苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒(苯丙氨酸微板法)

苯丙氨酸氨裂解酶
苯丙氨酸氨裂解酶
苯丙氨酸氨裂解酶（Phenylalanine Ammonia Lyase，PAL）是一种细胞色素P（cytochrome P450）家族的酶，主要用于氨基酸类植
物激素的合成。

它是一种非常重要的酶，可以帮助植物抗逆性的生长和发育过程。

苯丙氨酸氨裂解酶的分子量约为50kDa，分子结构由许多氨基酸组成。

它有两个催化中心，在一个催化中心，它可以将氨基酸转化为其他氨基酸，在另一个催化中心，它可以将氨基酸转化为植物激素。

此外，PAL还具有一定的调控作用，它可以抑制或激活植物激素的形成。

苯丙氨酸氨裂解酶有许多应用。

它可以用于调控植物激素的合成，从而影响植物的生长和发育。

它还可以用于研究调控植物激素合成的分子机制，这对了解植物的生长发育有重要意义。

此外，它还可以用于生产植物激素，这些植物激素可以用于农业生产。

苯丙氨酸氨裂解酶是一种重要的酶，可以帮助植物抗逆性的生长和发育过程。

它可以用于调控植物激素的合成，研究调控植物激素合成的分子机制以及生产植物激素。

一、实验目的1. 了解苯丙氨酸脱氨酶（Phenylalanine Dehydrogenase，简称PAH）的基本性质和作用。

2. 掌握苯丙氨酸脱氨酶活性的测定方法。

3. 通过实验验证不同条件下苯丙氨酸脱氨酶活性的变化。

二、实验原理苯丙氨酸脱氨酶是一种参与生物体内氨基酸代谢的酶，其活性对于许多生物学过程至关重要。

本实验采用邻苯二胺法测定苯丙氨酸脱氨酶活性。

该方法原理是：苯丙氨酸脱氨酶将苯丙氨酸脱氨后，产生苯丙酮酸，苯丙酮酸在反应中与邻苯二胺反应，生成深蓝色化合物。

该化合物的蓝色深浅与苯丙酮酸的浓度成正比，可以通过分光光度计测量吸光度来测定苯丙酮酸的生成速率，从而计算苯丙氨酸脱氨酶的活性。

三、实验材料1. 实验试剂：苯丙氨酸、邻苯二胺、氢氧化钠、三氯化铁、蒸馏水等。

2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。

四、实验方法1. 配制苯丙氨酸溶液：称取苯丙氨酸0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1mg/ml的苯丙氨酸溶液。

2. 配制邻苯二胺溶液：称取邻苯二胺0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1mg/ml的邻苯二胺溶液。

3. 氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.5g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成5%的氢氧化钠溶液。

4. 三氯化铁溶液：称取三氯化铁0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1%的三氯化铁溶液。

5. 样品处理：取适量样品，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成一定浓度的样品溶液。

6. 实验步骤：a. 取试管一支，加入苯丙氨酸溶液2ml。

b. 加入样品溶液2ml。

c. 加入邻苯二胺溶液2ml。

d. 加入氢氧化钠溶液2ml。

e. 混匀，置于恒温水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。

f. 取出试管，加入三氯化铁溶液1ml。

g. 混匀，用分光光度计在特定波长下测定吸光度。

h. 根据吸光度计算苯丙氨酸脱氨酶活性。

五、实验结果与分析1. 苯丙氨酸脱氨酶活性随温度升高而升高，在50℃时达到峰值，随后随温度升高而降低。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)简介：Leagene 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，在ALT 催化下，其反应公式如下：L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。

二硝基苯肼与α-酮酸反应，生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下，二硝基苯腙的吸收光谱有差异，通过酶标仪检测在500-520nm 处差异最大，以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量，进而计算酶的活性。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①_x0001_ 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。

②_x0001_ 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。

③_x0001_ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT 含量。

2、 制作ALT 标准曲线：取适量的丙酮酸标准(100mmol/L)，按丙酮酸标准(100mmol/L)：丙酮酸标准稀释液=1：49的比例混合，即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L)，按下表制备标准曲线。

最好设定平行检测管，求平均值。

编号 名称TE0121 100T Storage试剂(A): 丙酮酸标准(100mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 丙酮酸标准稀释液 2ml RT 试剂(C): 标准对照液 2ml 4℃ 试剂(D): ALT assay buffer 3ml -20℃ 避光 试剂(E): 二硝基苯肼显色液 3ml 4℃ 避光 试剂(F): ALT 显色基液 25mlRT 使用说明书1份加入物0 1 2 3 4 丙酮酸标准(2mmol/L)(μl)2468标准对照液(μl) 4 4 4 4 4ALT assay buffer(μl)(37℃提前孵育5min) 20 18 16 14 12相当于ALT/GPT(卡门单位) 0 28 57 97 150 混匀，向各管中加入二硝基苯肼显色液20μl，混匀，37℃孵育20min后，加入ALT 显色基液200μl，混匀。

苯丙氨酸（Phe）检测
苯丙氨酸（Phenylalanine, Phe），又称2-氨基-3-苯基丙酸，是人体必需氨基
酸之一，属芳香族氨基酸。

在体内大部分经苯丙氨酸羟化酶催化作用氧化成酪
氨酸，并与酪氨酸一起合成重要的神经递质和激素，参与机体糖代谢和脂肪代谢。

迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)法，可高效、精准的检测苯丙氨酸的含量变化。

此外，我们还提供其他氨基酸及其代谢物检测服务，以满足您的不同需求。

HPLC和LC-MS测定苯丙氨酸样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报
告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 苯丙氨酸含量信息
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。

LC-MS氨基酸测定项目样本报告，点击查看>。

苯丙氨酸解氨酶引言苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase，简称PAL）是一种重要的酶，参与苯丙氨酸代谢途径中的第一步反应。

它能够将苯丙氨酸转化为酪氨酸和氨。

因此，苯丙氨酸解氨酶在植物中的生理功能和途径调控中拥有重要的地位。

结构苯丙氨酸解氨酶是一种单体酶，其分子量约为40-65 kDa。

在不同的物种中，苯丙氨酸解氨酶的结构存在一定的差异。

但是总体上，它通常由若干个结构域组成，包括一个N末端的酶活性结构域，一个中间的调节结构域以及一个C末端的底物结合结构域。

反应机制苯丙氨酸解氨酶在催化反应中使用了一个共轭辅酶，被称为5,6,7,8-四羟基二氢类黄酮酸（pteridin-6醌的衍生物）。

该辅酶能够捕捉氨基的一个负电荷，并将其转移到供体分子上。

催化反应的步骤如下：1.苯丙氨酸进入酶活性结构域，并与共轭辅酶产生一个中间产物。

2.中间产物失去氨基，生成一个酮体。

3.该酮体再次与共轭辅酶发生反应，生成氨和酪氨酸。

生理功能苯丙氨酸解氨酶在植物的生长和发育过程中发挥着重要的作用。

它不仅参与苯丙氨酸代谢途径中的第一步反应，还能够产生次级代谢产物，如类黄酮类物质。

这些次级代谢产物在植物中具有抗氧化、抗病原体和抗逆境等多种生理功能。

苯丙氨酸解氨酶的活性和表达水平受到多种因素的调控。

其中，水分、光照和温度是三个关键的调控因素。

此外，植物激素和环境胁迫也会对苯丙氨酸解氨酶的表达产生影响。

应用苯丙氨酸解氨酶在医药和食品加工领域具有广泛的应用前景。

例如，苯丙氨酸解氨酶可以用于合成抗癌药物和抗病毒药物。

此外，它还可以用于食品加工中，用于改善食品的口感和提高食品的营养价值。

结论苯丙氨酸解氨酶是植物中重要的酶，参与苯丙氨酸代谢途径中的第一步反应。

它在植物的生理功能和途径调控中具有重要的地位。

苯丙氨酸解氨酶的结构和反应机制已经被研究得较为清楚，其生理功能受到多种因素的调控。

此外，苯丙氨酸解氨酶还具有广泛的应用前景，在医药和食品加工领域有着重要的应用价值。

苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液简介：苯丙氨酸解氨酶(L－phenylalanine ammonia-lyase ，PAL)是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。

该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，是1961年J.Koukol 在大麦中发现的，推测其分子量约为30万，这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。

在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照、病伤害、植物激素处理等会使活性显著增加。

在多数情况下，在组织中活性增加时，酶发生失活作用，这时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为这种失活是与类蛋白质物质作用有关。

Leagene 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的苯丙氨酸解氨酶。

该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。

2、加入苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液，冰浴情况下充分捣碎或研磨。

3、离心，留取上清液。

4、冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测或其他用途。

计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%注意事项：编号名称CS0366Storage 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液500ml 4℃避光使用说明书1份1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液稀释样品后重新测定。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。

苯丙氨酸定量检测试剂盒（酶法）说明书【产品名称】通用名称：英文名称：【包装规格】【预期用途】【检验原理】【主要组成成分】【储存条件及有效期】【适用机型】【样本要求】【检验方法】【参考值（参考范围）】【检验结果的解释】【检验方法的局限性】【产品性能指标】【注意事项】【参考文献】【生产企业】【医疗器械生产企业许可证编号】【医疗器械注册证书编号】【产品标准编号】【说明书批准及修改日期】【产品名称】通用名：苯丙氨酸定量检测试剂盒（酶法） 英文名称：Phenylalanine Kit （Enzyme ）【包装规格】96人份/盒 480人份/盒【预期用途】用于定量检测采集在S&S903# 滤纸上的新生儿全血样品中苯丙氨酸的浓度。

本试剂盒适用于新生儿苯丙酮尿症（PKU ）的筛查检测。

仅用于体外检测。

苯丙酮尿症（简称PKU ）是一种较常见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约1/10,000。

本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可因辅酶因子BH 4缺陷引起。

这些缺陷致使苯丙氨酸不能被转化为酪氨酸，导致大量的苯丙氨酸及其代谢产物在体内堆积，引起中枢神经系统损害。

其临床主要表现为：发育迟缓，毛发、皮肤及虹膜变浅，癫痫，进行性智力低下等。

由于本病的早期发现早期治疗，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。

检测方法还有细菌抑制法、荧光法等。

【检验原理】采用三氯醋酸（TCA）从干血片中萃取苯丙氨酸。

苯丙氨酸被苯丙氨酸脱氢酶转化成苯丙酮酸 。

这个反应伴随着反应混合物中存在的辅酶NAD+减少，生成NADH，这个氧化还原反应中把添加的四唑盐转化成橙黄色物质Formazane。

Formazane 的量与样本中苯丙氨酸的量成正比。

使用酶标仪检测其光密度值，即可换算成其对应的苯丙氨酸浓度值，酶标仪波长使用450nm。

【主要组成成分】名称96人份/盒 480人份/盒 包装酶稀释液（Triton X-100缓冲液） 11ml /瓶 55ml /瓶无色透明玻璃瓶或棕色玻璃瓶底物（四唑盐）11ml /瓶 55ml /瓶 中和液（碳酸盐缓冲液） 5.5ml /瓶 27.5m l/瓶 三氯醋酸溶液（3%） 17ml /瓶 85 m l/瓶 酶（冻干粉） 1瓶（冻干粉） 5瓶（冻干粉） 辅酶（冻干粉） 1瓶（冻干粉）5瓶（冻干粉）96孔微孔板2块 10块 铝箔袋 标准血片S1～S5 1.1、2.8、5.3、9.6、17.3mg/dl 1份 2份 无色透明塑料袋质控血片C1：2.2– 4.2 mg/dl C2：4.6– 8.6 mg/dl 1份2份说明书 1份 质量验证单1份注：标准品或质控品的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。

苯丙氨酸解氨酶（PAL）在植物中的作用及其活性测定方法生命科学实验117篇原创内容公众号苯丙氨酸解氨酶（PAL）催化 L-苯丙氨酸解氨生成反式肉桂酸，是连接初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶，也是苯丙氨酸代谢途径的关键酶和限速酶。

莽草酸途径产生的莽草酸通过分枝酸、预苯酸经转氨作用生成苯丙氨酸，从而进入苯丙烷类代谢途径，苯丙烷类代谢可生成反式肉桂酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等中间产物，这些中间产物可进一步转化为香豆素、绿原酸，也可以形成 CoA酯，再进一步转化为木质素、黄酮、异黄酮、生物碱、苯甲酸酯糖苷等次生代谢产物。

一切含苯丙烷骨架的物质都由该代谢途径直接或间接生成。

在生物次生物质代谢中具有防紫外线伤害、抵抗病原体的侵害、保持花粉生活力及形成植物花青素等多种重要作用。

该酶在不同组织中、不同的内外因素调节下，含量水平及其基因表达的时空方式均有所不同。

1.PAL对植物生理代谢的意义植物的代谢分为初级代谢和次级代谢。

植物的次级代谢有多条途径，苯丙烷类代谢途径是其中很重要的一条。

苯丙烷类途径生成的黄酮、异黄酮、生物碱等次生代谢产物在植物的生长发育过程中起着重要的作用，所以PAL对植物的生理意义非常重大。

1.1在木质化中的作用在植物的木质化组织中含有较高的PAL活性。

用分离的百日草叶肉细胞研究了苯丙烷类代谢酶类与木质素、管状分子形成和细胞分化的关系，发现在百日草细胞分化过程中，木质素的合成及管状分子形成与PAL 活性的增加成正相关，细胞溶质中的 PAL 活性在木质化之前迅速上升，微粒体和细胞壁的 PAL 活性在木质化期间快速增加。

1.2在植物色素形成过程中的作用花色素是植物花朵、果实和叶片颜色的重要组成部分，花色素等的合成可由苯丙烷类产物反香豆酰 CoA 经过类黄酮途径生成，该过程与 PAL 密切相关。

如苋红素是中央种子目植物所特有的色素，当用白光、蓝光或红光照射尾穗苋黄化苗后，发现 PAL活性均有不同程度地上升，并有苋红素的积累。

苯丙氨酸解氨酶（PAL微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0215规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶4℃保存试剂一液体15 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2瓶4℃保存试剂三液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加入2.5 mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用，4℃可保存2周。

产品说明：PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，在动物体内尚未发现。

与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

10000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、操作表：（在EP管或96孔板中按顺序加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管空白管样本5试剂一145150试剂二4040BC0215 -- 第1 页，共2 页混匀，30℃准确反应30min试剂三1010混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。