放射免疫分析技术

放射免疫分析测定方法-临床免疫放射免疫分析测定方法：用放射免疫分析进行测定时分三个步骤，即抗原抗体的竞争抑制反应、B和F的分离及放射性的测量。

（一）抗原抗体反应将抗原（标准品和受检标本）、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定的温度下进行反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。

不同质量的抗体和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。

如受检标本抗原含量较高，抗血清的亲和常数较大，可选择较高的温度（15～37℃）进行较短时间的温育，反之应在低温（4℃）作较长时间的温育，形成的抗原抗体复合物较为牢固。

（二）B、F分离技术在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的标记抗原抗体复合物（B）不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原（F）的分离。

另外对小分子量的抗原也可采取吸附法使B与F分离。

1.第二抗体沉淀法这是RIA中最常用的一种沉淀方法。

将产生特异性抗体（第一抗体）的动物（例如兔）的IgG免疫另一种动物（例如羊），制得羊抗兔IgG血清（第二抗体）。

由于在本反应系统中采用第一、第二两种抗体，故称为双抗体法。

在抗原与特异性抗体反应后加入第二抗体，形成由抗原-第一抗体-第二抗体组成的双抗体复合物。

但因第一抗体浓度甚低，其复合物亦极少，无法进行离心分离，为此在分离时加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG，使之与第二抗体形成可见的沉淀物，与上述抗原的双抗体复合物形成共沉淀。

经离心即可使含有结合态抗原（B）的沉淀物沉淀，与上清液中的游离标记抗原（F）分离。

将第二抗体结合在颗粒状的固相载体之上即成为固相第二抗体。

利用固相第二抗体分离B、F，操作简便、快速。

2.聚乙二醇（PEG）沉淀法最近各种RIA反应系统逐渐采用了PEG溶液代替第二抗体作沉淀剂。

PEG沉淀剂的主要优点是制备方便，沉淀完全。

缺点是非常特异性结合率比用第二抗体为高，且温度高于30℃时沉淀物容易复溶。

免疫放射分析基本原理
免疫放射分析（Radioimmunoassay，简称RIA）是一种常用的生物化学分析方法，通过使用放射性同位素标记的抗体来测量样品中特定物质的含量。

其基本原理如下：
1. 准备试样：需要测量的物质（抗原）存在于待测样品中。

样品可以是血清、尿液、分离得到的纯化物质等。

2. 标记抗体：选择能与待测物质结合的特异性抗体，并将该抗体与放射性同位素标记结合。

常用的同位素标记有^125I和
^3H。

放射性同位素标记的抗体是利用放射性同位素的射线释放特性来进行测量的关键。

3. 反应体系：将标记抗体和待测样品中的抗原加入到一个反应管中，使抗体与抗原发生特异性结合。

这一步骤通常需要一定的时间（通常为数小时）来达到最大的结合效率。

4. 分离无结合物质：通过加入剩余的非标记抗体或其他方法，分离无结合的标记抗体和未结合的物质（无结合物质）。

这一步骤可用于增加测量的灵敏度。

5. 分离被结合的标记抗体：将反应体系分离，常见的方法是利用沉淀或吸附等技术，将被结合的标记抗体与其他成分分离开来。

6. 测量放射活性：通过放射计或闪烁计数仪等设备，测量分离得到的被结合的标记抗体的放射活性。

放射活性与待测物质的
浓度呈正相关关系。

7. 构建标准曲线：使用已知浓度的标准物质重复上述步骤，测量其放射活性，并作为标准曲线的数据点。

通过与标准曲线的比较，可以确定待测样品中物质的浓度。

总之，免疫放射分析是一种利用放射性同位素标记的抗体来测量待测样品中特定物质含量的分析方法。

通过与已知浓度的标准物质进行比较，可以准确地测量待测物质的浓度。

放射免疫分析临床应用刘冬放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种以放射性示踪剂和免疫反应结合技术来测定生物标志物的一种方法。

该技术已广泛应用于临床医学中用于检测和测量患者体内的一些特定物质含量，如激素、抗体、肿瘤标志物等。

本文将重点介绍放射免疫分析在临床应用中的一些例子。

一、激素测定激素是机体内起调控作用的重要化学物质。

通过测定患者体内激素的水平，可以评估一些疾病的发生和发展，以及患者对治疗的反应。

常见的激素测定项目包括甲状腺激素、生长激素、性激素等。

放射免疫分析可以通过测定血液或尿液中激素的浓度，来帮助医生进行确诊和治疗方案的制定。

例如，对于甲状腺功能亢进患者，可以通过测定血液中的甲状腺素水平来确定是否需要进行手术或药物治疗。

二、肿瘤标志物测定肿瘤标志物是一种可以在肿瘤患者体内检测到的特殊物质。

通过测定血液中的肿瘤标志物的水平，可以帮助医生进行肿瘤的筛查、诊断和监测治疗效果。

放射免疫分析可以对常见的肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等进行快速、准确的检测。

例如，在临床上，对于可能患有肺癌的患者，测定血液中的CEA水平可以帮助医生进行早期诊断和有效治疗。

三、感染性疾病诊断感染性疾病的早期诊断对于患者的治疗和康复至关重要。

通过测定患者体液中的抗体水平，可以判断患者是否被特定的病原体感染。

放射免疫分析可以用来检测和诊断一些常见的感染性疾病，如乙肝、艾滋病等。

例如，对于可能患有乙型肝炎的患者，可以通过测定血液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和乙肝病毒表面抗体（HBsAb）来判断患者的感染状态和治疗效果。

综上所述，放射免疫分析技术在医学临床应用中发挥着重要的作用。

通过对患者体内特定物质含量的测定，可以帮助医生进行疾病的早期诊断、有效治疗和预后评估。

随着医学技术的不断发展，放射免疫分析技术在临床应用中的前景将会更加广阔。

放射免疫分析名词解释放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种用于检测和定量分析生物样品中特定抗原或抗体浓度的方法。

它是将放射性同位素标记于抗原或抗体上，在放射性同位素发出的放射线与样品中的抗原或抗体发生特异性结合后进行测定，从而得出相应物质的浓度。

放射免疫分析的基本原理是免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。

在RIA中，通常选择具有放射性的同位素标记物作为追踪试剂。

标记物可以是同位素标记的抗原或抗体，其中最常用的是放射性同位素碘-125（^125I）或碘-131（^131I）。

这些放射性同位素会发出特定能量的射线，可以通过辐射探测器测量。

RIA的步骤包括样品预处理、标记物制备、抗体反应和分离、洗涤、放射测定等。

首先，需要将待测物标记为放射性同位素，常见的方法是用碘-125标记。

然后，将标记物与样品中的抗原或抗体进行相互反应，形成抗原-抗体复合物。

接着，通过分离和洗涤步骤，去除未结合的放射性同位素。

最后，使用辐射探测器测量放射性同位素发出的射线，由此可以得到样品中特定抗原或抗体的浓度。

放射免疫分析的优势在于其高灵敏度和高特异性，可以检测到极低浓度的物质。

它广泛应用于医学、生物学、生物化学等领域，用于检测和量化各种生物分子，如荷尔蒙、抗体、蛋白质、癌标志物等。

RIA还可以用于研究免疫反应、疾病诊断、药物筛选和治疗监测等方面。

然而，放射免疫分析也存在一些问题。

首先，使用放射性同位素会造成辐射危害，对实验操作人员和环境有一定风险。

其次，放射性同位素的半衰期较短，需要定期更换，增加了实验的复杂性和成本。

此外，由于放射性同位素的使用受到严格的监管和限制，一些实验室可能无法获得所需的放射性同位素。

总体而言，放射免疫分析是一种广泛应用的生物分析技术，具有高灵敏度和高特异性。

随着科技的进步，更多无放射同位素的免疫分析方法被开发出来，如酶免疫分析、荧光免疫分析等，逐渐取代了放射免疫分析的应用。

放射免疫分析名词解释
放射免疫分析（RIA）是一种检测技术，可以用来测定多种体内物质，包括激素、细胞因子、蛋白质和抗原。

它可以应用于动物和人体，并且具有灵敏度高、可操作性好的优点，被广泛应用于临床和科研领域。

放射免疫分析由以下几个步骤构成：首先，将样本中待测物质结合到放射抗体中。

放射抗体是一种特异性抗体，能够特异性结合待测物质，避免其他物质干扰检测结果。

放射抗体可以是膜抗原抗体、非膜抗原抗体或者多肽抗体。

其次，将样本和放射抗体制成滴定曲线，测定放射抗体结合待测物质的含量。

最后，通过计算放射抗体浓度滴定曲线的相关系数来计算样本中的待测物质的含量。

放射免疫分析为临床和科研提供了许多方便，特别是在生理学方面，其应用极为广泛。

它可以用来检测各种激素、蛋白质和细胞因子的表达水平，对疾病的研究有重要意义。

放射免疫分析也可以检测各种抗原，为临床诊断疾病提供有力的支持。

放射免疫分析由于具有高灵敏度和特异性，可以很好地检测微量物质，在临床和科研领域具有重要的应用价值。

近年来，放射免疫分析在药物研发和食品质量检测方面也越来越受到重视，为科学研究和技术创新提供重要的技术支持。

综上所述，放射免疫分析是一种重要的检测技术，它不仅在临床检测中具有重要的应用价值，而且也受到越来越多科学研究和技术创新的重视。

它也可以帮助我们更准确、更早期地诊断疾病，为患者身
体健康提供有力的支撑。

放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。

放射免疫技术放射免疫分析免疫放射分析放射免疫分析技术的应用放射免疫技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大的推动作用。

基本类型及原理1.放射免疫分析（RIA）2.免疫放射分析（IRMA）常用的放射性核素放射免疫技术常用的放射性核素有125Ⅰ、131Ⅰ、3H、14C等。

使用最广泛的是125Ⅰ，可采用探测γ射线的晶体闪烁计数器测量。

标志物制备及鉴定125Ⅰ以放射性碘原子通过置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。

（1）氯胺T（ch-T）法。

（2）乳过氧化物酶标记法。

（3）间接标记法。

放射性标志物的纯化（1）凝胶过滤法：分子筛。

（2）离子交换层析法：极性差异。

（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：电荷和直径。

（4）高效液相色谱法。

放射性标志物的鉴定1.放射化学纯度：大于95%。

2.免疫活性：标志物与抗体结合的能力。

3.比放射性：标志物中所含的放射性强度。

方法学评价除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：（1）可靠性。

（2）剂量-反应曲线。

（3）高剂量钩状效应。

放射免疫分析放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合有限的特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。

Ag*+Ag+Ab Ag*-Ab+Ag-Ab+Ag*+Ag分离结合与游离标志物1.第二抗体沉淀法。

2.聚乙二醇（PEG）沉淀法。

3.PR试剂法：先将二抗与PEG按一定比例混合成悬液后进行试验。

4.活性炭吸附法。

放射性测量及数据处理可对标记抗原抗体复合物（B）或游离标记抗原（F）进行放射性测量，绘制标准曲线，查出相应的待检抗原浓度。

第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术一、基本类型及原理（一）放射免疫分析（RIA）以放射性核素标记抗原与未标记抗原竞争结合特异性抗体，测定样品中抗原量的一种分析法。

（二）免疫放射分析（IRMA）用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。

二、常用的放射性核素125I、131I、3H、14C等，使用最广泛的是125I。

三、放射性标记物制备及鉴定（一）原理：以放射性碘原子置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。

蛋白质、肽类等含有上述基团，可用125Ⅰ直接标记，不含上述基团的甾体激素或药物分子，须连接相应基团才能用于放射性碘标记。

（二）标记及类型1.直接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记。

常用的方法为：①氯胺 T（ch-T）法；②乳过氧化物酶标记法。

2.间接标记法：也称连接标记法，是最常用的间接碘标记方法。

该法主用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。

（三）放射标记物的纯化1.凝胶过滤法：分子筛机制。

2.离子交换层析法：游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离。

3.聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同。

4.高效液相色谱法。

（四）放射标记的鉴定1.放射化学纯度：单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，要求＞95%。

该参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。

2.免疫活性：制备的标记物与抗体结合的能力。

3.比放射活性：单位化学量标记物中所含的放射性强度，即每分子被标记物平均所结合放射性原子数目。

四、方法学评价除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：（一）可靠性：又称健全性，是评价被测物与标准品的免疫活性是否相同。

借助标准曲线与样品稀释曲线的平行性分析来判断。

平行性好者可靠。

（二）剂量-反应曲线：通过已知浓度的标准品和相应的反应参数绘制成剂量-反应曲线，待测物定量是通过计算其反应参数在剂量-反应曲线上对应的标准品浓度值而确定。