不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨免疫组化结果的影响

不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响浅析摘要目的分析不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学（免疫组化）染色抗原性的影响。

方法用8%硝酸分别于微波、光波及光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ的条件下对骨组织进行脱钙，并将室温（20℃）条件下脱钙的骨组织作为对照组，运用链霉菌素卵白素-生物素（LSAB）免疫组化染色技术，并对其染色效果进行分析比较。

结果微波、光波、光波+微波组合Ⅰ及光波+微波组合Ⅱ的脱钙时间显著低于对照组，且免疫组化染色效果显著优于对照组（P＜0.05）；光波+微波组合的免疫组化染色效果显著优于微波、光波（P＜0.05）；但微波与光波之间、光波+微波组合Ⅰ与光波+微波组合Ⅱ之间的免疫组化染色效果比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

结论光波+微波组合脱钙时间要明显短于微波、光波及室温脱钙，且具有良好的免疫组化染色效果。

关键词脱钙条件；骨组织；免疫组织化学染色；抗原性【Abstract】Objective To analyze influence by different decalcification conditions on bone tissue antigenicity in immunohistochemical staining. Methods Decalcification was made through 8% nitric acid under microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱin bone tissue. Decalcification under room temperature （20℃）was taken as control group. Labelled streptavidin biotin method （LSAB）immunohistochemical staining was applied to analyze and compare stain effects. Results Decalcification time under microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱwere all shorter than control group，and their immunohistochemical staining effects were all better than control group （P＜0.05）. Light wave + microwave had better immunohistochemical staining effects than single microwave or light wave （P ＜0.05）. There was no statistically significant difference of immunohistochemical staining effects across microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱ（P>0.05）. Conclusion Light wave + microwave provides shorter decalcification time than microwave，light wave and room temperature，and it contains good immunohistochemical staining effect.【Key words】Decalcification condition；Bone tissue；Immunohistochemical staining；Antigenicity目前，免疫組化染色技术是临床病理鉴别及诊断的重要手段，骨组织由于含有丰富的钙盐，因此其免疫组织化学染色自然与常规石蜡切片有所区别，通常需要先去除钙盐后才可制成比较薄的切片，然后再进行常规脱水、透明处理等操作[1]。

不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨免疫组化结果的影响沈溪明;何欣欣;吴东霞;陈耿标;王林【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(30)6【摘要】传统骨组织脱钙常采用酸性液体，但易导致组织结构难以保持完整，影响病理学进一步诊断。

骨组织用乙二胺四乙酸二钠（EDTA）作为脱钙液进行脱钙，能使骨组织中的蛋白抗原保持完好，组织细胞结构保持完整清晰。

已有大量文献报道肯定了EDTA脱钙液的作用，但对EDTA脱钙液的适宜浓度和pH值报道不一。

本文旨在探讨不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨组织HE形态和免疫组化结果的影响。

【总页数】3页(P696-698)【作者】沈溪明;何欣欣;吴东霞;陈耿标;王林【作者单位】中山大学附属第二医院病理科,广州510120;中山大学附属第二医院病理科,广州510120;中山大学附属第二医院病理科,广州510120;中山大学附属第二医院病理科,广州510120;中山大学附属第二医院病理科,广州510120【正文语种】中文【中图分类】R446.6【相关文献】1.四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响 [J], 李锐;金玉兰;韩一丁;刘红刚2.固定液及抗原修复液pH值对免疫组化染色的影响 [J], 杨京平;张燕;钟延丰;郑杰3.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣4.两种盐酸脱钙液对骨髓HE及免疫组化染色的影响 [J], 李锐;金玉兰;杨冬梅;岳常丽;马志红;刘红刚5.微波对不同浓度EDTA骨脱钙的影响 [J], 曾跃琴;李芳华;张天娥;陈继兰;秦健因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用【摘要】目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对HE染色的影响。

方法选取50例手术切除的新鲜骨标本，运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙，比较其脱钙效果和对HE染色的影响。

结果不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。

结论14%硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差；10%盐酸对骨组织的损伤小，HE染色的效果最好，但用时较长；20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间；EDTA脱钙液脱钙用时最长, 对骨组织的损伤最小。

【Abstract】Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry. Methods 50 cases of fresh human bone example are selected. The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution (including 14% nitric acid, 10% hydrochloric acid, 20% a hydrochloric acid and EDTA). Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry. Conclusion 14% nitric acid can decalcify strongly and rapidly. But its deficiency is the infection of HE coloration and immunohistochemistry. 10% hydrochloric acid doesn’t destroy the tissue and has the best influence for HE stain. The effect of 20% a hydrochloric acid and HE stain between 10% hydrochloric acid and EDTA decalcifying acid. EDTA can decalcify for a long , have the minimum damage for bone tissue.【Key words】Decalcifying solution; HE stain; Bone tissue骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成，骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者：张大贵等来源：《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响【摘要】目的探讨不同脱钙液对牙齿牙周联合切片HE染色质量的影响。

方法选用10%乙二胺四乙酸钠(EDTA)、复合酸(Plank-Rychlo脱钙液)和5%硝酸3种不同的脱钙液,分成A、B、C 3组用于犬和大鼠牙齿牙周组织联合石蜡切片脱钙,通过记录脱钙时间,观察HE染色效果,评价室温下(20℃～28℃)不同脱钙液对切片制作的影响。

结果A组脱钙液所制切片染色效果良好,但脱钙速度缓慢,所需时间较长;B组脱钙液脱钙速度快,所制切片染色好;C组脱钙液所制切片的染色强度和对比度均不如前两种脱钙液。

结论在制作牙齿牙周联合切片时,EDTA 脱钙液和Plank-Rychlo脱钙液所制切片均能取得良好的染色效果,但EDTA脱钙液脱钙周期过长;Plank-Rychlo脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合于临床速检工作;硝酸脱钙液组染色效果较差。

【关键词】脱钙;牙齿;牙周组织;石蜡切片;HE染色【Abstract】Objective To investigate the effect of different decalcifying fluid on HE color of teeth and periodontal tissue united sections.Methods 10%EDTA decalcifying fluid, mixed acid(Plank-Rychlo)and 5% nitric acid were divided into three groups: group A, group B and Group C, which were used to decalcify the united paraffin sections of tooth and periodontal tissue from dogs and rats. The effect of three kinds of decalcifying fluid on manufacture of united sections was evaluated at room temperature(20℃~28℃)by decalcification time and HE staining quality.Results Group A had a good effect of HE staining, but its decalcification time was too long. Group B had either high speed decalcification or high staining quality.Group C was the last choice with the regard of poor staining intensity and contrast.ConclusionEDTA decalcifying fluid and Plank-Rychlo decalcifying fluid can get a favorable staining effect, but has a long decalcification period,Plank-Rychlo decalcifying fluid is more suited to clinical quick examination due to well-distributed and high speed decalcification. Nitric acid decalcifying fluid has a poor staining effect.【Key words】Decalcification;Tooth;Periodontal tissue;Paraffin section;Hematoxylin/eosin staining在涉及口腔组织病理的研究中,需要制作牙齿牙周组织联合切片进行诊断、观察和对比分析,但由于牙齿是全身硬度最高的组织,特别是牙釉质,其无机物成分羟基磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2] 含量占97%,硬度与石英相似;牙本质、牙骨质及牙槽骨坚硬致密、易碎难切,而牙髓、牙龈、牙周膜等软组织在切片过程中易受挤压、牵拉、分离变形甚至脱落。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响张大贵;林小芳;张普;周婵萍【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2012(50)24【摘要】目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响.方法选择12例骨组织,随机分为3组.A组用14％硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色.结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大.PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好.结论室温条件下,三种脱钙液巾PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好.但南于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查.硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差.【总页数】3页(P101-103)【作者】张大贵;林小芳;张普;周婵萍【作者单位】温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院泌尿外科,浙江温州 325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000【正文语种】中文【中图分类】R446.4+1【相关文献】1.三种脱钙液对免疫组化染色效果的比较 [J], 孙庆妹;刘军2.三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析 [J], 连丽琴;夏凌志;钟惠霞3.四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响 [J], 李锐;金玉兰;韩一丁;刘红刚4.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣5.八种脱钙液对骨组织制片后HE染色质量影响的实践探究 [J], 方皓;云杰苗;王雄;袁滋铎;林俞辰;陶子春;薛逢贵;胡爱华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣【摘要】目的比较不同脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异,探讨其对HE染色的影响.方法选取16例大鼠胫骨标本,运用两种常用的脱钙液(混合脱钙液和EDTA脱钙液)进行脱钙,比较其脱钙效果和对HE染色的影响.结果两种脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别.结论混合脱钙液时间最短,但切片和染色效果最差;EDTA脱钙液对骨组织损伤小,HE染色效果最好,但用时较长.【期刊名称】《医学信息》【年(卷),期】2017(030)026【总页数】2页(P180-181)【关键词】混合脱钙液;EDTA脱钙液;HE染色【作者】吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣【作者单位】第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;中国人民解放军天津疗养院,天津 300381;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032【正文语种】中文【中图分类】R361骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成。

骨基质内含大量无机盐，质地坚硬，不能直接进行石蜡或冷冻切片，因此在制作病理切片过程中，常常需要经过脱钙处理，才能进行切染色[1]。

试验中脱钙过度或不足会影响染色效果，严重影响结果的判读，因此，脱钙时间和脱钙液的选择十分重要。

为了更好地了解脱钙技术对骨组织切片HE染色结果的影响，本文重点对比SD大鼠胫骨上段骨组织通过两种不同脱钙液的脱钙以及HE染色效果进行对比，现报告如下。

标本为第四军医大学西京医院骨科动物实验中心提供的大鼠8只。

取双侧胫骨上端16例标本，长约0.8 cm，用纱布包好随机标记为A组和B组，在10%中性福尔马林固定3 d，投入脱钙液中，A组为EDTA脱钙液，B组为混合脱钙液。

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两种EDTA脱钙方法的比较
作者：李喜红杨海新张睿
来源：《中国实用医药》2013年第10期
【摘要】目的寻求切片制作更容易、染色效果更好的脱钙方法。

方法对兔下颌骨分别使用15%EDTA微波脱钙法及15%EDTA低温脱钙法进行脱钙，从切片制作、免疫组化染色等方面进行比较。

结果以15%EDTA低温脱钙法对兔下颌骨进行脱钙后，制作切片时脱片率明显降低，染色效果更好。

结论以科学实验为目的对骨组织进行脱钙时，选用15%EDTA低温脱钙法能取得更准确的实验结果。

【关键词】骨；脱钙 EDTA
作者单位：45000郑州市口腔医院口腔颌面外科骨由骨组织、骨膜及骨髓等构成。

骨组织是一种坚硬的有一定韧性的结缔组织，它由大量钙化的细胞间质及数种细胞组成，钙化的细胞间质即称为骨基质。

骨基质由有机成分和无机成分构成，含水极少，骨基质中的有机成分由成骨细胞分泌形成，包括大量的胶原纤维（占有机成分的95%）及少量无定形基质，无机成分又称为骨盐，主要为羟磷灰石结晶（Ca10（PO4）6（OH）2），骨基质的有机成分和无机成分紧密结合使骨十分坚硬，不能之间制成切片。

脱钙液在微波辐射下对骨组织作用效果及免疫组织化学染色的影响中华病理学杂志/990220 骨组织脱钙常规多采用酸性液体(如硝酸、盐酸、甲酸等)进行脱钙，一般需较长时间，组织细胞结构很难保持完整清晰，有些甚至破坏组织结构很严重，从而影响病理学的诊断和研究。

骨组织中的蛋白抗原得不到很好的保存，有时甚至丢失。

为此我们对9例骨组织用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为脱钙液，利用微波辐射脱钙[1，2]并进行免疫组织化学方法定位，观察骨组织结构改变和蛋白抗原保存情况，得到较满意的结果。

一、材料与方法1.材料：9例骨组织为我科活检标本(骨肉瘤3例，肋骨2例，胫骨2例，股骨2例)，其组织大小为1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm；微波炉为浙江临安生产的YWY781B型；EDTA为进口分装，购于北京化学试剂公司；免疫组化试剂为福州迈新生物技术开发公司赠。

2.脱钙液配制：A液：EDTA10 g，PBS缓冲液(pH 7.2)100 ml，加NaOH搅拌溶解后，用1 mol/L HCl调pH至7.2，再加甲醛15 ml。

B液：甲酸15 ml，甲醛10 ml，蒸馏水75 ml。

C液：硝酸5 ml，甲醛10 ml，蒸馏水85 ml。

D液：甲酸10 ml，硝酸3 ml，盐酸5 ml，冰醋酸2 ml，甲醛10 ml，蒸馏水70 ml。

3.脱钙方法：本实验9例骨组织各分两组，即微波脱钙组和室温脱钙组。

微波组：将骨组织放入平底小烧杯内，分别装有上述各种脱钙液，表面加一层液体石蜡[3]，以微波4档间歇脱钙，每次辐射1分钟，每次辐射之间都将烧杯移至室温冷却5分钟，以保证每次的微波辐射脱钙液的温度不至于太高。

室温组：每隔4小时更换一次脱钙液。

以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。

4.免疫组织化学方法：组织脱钙后经常规组织处理切片，枸橼酸微波恢复抗原后，应用SP法进行免疫组织化学反应[4]，检测骨组织中骨形成蛋白(BMP单抗)和波形蛋白(Vimentin单抗)。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。

四种脱钙方法对牙齿脱钙及免疫组化染色的影响的开题报
告
开题报告：
一、研究背景
牙齿脱钙是口腔常见的疾病之一，常见于儿童和青少年。

脱钙后的牙齿质地变得柔软，容易受到施加在牙齿上的压力而发生龋齿，从而导致牙齿疼痛，咀嚼困难，影响正常生活。

目前，常用的脱钙修复方法有四种，分别为激光治疗、光固化树脂修复、氟化物治疗、微生物治疗。

然而，对于不同方法的优缺点，还需进一步研究。

二、研究目的
本研究旨在通过实验研究四种脱钙修复方法（激光治疗、光固化树脂修复、氟化物治疗、微生物治疗）对牙齿脱钙的影响，并比较它们对牙齿免疫组化染色的差异，以寻找最佳的脱钙修复方法。

三、研究内容
1. 实验对象：选取健康牙齿 50 个，分为 5 组，每组 10 个。

2. 实验设计：对五组牙齿分别采用不同脱钙修复方法: 激光治疗组、光固化树脂修复组、氟化物治疗组、微生物治疗组和空白对照组（未进行任何治疗），每组实验牙齿分别接受相应治疗。

3. 实验方法：
(1)检测脱钙前后实验牙齿的牙釉质硬度。

(2)比较脱钙修复后对免疫组化染色指标的影响。

(3)用SPSS软件统计数据，并进行差异性分析。

四、研究意义
本研究将对不同脱钙修复方法的优缺点进行实验比较，为口腔医学的发展提供重要的参考，从而为临床治疗牙齿脱钙提供更加科学的依据。

同时，有助于提高公众对牙齿健康保健方面的认识和了解，促进口腔医疗技术的发展。

EDTA抗原修复液高压法在免疫组化中的效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——在免疫组织化学染色中，部分抗原的修复要通过EDTA抗原修复液煮沸法进行。

笔者采用不同修复时间的高压法通过EDTA抗原修复液对抗原进行修复，并与煮沸法的修复效果进行对比，旨在探讨EDTA抗原修复液合适修复时间的高压法在免疫组化中的应用价值。

1材料与方法1.1标本来源本组标本取自2013年6月至2014年4月贵州航天医院收治的肿瘤患者20例，其中肺癌11例、前列腺癌3例、胃间质瘤2例、淋巴瘤2例、间皮瘤1例、子宫内膜间质肉瘤1例、乳腺癌1例；标本均经10%中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡包埋，切片厚为4m,且均经病理证实为抗原表达阳性的肿瘤标本。

1.2试剂和仪器（1）试剂：包括TTF-1、CK5/6、P504S、CD117、CD2、Bcl-6、CR、CD10、CD31、CEA共10种常用抗体；EDTA抗原修复液（0.01M,pH9.0）；PBS缓冲液（0.01M,PH7.4）；即用型快捷免疫组化MaxvisionTM试剂盒。

（2）仪器：包括烤箱、电热高压锅、培养箱等。

1.3修复方法（1）高压法：取EDTA抗原修复液1500ml放入电热高压锅中加热至沸腾后，将放置在耐高温塑料架上的切片放入EDTA抗原修复液中，拧紧锅盖继续加热至喷气，扣上压力阀，分别于加热2、5、7min后打开排气阀，待EDTA抗原修复液冷却至室温取出切片备用。

（2）煮沸法：取EDTA抗原修复液1500ml放入高压锅中加热至沸腾后，将切片放入EDTA抗原修复液中，盖上锅盖（锅盖不拧紧、亦不扣压力阀）继续加热20min,待EDTA抗原修复液冷却至室温取出切片备用。

1.4免疫组化染色及结果判定免疫组化染色步骤参照试剂盒操作说明进行，用PBS代替一抗作为阴性对照，每种抗体均用即用型抗体浓度进行实验。

由2位病理医师采用双盲法对标本染色结果进行评价，标本细胞呈深棕黄色者为强阳性（+++）、呈浅棕黄色为弱阳性（+）、介于二者之间者为阳性（++），无着色者为阴性（-）；阳性细胞50%为Ⅲ级、5%为I级、介于二者之间为Ⅲ级。

《中国癌症杂志》2019年第29卷第7期 CHINA ONCOLOGY 2019 Vol.29 No.7514·论　著·欢迎关注本刊公众号改良EDTA脱钙法和酸脱钙法在乳腺癌骨转移免疫组织化学中的比较研究孙　静1，袁俊清2，杨梦迪1，王智煜1，姚光宇1，周亦一1，赵　晖11.上海交通大学附属第六人民医院肿瘤内科，上海 200233；2.上海交通大学附属第六人民医院病理科，上海 200233［摘要］ 背景与目的：晚期乳腺癌骨转移发生率大于70%，对骨组织进行脱钙处理是一大技术难点。

探索乳腺癌骨转移的临床特点及更适合对骨组织进行脱钙的方法。

方法：收集2012年1月—2018年1月期间病理学诊断为乳腺癌骨转移患者的临床资料，分析临床特征；分析改良乙二胺四乙酸二钠（ethylenediaminetetraacetic acid ，EDTA ）脱钙法及酸脱钙法对骨转移组织进行处理后，骨组织形态、结构的差异；比较两组原发灶与转移灶免疫组织化学检查结果中雌激素受体（estrogen receptor ，ER ）、孕激素受体（progesterone receptor ，PR ）的一致性；分析两组骨转移组织ER 、PR 、Ki-67的阳性率；分析乳腺癌骨转移患者ER 、PR 阳性和阴性的生存差异。

结果：116例乳腺癌骨转移患者中91.4%为溶骨性骨转移，80.1%骨转移的数量为4~20，81.9%发生骨相关事件（skeletal-related event ，SRE ）。

41例为改良EDTA 脱钙，75例为酸脱钙，两组骨组织的形态结构无明显差异。

改良EDTA 脱钙组ER 一致性为95.1%，明显高于酸脱钙组（69.3%）（P <0.05）；改良EDTA 脱钙组骨组织ER 的阳性率为90.2%，明显高于酸脱钙组（73.3%）（P <0.05）；改良EDTA 组PR 的阳性率（58.5%）明显高于酸脱钙组（36.0%）（P <0.05），Ki-67增殖指数明显高于酸脱钙组（P <0.05）；骨转移组织ER +患者的平均生存时间为（41.09±4.26）个月，明显优于ER -患者［（25.81±5.71）个月］（P <0.05）。

骨髓活检组织制片中改良脱钙液的应用及常见问题分析翁丹枫【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2018(034)010【总页数】3页(P1166-1168)【关键词】骨髓活检;EDTA;制片;HE染色;免疫组织化学【作者】翁丹枫【作者单位】福建医科大学附属第一医院病理科,福州350005【正文语种】中文【中图分类】R446.8在临床病理外检工作中，骨髓组织由于含有大量的钙盐而比较坚硬，需经过脱钙处理后才能进行常规制片，脱钙不全或脱钙过度均影响骨髓HE染色及免疫组化染色效果，降低病理诊断的准确率。

作者在长期的骨髓制片工作中，摸索出一种适合骨髓组织的改良EDTA脱钙液，提高了骨髓制片质量和染色效果。

本文现就骨髓活检标本固定及取材、脱钙、制片和染色等环节进行总结，供广大同仁分析交流，共同提高骨髓活检组织制片和染色质量。

1 材料与方法1.1 材料选取福建医科大学附属第一医院病理科2016年1月～2017年8月骨髓活检穿刺标本1 000余例。

1.2 仪器及试剂 Thermo Pathcenter脱水机，Leica ST5020多功能染色机，Dako全自动免疫组化染色机；苏木精和伊红购自广州维格斯公司；二甲苯、乙醇及乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)购自上海沪试公司；CD3、CD38、CD68、CD138、MPO和Ki-67购自北京中杉金桥公司；CD20、CD42b、CD56、CD235a、Lambda购自福州迈新公司；Kappa购自Dako公司。

1.3 脱钙液配制改良EDTA脱钙液(pH 7.0)：取250 g的EDTA-2Na，溶于1 350 mL磷酸盐缓冲液中，待溶液彻底溶解后加入40%甲醛150 mL，加入氢氧化钠使溶液pH值至7.0。

1.4 HE染色及免疫组化染色送检骨髓组织经固定，3段取材后分别经盐酸甲酸混合酸脱钙液脱钙、不脱钙或改良EDTA脱钙液脱钙(图1)，脱水机脱水浸蜡(表1)，进行HE染色及免疫组化染色。

对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响发布时间：2021-04-15T05:57:28.848Z 来源：《健康世界》2021年2期作者：鞠学萍[导读] 目的对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响。

方法选取本院21例骨肿瘤患者标本开展本次研究，时间2019年01月-2020年01月，21例患者分别给予常规脱钙法（对照组）和表面脱钙法（观察组），比较两组对免疫组化抗原的影响。

结果观察组的骨松质脱钙时间、骨密质脱钙时间和光密度值均明显优于对照组（P＜0.05）；鞠学萍大庆市第四医院 163712摘要：目的对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响。

方法选取本院21例骨肿瘤患者标本开展本次研究，时间2019年01月-2020年01月，21例患者分别给予常规脱钙法（对照组）和表面脱钙法（观察组），比较两组对免疫组化抗原的影响。

结果观察组的骨松质脱钙时间、骨密质脱钙时间和光密度值均明显优于对照组（P＜0.05）；与对照组的ki-67阳性率和Vimentin阳性率相比，观察组均明显偏高（P＜0.05）。

结论相对比于常规脱钙法来说，表面脱钙法更有利于保存免疫组化抗原，脱钙效果更理想，具有推广价值。

关键词：骨组织；表面脱钙法；免疫组化抗原 [Abstract] Objective To compare the effect of surface decalcification and conventional decalcification on immunohistochemical antigen of bone tissue.Methods 21 cases of bone tumor patients in our hospital were selected to carry out this study from January 2019 to January 2020.21 cases were given conventional decalcification method（control group）and surface decalcification method（observation group），and the influence of two groups on immunohistochemical antigen was compared.Results the cancellous decalcification time，dense decalcification time and optical density value of the observation group were significantly better than those of the control group（P < 0.05）；compared with the Ki-67 positive rate and vimentin positive rate of the control group，the observation group was significantly higher（P < 0.05）.Conclusion compared with the conventional decalcification method，the surface decalcification method is more conducive to the preservation of immunohistochemical antigen，and the decalcification effect is more ideal. [Key words] bone tissue；surface decalcification；immunohistochemical antigen骨组织是人体中存在的一种非常坚硬的结缔组织，基质中存在大量钙盐是骨组织存在的最突出特点【1】。

比较四种脱钙法对人牙免疫组化染色抗原性的影响作者：陈洪伟刘英群温黎明冯晓杰李任来源：《中国美容医学》2012年第06期[摘要]目的：比较四种脱钙方法对人牙牙体组织免疫组化染色抗原活性的影响。

方法：40颗人牙随机分为四组，分别在微波、超声、微波-超声联合及常温下用10%乙二胺四乙酸二钠溶液(EDTA-2Na)脱钙。

应用SABC免疫组化染色技术检测Ⅰ型胶原蛋白、纤维粘连蛋白在各组牙体组织中的表达情况。

结果：在微波-超声联合组脱钙所需时间最短，且免疫组化染色效果最好﹙P＜0.05﹚；微波组脱钙时间较超声组略短，但二者免疫组化染色效果无显著差异（P ＞0.05）。

常温组所需脱钙时间最长且免疫组化染色效果最差。

结论：微波-超声联合法脱钙速度较快，免疫组化染色效果较好，是一种较为理想的脱钙方法。

[关键词]微波；超声；牙齿；脱钙方法；免疫组化[中图分类号]R783.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）06-0955-03牙体组织结构较为特殊，其硬组织中含有大量钙盐（洛氏硬度值达340）[1]，是全身最坚硬的组织，不易切片极易脱片，因此在病理制片过程中首先要脱去其中的钙盐再进行制片，而位于牙体硬组织中心的牙髓为柔软的结缔组织，在制片过程中易受挤压、牵拉而至变形、分离甚至脱落流失，脱钙不佳也会影响组织细胞染色效果或使组织抗原丢失[2]，从而影响对病变组织的病理诊断或科学研究工作。

因此合适的脱钙方法成为牙体组织制片，进行免疫组化染色实验首先要解决的难题。

本实验中对微波、超声、微波-超声联合脱钙法的脱钙效果，及不同脱钙方法对牙体组织免疫组化染色抗原的影响程度进行了初步检测，旨在寻找出更适合牙体组织免疫组化染色实验的脱钙方法。

1 材料和方法1.1 材料：收集因正畸拔除的健康人前磨牙40颗,患者年龄17～25岁,牙齿完好。

经生理盐水冲洗后,入4%多聚甲醛溶液固定24h。

1.2 仪器试剂：微光波炉（WG700TL20Ⅱ-k6,广东格兰仕集团有限公司）；KQ118型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Ⅰ型胶原蛋白抗体(武汉博士德公司)；纤维粘连蛋白抗体(武汉博士德公司)；SABC试剂盒(武汉博士德公司)。

EDTA浓度对流式细胞仪检测Ki67含量的影响
何丽容;冯海林;雷穗妮
【期刊名称】《现代医学仪器与应用》
【年(卷),期】2001(013)001
【摘要】@@ 乙二胺四乙酸(EDTA)可与血中钙离子结合成鳌合物,从而阻止血液凝固,我们在应用流式细胞仪检测实体肿瘤DNA和核增殖抗原Ki67时,在PBS加入适量的EDTA,可使单个细胞不易重新聚集,从而减少样品过滤过程中细胞的丢失,还可防止样品堵塞仪器.但EDTA的浓度过高是会直接使Ki67结果升高的,现检测报告如下.
【总页数】1页(P32)
【作者】何丽容;冯海林;雷穗妮
【作者单位】510060,中山医科大学肿瘤防治中心检验科;510060,中山医科大学肿瘤防治中心检验科;510060,中山医科大学肿瘤防治中心检验科
【正文语种】中文
【中图分类】TH7
【相关文献】
1.不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨免疫组化结果的影响 [J], 沈溪明;何欣欣;吴东霞;陈耿标;王林
2.L-精氨酸对大肠肿瘤细胞中Ki67、iNOS的表达及血清NO浓度的影响 [J], 惠均武;高小鹏;马清涌;王云检
3.Na2Fe-EDTA对不同浓度Cd2+胁迫平菇生长特性的影响 [J], 佘婷婷;吴映明;
生书晶;谭伟祥;陆少妃;陈晓
4.EDTA滴定法测定钙离子浓度的影响因素与优化 [J], 陈华林;冯忠琼;张枝健;马雯婧;刘军
5.EDTA浓度对流式细胞仪检测Ki67含量的影响 [J], 何丽容[1];冯海林[2];雷穗妮[3]
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