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乙酰化滤纸层析荧光分光光度法1 主题内容与适用范围本方法规定了测定水质中苯并(a)花[以下简称B(a)P]的方法。
本标准适用于饮用水、地面水、生活污水、工业废水。
最低校出浓度为0.004µg／L。
注意：B(a)P是一种由五个环构成的多环芳烃，它是多环芳烃类的强致癌代表物。
基于B(a)P的强致癌性，按本标准方法分析时必须戴抗有机溶剂的手套，操作应在白搪瓷盘中进行(如溶液转移、定容、点样等)。
室内应避免阳光直接照射，通风良好。
2 原理水中多环芳烃及环已烷可溶物经环己烷萃取(水样必须充分摇匀)，萃取液用无水硫酸钠脱水、浓缩，而后经乙酰化滤纸分离。
分离后的B(a)P用荧光分光光度计测定。
3 试剂除另有说明外，分析时均使用分析纯试剂和蒸馏水。
3.1 B(a)P标准溶液的配制：称取5.00mg固体标准B(a)P于50mL容量瓶中[因B(a)P是强致癌物，为了减少污染，以少转移为好]，用少量苯溶解后，加环已烷至标线，其浓度为100?g／mL。
特此贮备液用环己烷稀释成10?g／mL的标准使用液，避光贮于冰箱中。
3.2 乙酷化滤纸的制备：把15×30cm的层析滤纸15至20张卷成高15cm的圆筒状，逐张放入1000mL高型烧杯中，杯壁与靠杯的第一张纸间插入一根玻璃棒，杯中间放一枚玻璃熔封的电磁搅拌铁芯。
在通风柜中，沿杯壁慢慢倒入乙酰化剂(由苯十乙酸酐＋浓硫酸＝750mL＋250mL＋0.5mL混合配制成)，磁力恒温搅拌器的温度保持55±1℃.连续反应6h。
取出乙酰化滤纸，用自来水漂洗3～4次，再用蒸馏水漂洗2～3次，晾干。
次日用无水乙醇浸泡4h后，取出乙酰化滤纸，晾干压平，备用。
3.3 环己烷，重蒸。
用荧光分光光度计检查：在荧光激发波长367nm，狭缝10nm；荧光发射狭缝2nm，波长405nm应无峰出现。
3.4 丙酮，重蒸。
3.5 甲醇。
3.6 乙醚。
3.7 苯，重蒸。
3.8 乙酸酐。
动植物油脂中苯并(a)芘测定方法的制定及应
用
1 苯并(a)芘
苯并(a)芘（PAHs）是一类有毒多环芳香烃，包含一个或多个六元
环结构，通常以芘为主。
具有易燃性、有毒性和难降解等特点，能够
进入生物体，其中芘是16种重要的苯并(a)芘化合物之一，具有致癌、致畸、致突变、免疫毒性和其他潜在危害。
2 植物油脂中的苯并(a)芘
植物油脂中的苯并(a)芘是与农药运用、农作物栽培过程和烹调方
式有关的，可随植物油脂中脂肪吸收，存在机械污染也会使其含量增加。
而植物油脂一般都会在生活中消费，长期摄入会对人体产生危害。
3 植物油脂中苯并(a)芘测定方法
植物油脂中苯并(a)芘测定方法一般采用色谱-质谱联用仪，利用
柱质谱原理液相色谱婆罗门芘离子（m/z 212）测定植物油脂中苯并(a)芘含量。
测定方法要求用户必须熟悉色谱-质谱联用仪操作程序，准确
掌握柱层析原理及操作技术。
4 植物油脂中苯并(a)芘测定方法的使用
植物油脂中苯并(a)芘的检测标准建立后，植物油脂中苯并(a)芘
测定方法得到了广泛的应用，它可以用来监测植物油脂中苯并(a)芘的
分布，并可以帮助相关部门科学决策，防治环境污染，保护民众的健康。
![苯并[a]芘的测定](https://img.taocdn.com/s1/m/4b03d5122a160b4e767f5acfa1c7aa00b52a9ded.png)
![苯并[a]芘的测定](https://img.taocdn.com/s1/m/fead663d581b6bd97f19ea79.png)
植物油脂中苯并（a ）芘的测定-高效液相色谱法本方法参考国标方法：动植物油脂苯并（a ）芘的测定反相高效液相色谱法，GBT 22509-2008；该国标源自ISO 15302:2007，MOD 方法。
相关技术差异为：对仪器设备作了改动；氧化铝柱采用天津博纳艾杰尔科技有限公司的商品氧化铝固相萃取柱；将洗脱溶剂改为采用重蒸后的石油醚；待测液定容体积改为300µL，采用仪器自动进样，进样量为20µL；采用外标法定量计算。
方法内容：1．适用范围本方法适用于动植物油脂中苯并（a ）芘的检测。
本方法的最低检出限为0.3-0.5µg/Kg，该最低检出限为对应所使用的仪器的检出限，因此仪器荧光检测器的灵敏度对应检出限。
2．方法原理样品经石油醚溶解，通过商品氧化铝固相萃取柱（活度为Ⅳ级，粒径大小为100-200目）吸附脂肪酸等，用石油醚洗脱苯并（a ）芘，采用反相高效液相色谱法分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，采用峰面积外标法定量。
3．试剂与材料3.1 色谱纯正己烷；石油醚，每升加4g 氢氧化钾重蒸；3.2 氧化铝固相萃取柱：100-200目，brockmann 活度Ⅳ级，在室温下避光保存，天津博纳艾杰尔科技有限公司；3.3 苯并（a ）芘标准储备液：称取10mg 标准品于10ml 容量瓶中，用正己烷定容，配制的标准储备液浓度为1000mg/L；3.4 标准工作液：用正己烷稀释标准储备液，稀释的浓度为10µg/L。
4．仪器和设备4.1 旋转蒸发仪，大于150ml 的圆底旋蒸瓶或鸡心瓶，勿用平底旋蒸瓶；4.2 氮吹仪；4.3 涡旋混合器；QL-866 江苏海门产；4.4 2ml色谱瓶；4.5 250µL色谱瓶玻璃内插管；4.6 高效液相色谱仪，配自动进样器，荧光检测器。
5．样品前处理5.1 样品净化称取约0.300g 的油样，用5ml 石油醚溶解涡旋混合器上充分混匀。
MMFSCNG0143 食品 苯并(a)芘 分光光度法MM_FS_CNG_0143食品中苯并(a)芘的测定方法1. 适用范围本方法适用于食品中苯并(a)芘的测定。
样品量为50 g，点样量为1 g时，方法最低检出浓度为1ng/g。
2.原理概要样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液-液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。
3.主要仪器和试剂3.1.主要试剂苯、丙酮、石油醚(60～90℃)、无水乙醇：重蒸馏。
乙醇(95％)、甲酸(88％～90％)、氢氧化钾、甲酸(40％)、硫酸钠溶液(20g/L)。
环己烷(或石油醚，沸程30～60℃)：重蒸馏或经氧化铝柱处理无荧光。
二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。
无水硫酸钠：120℃烤2h以上。
咖啡因甲酸溶液(150g/L)：称咖啡因(医用或试剂用)15g，溶于适量甲酸中，再稀释至100mL。
脱脂棉：用二氯甲烷回流4 h以上。
展开剂：乙醇(95％)-二氯甲烷(2：1)。
硅镁型吸附剂：将60～100目筛孔的硅镁吸附剂经水洗四次(每次用水量为吸附剂质量的4倍)于垂融漏斗上抽滤干后，再以等量的甲醇洗(甲醇与吸附剂量克数相等)，抽滤干后，吸附剂铺于干净瓷盘上，在130℃干燥5 h后，装瓶贮存于干燥器内，临用前每100g加5g水减活，混匀并平衡4h以上，最好放置过夜。
层析用氧化铝(中性)：120℃活化4 h。
乙酰化滤纸：将中速层析用滤纸裁成30 cm×4cm的条状，逐条放入盛有乙酰化混合液(180mL苯、130mL乙酸酐、0.1mL硫酸)的500mL烧杯中，使滤纸充分地接触溶液，保持溶液温度在21℃以上，时时搅拌，反应6h，再放置过夜。
取出滤纸条，在通风橱内吹干，再放入无水乙醇中浸泡4h，取出后放在垫有滤纸的干净白瓷盘上，在室温内风干压平备用，一次可处理滤纸15～18条。
生活饮用水苯并[a]芘的测定高压液相色谱法1. 适用范围本方法规定了用高压液相色谱法测定生活饮用水及其水源水中的苯并[a]芘。
本法适用于生活饮用水及其水源水中苯并[a]芘的测定。
本法最低检测质量为0.07ng，若取500mL水样测定，本法最低检测质量浓度为1.4ng/L。
2. 原理水中苯并[a]芘及其他芳烃能被环己烷萃取，萃取液经活性氧化铝吸附净化，以苯洗脱、浓缩后，可用液相色谱一荧光检测器定量。
3. 试剂所用试剂和材料应进行空白试验，即通过全部操作过程，证明无干扰物质存在。
所有试剂使用前均应采用0.45µm过滤膜过滤。
3.1 活性氧化铝：取250g100目~200目层析用中性氧化铝(A12O3)于140℃活化4h，冷却后装瓶，储于干燥器内，备用。
3.2 盐酸溶液(1+19)：取5mL盐酸(ρ20=1.19g/mL)，加至95mL纯水中，混匀。
3.3 玻璃棉：用盐酸溶液浸泡过夜，然后用纯水洗至中性。
用氢氧化钠溶液浸泡过夜，再以纯水洗至中性，于105℃烘干备用。
3.4 甲醇：HPLC级。
3.5 超纯水：电阻率大于18.0MΩ。
3.6 活性炭：取50g(20目~40目)活性炭用盐酸溶液浸泡过夜，用纯水洗至中性，于105℃烘干。
再用环己烷浸泡过夜，滤干后在氮气流下于400℃活化4h，冷后储于磨口瓶中备用。
3.7 环己烷：通过活性炭层析柱后重蒸馏，取此环己烷70mL浓缩至1.0mL，浓缩液必须测不出苯并[a]芘的存在，方可使用。
3.8 苯：重蒸馏。
3.9 无水硫酸钠：40℃烘烤4h，冷却后储于磨口瓶中备用。
3.10 氢氧化钠溶液：称取5g氢氧化钠，用纯水溶解，并稀释至100mL。
4. 仪器4.1 髙压液相色谱仪：4.1.1 荧光检测器。
4.1.2 记录仪。
4.1.3 色谱柱。
A色谱柱类型：不锈钢柱，长150mm，内径3.9mm。
B 填充物：用Spherisorb C18(5µm)。
4.2 微量注射器：25µL，针头锥度为90度。
苯并(a)芘的测定
乙酰化滤纸层析荧光分光光度法
1 主题内容与适用范围
本方法规定了测定水质中苯并(a)花[以下简称B(a)P]的方法。
本方法适用于饮用水、地面水、生活污水、工业废水。
最低校出浓度为0.004μg/L。
注意：B(a)P是一种由五个环构成的多环芳烃，它是多环芳烃类的强致癌代表物。
基于B(a)P的强致癌性，按本方法方法分析时必须戴抗有机溶剂的手套，操作应在白搪瓷盘中进行(如溶液转移、定容、点样等)。
室内应避免阳光直接照射，通风良好。
2 原理
水中多环芳烃及环已烷可溶物经环己烷萃取(水样必须充分摇匀)，萃取液用无水硫酸钠脱水、浓缩，而后经乙酰化滤纸分离。
分离后的B(a)P用荧光分光光度计测定。
3 试剂
除另有说明外，分析时均使用分析纯试剂和蒸馏水。
3.1 B(a)P标准溶液的配制：称取5.00mg固体标准B(a)P于50ml容量瓶中[因B(a)P 是强致癌物，为了减少污染，以少转移为好]，用少量苯溶解后，加环已烷至标线，其浓度为100μg/ml。
特此贮备液用环己烷稀释成10μg/ml的标准使用液，避光贮于冰箱中。
3.2乙酷化滤纸的制备：把15×30cm的层析滤纸15至20张卷成高15cm的圆筒状，逐张放入1000ml高型烧杯中，杯壁与靠杯的第一张纸间插入一根玻璃棒，杯中间放一枚玻璃熔封的电磁搅拌铁芯。
在通风柜中，沿杯壁慢慢倒入乙酰化剂(由苯十乙酸酐＋浓硫酸＝750ml＋250ml＋0.5ml混合配制成)，磁力恒温搅拌器的温度保持55±1℃.连续反应6h。
取出乙酰化滤纸，用自来水漂洗3～4次，再用蒸馏水漂洗2～3次，晾干。
次日用无水乙醇浸泡4h后，取出乙酰化滤纸，晾干压平，备用。
3.3环己烷，重蒸。
用荧光分光光度计检查：在荧光激发波长367nm，狭缝10nm；荧光发射狭缝2nm，波长405nm应无峰出现。
3.4丙酮，重蒸。
3.5甲醇。
3.6乙醚。
3.7 苯，重蒸。
3.8乙酸酐。
3.9硫酸，ρ＝1.84g/ml。
3.10无水硫酸钠。
3.11
二甲基亚矾(DMSO)：用前先用环已烷萃取两次(500ml二甲基亚矾加50ml环已烷萃取)。
弃去环己烷后备用。
4 仪器
常用实验室设备和下列仪器。
4.1备有紫外激发和荧光分光的荧光分光光度计，光程为10mm的石英比色皿。
4.2紫外分析仪(带365nm或254nm的滤光片)。
4.3康氏振荡器。
4.4磁力恒温搅拌器。
4.5立式离心机，转速为4000r/min。
4.6分液漏斗，1L、3L、100ml。
活塞上禁用油性润滑剂，活塞直接用水或有机溶剂润滑即可。
4.7锥形瓶，250ml。
具磨口玻璃塞。
4.8恒温水浴锅。
4.9层析缸。
4.10具磨口塞刻度离心管，5ml。
4.11点样用玻璃毛细管(自制)。
4.12分析天平、感量0.01mg。
5 样品保存
水样应贮于玻璃瓶中并避光，当日(24h内)用环己烷萃取，环已烷萃取液放入冰箱中保存。
6 步骤
6.1 样品和标样的预处理
6.1.1 清洁水和地面水萃取
取充分混匀的清洁水样2000ml放入3000ml分液漏斗中，用环己烷萃取两次，每
次用50ml，在康氏振荡器上每次振荡3min，取下放气，静置半小时，待分层后，将两次环已烷萃取液收集于具塞锥形瓶中，弃去水相部分。
6.1.2 工业废水的萃取
取混匀的工业废水样1000ml，放入1000ml分液漏斗中，每次用50ml环已烷萃取两次，在康氏振荡器上每次振荡3min，取下放气，静置半小时，待分层后，将两次环已烷萃取液收集于具塞锥形瓶中，弃去水相部分。
6.1.3 脱水、浓缩
在(上述)环已烷萃取液中加入无水硫酸钠(约20～50g)，静置至完全脱水(约1～2h)，至具塞锥形瓶底部无水为止。
如果环已烷萃取液颜色比较深，则将脱水后环已烷定容至100ml，分取其一定体积浓缩；如果颜色不深则全部浓缩。
在温度为70～75C 用KD浓缩器减压浓缩至近干，用苯洗涤浓缩管壁三次，每次用3滴，再浓缩至0.05ml，以备纸层析用。
6.1.4 纸层析分离
在乙酰化滤纸30cm长的下端3cm处，用铅笔画一横线，横线两端各留出1.5cm，以2.4cm的间隔将标准B(a)P与样品浓缩液用玻璃毛细管交叉点样。
点样斑点直径不超过3～4mm。
点样过程中用冷风吹干。
每支浓缩管洗两次，每次用一滴苯，全部点在纸上。
将点过样的层析滤纸挂在层析缸内架子上，加入展开剂[甲醇＋乙醚＋蒸馏水＝4＋4＋1(体积比)]，直到滤纸下端浸入展开剂1cm为止。
加盖用透明胶纸密封。
于暗室中展开2～4h。
取出层析滤纸，在紫外分析仪照射下用铅笔圈出标样B(a)P斑点以及样品中与其高度(Rf值)相同的紫蓝色斑点范围。
剪下用铅笔圈出的斑点，剪成小条，分别放入5ml具塞离心管中。
在105～110℃烘箱中烘10min(亦可在干燥器中或干净空气中晾干)。
在干燥器内冷却后、加入丙酮至标线。
用手振荡1min后，以3000r/min的速度离心2min。
上清液留待测量用。
6.2 测定
将标准B(a)P斑点和样品斑点的丙酮洗脱液分别注入10mm的石英比色皿中，在激发、发射狭缝分别为10nm、2nm，激发波长为367nm处，测其发射波长402nm、405nm、408nm处的荧光强度F。
7 结果的表示
用窄基线法按下列公式计算出标准
B(a)P 和样品B(a)P 的相对荧光强度，再计算出B(a)P 的含量C(用相对比较计算法)。
相对荧光强度2
408
402405F F F F nm +-
= R V
F F M C ⨯⨯⨯=标准样品
式中：
C ——水样B(a)P 含量，μg/L ； M ——标准B(a)P 点样量，μg ；
标准F ——标准B(a)P 的相对荧光强度； 样品F ——样品斑点的相对荧光强度；
V ——水样体积，L ；
R ——环己烷提取液总体积与浓缩时所取的环己烷提取液的体积之比值。
8 精密度与准确度
8.1精密度
五个实验室自行配制的含有
B(a)P 近似O.2μg/L 的焦化废水的精密度见表1。
表1 精密度
8.2准确度
两种工业废水的加标回收率见表2、表3。
表2 焦化废水加标回收结果
表3 沥青废水加标回收结果
附录A 对除去B(a)P干扰物的说明
(补充件)
A1石油、含油废水按下面操作进行
将上述(6.1.2)100ml环己烷萃取液定容后取出20ml，放入100ml分液漏斗。
用DMSO萃取2次，每次5ml，用手振荡2min，注意放气，静置半小时。
待分层后收集两次萃取的DMso液于另一个100ml分液漏斗中，弃去环己烷液。
于盛有10mlDMSo 液的分液漏斗中加入事先用冰冷却过的1：1HCl15ml，冷却至室温，再用环己烷反萃取两次，每次5ml，用手振荡2min，注意放气。
合并两次环己烷萃取液10ml于另一个100ml分液漏斗中，加5ml15％NaOH溶液洗一次，振荡两分钟，弃去NaOH液层。
再用蒸馏水洗2—3次，每次15ml，直至洗涤后的蒸馏水pH＝7，弃去水相，将环己烷萃取液加无水流酸钠脱水后，在KD浓缩器上浓缩。
以下步骤包括乙酰化滤纸层析分离，荧光分光光度计测量，计算与(7)相同。
A2测量后的B(a)P丙酮洗脱液切勿随意丢弃，可放入通风柜中专用大烧杯中，统一处理。
A3本实验均应在避免阳光直接照射下进行。
A4所用玻璃器皿必须用洗液浸泡4h以后洗涤。
附加说明：
本方法来源于GB 11895—89。
