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苯并（a）芘是多环芳烃中有代表性的化合物之一，致癌作用极强，但遇光易分解。
因此，水样需用棕色瓶装，采样后尽快分析。
1 纸层析－荧光分光光度法1 应用范围1．1 本法适用于测定生活饮用水及清洁的水源水中苯并（a）芘含量。
1．2 水中含有的一般物质不干扰测定。
1．3 苯并（a）芘的最低检测量为5．0ng，若取2L水样测定，最低检测浓度为2．5ng/L。
2 原理水中多环芳烃能为环己烷萃取并为活化氧化铝所吸附，以苯洗脱浓缩后于乙酰化滤纸上层析，将多环芳烃分离，苯并（a）芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，取下以丙酮洗脱，其洗脱液的荧光强度与苯并（a）芘含量成正比，可定量测定。
3 仪器3．1 3000ml磨口瓶。
3．2 2000ml分液漏斗（活塞勿涂油）。
3．3 层析柱：可用25ml酸式滴定管。
3．4 KD浓缩器。
3．5 层析缸：21cm×13cm×30cm。
3．6 5ml具塞比色管。
3．7 振荡器。
3．8 电热磁力搅拌器。
3．9 254nm紫外分析仪。
3．10 荧光分光光度计。
4 试剂本试验所用的环己烷、丙酮及苯均需重蒸后使用。
4．1 苯并（a）芘标准贮备液：称取5．00mg苯并（a）芘（C20H12，简称Bap）用少量苯溶解后，加环己烷定容至50．0ml。
1．00ml含100?gBap。
装入棕色瓶，贮于冰箱内，备用。
4．2 苯并（a）芘标准溶液：吸取定量的苯并（a）芘贮备液（4．1）用环己烷稀释至1．00ml 含0．10微克 Bap。
装入棕色瓶，贮于冰箱内，备用。
4．3 玻璃纤维滤纸。
4．4 活化氧化铝：取250g100～200目层析用中性氧化铝（Al2O3）于140℃活化4h。
冷后装瓶，贮于干燥器内，备用。
4．5 乙酰化混合液：量取290ml苯，210ml乙酸酐，加入0．11ml浓硫酸，混匀即可。
4．6 无水乙醇。
4．7 展开剂：1＋2二氯甲烷－无水乙醇溶液。
4．8 乙酰化层析滤纸：将7．5cm×27cm的2号层析滤纸30～40张松松卷成圆筒状，逐张放入600ml烧杯中，纸筒中间放一个玻璃熔封的电磁搅拌铁芯，于通风柜中倒入乙酰化混合液（4．5），将滤纸全部浸泡，于室温（约21℃左右）电磁搅拌反应6h，然后放置至24h，取出滤纸条，自然挥干，再放入乙醇（4．6）浸泡4h，取出晾至微干，夹入粗滤纸之间，用玻璃板压平至干燥备用。
![苯并[a]芘的测定](https://img.taocdn.com/s1/m/4b03d5122a160b4e767f5acfa1c7aa00b52a9ded.png)
![液液萃取-高效液相色谱法测定水中苯并[a]芘](https://img.taocdn.com/s1/m/a16513066d175f0e7cd184254b35eefdc8d315ae.png)
液液萃取-高效液相色谱法测定水中苯并[a]芘杨敏娜;王来梁;高孝礼【摘要】研究了液液萃取-反相高效液相色谱法分离测定水中苯并[a]芘的方法.采用Eclipse XDB-C18色谱柱;流动相为甲醇:水=85:15;荧光检测器激发波长Ex=266nm,发射波长Em=412nm 的条件进行分析.方法检出限为0.001μg/L,加标回收率为94.4%～101%,相对标准偏差(RSD,n=7)为2.6%.【期刊名称】《地质学刊》【年(卷),期】2010(034)004【总页数】3页(P412-414)【关键词】苯并[a]芘;液液萃取;高效液相色谱;荧光检测器【作者】杨敏娜;王来梁;高孝礼【作者单位】江苏省地质调查研究院,江苏,南京,210018;江苏省地质调查研究院,江苏,南京,210018;江苏省地质调查研究院,江苏,南京,210018【正文语种】中文【中图分类】P575;O657.7多环芳烃(PAHs)是一类广泛分布并稳定存在于自然环境中的含 2个以上苯环的有毒有机污染物。
苯并 [a]芘简称 B[a]P,又名 3,4-苯并芘,是一种由 5个苯环构成的多环芳烃,是致癌性很强的一种化合物,存在于石油中,除石油燃烧造成环境污染外,加工烹调食品也可以生成。
工业废水中 B[a]P以吸附于某些固体颗粒上、溶解于水中和呈胶体状态等 3种形式存在。
纯品为无色或微黄色针状晶体,易溶于苯、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮等有机溶剂。
国际饮用水标准认为饮用水中致癌性多环芳烃的总量不应超过0.2μg/L,我国饮用水卫生标准规定饮用水中 B[a]P单体应低于0.01μg/L。
随着环境污染的日趋严重,对饮用水中 B[a]P等多环芳烃进行日常性监测已刻不容缓。
目前,国内外主要选用高效液相色谱法测定环境中的 B[a]P等多环芳烃,该方法选择性好,灵敏度高,操作简单。
安捷伦 HPLC-1100液相色谱仪,荧光检测器,液液萃取装置,旋转蒸发仪,氮吹仪。
![苯并[a]芘的测定](https://img.taocdn.com/s1/m/fead663d581b6bd97f19ea79.png)
![苯并[a]芘含量测定的前处理方法研究进展](https://img.taocdn.com/s1/m/7349d465a36925c52cc58bd63186bceb18e8ed5f.png)
苯并[a]芘含量测定的前处理方法研究进展王亚萍【摘要】回顾了近年来研究人员在苯并[a]芘检测过程中的前处理方法的研究概况,对比了各方法的优缺点.苯并[a]芘检测过程中的前处理方法主要有液液萃取、索氏提取、固相萃取、凝胶渗透色谱净化、超声萃取、微波辅助萃取等,检测涉及的样品主要为水、油、土壤及各种食品等.每种前处理方法都有一定的适用范围,在实际检测过程中可根据样品的性状以及苯并[a]芘在该样品中的存在形态选择合适的检测方法.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(000)011【总页数】3页(P96-98)【关键词】苯并[a]芘;含量测定;前处理;研究进展【作者】王亚萍【作者单位】中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳311400【正文语种】中文【中图分类】S-3苯并芘(Benzopyrene)是苯与芘稠合而成的一类多环芳烃，根据稠合位置的不同，有苯并[a]芘和苯并[e]芘2种异构体，其中最常见的是苯并[a]芘[1]。
苯并[a]芘主要存在于煤焦油、各类炭黑和煤、石油等燃烧产生的烟气、香烟烟雾、汽车尾气中，焦化、炼油，沥青、塑料等工业污水中，以及一些受污染的食物、经久炼制的食用油中[2]。
有研究表明，苯并[a]芘是一种高活性致癌物质和致突变原[3-4]，在日光照射下，大气中的苯并[a]芘化学半衰期不足24 h，但在没有日光照射时为数日，如在土壤中苯并[a]芘的降解速度8 d为53%～82%。
长期生活在含苯并[a]芘的环境中，会造成慢性中毒，如空气中的苯并[a]芘是导致肺癌的最重要因素之一[5]。
已有动物试验证明，苯并[a]芘具有致癌、致畸、致突变性。
可见，苯并[a]芘毒性大、在环境中广泛存在，而且较稳定，严格控制其在人们日常生活环境及食品中的含量非常必要。
同时苯并[a]芘与其他多环芳烃的含量有一定的相关性，测定苯并[a]芘的含量可用于估算其他多环芳烃含量，因此，近年来对苯并[a]芘检测分析方法的报道越来越多，特别是在样品的前处理方面[6-10]。
高效液相色谱法测定地下水中苯并（a）芘的不确定度评定. . . 年』岩矿测试~文章编号: ? ??高效液相色谱法测定地下水中苯并芘的不确定度评定冯静 ,王海娇 ,何超君 ,张激光.沈阳地质矿产研究所,辽宁沈阳; .辽宁省地质矿产研究院,辽宁沈阳摘要:通过对高效液相色谱法测定地下水中苯并芘含量的全过程分析,确定了测定结果不确定度的来源。
采用不确定度连续传递模型,对引入的不确定度分量进行评定,并采用最小二乘法对标准曲线进行拟合,确定了地下水中苯并芘含量标准不确定度由样品取样量、样品定容体积及测定体积、样品重复性测定、标准溶液浓度和标准曲线拟合误差部分不确定度合成。
通过对个不同含量样品测定结果不确定度评定,证明苯并芘含量越低,测定结果的相对标;隹不确定度越大;且样品重复性测定和标准曲线拟合误差是测定结果不确定度的重要来源。
关键词:不确定度评定;地下水;苯并芘;高效液相色谱法 ,。
, , ? . , , ;. , , :. ?,., , ,, ... :;; ;地下水是水资源的重要组成部分,对我国经济社《地下水污染地质调查评价规范》?规会发展具有非常重要的作用。
目前,全国地下水污染定有机污染物必测项目种,苯并芘是其中必测调查评价工作已全面、深入展开。
中国地质调查局项目之一。
收稿日期:一 ? ;接受日期: ? ?基金项目:国土资源地质大调查项目作者简介:冯静,教授级高级工程师,主要从事岩矿测试及质量管理工作。
? :.。
一 ?第期岩矿测试:// ...苯并芘是很强的环境致痛物,可燃烧,高毒, 次,最后用甲醇定容至,放在漩涡混合仪上振具有刺激性,可诱发皮肤、肺和消化道癌症,是优先控荡,静止,装入棕色样品瓶上测定,自动进制的污染物。
因此,地下水有机污染物苯并芘样 ,荧光检测器检测。
测量结果的准确性、可靠性尤为重要。
. 标准系列的配制分别移取苯并芘三级标准溶液 .近年来,检验分析工作对测量结果的不确定度评/ . 、. 、. 、 .、 .定越来越得以重视。
高效液相色谱法测定水中痕量苯并芘的研究李敏;蔡伊莎;韩宝武;夏亮【摘要】建立了一种高效液相色谱法测定水中苯并[a]芘的分析方法.找到最佳色谱分析条件,荧光检测器激发波长290nm,发射波长406nm,流动相为(乙腈)∶(水)=80∶20.应用此检测条件得出苯并[a]芘在0～100μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,方法检出限低至0.012ng/L,样品加标回收率为86.9％～103.0％,精密度为2.7％～4.9％.结果表明,该方法灵敏度高,分析时间短,定量准确,适用于环境水样和生活饮用水中痕量苯并芘的测定.【期刊名称】《四川环境》【年(卷),期】2015(034)004【总页数】4页(P71-74)【关键词】高效液相色谱法;苯并芘;色谱条件;检出限【作者】李敏;蔡伊莎;韩宝武;夏亮【作者单位】南充市环境监测中心站,四川南充637000;南充市环境监测中心站,四川南充637000;南充市环境监测中心站,四川南充637000;南充市环境监测中心站,四川南充637000【正文语种】中文【中图分类】X830.2· 环境监测·多环芳烃(PAHs)是一类广泛分布并稳定存在于自然环境中的含2个以上苯环的有毒有机污染物，具有较强诱癌作用，目前已经鉴定出数百种，其中以苯并[a]芘[benzo(a)pyrene，B(a)P]最为重要[1]。
苯并[a]芘是多环芳烃中致癌性最强的一种化合物，可诱发皮肤、肺和消化道癌症，是环境污染主要监测项目之一。
由于对人体的严重危害，我国地表水环境质量标准规定集中式饮用水地表水水源地特定项目苯并[a]芘的标准限值为2.8ng/L[2]，饮用水卫生标准规定饮用水中苯并[a]芘单体应低于0.01μg/L[3]。
苯并芘的测定方法主要有薄层层析法、荧光光度法、紫外光度法和高效液相色谱法。
薄层层析法、荧光光度法和紫外光度法样品处理繁琐，灵敏度较低[4～6]，目前国内外主要选用高效液相色谱-荧光法法测定环境中苯并[a]芘等具有荧光特性的多环芳烃类物质[7～10],此方法具有很高的选择性和灵敏度, 且操作简单。
高效液相色谱法分析地下水和饮用水中苯并(a)芘王海娇;王娜;汪寅夫;李丽君【摘要】采用液-液萃取、高效液相色谱法测定地下水和饮用水中的苯并(a)芘,建立了适用于全国地下水污染调查项目多环芳烃中苯并(a)芘必测组分的检测方法.标准曲线的线性范围为2.00～80.0ng/L,相关系数为0.9999,方法检出限为1.8ng/L,回收率为93.1%～103.2%,相对标准偏差(RSD,n=7)为6.48%.方法检出限低,精密度好.【期刊名称】《岩矿测试》【年(卷),期】2010(029)005【总页数】3页(P625-627)【关键词】高效液相色谱法;苯并(a)芘;地下水;饮用水【作者】王海娇;王娜;汪寅夫;李丽君【作者单位】沈阳地质矿产研究所,辽宁,沈阳,110032;沈阳地质矿产研究所,辽宁,沈阳,110032;沈阳地质矿产研究所,辽宁,沈阳,110032;沈阳地质矿产研究所,辽宁,沈阳,110032【正文语种】中文【中图分类】O657.72%O625.1%P641以苯并(a)芘为代表的多环芳烃(PAHs)属强致癌物质，是环境污染物中最重要的监测项目之一[1-2]，已被列为全国地下水污染调查评价专项的必测组分[3]。
苯并(a)芘的分析方法很多，有柱层析、薄层层析、纸层析色谱等方法[4-11]。
20世纪60年代高效液相色谱法(HPLC)开始迅速发展，由于其灵敏度高、精密度好、分析快速，现已成为分析苯并(a)芘的首选方法[12-24]。
本文采用液-液萃取HPLC法测定地下水中的苯并(a)芘，对实验条件进行了优化。
1 实验部分1.1 仪器及工作条件Agilent 1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，工作条件为：C18反相色谱柱，甲醇和水为流动相，0.00 min，V甲醇︰V水=85︰15；10 min，V甲醇︰V 水=90︰10;17 min，V甲醇︰V水=90︰10，流速1.0 mL/min。
高效液相色谱法测定水中苯并(a)芘刘明延【摘要】苯并(a)芘属于多环芳烃中毒性最大的一种强烈致癌物.为降低苯并(a)芘对土壤、空气、水等多种环境介质的不良影响,建立了液液萃取-高效液相色谱法测定水样中苯并(a)芘的分析方法.选用二氯甲烷为萃取剂,w(乙腈)∶w(水)=85∶15为流动相,流速1 mL/min,柱温25℃的条件下,在1L空白水样中添加低浓度的苯并(a)芘(加标量为0.5 μg),测定平行样品7份.结果表明,苯并(a)芘加标回收率为85.2％～86.6％,标准偏差为0.5％;当萃取体积为1L,浓缩至1 mL,进样量为10 μL时,苯并(a)芘的方法检出限为0.008μg/L.【期刊名称】《洁净煤技术》【年(卷),期】2016(022)005【总页数】3页(P127-129)【关键词】液液萃取;高效液相色谱;苯并(a)芘【作者】刘明延【作者单位】陇南市环境监测站,甘肃陇南746000【正文语种】中文【中图分类】O652.1苯并(a)芘又称3,4-苯并芘，是日常生活或工业生产过程中产生的副产物，属于多环芳烃中毒性最大的强烈致癌物。
主要由煤炭、石油、天然气、木材等不完全燃烧而产生，在土壤、空气、水等多种环境介质中广泛存在。
人体和动物摄入该物质后，可诱发皮肤、肺和消化道癌症，对健康造成很大威胁[1]。
目前，苯并(a)芘的测定方法主要有乙酰化滤纸层析荧光分光光度法[2]、薄层色谱法、高效液相色谱法[3-6]、气相色谱法[7-8]、气相色谱-质谱联用等方法[9]。
本文采取液液萃取-高效液相色谱法，选用二氯甲烷为萃取剂，w(乙腈):w(水)=85∶15为流动相，在流速1 mL/min，柱温25 ℃条件下成功测定了水中苯并(a)芘含量。
采样选用棕色玻璃瓶灌装，采样时水样应充满采样瓶并加盖密封，防止空气进入，样品在4 ℃下避光保存。
仪器：配有四元梯度泵和荧光检测器(FLD)的液相色谱仪(Aglient 1200)、液相色谱柱Discovery@C18(15 cm×4.6 mm，5 μm)、分液漏斗(1 000 mL)、氮吹仪(N-EVAP 111)、有机相滤头(津隆，有机，0.22 μm)。
生活饮用水苯并[a]芘的测定高压液相色谱法
1. 适用范围
本方法规定了用高压液相色谱法测定生活饮用水及其水源水中的苯并[a]芘。
本法适用于生活饮用水及其水源水中苯并[a]芘的测定。
本法最低检测质量为0.07ng，若取500mL水样测定，本法最低检测质量浓度为1.4ng/L。
2. 原理
水中苯并[a]芘及其他芳烃能被环己烷萃取，萃取液经活性氧化铝吸附净化，以苯洗脱、浓缩后，可用液相色谱一荧光检测器定量。
3. 试剂
所用试剂和材料应进行空白试验，即通过全部操作过程，证明无干扰物质存在。
所有试剂使用前均应采用0.45µm过滤膜过滤。
3.1 活性氧化铝：取250g100目~200目层析用中性氧化铝(A12O3)于140℃活化4h，冷却后装瓶，储于干燥器内，备用。
3.2 盐酸溶液(1+19)：取5mL盐酸(ρ20=1.19g/mL)，加至95mL纯水中，混匀。
3.3 玻璃棉：用盐酸溶液浸泡过夜，然后用纯水洗至中性。
用氢氧化钠溶液浸泡过夜，再以纯水洗至中性，于105℃烘干备用。
3.4 甲醇：HPLC级。
3.5 超纯水：电阻率大于18.0MΩ。
3.6 活性炭：取50g(20目~40目)活性炭用盐酸溶液浸泡过夜，用纯水洗至中性，于105℃烘干。
再用环己烷浸泡过夜，滤干后在氮气流下于400℃活化4h，冷后储于磨口瓶中备用。
3.7 环己烷：通过活性炭层析柱后重蒸馏，取此环己烷70mL浓缩至1.0mL，浓缩液必须测不出苯并[a]芘的存在，方可使用。
3.8 苯：重蒸馏。
3.9 无水硫酸钠：40℃烘烤4h，冷却后储于磨口瓶中备用。
3.10 氢氧化钠溶液：称取5g氢氧化钠，用纯水溶解，并稀释至100mL。
4. 仪器
4.1 髙压液相色谱仪：
4.1.1 荧光检测器。
4.1.2 记录仪。
4.1.3 色谱柱。
A色谱柱类型：不锈钢柱，长150mm，内径3.9mm。
B 填充物：用Spherisorb C18(5µm)。
4.2 微量注射器：25µL，针头锥度为90度。
4.3 分液漏斗：1000mL。
4.4 KD浓缩器。
4.5 层析柱：玻璃柱，内径5mm，长10cm。
5. 样品
5.1 样品的稳定性
苯并[a]芘在水中不稳定，易分解。
5.2 水样采集及储存方法
在采样点采取水样时，水样应完全注满，不留有空气。
采集水源水水样时，应将水样瓶(棕色瓶)浸入水面下再进行采样，以防表层水的污染。
采集自来水水样作苯并[a]芘分析，应在水龙头消毒之前采集，并在每升水样中加入0.5mL硫代硫酸钠溶液(100g/L)并混匀，以除去游离余氯。
试样应放置暗处并尽快在采样后24h内进行萃取。
萃取液在冰箱内可保存1W。
5.3 水样的预处理（需在暗室内，有微弱黄光下操作）
5.3.1 水样的萃取：取500mL均匀水样置于1000mL分液漏斗中，用70mL环己烷分三次萃取(30mL，20mL和20mL)，每次振摇5min，注意放气。
放置15min，分出环己烷萃取液，合并三次萃取液于250mL具塞锥形瓶中，加人5g~l0g无水硫酸钠脱水。
5.3.2 萃取液的净化：
A装氧化铝柱：将活性氧化铝在不断振动下装入层析柱内，柱底部装有少许处理过的玻璃棉，氧化铝的高度为5cm~7cm，上面再装1cm~2cm高的无水硫酸钠，用少量环己烷润湿，不得有气泡。
B柱层析：将环己烷萃取液注入氧化铝柱上，锥形瓶中残存的无水硫酸钠用20mL环己烷分次洗涤，洗涤液过柱。
用10mL苯洗氧化铝柱，收集苯洗脱液。
5.3.3 样品浓缩：将苯洗脱液置KD浓缩器内，于60℃~70℃：水浴中减压浓缩至0.1mL。
6. 步骤
6.1 仪器的调整
6.1.1 柱温：30℃。
6.1.2 流动相：甲醇+水(9+1)。
6.1.3 流量：2mL/min。
6.1.4 荧光检测器：Ex=303nm，Em=425nm。
6.1.15 衰减：根据样品中被测组分含量调节记录器衰减。
6.2 校准
6.2.1 定量分析中的校准方法：外标法。
6.2.2 标准样品：
A使用次数：每次分析样品时，用配制不超过1W的标准使用液绘制标准曲线。
B苯并[a]芘标准储备溶液{ρ[B[a]P]=100µg/mL}的制备：称取5.00mg苯并[a]芘，用少量苯溶解后，加环己烷定容至50.0mL。
装人棕色瓶，储于冰箱内，可保存6个月。
C苯并[a]芘标准中间溶液{ρ[B[a]P]=lµg/mL}的制备：吸取1.00mL苯并[a]芘标准储备溶液于100mL棕色容量瓶内，用环己烷稀释。
储于冰箱内，可保存1月。
D苯并[a]芘标准使用溶液：取5个10mL容量瓶，加人0、0.07、0.15、0.25、0.50mL苯并[a]芘标准中间液，用环己烷稀释至刻度，苯并[a]芘浓度分别为0、7、15、25和50ng/mL。
6.2.3 标准数据的表示：用标准曲线计算测定结果。
各取10µL苯并[a]芘标准使用溶液注入色谱仪，记录色谱峰高。
以峰高为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
6.3 定量分析
取10mL样品浓缩液注入色谱仪，测量峰高。
从标准曲线上査出水样苯并[a]芘的含量。
7. 计算
水样中苯并[a]芘的质量浓度计算见下式：
式中：
ρ[B[a]P]——水样中苯并[a]芘的质量浓度，单位为纳克每升(ng/L)；
ρ1——相当于标准曲线标准的苯并[a]芘质量浓度，单位为纳克每毫升
(ng/mL)；
V1——萃取液浓缩后的体积，单位为毫升(mL)；
V——水样体积，单位为毫升(mL)。
8. 参考文献
GB/T 5750.8-2006/9.1高压液相色谱法《生活饮用水标准检验方法有机物指标》。
