植物(Plant)苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒说明书

苯丙氨酸解氨酶的测定一、实验目的利用无土栽培技术培育不同pH下水芹，使用离心技术粗提取苯丙氨酸解氨酶，用分光光度计测不同的吸光值。

二、实验原理无土栽培是用人工配制的培养液，供给植物矿物营养的需要。

离心技术的应用是将样品放入离心机的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一向外的离心力。

由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同，在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同，由此便可以得到相互间的分离。

分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。

三、仪器与试剂仪器：高速离心机、分光光度计、玻璃瓶、研钵、烧杯、量筒、试管、剪刀和纱布等。

试剂：霍格兰营养液，磷酸缓冲液,0.02mol/L苯丙氨酸,硼酸缓冲液，高锰酸钾材料：水芹幼苗，0.1mol/LNaOH溶液四、操作步骤一、水芹的无土栽培1.配好无土栽培营养液，准备7个玻璃瓶，分别加入15ml营养液。

再加NaOH溶液把玻璃瓶中pH值调成5，5.5，6，6.5，7，7.5，8，贴上标签。

2.把水芹幼苗从玻璃瓶中取出经过洗净，用高锰酸钾消毒处理后，分别移入盛有营养液的玻璃杯中，放在光照培养箱培养3.定期观察并注意加霍格兰营养液和NaOH溶液使玻璃瓶中pH保持不变。

二、水芹中苯丙氨酸解氨酶的粗提取1.等到水芹大概张到20cm左右，就把它们分别从玻璃瓶中取出，在30℃暗中培养5小时。

然后分别把同一pH值的水芹分别剪成根，茎，叶，根茎，根叶，叶茎，根茎叶七个部分均为0.5g。

2.加预冷的pH7.2磷酸缓冲液5mL，冰浴下充分研磨，均匀混合，用4层纱布过滤。

4000rpm 离心15min，弃沉淀。

获上清液用磷酸缓冲液稀释5倍，作为酶测定的粗提液，置于冰浴下保存备用。

三、水芹中苯丙氨酸解氨酶的吸光度测定设计对照试验：A：取粗水芹酶液0.1mL，加入2.5mL 0.02mol/L苯丙氨酸B：取0.1mL硼酸缓冲液，加入2.5mL 0.02mol/L苯丙氨酸（对照）。

苯丙氨酸氨裂解酶
苯丙氨酸氨裂解酶
苯丙氨酸氨裂解酶（Phenylalanine Ammonia Lyase，PAL）是一种细胞色素P（cytochrome P450）家族的酶，主要用于氨基酸类植
物激素的合成。

它是一种非常重要的酶，可以帮助植物抗逆性的生长和发育过程。

苯丙氨酸氨裂解酶的分子量约为50kDa，分子结构由许多氨基酸组成。

它有两个催化中心，在一个催化中心，它可以将氨基酸转化为其他氨基酸，在另一个催化中心，它可以将氨基酸转化为植物激素。

此外，PAL还具有一定的调控作用，它可以抑制或激活植物激素的形成。

苯丙氨酸氨裂解酶有许多应用。

它可以用于调控植物激素的合成，从而影响植物的生长和发育。

它还可以用于研究调控植物激素合成的分子机制，这对了解植物的生长发育有重要意义。

此外，它还可以用于生产植物激素，这些植物激素可以用于农业生产。

苯丙氨酸氨裂解酶是一种重要的酶，可以帮助植物抗逆性的生长和发育过程。

它可以用于调控植物激素的合成，研究调控植物激素合成的分子机制以及生产植物激素。

山西农业科学 2023，51（9）：961-973Journal of Shanxi Agricultural Sciences棉花PAL 基因家族的全基因组鉴定及其在逆境胁迫下的表达分析王梓钰，古丽斯坦·赛米，刘隋赟昊，黄耿青，张经博，郭彦君（新疆师范大学 生命科学学院/新疆特殊环境物种保护与调控生物学实验室，新疆 乌鲁木齐 830054）摘要：苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia lyase ，PAL ）是苯丙烷代谢的关键酶和限速酶，在植物的生长发育、抗病虫害和抗逆等方面发挥着重要作用。

研究在全基因组水平上对棉花PAL 基因家族进行了鉴定和分析，以了解棉花中PAL 的功能，为后续深入研究棉花PAL 功能提供一定参考。

结果表明，在陆地棉（Gossypium hir⁃sutum ）、海岛棉（Gossypium barbadense ）、草棉（Gossypium herbaceum ）和雷蒙德氏棉（Gossypium raimondii ）中分别鉴定出15、13、7、8个PAL 基因。

进化分析结果显示，棉花PAL 基因家族可分为3个亚组。

保守基序和基因结构分析显示，亲缘关系近的PAL 基因之间的保守基序组成和基因结构也十分相似。

启动子分析显示，GhPAL 基因的启动子上存在多个与非生物和生物胁迫应答以及激素信号转导相关的顺式作用元件。

组织表达模式分析表明，GhPAL 基因主要在根、茎、花丝和胚珠中高表达。

转录组和qPCR 分析显示，部分GhPAL 基因的表达量在PEG 、盐、高温、低温和碱胁迫下显著提高，其中一些GhPAL 基因能够对多种非生物胁迫作出响应。

生物胁迫转录组数据显示，GhPAL1/GhPAL5/GhPAL13的表达在大丽轮枝菌处理条件下发生显著上调。

GhPAL 基因在逆境胁迫下的表达分析结果说明，PAL 基因可能在棉花应答逆境胁迫的过程中发挥一定的功能。

苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液简介：苯丙氨酸解氨酶(L－phenylalanine ammonia-lyase ，PAL)是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。

该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，是1961年J.Koukol 在大麦中发现的，推测其分子量约为30万，这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。

在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照、病伤害、植物激素处理等会使活性显著增加。

在多数情况下，在组织中活性增加时，酶发生失活作用，这时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为这种失活是与类蛋白质物质作用有关。

Leagene 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的苯丙氨酸解氨酶。

该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。

2、加入苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液，冰浴情况下充分捣碎或研磨。

3、离心，留取上清液。

4、冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测或其他用途。

计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%注意事项：编号名称CS0366Storage 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液500ml 4℃避光使用说明书1份1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液稀释样品后重新测定。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。

苯丙氨酸解氨酶（PAL）在植物中的作用及其活性测定方法生命科学实验117篇原创内容公众号苯丙氨酸解氨酶（PAL）催化 L-苯丙氨酸解氨生成反式肉桂酸，是连接初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶，也是苯丙氨酸代谢途径的关键酶和限速酶。

莽草酸途径产生的莽草酸通过分枝酸、预苯酸经转氨作用生成苯丙氨酸，从而进入苯丙烷类代谢途径，苯丙烷类代谢可生成反式肉桂酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等中间产物，这些中间产物可进一步转化为香豆素、绿原酸，也可以形成 CoA酯，再进一步转化为木质素、黄酮、异黄酮、生物碱、苯甲酸酯糖苷等次生代谢产物。

一切含苯丙烷骨架的物质都由该代谢途径直接或间接生成。

在生物次生物质代谢中具有防紫外线伤害、抵抗病原体的侵害、保持花粉生活力及形成植物花青素等多种重要作用。

该酶在不同组织中、不同的内外因素调节下，含量水平及其基因表达的时空方式均有所不同。

1.PAL对植物生理代谢的意义植物的代谢分为初级代谢和次级代谢。

植物的次级代谢有多条途径，苯丙烷类代谢途径是其中很重要的一条。

苯丙烷类途径生成的黄酮、异黄酮、生物碱等次生代谢产物在植物的生长发育过程中起着重要的作用，所以PAL对植物的生理意义非常重大。

1.1在木质化中的作用在植物的木质化组织中含有较高的PAL活性。

用分离的百日草叶肉细胞研究了苯丙烷类代谢酶类与木质素、管状分子形成和细胞分化的关系，发现在百日草细胞分化过程中，木质素的合成及管状分子形成与PAL 活性的增加成正相关，细胞溶质中的 PAL 活性在木质化之前迅速上升，微粒体和细胞壁的 PAL 活性在木质化期间快速增加。

1.2在植物色素形成过程中的作用花色素是植物花朵、果实和叶片颜色的重要组成部分，花色素等的合成可由苯丙烷类产物反香豆酰 CoA 经过类黄酮途径生成，该过程与 PAL 密切相关。

如苋红素是中央种子目植物所特有的色素，当用白光、蓝光或红光照射尾穗苋黄化苗后，发现 PAL活性均有不同程度地上升，并有苋红素的积累。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒操作方法本试剂盒仅供研究使用。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒检测范围96T40ng/L -1200ng/L小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒使用目的本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中降钙素原（PCT）含量。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人降钙素原（PCT）水平。

用纯化的人降钙素原（PCT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素原（PCT），再与HRP标记的降钙素原（PCT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的降钙素原（PCT）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人降钙素原（PCT）浓度。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒组成小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）苯丙氨酸解氨酶（PAL）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被苯丙氨酸解氨酶（PAL）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.植物萃取液或其它相关样本：请1000x g离心20分钟，取上清即可检测。

4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1、2、4、8、16U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被激素脱落酸（ABA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的激素脱落酸（ABA）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.植物萃取液或其它相关样本：请1000x g离心20分钟，取上清即可检测。

4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

PAL 苯丙氨酸解氨酶所使用的缓冲液——硼酸盐缓冲液首先配制0.2 Mol/L硼酸和0.05 Mol/L 硼砂。

然后再根据不同的pH值，再配制成0.2Mol/L 的硼酸缓冲液。

具体如下所示：1．硼酸（Ｈ3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。

不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH 0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.4 1.0 9.07.6 1.5 8.58.4 4.5 5.57.8 2.0 8.08.2 3.5 6.58.7 6.0 4.08.0 3.0 7.09.0 8.0 2.0pAL的提取与活性的测定按照Lister等的方法[0·2 M硼酸盐缓冲液(pH8·8), 0·018 Mβ-巯基乙醇], 0·1 g PVPP(以去除酚类物质对颜色的干扰),加少量石英砂,于-20℃预冷的研钵中冰浴研磨, 4层纱布过滤.滤液经4℃, 15 000 g离心20 min,取上清液作为粗酶液,用于PAL活性测定:取1 mL粗酶液加2 mL蒸馏水再加1 mL反应底物(0·02 M的L-苯丙氨酸),对照不加底物,加1mL蒸馏水. 34℃恒温水浴30 min,加0·5 mL 35%的三氯乙酸(TCA)终止反应. 12 000 g离心10 min去除变性蛋白,于290 nm波长处测定吸光度.以1 mL反应液每小时在290 nm处吸光度变化0·01为1个酶活单位,用U表示[20].以上实验操作重复3次,每次操作设3个重复。

苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定一、目的掌握纯化酶的基本操作和方法；学习一种常用的酶活力测定法。

二、原理苯丙氨酸解氨酶（l-phenylalanine：ammonialyase,缩写pal；ec4.3.1.5）就是植物体内苯丙烷类新陈代谢的关键酶，与一些关键的次生物质例如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等制备紧密有关，在植物正常生长发育和抵挡病菌侵犯过程中起至关键促进作用。

pal催化剂l-苯丙氨酸水解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处为最小稀释值。

若酶的重新加入量适度，a290增高的速率可以在几小时内维持维持不变，因此通过测量a290增高的速率以测量pal活力。

规定1h内a290减少0.ol为pal的一个活力单位。

三、试剂和材料(1)0.lmol硼酸一硼砂缓冲液(ph8.7)(2)酶提取液0.1mol/i硼酸一硼砂缓冲液（含1mmol/i,edta,20mmol/lβ一巯基乙醇）（3）0.6m.ol/i-l一苯丙氨酸溶液（4）6mol/lhcl(5）固体硫酸铵(6）0.02mol/l-磷酸盐缓冲液（ph8.0,含0.5mmol/ledta,2.5%甘油，20nlmol/l.β-巯基乙醇）（7）sephadexg一25（8）deae纤维素52（9）标准蛋白质溶液（100ug/ml）：精确称取10mg牛血清自蛋自于烧杯内，用蒸馏水熔化，全然迁移至100ml容量瓶内，定容至刻度，搅匀。

（10）托福马斯亮蓝g-250蛋白质染色液：称取10mg托福马斯亮蓝g-250,溶5ml95`%乙醇中，重新加入85％（w/v）磷酸loml，搅匀后即为母液。

用时，按15ml母液提85m1蒸馏水的比例吸收，搅匀后过滤器即为为稀释液。

（11）滴管(l2)木患夹材料：供试植物材料四、操作步骤（1）酶液抽取植物材料lg，剪大段，重新加入5倍体积的酶提取液，于冰浴上研钵研磨。

(2)将已匀浆的酶液用三层纱布过滤。

滤液转入离心管，10000g冷冻离心30分钟。

苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4457规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶4℃保存试剂一液体15mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2瓶4℃保存试剂三液体1mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用，4℃可保存2周。

产品说明：PAL（EC4.315）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，在动物体内尚未发现。

与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

10000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、操作表：（在EP管或96孔板中按顺序加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管空白管样本5试剂一145150试剂二4040混匀，30℃准确反应30min试剂三1010混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。

苯丙氨酸检测试剂盒（细菌抑制法）说明书【产品名称】通用名称：英文名称：【包装规格】【预期用途】【检验原理】【主要组成成分】【储存条件及有效期】【适用机型】【样本要求】【检验方法】【参考值（参考范围）】【检验结果的解释】【检验方法的局限性】【产品性能指标】【注意事项】【参考文献】【生产企业】【医疗器械生产企业许可证编号】【医疗器械注册证书编号】【产品标准编号】【说明书批准及修改日期】【产品名称】通用名：苯丙氨酸检测试剂盒（细菌抑制法） 英文名称： Phenylalanine Kit （BIA ）【包装规格】96人份/盒【预期用途】用于检测采集在S&S 903# 滤纸上的新生儿血样品中苯丙氨酸的含量。

适用于新生儿苯丙酮尿症（PKU ）的筛查，仅用于体外检测。

苯丙酮尿症（简称PKU ）是一种较常见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约1/10,000。

本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可因辅酶因子BH 4缺陷引起。

这些缺陷致使苯丙氨酸不能被转化为酪氨酸，导致大量的苯丙氨酸及其代谢产物在体内堆积，引起中枢神经系统损害。

其临床主要表现为：发育迟缓，毛发、皮肤及虹膜变浅，癫痫，进行性智力低下等。

由于本病的早期发现早期治疗，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。

检测方法还有荧光法、酶法等。

【检验原理】枯草杆菌在含有抑制剂的培养基中生长受到抑制，而当外界提供苯丙氨酸环境时，抑制作用解除，枯草杆菌即可恢复生长且细菌生长环的直径与苯丙氨酸的含量呈正比。

所以在制备好的培养基上，放上滤纸干血片，血中的苯丙氨酸会扩散到周围培养基中，被抑制的枯草杆菌即可恢复生长。

用被检样品的菌环直径与标准品的菌环直径相比，得出样品中苯丙氨酸的含量。

【主要组成成分】苯丙氨酸筛查试剂盒（细菌抑制法）组成表名称96人份/盒 包装琼脂糖粉 （琼脂粉、葡萄糖粉） 1.5g/瓶 无色透明玻璃瓶营养液（氨基酸、磷酸盐缓冲液等） 10ml/瓶 青霉素酶（青霉素酶、生理盐水） 0.3ml/瓶 抑制剂（β-2-噻吩丙氨酸） 1.0ml/瓶 菌株孢子悬液（枯草杆菌） 0.2ml/瓶 一次性培养皿（透明聚苯乙烯） 1块无色透明塑料袋 标准血片 2;4;8;20mg/dl(全血、苯丙氨酸) 1份 质控血片C1、C2(全血、苯丙氨酸) 1份 说明书1份注*：标准品或质控品的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。

植物生理指标1、 植物酶液提取：1) PVPP 固体,PVP 单体与金属元素结合)酚类吸附剂，酚的羟基与蛋白质的羰基形成氢键，醌导致蛋白质聚合。

或 polyclarAT ( Polyclar-AT isin soluble PVP, also called as PVPP(PolyVi nyl PolyPyrrolidi ne).It binds phenols etc more efficiently than PVP and is easily removable by filtrati on or a low speed spi n ) 去除酚的毒害防止醌颜色干扰。

PVP 的肽键中的氧与酚羟基上的质子牢固结合，防止酚与酶 中肽键结合，保护了酶。

2) 母液制备：0.1mol/L 二硫苏糖醇DTT: 100mg 至微量离心管，+650ul 水0.5mo/L EDTA : 93gEDTANa,10g NaOH,定容至U 500ml 10mg/mlBSA : 100mgBSA 于 9.5ml 水中2、 可溶性总糖测定(蒽酮比色法)(1) 原理：糖+硫酸一糠醛，其与蒽酮形成绿色络合物， 620nm 下显色。

本实 验采用浓硫酸，倒入水中产生大量热，促进反应发生。

(2) 标准曲线绘制：取略大于 0.01g 的葡萄糖，105度烘干至恒重，取0.01g 定容至100ml ，配成100ug/ml 的溶液。

取200mg 蒽酮，溶于100ml 浓硫 酸，冷却，保存于棕色瓶。

(注意：不需定容，量取100ml 硫酸倒入烧杯 即可，定容混匀时产气热溅出。

注意硫酸中是否存在杂质。

蒽酮非常敏感， 不能用勺等挖取，只能直接倒，否则就会污染。

溶液配后呈亮黄色，放置 顷刻不变色。

)总体积9ml ，快摇2-3s ，室温冷却10-15min ,显色，620nm.实验结果：实际上并不理想，因abs 均偏低，可试将标糖浓度适当升高葡萄糖含量ug 20 40 60 80 100abs 0.09 0.169 0.259 0.332 0.42720070830可溶性糖标准曲线葡萄糖浓度*系列1——线性(系列1)3、电导率（DDS-11A）1）接通电源前观察表若有偏差调节表头下方凹孔，使其恰指零2）接通电源，仪器预热10分钟。