磁酶免疫和放射免疫方法检测血清FT3、FT4、TSH的方法学探讨及临床应用
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放射免疫法与酶免疫法在临床检验上的应用摘要】放射免疫法RIA在生物检验上最常使用I-125做为标定物质,标定乙型肝炎表面抗体,比较放射免疫法与酶免疫法EIA的灵敏度与专一性及各中优缺点。
酶免疫法与放射免疫法是临床常使用的免疫化学法。
但前者不需使用到放射性物质,所以广泛被使用,酶免疫法中的异相酶免疫法ELISA的测定有很多种,有测定抗原的双抗体夹心法,有测定抗体的间接法。
酶免疫分析法EIA优点试剂稳定,且沒有放射性物质的放射危险,缺点是酶免疫使用的介质有毒或会致癌,故放射免疫分析法RIA优点是检体中不具放射性,沒有內在背景干扰,具极高灵敏度(1pg/ml),缺点是试剂不稳定,另有辐射污染,废弃物的善后。
【关键词】放射免疫法酶免疫法【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)30-0011-02乙型肝炎是肝炎病毒引起的疾病,其感染途径为不当的注射或输血所至。
乙型肝炎是一种免疫性疾病,当病毒进入人体后,将引发自身免疫反应,造成肝脏的损伤。
凡病毒产物(抗原)或宿主对抗病毒的产物(抗体)。
即所谓免疫标记,常成为免疫疾病的工具。
乙型肝炎有六种免疫标记:表面抗原、核心抗原、e-抗原以及相对的抗体,其中最早出现在血液的为表面抗原。
表面抗原虽非病毒本体,但它的存在为病毒繁殖的确证。
运用放射免疫分析法(RIA)及酶免疫分析法(EIA),检测乙型肝炎表面抗体。
1、材料与方法放射免疫分析法(RIA)中的材料有乙型肝炎表面抗体试珠I—125标示乙型肝炎表面抗体、乙型肝炎表面抗原阳性对照组PC、乙型肝炎表面阴性对照组(不含乙型肝炎标记)NC。
酶免疫分析法(EIA)的材料有乙型肝炎表面抗体试盘、乙型肝炎表面抗体过气化酶偶合物、乙型肝炎表面抗原阳性对照组、乙型肝炎表面阴性对照组(不含乙型肝炎标记)、呈色剂。
放射免疫分析法(RIA)是将每一试孔中各加入一试珠,分别加200ulNC至3个试孔,200ulPC至2个试孔,室温培育15分钟,合试珠的试孔中各加入100ul的I-125Anti-HBs溶液,40°C培育1小时,清洗试珠,将试珠倒入试管,用r-count测读每一试管1分错,读出CPM值,判定结果。
磁分离酶联免疫技术和放射免疫法测定甲状腺功能指标的比较彭兰;陈孝进;袁选波
【期刊名称】《微循环学杂志》
【年(卷),期】2005(015)004
【摘要】血清中T3、T4、FT3、FT4、TSH五项指标(简称甲功五项)的含量测定对甲状腺疾病的诊断及疗效评价具有重要意义。
甲功五项的测定通常采用放射免疫法(RIA),这种方法虽然灵敏可靠,但存在放射性污染的问题,因此寻找一种灵敏、特异、可靠、无污染的测定方法是一项很有意义的工作。
磁分离酶联免疫测定技术(MAIA)是一种非放射性物质标记分析技术,符合上述要求,在临床上具有广阔的应用前景。
我们用该法检测了135例甲状腺功能异常患者和50例正常人血清甲功五项指标并与RIA法进行了比较,
【总页数】2页(P129-130)
【作者】彭兰;陈孝进;袁选波
【作者单位】湖北省兴山县医疗中心检验科,兴山,443711;湖北省兴山县医疗中心检验科,兴山,443711;湖北省兴山县医疗中心检验科,兴山,443711
【正文语种】中文
【中图分类】R518
【相关文献】
1.应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态 [J], 于春玲
2.磁分离酶标免疫分析法与放射免疫分析法测定甲状腺五项的比较 [J], 杨桂芳;黎
锋
3.血清肝纤维化指标酶联免疫试验与放射免疫检测比较 [J], 马章林;马朝霞;郑景瑞
4.乙型肝炎病毒标志物的放射免疫法测定和酶联法测定的探讨 [J], 杨美福;易湘群
5.血清肝纤维化指标酶联免疫试验和放射免疫检测的比较 [J], 陈文思;彭晓谋;张宇峰
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中国卫生产业CHINA HEALTHINDUSTRY[作者简介]李佐祥(1981-),男,贵州余庆人,本科,主管检验技师,主要从事临床生化与免疫检验研究工作。
生物参考区间是检验结果常用的一项评价指标,为患者疾病的诊断、治疗、预后和筛查提供信息。
游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺激素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)是反映甲状腺功能最常用的检测指标,常称为“甲状腺功能三项”。
FT3、FT4、TSH 以往主要采用放射免疫法和酶联免疫法测定技术。
目前实验室大多采用免疫标记的方法直接测定血清中的激素浓度。
随着免疫测定技术的发展,竞争性荧光免疫分析法、化学发光免疫法和电化学发光免疫法已能灵敏、特异、快速和准确地用于临床血清激素的测定。
许多实验室一般参照试剂说明书或者全国临床检验操作规程设定参考区间,在实际工作中,发现这些参考区间并不适合临床应用,其生物参考区间是解释检验结果分析检验信息是一个基本尺度和依据,实验室只有给临床检验项目提供可靠的生物参考区间,才能使临床医生对患者或健康体检者的诊断治疗有明确的指引[2]。
虽然不同厂家的检测系统提供了各自参考区间,但由于地域、人群等因素的差异,为了更好地服务于临床,提高这些指标对甲状腺疾病符合率,有必要对厂家提供的生物参考区间进行验证或进一步重新设定,这也ISO015189《医学实验室质量和能力认可提准则》及医院等级评审中所要求的内容之一。
按照CLSI 文件C28-P3《医学实验室参考区间的定义、建立和确认》中的推荐方法,参考IS015189:2003(E)《医学实验室一质量和能力的专用要求》条款要求,根据参考区间正确、科学的确定方法,按照建立参考区间的具体操作程序,保证参考区间的可靠、适用。
该研究通过2015—2016年调查该地区3172名体检者,现报道如下。
1资料与方法1.1一般资料选取到该院健康体检者3172名,年龄16~78岁,年龄:(32.02±8.99)岁;其中:男性2273名,年龄:(32.65±8.98)岁;女性899名,年龄:(30.42±8.47)岁。
技术与应用生命科学仪器 2024年第22卷/第1期26作者简介:吴婷(1987-)女,本科,主管技师,研究方向:临床免疫学㊂甲状腺功能疾病诊断中化学发光免疫检测技术的应用价值吴 婷1 祝 源2 依晓婷1(1.镇江三五九医院检验科,江苏镇江2120002.江苏大学附属人民医院检验科,江苏镇江212000)摘要 目的探讨化学发光免疫检测技术(C L I A )在甲状腺功能疾病(T F D )中的应用价值㊂方法选取2020年1月至2022年12月镇江三五九医院收治的100例T F D 患者,作为观察组;选取同期100例健康人群,作为对照组㊂两组均接受C L I A 检验,比较两组检验结果㊂结果观察组F T 4㊁T G-A b ㊁F T 3㊁T p o -A b ㊁T S H 水平均明显高于对照组(P <0.05)㊂F T 4㊁T G-A b ㊁F T 3㊁T p o -A b ㊁T S H 联合检查诊断T F D 的敏感度为98.00%,特异度为99.00%,准确度为98.50%㊂结论对T F D 患者实施C L I A 检验具有敏感度高㊁操作简单㊁准确率高等优势,可为T F D 的临床诊断提供科学依据㊂关键词 化学发光免疫检测技术;甲状腺功能疾病;诊断价值A p p l i c a t i o n e f f e c t o f c h e m i l u m i n e s c e n c e i m m u n o d e t e c t i o n t e c h n o l o g y i n t h yr o i d f u n c t i o n t e s t W u T i n g ,Z h u Y u a n ,Y i X i a o t i n g(1L a b o r a t o r y o f Z h e n j i a n g 359H o s p i t a l ,Z h e n j i a n g J i a n gs u 212000,C h i n a ;2L a b o r a t o r y o f P e o p l e 's H o s p i t a l o f J i a n g s u U n i v e r s i t y ,Z h e n j i a n g J i a n gs u 212000,C h i n a )ʌA b s t r a c t ɔO b je c t i v e :T o e x p l o r e t h e a p p l i c a t i o n v a l u e of c h e m i l u m i n e s c e n c e i mm u n o a s s a y (C L I A )i n t h y r o i d d y s f u n c -t i o n (T F D ).M e t h o d s :100p a t i e n t s w i t h T F D a d m i t t e d t o Z h e n j i a ng 359H o s p i t a l f r o m J a n u a r y 2020t o D e c e m b e r 2022w e r e s e l e c t e d a s t h e o b s e r v a t i o n g r o u p .100h e a l t h y p e o p l e i n t h e s a m e p e r i o d w e r e s e l e c t e d a s c o n t r o l g r o u p.B o t h g r o u p s r e c e i v e d C L I A t e s t ,a n d t h e t e s t r e s u l t s w e r e c o m p a r e d .R e s u l t :T h e l e v e l s o f F T 4㊁T G-A b ㊁F T 3㊁T p o -A b a n d T S H i n t h e o b s e r v a t i o n g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p (P <0.05).T h e s e n s i t i v i t y ,s p e c i f i c i t y a n d a c c u r a c y o f F T 4㊁T G-A b ㊁F T 3㊁T p o-A b a n d T S H i n t h e d i a g n o s i s o f T F D w e r e 98.00%,99.00%a n d 98.50%.C o n c l u s i o n :C L I A t e s t f o r T F D p a t i e n t s h a s t h e a d v a n t a g e s o f h i g h s e n s i t i v i t y ,s i m -p l e o p e r a t i o n a n d h i g h a c c u r a c y ,w h i c h c a n p r o v i d e s c i e n t i f i c b a s i s f o r c l i n i c a l d i a gn o s i s o f T F D .ʌK e y wo r d s ɔC h e m i l u m i n e s c e n c e i mm u n o a s s a y ;T h y r o i d f u n c t i o n d i s e a s e s ;D i a g n o s t i c v a l u e 中图分类号:R 736.1 文献标识码:B D O I :10.11967/2024220208甲状腺功能疾病(T h yr o i d f u n c t i o n d i s o r -d e r s ,T F D )分为内科㊁外科两种,内科包含甲状腺炎症㊁甲亢症等,外科包含甲状腺肿㊁甲状腺肿瘤等;两者并非独立存在,有互相转变的可能[1]㊂甲状腺炎症的发生与发射线接触㊁雌激素分泌增多等存在关联,患者表现为脖子粗㊁眼突出等症状,给日常生活造成影响㊂甲状腺功能检测项目主要包含游离甲状腺素4(F r e e t h y r o x i n e 4,F T 4)㊁游离三碘甲状腺原氨酸(F r e e t h y r o x i n e 3,F T 3)㊁抗甲状腺过氧化物酶抗体(A n t i t h yr o i d p e r o x i d a s e a n t i b o d y ,T p o -A b )㊁抗甲状腺球蛋白抗体(T h y-r o g l o b u l i n a n t i b o d y,T G-A b )㊁促甲状腺激素(t h y r o i d s t i m u l a t i n gh o r m o n e ,T S H )等㊂通过检测上述指标,可反映甲状腺功能状态㊂但对于检测方法的选择,临床仍存在争议[2]㊂目前,临床多采取放射免疫法检测指标,受到很多医师的青睐;但实践操作发现,该方法可出现假阳性反应,且报告时间长,一般需要2d 左右[3]㊂化学发光免疫检测技术(C h e m i l u m i n e s c e n c e i mm u n o a s s a y te c h n o l o -g y,C L I A )是继放射免疫㊁免疫荧光等方法后的新型检测方式,具有敏感度㊁特异度高及检测范围广㊁费用低等优点[4]㊂本研究进一步探讨分析C L I A 在T F D 诊断中的应用价值,现报道如下㊂1 资料与方法1.1 临床资料 选取2020年1月至2022年12月镇江三五九医院收治的100例T F D 患者,作为生命科学仪器 2024年第22卷/第1期技术与应用27观察组;选取同期100例健康人群,作为对照组㊂观察组男35例㊁女65例;年龄20~65岁,平均(41.88ʃ3.47)岁㊂对照组男33例㊁女67例;年龄21~64岁,平均(42.03ʃ3.49)岁㊂本研究通过医院医学伦理委员会审核㊂两组一般资料对比,差异无统计学意义(P >0.05),具有可比性㊂1.2 纳入与排除标准纳入标准:(1)自愿参与研究;(2)已了解本研究开展意义,衡量利弊后签字确认;(3)资料完整;(4)无视听㊁认知等障碍㊂排除标准:(1)无法配合操作;(2)患者及家属不接受;(3)严重感染或肝肾不全;(4)器质性疾病;(5)入组前接受相关药物治疗;(6)伴凝血㊁免疫病变;(7)恶性肿瘤㊂1.3 方法 C L I A 检验方法:检查前,嘱患者保持空腹,采集3~4m l 静脉血,置入分离胶普管内,待血液凝固后,以2000r /m i n 速度离心处理,分离血清标本,检测血清中甲状腺生化指标含量,包含F T 4㊁F T 3㊁T p o -A b ㊁T G-A b ㊁T S H ㊂1.4 观察指标(1)检测两组生化检验指标,包括F T 4㊁T G-A b ㊁F T 3㊁T p o -A b ㊁T S H ㊂(2)对比两组诊断效能,包括特异度㊁敏感度与准确度㊂敏感度=真阳性例数/(假阴性例数+真阳性例数)ˑ100%];特异度=真阴性例数/(假阳性例数+真阴性例数)ˑ100%㊁准确度(真阳性+真阴性)/总例数ˑ100%㊂1.5 统计学分析 用S P S S 20.0统计软件分析数据,符合正态分布的计量资料以均数标准差(xʃs )表示,行t 检验;计数资料用率表示,行χ2检验,P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 两组C L I A 检验结果 观察组F T 4㊁T G-A b ㊁F T 3㊁T p o -A b ㊁T S H 水平均明显高于对照组(P <0.05)㊂见表1㊂表1 两组C L I A 检验结果(x ʃs)分组例数F T 4(p m o l /L )T G-A b (I U /m l )F T 4(p m o l /L )T po -A b (I U /m l )T S H (u I U /L )对照组10012.94ʃ2.348.61ʃ1.456.57ʃ2.031.62ʃ0.514.73ʃ1.21观察组10062.67ʃ4.13172.54ʃ43.8528.76ʃ2.88316.98ʃ55.8445.36ʃ3.49t 104.76437.36462.97756.473109.995P0.0000.0000.0000.0000.0002.2 诊断效能 F T 4诊断TF D 的敏感度为72.00%,特异度为79.00%,准确度为75.50%;T G-A b 诊断T F D 的敏感度为81.00%,特异度为84.00%,准确度为84.00%;F T 3诊断T F D 的敏感度为79.00%,特异度为83.00%,准确度为81.00%;T po -A b 诊断T F D 的敏感度为85.00%,特异度为88.00%,准确度为86.50%;T S H 诊断T F D 的敏感度为82.00%,特异度为86.00%,准确度为84.00%;联合检查诊断T F D 的敏感度为98.00%,特异度为99.00%,准确度为98.50%㊂见表2㊂表2 生化检验指标单独及联合对T F D 的诊断效能(n)确诊结果F T 4T G-A bF T 3T po -A b T S H联合诊断阳性阴性阳性阴性阳性阴性阳性阴性阳性阴性阳性阴性合计阳性72288119792185158218982100阴性21791684178312881486199100合计9310797103961049710396104991012003 讨论甲状腺为内分泌腺,主要负责分泌T 4类激素,通过观察其代谢情况可以明确,丘脑-垂体-甲状腺轴的关系[5]㊂T F D 包含甲状腺炎㊁甲减㊁甲亢等,常见的诱发因素有自身免疫㊁药物㊁遗传㊁生理等㊂如机体缺碘,可导致甲状腺机能减弱,摄入过量碘则会引起甲亢;自身免疫可能引发甲状腺疾病;过度劳累㊁压力过大等也会引发病症[6]㊂但由于甲状腺炎症早期症状不具备典型性,易被患者忽略,导致诊断准确性较低,经常发生漏诊㊁误诊情况,耽误最佳治疗时机㊂因此,需寻找更为可靠㊁高效的检验方式,以提高T F D 检验质量,确保患者尽早得到治疗,改善患者预后结局[7]㊂研究指出[8],通过检验甲状腺功能生化指标,有助于判断疾病性质㊂F T 4是血液中的甲状腺功能指标,一般通过抽血来检测,可反映甲状腺功能状态,若水平升高,一般提示甲亢和甲状腺炎㊂虽然F T 4在体内不发挥直接作用[9]㊂T G-A b 与甲技术与应用生命科学仪器 2024年第22卷/第1期28状腺组织受损存在关联,可用于检测是否患有甲状腺方面的病症;该指标水平过高多见于甲状腺炎患者㊂该指标为器官特异性抗体,水平高代表免疫力遭受损害,正常范围为0~60I U /m l [10]㊂F T 3占据T 3的0.3%,可透过细胞膜进入组织,发挥生理效应,其浓度与三碘甲状腺原氨酸浓度相同,是诊断甲亢最灵敏的指标[11]㊂T po -A b 是由细胞损伤后,胞浆内的过氧化物酶进入血液中刺激机体产生,其水平升高代表甲状腺处于炎症活跃状态㊂T S H 在激素合成㊁分泌中发挥重要作用,是诊断病变部位及早期异常的依据[12]㊂C L I A 检验是利用化学发光剂标记抗体,与待测标本中对应的抗体通过磁场将结合㊁游离状态分离开,然后加入促进剂,实行发光反应,通过检测发光强度,完成定性检验[13]㊂该方法可将免疫分析与化学发光有效结合,作用基质包含抗体-抗原免疫反应(抗原与抗体特异性结合形成复合物,这个过程利用了标记物实施直接标记)及化学发光分析(发光底物会经过氧化形成中间体,通过发射光子释放能量,从而达到稳定目的;这个过程可用于检测发光强度,并转化为检测物浓度),可经过负载不同抗原/抗体对应的不同项目,实现对人体部位㊁病症的辅助诊断[14]㊂本研究结果显示,观察组各项生化检验指标均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)㊂得出,C L I A 检验能测定甲状腺激素含量,明确指标差异性,为临床诊断提供数据支持㊂江荣[14]在研究中选取50例甲亢患者㊁50例甲减患者㊁50例健康体检者,依次分为甲亢组㊁甲减组㊁健康组,均行C L I A 检验,结果显示,三组五项指标对比,差异明显㊂说明,C L I A 检验测定甲状腺功能,可初步判断功能异常状态,结合数值,可判断甲亢或甲减,与本研究结果一致㊂本文研究显示,,F T 4㊁T G-A b ㊁F T 3㊁T p o -A b ㊁T S H 联合检查诊断T F D 的敏感度为98.00%,特异度为99.00%,准确度为98.50%㊂戴微微[15]的研究结果显示,联合诊断敏感度为95.45%,特异度为100.00%,因而C L I A 检验的诊断效能较高,价值显著㊂对T FD 患者实施C L I A 检验具有敏感度高㊁操作简单㊁准确率高等优势,可为T F D 的临床诊断提供科学依据㊂综上所述,对T F D 患者实施C L I A 检验具有敏感度高㊁操作简单㊁准确率高等优势,可为T F D的临床诊断提供科学依据㊂参考文献[1]李娟娟,衡旭民.甲状腺肿瘤患者生化免疫检验中应用化学发光免疫测定技术的临床效果观察[J ].医学理论与实践,2020,33(16):2720-2721.[2]袁兆林.甲状腺肿瘤患者生化免疫检验中应用化学发光免疫测定技术的临床价值分析[J ].国际医药卫生导报,2019,25(10):1633-1634.[3]刘丹秋.全自动化学发光免疫分析仪检测甲状腺功能在系统性红斑狼疮患者中的应用价值分析[J 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血清甲状腺素化学发光免疫分析与评价发表时间:2016-03-08T15:12:55.797Z 来源:《健康世界》2015年18期作者:侯鹏代荣荣[导读] 平度市第二人民医院本院利用最新全自动化学发光免疫分析仪,检测100例患者甲状腺功能,对其性能进行综合评价。
平度市第二人民医院 266731化学发光免疫分析是20世纪80年代以来发展起来的一项新的标记免疫技术,可测定内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病、心血管疾病标志物、贫血及过敏原等项目,,测定速度快,测定项目齐,近2年在国内逐渐推广。
本院利用最新全自动化学发光免疫分析仪,检测100例患者甲状腺功能,对其性能进行综合评价。
现报告如下:1材料与方法1.1仪器:美国贝克曼全自动化学发光免疫分析仪。
1.2 试剂:发光试剂是贝克曼公司配套试剂、质控品、标准品。
1.3 对象:随机抽取2012年1月至2013年6月本院门诊和住院100例患者,,平均年龄41岁。
男女比例1:3 每例取3 ml血,离心3000 r/min,10分钟,取血清-70 ℃保存备用。
1.4检测方法:利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗夹心法、竞争法相似,严格按试剂盒操作说明书操作。
1.4.1 批内精密度:100例血清样本,分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,取其中高,中,低三种浓度的血清样本,每种浓度同批平行测定10次计算其变平均异系数(CV)。
1.4.2 批间精密度:取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高,中,低三种浓度的血清样本,各10份每天各测定1次,共测定10天,计算其变平均变异系数(CV)。
1.4.3 回收率:由贝克曼公司提供原装3个浓度的标准品,分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每个浓度重复测定3次,计算平均回收率。
1.4.4 线性范围:收集患者血清标本,取T3、T4、FT3、FT4浓度高于厂家提供可报告范围上限作为高值浓度水平(H),厂家提供稀释液作为低值浓度水平(L),用稀释液稀释高值浓度血清,形成如下系列浓度检测标本:1H+1L、4H +1L、3H +2L、2H +2L、2H +3L、1H +4L、0H +1L。
血清甲状腺激素(T3、T4)的磁酶联免疫测定法——方法学探讨及临床应用摘要】本技术为酶联免疫系统与磁性微粒分离技术相结合的一种测定血清T3、T4的方法,并使用了一种高亲合力的抗体。
血清中的T3、T4与一定量的荧光素T3、T4衍生物竞争性地和少量酶标T3、T4单克隆抗体相结合,并使用了ANS置换剂,把T3、T4从蛋白质中置换出来。
方法学检测数据如下:最小检出量T3为0.2ng/mL,T4为5.0ng/mL;回收率:T3为1.03,T4为0.98;批内变异系数T3为3.5%,T4为5.1%;批间变异系数T3为4.6%,T4为5.1%;两种抗血清对相应抗原的同类物的交叉反应率低,用本方法与放免法同时测定30份标本,同一激素的两种方法测定结果呈显著相关。
【关键词】甲状腺激素磁酶联免疫测定近年来,经过科研工作者的努力,先后建立并发展了多种使用非放射性标记物的免疫测定法,其中包括磁分离酶联免疫测定法(MAIA)。
国内外关于人血清T3和T4的MAIA的论著已有多篇,我们于1995年来对本院多例病人和正常人进行了血清中的T3、T4测定,其中30份病人标本同时用放免法(RIA)作对照,兹将结果报告如下。
1 材料和方法1.1材料本实验使用的是北京倍爱康生物技术有限公司提供的T3、T4试剂盒。
(1)抗T3、(T4)衍生物1瓶:牛碱性磷酸酶标鼠抗T3、(T4)单克隆抗体的Tris 缓冲液;羊和牛的血清蛋白;叠氮化纳0.2%W/V,20mL。
(2)T3、(T4)、衍生物1瓶:荧光素标T3、(T4)、衍生物的Tris缓冲液;羊、牛血清蛋白;0.19% W/V ANS:0.2%W/V叠氮化纳,20mL。
(3)分离剂(0.6%)1瓶:与磁性微粒共价结合的羊抗荧光素抗血清0.6%W/V的Tris缓冲液:0.5%W/V牛血清蛋白;0.2%W/V叠氮化钠,40mL。
(4)清洗浓缩液1瓶:表面活性剂和防腐剂的Tris缓冲液,14.3mL。
磁分离酶联免疫荧光法(MEIF)检测人血清中胰岛素作者:谢晶, 刘振世, 胡珊, 蔡汝秀, 杨海, 杨祥良【摘要】目的: 采用磁微粒分离酶联免疫荧光(MEIF)分析技术建立一种简便、高敏感性、定量检测人血清胰岛素(insulin)的新方法。
方法: 选用2株识别人胰岛素不同表位的单克隆抗体(mAb)。
一株mAb用异硫氰酸荧光素(FITC)标记, 另一株用碱性磷酸酶(AP)标记; 偶联羊抗FITC抗体的磁珠用作固相分离载体, 4-甲基磷酸伞型酮用作荧光底物。
结果: 成功建立了定量检测人血清胰岛素的MEIF, 灵敏度2.0 μIu/mL, 线形范围0~188.52 μIu/mL, 批内变异系数(CV)为4.3%~5.2%, 批间CV为2.6%~9.5%, 稀释回收率为93%~117%, 加标回收率为94%~113%。
实际样品的测定结果与倍爱康公司商品化人insulin磁分离发光系统检测试剂盒的检测结果比较, 具有良好的相关性。
结论: MEIF定量测定人insulin方法成本低、灵敏度高、稳定性好, 在临床免疫检测领域具有广阔的应用前景。
【关键词】酶联免疫分析免疫荧光4-甲基磷酸伞型酮磁珠胰岛素[Abstract]AIM: To establish a convenient and sensitive magnetic separation enzyme immunofluorescence (MEIF) method fordetecting human insulin. METHODS: Two monoclonal antibodies (mAbs) were conjugated with FITC and alkaline phosphatase (AP) respectively, which were incorporated magnetic solid phase separation. Magnetic beads were coupled with sheep anti-FITC antibody as solid phase and 4-Methylumbelliferyl-phosphoric acid (4-MUP) was used as substrate to set up MElF for detecting insulin. RESULTS: The sensitivity of this assay was 2.0μIu/mL, the linear range was from 0 μIu/mL to 188.52 μIu/mL, and the intra-assay variation and inter-assay variation were 4.3%-5.2% and 2.6%-9.5%, respectively. The recovery rate of dilution was 92.6%-117% and the recovery rate of accession was 106%-121%. The result of the assay correlated well with that of magnetic enzyme chemiluminescence immunoassay system. CONCLUSION: The MEIF for detecting insulin is low at cost, sensitive, specific and stable, which can be widely used in clinical immune detection.[Keywords]enzyme immunoassay; immunofluorescence; 4-Methylum-belliferyl-phosphoric acid; magnetic beads; insulin糖尿病是我国最常见的内分泌疾病, 发病率约为1.3‰, 我国每年约有2.7万新增患者。
甲状腺功能的实验室检测的原理及方法甲状腺功能实验室检查主要包括甲状腺激素、促甲状腺激素、甲状腺激素结合球蛋白和相关自身抗体检测。
目前认为,联合进行游离三碘甲状腺原氨酸,游离甲状腺素和超敏促甲状腺激素测定,是甲状腺功能评估的首选方案和第一线指标。
甲状腺激素的测定多采用免疫分析法,但传统的放射免疫法灵敏度有限,不能区别正常人低值和原发性甲亢。
化学发光免疫法和时间分辨荧光免疫法都更为灵敏、准确,其检测限可达0.001mIU/L。
但无论检测方法灵敏度多高,结果多准确,都必须结合临床和其他甲状腺功能检查才能做出正确诊断和治疗决策。
一、甲状腺素甲状腺素(thyroxine,T4)检测具有多种方法,传统检测方法采用放射性碘标记的放射免疫法。
但其操作过程繁琐,在临床应用中受到一定限制。
时间分辨荧光免疫法和电化学发光法均是目前最先进的标记免疫测定技术,其检测快捷,敏感度高,近年来在临床T4 检测中被广泛应用。
时间分辨荧光免疫法测定血清总甲状腺素如下:1.原理加入待测血清、铕标记T4和鼠抗T4的单克隆抗体(单抗)温育,试剂中的8-苯胺-1-萘磺酸(ANS)能将结合状态的T4游离出来。
抗T4单抗和包被在微孔板上的二抗结合的同时,样本中的T4和铕标记T4竞争结合抗T4单抗上的结合位点,温育后洗板,加入解离增强液将标记在复合物中的铕离子解离至溶液中,与增强液中的有关成分形成荧光螯合物微囊,发出的荧光强度与样品中的总甲状腺素(total thyroxin,TT4)浓度成反比。
2.试剂与仪器购买成套的商品试剂盒,主要成分如下:已包被第二抗体的96微孔反应板,T4标准品(6瓶,分别含0、20、50、100、150和300nmol/L 的T4标准品),抗T4单克隆抗体(含ANS),铕标记T4(含ANS),浓缩洗液(25×),缓冲溶液,增强液。
3.操作(1)试剂准备:1)洗涤液:40ml浓缩洗液加960ml蒸馏水混合(pH 7.8)。
磁性分离免疫法检测T3、T4、TSH的评价徐京昕【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2005(023)003【摘要】目的用Serozyme-IEMA分析仪检测血清T3、T4、TSH,进行临床和实验室考核.方法将本分析仪与放免法(RIA)进行对比研究.结果健康人(N=482)血清T3、T4、TSH水平(x±s)分别为1.2±0.4ng/ml、92.0±18.1μg/dl、1.7±1.6μIU/ml;初诊甲亢组T3、T4水平明显升高TSH水平明显下降,随着治疗,T3、T4降低TSH升高;甲减组T4水平降低TSH水平明显升高;甲状腺瘤、甲状腺肿、甲状腺结节等各疾病组与正常对照组无明显差异.仪器精密度和准确度均良好:T3、T4、TSH的批内和批间变异系数(CV%)分别为2.5~5.5%、1.6~4.4%、1.1~2.6%和5.5~9.5%、4.6~7.4%、3.1~7.6%;回收率分别为91~105%、91~107%、91~109%.T3、T4、TSH联合检测对甲亢和甲减诊断的敏感性和特异性分别为93.6%、94.6%和98.1%、97.8%.结论本分析仪对甲状腺功能的检测敏感、特异,完全可替代RIA,作为基层实验室检测甲状腺功能的良好仪器.【总页数】3页(P221-222,226)【作者】徐京昕【作者单位】100871,北京大学医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446.62;R392-33【相关文献】1.磁性分离免疫酶联测定法与放射免疫分析法测定T3、T4、TSH的含量比较 [J], 陆培芳;黎华辉2.电化学发光免疫法检测TSH、T3、T4、FT3、FT4相关性观察 [J], 周万军;柳永和;陈卫群;唐孟萱3.磁性分离酶联免疫技术测定T3,T4,TSH [J], 陆培芳4.磁性分离酶标技术检测T3、T4、TSH、FT3、FT4 [J], 乐理;刘晓敏5.联合检测FT3、FT4、TSH、T3、T4评价甲状腺功能的临床意义 [J], 于丽娟因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
血清促甲状腺素功能敏感度的测定及意义作者:王德麟,陈琳,张志泉,王惠民【摘要】目的: 对人血清促甲状腺素(TSH)功能敏感度的测定。
方法: 利用美国ABBOTT(雅培)公司的AXSYM和美国BECKMAN(贝克曼)公司的ACCESS全自动免疫系统,对14份不同浓度的血清标本连续测定10天,计算变异系数(CV)。
通过统计学处理计算功能敏感度。
结果: AXSYM系统与ACCESS系统功能敏感度分别为0.06 mIU/L和0.03 mIU/L。
结论: 功能敏感度由20%的批间变异系数得出,功能敏感度反映了临床的最低检出限度。
【关键词】促甲状腺素;功能敏感度;变异系数[Abstract] Objective: To measure the functional sensitivity of human serum TSH. Methods: Using entire automatic immune system AXSYM of American ABBOTT corporation and ACCESS of American BECKMAN corporation ,measure the coefficient of variation of human serum specimen pools that covering the assay range in 14 different runs during 10 days .Compute the functional sensitivity by statistics processing. Results: The functional sensitivity of AXSYM system and ACCESS system respectively is 0.06 mIU/L and 0.03 mIU/L. Conclusion: The functional sensitivity is obtained by the 20% between-run coefficient and it reflects the lowest limit of clinical examination.[Key Words] Thyroid stimulating hormone; Functionalsensitivity; Coefficient of variation促甲状腺素(TSH)的功能主要是促进甲状腺体积增大,使得甲状腺摄取碘并合成甲状腺素,临床常用作甲亢、甲减等甲状腺疾病的检测指标。
磁性分离酶标技术检测T3、T4、TSH、FT3、FT4
乐理;刘晓敏
【期刊名称】《四川省卫生管理干部学院学报》
【年(卷),期】2001(020)004
【摘要】磁性分离酶标免疫技术是80年代中期Serono诊断中心发明的一种非同位素免疫检测的先进技术,称为磁性抗体免疫技术(MAIA)。
使双抗体夹心酶联免疫技术在游离型标记抗体和标记抗原——抗体复合物分离中具有分离完全和快速的优点。
我们采用Seroeyme酶联免疫双抗体夹心检测系统,分析测定T3、T4、TSH、FT3、FT4,现将检测结果报告如下。
【总页数】1页(P302-302)
【作者】乐理;刘晓敏
【作者单位】崇州市人民医院,四川,崇州,611230;新津县人民医院,四川,新
津,611430
【正文语种】中文
【中图分类】R446.61
【相关文献】
1.FT3、FT4、TSH与T3、T4联合检测甲状腺功能的临床表达意义 [J], 刘卫
2.甲亢患者血清T3、T4、FT3、FT4、TSH、PTH和CT水平检测及益气化痰祛瘀方药干预作用的研究 [J], 彭伟;白雪
3.甲状腺功能异常患者FT3、FT4、TSH与T3、T4联合检测的临床价值 [J], 曹丽;
4.甲状腺功能异常患者FT3、FT4、TSH与T3、T4联合检测的临床价值 [J], 曹丽
5.联合检测FT3、FT4、TSH、T3、T4评价甲状腺功能的临床意义 [J], 于丽娟因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
FT3、FT4和TSH超微量磁免法测定与临床应用汪隆海;孙邦水【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2005(2)5【摘要】目的建立测定血清游离三碘甲状腺原氨酸(FTs)、游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺素(TSH)超微量磁免法,并探讨其应用价值.方法标本和所有试剂减量5倍,再作FFT3、FT4和TSH检测.结果平均回收率为98.1%,批内CV为4.10%,批间CV 为5.83%.52例甲亢患者FT3、FT4和TSH分别为(25.36±8.95)pmol/L、(86.73±32.69)pmol/L和(0.13±0.11)mIU/L((-x)±s);25例原发性甲减患者FT3、FT4和TSH分别为(0.96±0.38)pmol/L、(4.51±1.76)pmol/L和(28.73+8.15)mIU/L((-x)±s).结论超微量磁免法灵敏、特异、准确,临床检测具有实用价值.【总页数】2页(P207-208)【作者】汪隆海;孙邦水【作者单位】238100,安徽省含山县人民医院检验科;238100,安徽省含山县人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R4【相关文献】1.磁酶免疫和放射免疫方法检测血清FT3、FT4、TSH的方法学探讨及临床应用[J], 吴思源;何静2.磁性均相酶联免疫技术测定血清TSH、FT3、FT4的方法学探讨及临床应用 [J], 谢国强3.电化学发光免疫分析法测定TSH、FT3、FT4的临床应用 [J], 张允平;单汉青;徐龙宝;邓民斌4.磁性均相酶免疫技术测定血清TSH、FT3、FT4的临床应用 [J], 谢国强5.老年性疾病患者TSH、T3、T4、FT3、FT4测定的临床应用 [J], 戴珺;王瑛因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。