三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

两种组织脱钙法对免疫组织化学染色影响比较杜娟;柳剑英;苏静【期刊名称】《北京大学学报（医学版）》【年(卷),期】2011(043)002【摘要】Objective : To investigate the effects of 1％ hydrochloric acid and 10％ nitric acid on immunohistochemical staining for several antigens. Methods: Fifteen cases of focally calcified soft tumors including three cases of thyroid papillary carcinoma, three of breast invasive ductal carcinoma, three of prostate cancer, three of colon adenocarcmcoma and three of normal lymph nodes, were selected in this study, and so were mne cases of bone and bone marrow tissue from biopsy and autopsy. Tissue samples were divided into three groups. One group was each soaked into 10％nitric acid for 24, 42 and 48 h, another group was each incubated in 1％hydrochloric acid for 1. 2 and 3 h. The other group which was not treated with acid was regarded as control. Then immunohistochemical staining was conducted in these samples for antigens as follows: ER, PR and Ki-67 in breast invasive ductal carcmoma; TTF-1 in thyroid papillary carcmoma; 34βE12 and P504s in prostate cancer; AE1/AE3 , P504s and Ki-67 in colon adenocarcincoma; CD3 , CD20 and Ki-67 in lymph nodes; CD3 ,CD20 , CD68 , CD235a, MPO, Ki-67 , AE1/ AE3 and TTF-1 in bone tissue. Results : After the tissues decalcificated in both acid solutions for some time, the numbers of positive cells decreased and the intensity of immunostainingbecame weaker, which was proportionate to time. Bone tissue was less influenced than calcified soft tissue. Different antigens showed different sensitivity to the same acid treatment. TTF-1 and Ki-67 were the two most vulnerable antigens among them; while ER, CD3 and CD20 were the least influenced. The effects of decalcification on immunostaining of one antigen were the same in different tissues. Conclusion: In most cases, both hydrochloric acid and nitric acid decalcification can lower the sensitivity of immunohistochemical staining, but have different effects on different antigens. It is better to use 10％ nitric acid for decalcification of relatively large bone tissue and to use 1％ hydrochloric acid for bone marrow tissues and bone tissues containing much more soft tissue.%目的:了解1%(体积分数)盐酸和10%(体积分数)硝酸脱钙液对多种抗原免疫组织化学染色效果的影响.方法:选择伴有灶状钙化的软组织标本包括甲状腺乳头状癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和淋巴结各3例,骨组织标本包括活检和尸检病例共9例,将样本分为3组,一组分别用10%(体积分数)硝酸处理24、42和48 h,另一组分别用1%(体积分数)盐酸处理1、2和3 h,还有一组不用酸处理作为对照组,同时进行多种抗原免疫组织化学染色,其中乳腺癌组织作ER、PR和Ki-67染色,甲状腺癌组织作TTF-1染色,前列腺癌作34βE12和P504s染色,结肠癌作AE1/AE3、P504s和Ki-67染色,淋巴结作CD3、CD20和Ki-67染色,骨组织作CD3、CD20、CD68、CD235a、MPO、Ki-67、AE1/AE3和TTF-1染色.结果:伴有钙化的软组织和骨组织内多种抗原免疫组织化学染色阳性程度均随酸处理时间的延长而有不同程度的下降,骨组织对酸处理的耐受力比软组织强;不同抗原对酸处理的敏感性不同,TTF-1和Ki-67最为敏感,ER、CD3、和CD20耐受性较好.结论:大多数情况下,盐酸和硝酸处理都会降低组织免疫组织化学染色的敏感性,但是对不同抗原的影响程度不同.大块骨组织可以采用10%(体积分数)硝酸脱钙,软组织比例较高的骨组织和骨髓活检组织尽可能使用1%(体积分数)盐酸脱钙.【总页数】5页(P290-294)【作者】杜娟;柳剑英;苏静【作者单位】北京大学基础医学院病理学系,北京,100191;北京大学基础医学院病理学系,北京,100191;北京大学基础医学院病理学系,北京,100191【正文语种】中文【中图分类】R36-33【相关文献】1.光波-微波-硝酸快速脱钙技术对骨组织免疫组织化学染色的影响 [J], 熊正文;李德炳;冯骥良;黄勇;苏红;胡海霞;李宏伟2.不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响 [J], 熊正文;李德炳;冯骥良;黄勇;李宏伟;苏红;胡海霞3.不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响 [J], 熊正文;李德炳;冯骥良;黄勇;李宏伟;苏红;胡海霞4.不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响浅析 [J], 朱淑玲;武彤彤;吴惠如;杨清绪5.骨组织的快速脱钙与免疫组织化学染色技术应用 [J], 熊正文;彭东长;朱光君;安赵栓;李春光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响浅析摘要目的分析不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学（免疫组化）染色抗原性的影响。

方法用8%硝酸分别于微波、光波及光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ的条件下对骨组织进行脱钙，并将室温（20℃）条件下脱钙的骨组织作为对照组，运用链霉菌素卵白素-生物素（LSAB）免疫组化染色技术，并对其染色效果进行分析比较。

结果微波、光波、光波+微波组合Ⅰ及光波+微波组合Ⅱ的脱钙时间显著低于对照组，且免疫组化染色效果显著优于对照组（P＜0.05）；光波+微波组合的免疫组化染色效果显著优于微波、光波（P＜0.05）；但微波与光波之间、光波+微波组合Ⅰ与光波+微波组合Ⅱ之间的免疫组化染色效果比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

结论光波+微波组合脱钙时间要明显短于微波、光波及室温脱钙，且具有良好的免疫组化染色效果。

关键词脱钙条件；骨组织；免疫组织化学染色；抗原性【Abstract】Objective To analyze influence by different decalcification conditions on bone tissue antigenicity in immunohistochemical staining. Methods Decalcification was made through 8% nitric acid under microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱin bone tissue. Decalcification under room temperature （20℃）was taken as control group. Labelled streptavidin biotin method （LSAB）immunohistochemical staining was applied to analyze and compare stain effects. Results Decalcification time under microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱwere all shorter than control group，and their immunohistochemical staining effects were all better than control group （P＜0.05）. Light wave + microwave had better immunohistochemical staining effects than single microwave or light wave （P ＜0.05）. There was no statistically significant difference of immunohistochemical staining effects across microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱ（P>0.05）. Conclusion Light wave + microwave provides shorter decalcification time than microwave，light wave and room temperature，and it contains good immunohistochemical staining effect.【Key words】Decalcification condition；Bone tissue；Immunohistochemical staining；Antigenicity目前，免疫組化染色技术是临床病理鉴别及诊断的重要手段，骨组织由于含有丰富的钙盐，因此其免疫组织化学染色自然与常规石蜡切片有所区别，通常需要先去除钙盐后才可制成比较薄的切片，然后再进行常规脱水、透明处理等操作[1]。

不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用【摘要】目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对HE染色的影响。

方法选取50例手术切除的新鲜骨标本，运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙，比较其脱钙效果和对HE染色的影响。

结果不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。

结论14%硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差；10%盐酸对骨组织的损伤小，HE染色的效果最好，但用时较长；20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间；EDTA脱钙液脱钙用时最长, 对骨组织的损伤最小。

【Abstract】Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry. Methods 50 cases of fresh human bone example are selected. The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution (including 14% nitric acid, 10% hydrochloric acid, 20% a hydrochloric acid and EDTA). Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry. Conclusion 14% nitric acid can decalcify strongly and rapidly. But its deficiency is the infection of HE coloration and immunohistochemistry. 10% hydrochloric acid doesn’t destroy the tissue and has the best influence for HE stain. The effect of 20% a hydrochloric acid and HE stain between 10% hydrochloric acid and EDTA decalcifying acid. EDTA can decalcify for a long , have the minimum damage for bone tissue.【Key words】Decalcifying solution; HE stain; Bone tissue骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成，骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者：张大贵等来源：《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨免疫组化结果的影响沈溪明;何欣欣;吴东霞;陈耿标;王林【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(030)006【总页数】3页(P696-698)【关键词】EDTA;脱钙液;下颌骨;免疫组织化学【作者】沈溪明;何欣欣;吴东霞;陈耿标;王林【作者单位】中山大学附属第二医院病理科,广州510120;中山大学附属第二医院病理科,广州510120;中山大学附属第二医院病理科,广州510120;中山大学附属第二医院病理科,广州510120;中山大学附属第二医院病理科,广州510120【正文语种】中文【中图分类】R446.6传统骨组织脱钙常采用酸性液体，但易导致组织结构难以保持完整，影响病理学进一步诊断。

骨组织用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为脱钙液进行脱钙，能使骨组织中的蛋白抗原保持完好，组织细胞结构保持完整清晰。

已有大量文献报道肯定了EDTA脱钙液的作用，但对EDTA脱钙液的适宜浓度和pH值报道不一［1，2］。

本文旨在探讨不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨组织HE形态和免疫组化结果的影响。

1.1 材料随机选取25例中山大学附属第二医院病理科下颌骨标本，常规经10%中性福尔马林固定24 h。

随机分为5组:10%EDTA(pH 9.01)为A组，15%EDTA(pH 11.0)为B组，10%EDTA(pH 11.0)为C组，15%EDTA(pH 9.01)为D组，14%硝酸脱钙液为硝酸组，组织标本组切割为1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm 大小。

1.2 脱钙液的配制使用100 ml双蒸水将10 g EDTA配成浓度为10%EDTA，双蒸水100 ml+15 g EDTA配成浓度15%EDTA，分别加入 1 mmol/L NaOH 和 1 mmol/L HCl，将pH调至9.01和11.0。

14%硝酸脱钙液:86 ml双蒸水+14 ml 浓硝酸。

三种脱钙液对大鼠股骨切片染色效果的对比马新峰（河南医学高等专科学校，河南　郑州　450003）【摘要】目的：不同脱钙液对大鼠股骨组织脱钙效果的比较，找出一种较为适宜制作骨组织切片的脱钙液。

方法取成年健康大鼠股骨做为标本，采用plsnk-Rychlo脱钙液、EDTA脱钙液及改良的硝酸脱钙液脱钙后进行常规HE制片染色比较。

结果改良的硝酸脱钙液脱钙时间短，常规制片效果优良，更适用于一般实验室。

【关键词】　脱钙液骨组织 HE染色【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-4808（2020）09-042-02骨组织是机体最坚硬的组织，由骨质和骨细胞组成，骨质内的无机成分为骨盐即羟基磷灰石结晶,使骨组织十分坚硬[1]。

骨盐的存在对教学科研及临床病理等制作骨组织切片带来较大困难，在此笔者选取组织技术界较为普遍使用的三种脱钙液，对大鼠股骨进行脱钙处理、切片、HE染色，并对染色效果进行比较，旨在找出一种脱钙时间短、制片效果好的脱钙液。

1.材料与方法1.1材料,取成年健康大鼠股骨9根，浸入10%的福尔马林固定液固定5天以上，在相同生理部位取0.5cm的横断共9枚组织块。

1.2 三种脱钙液的配制,A液：（改良的硝酸脱钙液）：硝酸10ml、冰醋酸20ml、甲酸50 ml、蒸馏水70ml、甲醛10ml,B液：（plsnk-Rychlo脱钙液）：氯化铝7g、盐酸8.5ml、甲酸5ml、加蒸馏水至100ml,C液（EDTA脱钙液）：二胺四醋酸二钠200g、蒸馏水2000ml、加NaOH充分搅拌溶解后将pH值调至7.3～7.51.3仪器,型号78-7隔水式电恒温溶蜡箱、QPJ-1轮转式切片机、GNP型隔水式恒温烤片箱、BMF-1生物组织包埋机、BCD-191ckaz冰箱1.4 脱钙方法,将9枚骨组织块均等份置入三种盛有100ml脱钙液的200ml 烧杯中，12h换一次脱钙液，直至完成脱钙。

1.5 脱钙完成判断标准,物理检测法，大头针无阻力刺入组织深部为脱钙完成的标志。

脱钙液在微波辐射下对骨组织作用效果及免疫组织化学染色的影响中华病理学杂志/990220 骨组织脱钙常规多采用酸性液体(如硝酸、盐酸、甲酸等)进行脱钙，一般需较长时间，组织细胞结构很难保持完整清晰，有些甚至破坏组织结构很严重，从而影响病理学的诊断和研究。

骨组织中的蛋白抗原得不到很好的保存，有时甚至丢失。

为此我们对9例骨组织用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为脱钙液，利用微波辐射脱钙[1，2]并进行免疫组织化学方法定位，观察骨组织结构改变和蛋白抗原保存情况，得到较满意的结果。

一、材料与方法1.材料：9例骨组织为我科活检标本(骨肉瘤3例，肋骨2例，胫骨2例，股骨2例)，其组织大小为1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm；微波炉为浙江临安生产的YWY781B型；EDTA为进口分装，购于北京化学试剂公司；免疫组化试剂为福州迈新生物技术开发公司赠。

2.脱钙液配制：A液：EDTA10 g，PBS缓冲液(pH 7.2)100 ml，加NaOH搅拌溶解后，用1 mol/L HCl调pH至7.2，再加甲醛15 ml。

B液：甲酸15 ml，甲醛10 ml，蒸馏水75 ml。

C液：硝酸5 ml，甲醛10 ml，蒸馏水85 ml。

D液：甲酸10 ml，硝酸3 ml，盐酸5 ml，冰醋酸2 ml，甲醛10 ml，蒸馏水70 ml。

3.脱钙方法：本实验9例骨组织各分两组，即微波脱钙组和室温脱钙组。

微波组：将骨组织放入平底小烧杯内，分别装有上述各种脱钙液，表面加一层液体石蜡[3]，以微波4档间歇脱钙，每次辐射1分钟，每次辐射之间都将烧杯移至室温冷却5分钟，以保证每次的微波辐射脱钙液的温度不至于太高。

室温组：每隔4小时更换一次脱钙液。

以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。

4.免疫组织化学方法：组织脱钙后经常规组织处理切片，枸橼酸微波恢复抗原后，应用SP法进行免疫组织化学反应[4]，检测骨组织中骨形成蛋白(BMP单抗)和波形蛋白(Vimentin单抗)。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。