放射免疫检测技术.

免疫学课后作业比较几种免疫标记技术的异同。

答：根据标记物种类的不同，免疫标记技术可以分为放射免疫分析、酶标记免疫分析、荧光标记免疫分析、化学发光标记免疫分析、胶体金标记免疫分析技术，它们之间具有相同点，也有不同之处，现将其归纳如下。

一、相同点主要包括以下几个方面：1、均具有高特异性。

五种免疫标记技术的免疫技术都是采用抗原抗体反应，而抗原与抗体的结合是一一对应、特异性结合的，故它们都具有非常高的特异性。

2、均具有高灵敏性。

由于五种免疫标记技术的标记技术均采用示踪物标记，例如酶、放色性核素、荧光素、胶体金以及致密物质等，当与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，只需测定复合物中的标记物，通过化学或物理的手段使不见的反应放大，转化为可见的、可测知的光、色、电、脉冲等信号，并可借助仪器精密测定，从而间接测出微量的抗原或抗体。

3、检测对象相同。

除了放射免疫技术只能检测抗原外，其他四种免疫标记技术均可检测抗原或者抗体，即通过已知抗原(或抗体)特异性结合待测抗体（或抗原），从而定性或定量地测出抗体或抗原。

4、免疫标记的程序基本相同。

其包括纯化抗原或抗体、确定标记物质（即决定了最终的检测方式）、进行标记、对标记产物分离纯化和分析鉴定等一系列程序。

二、不同点主要包括以下几个方面：1、检测原理不一样。

首先，酶免疫技术是以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原-抗体反应的特异性和酶催化底物反应高效性和专一性结合起来的一种免疫方法，其对作为标记用的酶具有特定的要求，如活性高、纯度高等；放射免疫标记技术是以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法；免疫荧光技术是以荧光素作为标记物与已知的抗体或抗原结合，然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用于检测和坚定未知的抗原，其对用于标记的荧光素也有特定的要求，如荧光效率高，与蛋白质结合稳定，易于保存等；发光免疫分析技术是将发光分析与免疫反应相结合而建立的一种新型超微量分析技术，它是使用发光剂标记抗体（或抗原），通过发光检测抗原（或抗体）反应的免疫分析方法；免疫胶体金标记技术则是以胶体金作为示踪标记物，而胶体金在碱性环境中带负电荷，与抗体蛋白质分子的正电荷基团因静电而形成牢固结合应用于抗原抗体反应的一种新型免疫检测方法。

放射免疫技术的名词解释放射免疫技术是一种广泛应用于医学和生物学领域的技术，它利用放射性同位素进行标记，通过测定同位素放射性衰变释放的放射性能量来检测和研究生物体内的抗原、抗体和其他分子的存在或相互作用。

本文将探讨放射免疫技术的基本原理、应用范围以及未来发展前景。

1. 基本原理放射免疫技术的基本原理是利用放射性同位素的放射性衰变特性进行检测。

首先，将一个抗原、抗体或其他生物分子与放射性同位素结合，形成放射性标记的复合物。

然后，将该放射性标记物与待检测样品接触，使其与目标抗原或抗体发生特异性反应。

最后，通过测量放射性标记物释放的放射能量来确定样品中目标分子的存在或数量。

2. 应用范围放射免疫技术在医学和生物学领域具有广泛的应用范围。

首先，在医学诊断方面，放射免疫技术可以帮助检测血清中特定抗体或抗原的存在，从而诊断某些疾病或监测病情进展。

例如，通过测定甲状腺功能相关的抗体水平可以诊断自身免疫性甲状腺疾病。

此外，放射免疫技术还可以用于肿瘤标记物的检测，辅助癌症的早期诊断和治疗监测。

其次，在生命科学研究中，放射免疫技术被广泛应用于分子生物学、细胞生物学和免疫学领域。

例如，利用放射免疫技术可以测定特定蛋白质、核酸或其他生物分子的合成速率、代谢路径或相互作用方式。

这些研究有助于我们理解细胞信号传导、基因调控以及免疫应答等生物过程的机制。

3. 发展前景尽管放射免疫技术在医学和生物学领域有着广泛应用，但由于潜在的放射性危险和仪器设备的复杂性，人们对其安全性和可行性提出了一些担忧。

因此，在未来的发展中，放射免疫技术需要与其他新兴的生物检测方法相结合，以实现更高的安全性和灵敏度。

一种可能的发展方向是与光学技术的结合。

近年来，光学生物成像技术得到了迅猛发展，如荧光成像和多光子显微镜。

这些技术可以通过标记荧光染料或量子点等光学探针，实现对生物分子的高分辨率成像。

将光学技术与放射免疫技术相结合，可以充分利用两种技术的优势，实现更准确、灵敏和便捷的检测手段。

放射免疫分析摘要：放射免疫技术（radio immunoassay ,RIA）类型主要包括经典的放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)和免疫放射分析或免疫放射度量分析( immunoradiometric assay，IRMA)。

由于受接触放射性物质，损害操作人员的身体，测定完成后放射性材料的处置等问题的存在,再加上80年代初出现的非同位素标记技术得到了极大的发展和广泛应用，放射免疫技术的应用有下降的趋势。

0引言：放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。

目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用。

关键词：结构，原理，临床应用1检测的基本结构原理、结构及其探测原理核射线探测仪器由射线探测器和后续电子学单元两大部分组成。

核射线探测器是个能量转化器，其检测原理是当射线作用于闪烁体，闪烁体吸收了射线的能量而引起闪烁体中的原子或分子激发，当受激的原子或分子退激时，则发出光子进入光电倍增管光阴极，转换为光电子，光电子在光电倍增管电场作用下到达阳极，形成电脉冲。

转换模式是放射能→光能→电能→脉冲。

液体闪烁测量是在闪烁杯内进行的，放射性样品主要被溶剂和闪烁剂分子包围，射线能量先被溶剂分子吸收，受激溶剂分子退激时释放出能量激发闪烁剂，当激发态回到基态时释放出光子到达光阴极，光阴极产生光电子，在光电倍增管的电场作用下，在阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。

放射性活度测定方法放射免疫分析中经抗原抗体反应和B、F分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。

放射性量的检测需特殊的仪器，放射免疫分析仪实际上就是进行放射性量测定的仪器。

测量仪器有两类，即晶体闪烁计数仪（主要用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等）和液体闪烁计数仪（主要用于检测β射线，如3H、32P、14C等）。

临床常用标记免疫技术及特点1.引言1.1 概述标记免疫技术是现代生物医学领域中常用的一种实验方法，其通过在生物样本中引入特定的标记物，来检测、定量或分析目标物质的存在和性质。

这些标记物可以是荧光染料、放射性同位素、酶或其他具有特异性的物质。

在临床医学中，标记免疫技术具有广泛的应用，可以用于诊断疾病、评估治疗效果、研究疾病机制等方面。

常用的标记免疫技术包括免疫荧光染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)等。

免疫荧光染色技术是一种利用特异性抗体与标记物结合后发出荧光信号的技术。

通过荧光显微镜观察样本中的荧光信号，可以定位、鉴定并定量分析目标物质。

这种技术具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的特点。

酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种利用特异性抗体与酶结合后，通过酶催化反应来产生可定量的信号的技术。

ELISA技术可以用于检测血清中的免疫球蛋白、抗原、抗体等多种生物分子，并可定量测定其浓度。

ELISA 技术具有高灵敏度、高准确性和高通量的特点。

放射免疫测定(RIA)是一种利用放射性同位素标记分子，通过测量放射性同位素放出的射线来定量目标物质的技术。

RIA技术在测定极低浓度物质或微量物质时具有非常高的敏感性和特异性。

然而由于放射性同位素标记物的安全性和环境污染问题，RIA技术在临床实验室中的应用受到了限制。

总之，标记免疫技术在临床医学中具有重要的应用价值，可以帮助医生准确、快速地诊断疾病，评估治疗效果，深入研究疾病的发生机制。

随着科学技术的不断进步，标记免疫技术也在不断发展，将为临床医学带来更多的突破和进展。

1.2文章结构文章结构部分：本篇文章主要介绍临床常用标记免疫技术及其特点。

文章结构如下：第一部分为引言，包括概述、文章结构和目的。

在概述中，将介绍免疫技术在临床应用中的重要性和广泛应用的背景。

在文章结构部分，将详细说明本篇文章的章节分布和内容安排。

在目的部分，将说明本文的目的和意义，为读者明确文章的目标。

常用的抗原抗体检测方法抗原抗体检测是生物医学领域中常见的技术手段，主要用于检测样品中是否含有特定的抗原或抗体。

以下是几种常用的抗原抗体检测方法：1、酶联免疫吸附法（ELISA）：这种方法利用酶作为标记物，与抗原或抗体结合，通过酶催化底物反应产生颜色变化，从而检测抗原或抗体的存在。

ELISA 方法具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，因此在临床诊断、生物制品检测等领域广泛应用。

2、免疫荧光技术：该技术通过荧光物质标记抗原或抗体，利用荧光显微镜观察荧光信号，检测抗原或抗体的存在。

免疫荧光技术具有高灵敏度、高特异性、无放射性等优点，常用于组织切片、细胞表面抗原或抗体的检测。

3、放射免疫分析法：这种方法利用放射性同位素标记抗原或抗体，通过与样品中的抗原或抗体结合后，用放射性检测器检测放射信号，从而确定抗原或抗体的浓度。

放射免疫分析法具有较高的灵敏度和特异性，但放射性物质可能对环境和人体健康造成影响，因此使用时需特别注意安全问题。

4、胶体金免疫层析法：该技术利用胶体金标记抗原或抗体，通过与样品中的抗原或抗体结合后，利用层析原理将结合物分离并富集，再用光学仪器检测胶体金颗粒的聚集程度，从而判断抗原或抗体的存在。

胶体金免疫层析法具有简便、快速、可视化等优点，常用于临床床快速诊断和食品安全等领域。

5、化学发光免疫分析法：这种方法利用化学发光物质标记抗原或抗体，与样品中的抗原或抗体结合后，利用化学反应产生光信号，通过检测光信号的强度确定抗原或抗体的浓度。

化学发光免疫分析法具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，因此在临床诊断和生物制品检测等领域应用广泛。

这些方法各有特点和使用范围，选择合适的抗原抗体检测方法要根据具体实验条件和要求而定。

同时，为保证检测结果的准确性和可靠性，操作过程中需遵循规范，避免污染和交叉反应等问题的发生。

临床医学检验临床免疫技术：放射免疫技术测试题（强化练习）1、单选表示单位质量标记物的放射强度的指标是（）A.放射化学纯度B.免疫活性C.比放射性D.交叉反应率E.亲和常数正确答案：C2、单选分离结合态与游离（江南博哥）态放射性标记抗原不完全时会增加（）A.特异性结合量B.非特异性结合量C.敏感度D.精确度E.反应速率正确答案：B3、单选与RIA比较，IRMA的特点不包括（）A.IRMA的反应速度更快B.非竞争结合，使IRMA更易检测微少含量的抗原C.抗体用量大但K值要求不高D.反应参数与待测抗原含量成反比E.具有更高的灵敏度正确答案：D参考解析：IRMA属固相免疫标记测定，抗原与过量的标记抗体在液相反应后加入免疫吸附剂，游离的标记抗体与免疫吸附剂结合被离心除去，然后测定上清液的放射性量。

所以反应参效与待测抗原含量成正比4、单选在放射免疫分析中常用到RIA标准曲线（Standardcurve），其作用是（）A.用来校正计数器（counter）B.用得到的计数率去推算试样中所含样品的浓度或含量C.做质控D.用来追踪试样的变化E.鉴定核素的放射化学纯度正确答案：B5、单选RIA试验中抗原抗体复合物的放射性强度与待测抗原呈（）A.函数关系B.正比关系C.反比关系D.曲线关系E.正弦关系正确答案：C6、单选放射免疫分析常用的放射性核素错误的是（）A.125IB.130IC.3HD.14CE.111I正确答案：E参考解析：放射免疫分析常用的放射性核素有：125I、130I、3H、14C等。

7、单选标记免疫技术实际应用时测定的是（）A.待测抗原与抗体结合后形成的结合物B.待测抗体与抗原结合形成的复合物C.标记物在抗原抗体复合物的信号D.直接测定样品中抗原的含量E.直接测定样品中抗体的含量正确答案：C参考解析：一种定性、定量甚至定位测定技术。

即用荧光素、放射性核素、酶、发光剂或电子致密物质（胶体金、铁蛋白）作为示踪剂标记抗体或抗原，通过抗原抗体反应而检测相应抗原和抗体。

常用免疫学检验技术的基本原理免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。

由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）.由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体)。

免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。

最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。

这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。

单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈,沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比.利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。

免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开.然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。

然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体)的鉴别。

上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限.比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原(或抗体）的含量。

该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。

免疫印迹法则首先通过电泳分离标准的已知抗原,然后将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上，浸于待测血清中。

放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。

放射免疫技术放射免疫分析免疫放射分析放射免疫分析技术的应用放射免疫技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大的推动作用。

基本类型及原理1.放射免疫分析（RIA）2.免疫放射分析（IRMA）常用的放射性核素放射免疫技术常用的放射性核素有125Ⅰ、131Ⅰ、3H、14C等。

使用最广泛的是125Ⅰ，可采用探测γ射线的晶体闪烁计数器测量。

标志物制备及鉴定125Ⅰ以放射性碘原子通过置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。

（1）氯胺T（ch-T）法。

（2）乳过氧化物酶标记法。

（3）间接标记法。

放射性标志物的纯化（1）凝胶过滤法：分子筛。

（2）离子交换层析法：极性差异。

（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：电荷和直径。

（4）高效液相色谱法。

放射性标志物的鉴定1.放射化学纯度：大于95%。

2.免疫活性：标志物与抗体结合的能力。

3.比放射性：标志物中所含的放射性强度。

方法学评价除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：（1）可靠性。

（2）剂量-反应曲线。

（3）高剂量钩状效应。

放射免疫分析放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合有限的特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。

Ag*+Ag+Ab Ag*-Ab+Ag-Ab+Ag*+Ag分离结合与游离标志物1.第二抗体沉淀法。

2.聚乙二醇（PEG）沉淀法。

3.PR试剂法：先将二抗与PEG按一定比例混合成悬液后进行试验。

4.活性炭吸附法。

放射性测量及数据处理可对标记抗原抗体复合物（B）或游离标记抗原（F）进行放射性测量，绘制标准曲线，查出相应的待检抗原浓度。

第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术一、基本类型及原理（一）放射免疫分析（RIA）以放射性核素标记抗原与未标记抗原竞争结合特异性抗体，测定样品中抗原量的一种分析法。

（二）免疫放射分析（IRMA）用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。

二、常用的放射性核素125I、131I、3H、14C等，使用最广泛的是125I。

三、放射性标记物制备及鉴定（一）原理：以放射性碘原子置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。

蛋白质、肽类等含有上述基团，可用125Ⅰ直接标记，不含上述基团的甾体激素或药物分子，须连接相应基团才能用于放射性碘标记。

（二）标记及类型1.直接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记。

常用的方法为：①氯胺 T（ch-T）法；②乳过氧化物酶标记法。

2.间接标记法：也称连接标记法，是最常用的间接碘标记方法。

该法主用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。

（三）放射标记物的纯化1.凝胶过滤法：分子筛机制。

2.离子交换层析法：游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离。

3.聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同。

4.高效液相色谱法。

（四）放射标记的鉴定1.放射化学纯度：单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，要求＞95%。

该参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。

2.免疫活性：制备的标记物与抗体结合的能力。

3.比放射活性：单位化学量标记物中所含的放射性强度，即每分子被标记物平均所结合放射性原子数目。

四、方法学评价除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：（一）可靠性：又称健全性，是评价被测物与标准品的免疫活性是否相同。

借助标准曲线与样品稀释曲线的平行性分析来判断。

平行性好者可靠。

（二）剂量-反应曲线：通过已知浓度的标准品和相应的反应参数绘制成剂量-反应曲线，待测物定量是通过计算其反应参数在剂量-反应曲线上对应的标准品浓度值而确定。