平行浓缩仪来代替传统的手动净化和浓缩，不仅实现了净化、浓缩过程的全自动化，省却了大量的手动工作，提高效率，而且减少了人为误差，实现了高回收率和良好的实验重复性。

关键词SePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统；MV5多通道平行浓缩仪；食品；苯并（a）芘；GB 5009.27-20161、仪器设备及试剂1.1仪器设备SePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统（莱伯泰科公司）；MV5多通道平行浓缩仪（莱伯泰科公司）；LC600 二元高压梯度高效液相色谱：配有荧光检测器（莱伯泰科公司）；萃取柱：MIP-BAP 苯并(a)芘专用SPE小柱，500mg 6mL（CNW公1.2试剂二氯甲烷，正己烷，乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；苯并（a）芘标准储备液：100ug/mL，乙腈，国家标准物质；苯并（a）芘标准工作液：取100μL的标准储备液与10mL的容量瓶中，用乙腈定容，得到浓度为1μg/mL的标样工作液。

2、实验过程2.1 样品预处理取一定量的黄豆，将其磨碎成均匀的样品，储于洁净的样品瓶中，于室温下保存。

2.2 提取称取1g（精确到 0.001g）试样，加入 5 mL 正己烷，旋涡混合 0.5 min，40℃下超声提取10min，4000r/min离心5min，转移出上清液。

高效液相色谱法测定水中苯并(a)芘刘明延【摘要】苯并(a)芘属于多环芳烃中毒性最大的一种强烈致癌物.为降低苯并(a)芘对土壤、空气、水等多种环境介质的不良影响,建立了液液萃取-高效液相色谱法测定水样中苯并(a)芘的分析方法.选用二氯甲烷为萃取剂,w(乙腈)∶w(水)=85∶15为流动相,流速1 mL/min,柱温25℃的条件下,在1L空白水样中添加低浓度的苯并(a)芘(加标量为0.5 μg),测定平行样品7份.结果表明,苯并(a)芘加标回收率为85.2％～86.6％,标准偏差为0.5％;当萃取体积为1L,浓缩至1 mL,进样量为10 μL时,苯并(a)芘的方法检出限为0.008μg/L.【期刊名称】《洁净煤技术》【年(卷),期】2016(022)005【总页数】3页(P127-129)【关键词】液液萃取;高效液相色谱;苯并(a)芘【作者】刘明延【作者单位】陇南市环境监测站,甘肃陇南746000【正文语种】中文【中图分类】O652.1苯并(a)芘又称3,4-苯并芘，是日常生活或工业生产过程中产生的副产物，属于多环芳烃中毒性最大的强烈致癌物。

主要由煤炭、石油、天然气、木材等不完全燃烧而产生，在土壤、空气、水等多种环境介质中广泛存在。

人体和动物摄入该物质后，可诱发皮肤、肺和消化道癌症，对健康造成很大威胁[1]。

目前，苯并(a)芘的测定方法主要有乙酰化滤纸层析荧光分光光度法[2]、薄层色谱法、高效液相色谱法[3-6]、气相色谱法[7-8]、气相色谱-质谱联用等方法[9]。

本文采取液液萃取-高效液相色谱法，选用二氯甲烷为萃取剂，w(乙腈):w(水)=85∶15为流动相，在流速1 mL/min，柱温25 ℃条件下成功测定了水中苯并(a)芘含量。

采样选用棕色玻璃瓶灌装，采样时水样应充满采样瓶并加盖密封，防止空气进入，样品在4 ℃下避光保存。

仪器：配有四元梯度泵和荧光检测器(FLD)的液相色谱仪(Aglient 1200)、液相色谱柱Discovery@C18(15 cm×4.6 mm，5 μm)、分液漏斗(1 000 mL)、氮吹仪(N-EVAP 111)、有机相滤头(津隆，有机，0.22 μm)。