高效液相色谱法检测虾肉中硝基呋喃类药物残留毕业论文
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反相高效液相色谱(HPLC)技术及其发展页数:3
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成分检测类论文页数:20
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高效液相色谱法在分析测试中的应用页数:22
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液相色谱-串联质谱法测定小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定
0引言测量不确定度是指表征合理地赋予被测量之值的分散性与测量结果相联系的参数［1］。
《检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求》（RB/T214—2017）中要求检验检测机构应建立相应的数学模型，给出相应检测能力评定测量不确定度的案例［2］。
硝基呋喃类药物是一类广谱抗生素，广泛应用于水产养殖［3］。
硝基呋喃类药物具有遗传毒性，有可能导致基因变异，我国已于2002年颁布禁止使用硝基呋喃类抗生素的禁令。
硝基呋喃类药物原型药在动物体内虽代谢迅速，但代谢物会与蛋白质紧密结合，形成稳定的残留物。
一般判定动物源性食品中硝基呋喃类药物的残留状况都是以其硝基呋喃类代谢产物的含量作为检测依据，硝基呋喃类药物主要有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林，其对应的代谢物分别为3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）、5-甲基-吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）。
液相色谱-串联质谱法因其灵敏度高、定性定量准确，成为目前硝基呋喃类代谢物主要的检测方法。
陈茹等［4］、吕燕［5］、蒙丽琼等［6］、林功师［7］、郭丽娜等［8］、李绪鹏等［9］、邢丽红等［10］都对液相色谱-串联质谱法测定硝基呋喃类代谢物的不确定度进行评定，但在对内标物引入的不确定度的分量上，未充分考虑内标法的特点，即内标物引入不确定度来自内标添加量的重复性。
本文根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012）对《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》（GB31656.13—2021）测定小龙虾中硝基呋喃代谢物残留量的不确定度进行评定，分析不确定度的主要来源，保证检测结果准确可靠。
1材料与方法1.1仪器与设备液相色谱-串联质谱联用仪（Xevo TQ-XS型号，配有电喷雾ESI离子源，美国Waters公司生产）；电子液相色谱-串联质谱法测定小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定*吴祥庆，杨姝丽，吴明媛，黄鸾玉，谢宗升，蒙源，庞燕飞（广西壮族自治区水产科学研究院，广西南宁530021）摘要：文章根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012），探讨采用《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱－串联质谱法》（GB31656.13—2021）测定小龙虾中硝基呋喃代谢物残留量的不确定度，建立相应数学模型，评估不确定度的测定结果。
超高效液相色谱-串联质谱法测定凡纳滨对虾中的硝基呋喃代谢物残留
超 高效 液相 色 谱 一 串联质 谱 法测 定 凡 纳滨 对 虾
中 的 硝 基 呋 喃 代 谢 物 残 留
赵 艳 ，张凤 枰 ，刘耀敏
（ 威 股 份 有 限公 司 ，四 川 成 都 ６ ０ ４ ） 通 １０ １
摘 要 ：采 用超高效 液相 色 谱一 串联 质 谱 （ Ｐ Ｃ Ｍ ／ ） ，测 定 了 凡纳 滨 对 虾 （ ｉｐｎｅｓ Ｕ Ｌ — Ｓ ＭＳ 法 Ｌｔ ｅａｕ ａ船眦 中氨 基 脲 ｏ ） （ Ｅ 、１氨基 －一 Ｓ Ｍ） 一 ２ 内酰脲 （ Ｈ 、３氨基 －一 Ａ Ｄ） － ２唑烷基 酮（ Ｏ 和 ５ 甲基 吗啉一一 Ａ Ｚ） 一 ３氨基一一 ２唑烷基 酮 （ ＭＯ ４种硝基 Ａ Ｚ） 呋喃类代谢 物。采用 ２硝基 苯甲醛作为衍生 化试剂 ，氘 、碳一３ 一 １ 、氮一５同位素标 记 的 Ｓ Ｍ． 一 Ｈ Ｃ 、 １ Ｅ Ｃ Ｎ 、Ａ Ｄ ” Ａ ＺＤ Ｏ — 和 Ａ ＺＤ 为 内标物 ，样 品经衍 生 、乙酸乙酯提 取 、正 己烷净 化 ，以甲醇 ０５ ｍ ｏ ・ 乙酸铵 水溶液 ｔ ｅ ｉ ｌｄｎ ． ％ ｆ ｃａ ｉ ，ａ ｄｔｅ ａｅｇ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｉ ｉ ． ２ ． ｇ ｍ （ ０ ９ ９ ， ｈ ｍｉｏ ｏ ｉｍ ａ ｅ ｔ ｎ ｕ ｉ ０ １ ｏ ｃ ａ ｃ ｇ ｍｉ ｄ ｎ ｙｈ ｖ ｏ ｄ ｌ ｅ ｒ ｅ ｔ ｎｗ ｔ ｎ０ ４～ ０ ０ ｎ 。 Ｌ Ｒ＞ ． ９ ） ｔ ｌ ｔ ｆ ｈ ｉ ｒａｏ ｈ ｅｉ
（ ０ １ 甲酸 ） 含 ．％ 为流动相进行梯度洗脱 ，８ｍｎ可将 ４种 目标化 合物完 全分 离并测 定。结果 表明 ，４种待 测物在 ｉ
０ ４— ０ ０ｎ 。 范围内线性关系 良好 （ ． ２ ． ｇｍＬ Ｒ＞０９ ９ ，检出限为 ０ ０ ０ １ ｇｋ 。在 ０５ ｇｋ 、１０ ｇ ．９ ） ． ３～ ． ５ ・ｇ ． ・ｇ ． ・ ｋ 和 ２ ０ ｖ ・ｇ ３个水平上进行 加标 回收试验 ，平 均 回收率为 ９ ． ％ ～１７３ ，Ｒ Ｄ为 ３ １ 一８７ 。采 ｇ ． ｇｋ ２０ ０．％ Ｓ ．％ ．％ 用该法参加 Ｆ Ｐ Ｓ国际水平测试 ，获得 了满意的结果 。 ＡＡ 关键词 ：硝基 呋喃类 代谢 物 ；残 留；凡纳滨对虾 ；超高效液 相色谱一 串联质谱法 中图分 类号 ：Ｔ ５ ． Ｓ２ ４ ７ 文 献标 志码 ：Ａ 文章编号 ：２ ９ ０ ８ ０ ５— ７ ０一（０ １０ — ０ ５— ６ ２１ ） ４ ０ ５ ０
HPLC-MS／MS法测定南美白对虾苗中硝基呋喃类代谢物残留
１ ６
第２ ３卷 ， 第１ 期
ｌ ４ ｌ
化 学分 析计 量
ＣＨＥＭ Ｉ ＣＡＬ ＡＮＡＬ ＹＳ Ｉ Ｓ ＡＮＤ ＭＥ ＴＥＲＡＧＥ
Ｖ ｏｌ ＿ ２ ３． ＮＯ ． １ Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ４
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ８ － － ６ １ ４ ５ ． ２ ０ １ ４ ． ０ １ ． ０ ０ ５
ＡＭＯ Ｚ 的 检 出限 为 ０ ． １ ０ ｇ ／ ｋ ｇ ， Ｓ Ｅ Ｍ， Ａ ＨＤ 的 检 出限 为 Ｏ ． ２ ５ ｇ ／ ｋ ｇ； ＡＯ Ｚ， Ａ ＭＯＺ的 定 量 下 限 为 ０ ． ４ Ｏ ｇ ／ ，
Ｓ Ｅ Ｍ， ＡＨ Ｄ 的定量下限为 ０ ． ５ ０ Ｌ Ｌ ｇ ／ ｋ ｇ 。方法加标 回收率在 ８ ８ ． ２ ％－９ ７ ． ６ ％之 间 ， 相对标准偏差在 ４ ． ６ ％－ ８ ． １ ％（ ｎ ＝ ６ ） 之 间。该法检 测灵敏 度高 ， 测量结果的精 密度和准确度满足 药物残 留检 测要 求。 关键词 高效液相 色谱 串联质谱 法 ； 南美白对虾苗 ； 硝基 呋喃 类代谢物 中图分类号 ： ０６ ５ ７ ． ７ 文献标识码 ： Ａ 文章 编号 ： １ ０ ０ ８ － ６ １ ４ ５ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ － ０ ０ １ ６ － ０ ４
因代谢 物（ ＡＨ Ｄ） 、 呋喃 西林代谢 物（ Ｓ Ｅ Ｍ） 的高效 液相 色谱 一串联 质谱（ ＨＰ Ｌ Ｃ － ＭＳ ／ ＭＳ） 测定 方法 。以水 解衍 生 并添加 ４种 同位 素 内标 的方法 对样品进 行处理 ， 补偿 了衍 生化 效率 ， 提 高 了定量 的准确性 。 实验 结果表 明 ， ＡＯ Ｚ，
ＨＰ ＬＣ— ＭＳ ／Ｍ Ｓ法 测 定 南 美 白对 虾 苗 中硝 基 呋 喃类 代 谢 物 残 留 ＊
高效液相色谱法检测饲料中的硝基呋喃类药物
因此 ． 究 建立 饲 料 中多 种 硝基 呋 喃类 药 物 的快 研
２６ 混合 型 阳离 子交 换柱 ： ． 规格 为 ６ ｍ 。 ０ ｇ ２７ 微孔滤 膜 ： 格 为 ０２ ｍ。 ． 规 ．１ ｘ ２８ 呋喃西 林 （ ｉｏｕａｏ ｅ ： ． Ｎ ￣ ｆｒ ｎ ） 纯度 Ｉ９ ％。 ｚ ＞ ９ ２９ 呋喃妥 因（ ｉｏｕ ｎｉｎ ： 度 Ｉ９ ％。 ． Ｎ ｔ ｆａ ｔ ）纯 ＞ ９ ｒ ｏ ２１ 呋 喃它酮 （ ｕＭ ａ ｏ ｅ ： 度 ＞９ ％。 ． ０ Ｆ ｒ ｔｄ ｎ ）纯 １ ９ ２１ 呋 喃唑酮 （ ｕａｏｉｏ ｅ ： 度 Ｉ９ ％。 ．１ Ｆ ｒｚｌ ｎ ）纯 ＞ ９ ｄ ２１ ２ ． ２ ％甲酸 溶液 ： 甲酸＋ ＝ ＋ ８ 水 ２９。 ２１ ｌ ．３ ％氨水 溶液 ：５ ３ ％氨水＋ ＝ ＋ ９ 水 １９ 。 ２１ 固相 萃取 柱洗脱 液 ：％氨水＋ ． ４ ｌ 甲醇＝ ０ ７ 。 ３ ＋０ ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准 贮 备 液 （０ ｍ￣ ． ５ １０ ｍＬ ： 称 取 ４ 种 硝 基 呋 喃 类 药 物 （． ，． ， ） ２８ ２９ ２１ ，．１ 各 １ ０ （ 确 到 ００ ０ ｇ 于 １ｍＬ容 ． ２１ ） ０ ． ｇ精 ０ ． １） ０ ０ 量瓶 中 。 乙腈溶 解定 容 。一 ０ 用 ２ ℃保存 ６个月 。 ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准贮 备 液 （０ １ ／ ．６ ２ ０ｘ ｇ
中 的硝 基 呋 喃 类 药 物 。 缩 近 干 ， ２ 甲酸 溶 解 ， 混 合 浓 用 ％ 经
除非 另有 说 明 ． 分 析 中仅使 用 确 认 为分 析 在 纯 的试 剂 和 Ｇ ／ ６ ２ ２ ０ （ 析实 验室 用水 规 ＢＴ ６ ８ — ０ ８ 分 格 和试 验方 法》 中规定 的二级 水 。
２６ 混合 型 阳离 子交 换柱 ： ． 规格 为 ６ ｍ 。 ０ ｇ ２７ 微孔滤 膜 ： 格 为 ０２ ｍ。 ． 规 ．１ ｘ ２８ 呋喃西 林 （ ｉｏｕａｏ ｅ ： ． Ｎ ￣ ｆｒ ｎ ） 纯度 Ｉ９ ％。 ｚ ＞ ９ ２９ 呋喃妥 因（ ｉｏｕ ｎｉｎ ： 度 Ｉ９ ％。 ． Ｎ ｔ ｆａ ｔ ）纯 ＞ ９ ｒ ｏ ２１ 呋 喃它酮 （ ｕＭ ａ ｏ ｅ ： 度 ＞９ ％。 ． ０ Ｆ ｒ ｔｄ ｎ ）纯 １ ９ ２１ 呋 喃唑酮 （ ｕａｏｉｏ ｅ ： 度 Ｉ９ ％。 ．１ Ｆ ｒｚｌ ｎ ）纯 ＞ ９ ｄ ２１ ２ ． ２ ％甲酸 溶液 ： 甲酸＋ ＝ ＋ ８ 水 ２９。 ２１ ｌ ．３ ％氨水 溶液 ：５ ３ ％氨水＋ ＝ ＋ ９ 水 １９ 。 ２１ 固相 萃取 柱洗脱 液 ：％氨水＋ ． ４ ｌ 甲醇＝ ０ ７ 。 ３ ＋０ ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准 贮 备 液 （０ ｍ￣ ． ５ １０ ｍＬ ： 称 取 ４ 种 硝 基 呋 喃 类 药 物 （． ，． ， ） ２８ ２９ ２１ ，．１ 各 １ ０ （ 确 到 ００ ０ ｇ 于 １ｍＬ容 ． ２１ ） ０ ． ｇ精 ０ ． １） ０ ０ 量瓶 中 。 乙腈溶 解定 容 。一 ０ 用 ２ ℃保存 ６个月 。 ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准贮 备 液 （０ １ ／ ．６ ２ ０ｘ ｇ
中 的硝 基 呋 喃 类 药 物 。 缩 近 干 ， ２ 甲酸 溶 解 ， 混 合 浓 用 ％ 经
除非 另有 说 明 ． 分 析 中仅使 用 确 认 为分 析 在 纯 的试 剂 和 Ｇ ／ ６ ２ ２ ０ （ 析实 验室 用水 规 ＢＴ ６ ８ — ０ ８ 分 格 和试 验方 法》 中规定 的二级 水 。
HPLC—MS／MS法测定2017—2018年淮安地区小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量
HPLC—MS／MS法测定2017—2018年淮安地区小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量为了解淮安地区小龙虾中硝基呋喃类代谢物的残留情况，对2017和2018年该地区的小龙虾产品进行随机抽样检测。
结果表明，2017和2018年淮安地区小龙虾产品中，呋喃西林代谢物残留检出率高达63%，其他硝基呋喃类代谢物没有检出。
结果显示，在淮安地区的小龙虾养殖中呋喃西林仍然存在违规用药情况，呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃妥因几乎不用。
标签：HPLC-MS/MS法；硝基呋喃类代谢物；小龙虾；SEM硝基呋喃类抗生素因具有抑菌性和杀菌性，曾广泛用于水产养殖中传染病的预防和治疗[1]。
主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因四种，而其对应的代谢产物3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）、l-氨基-2-内酰脲（AHD）都能与蛋白质紧密结合，形成稳定的残留物，残留时间达数周以上，甚至在蒸煮、微波加热等情况下仍然无法降解。
研究表明硝基呋喃类抗生素及其代谢产物对人体有潜在毒理性危害。
欧盟将其列为A类禁用药物[2]，且在2005年时又禁止在人类和动物中使用；美国在2002年将其禁用于食源性动物；日本也规定牛肉、猪肉、禽肉、虾肉都不得检出抗生素；我国农业部在2002年颁布禁令禁止将硝基呋喃类药物用在食源性动物身上。
江苏省淮安市盱眙县有着”中国龙虾之都”的美誉，自2001年至今，已举办了18界龙虾节。
盱眙境内年产龙虾10万吨，年交易量15万吨，交易额突破60亿元。
如今，盱眙80万人中有10万余人在龙虾产业链上淘金，龙虾已经成为盱眙县的支柱产业。
但是一些养殖场高密度饲养、养殖污水不处理等，导致疫病的爆发，为了预防和治疗病害，养殖户违法使用了硝基呋喃类抗生素。
本研究通过对淮安地区小龙虾产品中，硝基呋喃类代谢产物的残留量检测，为该地区小龙虾中违禁药物使用情况进行调查，以促进小龙虾产业的健康发展，保障人民的食品安全。
液相色谱－串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量
液相色谱－串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量广东省珠海市斗门区动物卫生监督所 孟轩 梁可昌【摘 要】本文介绍液相色谱-串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类药物（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林）代谢物残留方法。
试样中加入2-硝基苯甲醛溶液，在酸性条件下衍生，乙酸乙酯提取，涡旋离心提取，以乙酸胺和甲醇溶液进行梯度洗脱。
在浓度0.5～20.0纳克/毫升范围内，4种硝基呋喃类代谢物呈良好线性关系，相关系数均不小于0.995，检出限为0.5微克/千克。
在0.5微克/千克,1.0微克/千克,5.0 微克/千克添加水平下，目标分析物的加标回收率为82.0%～103%，相对标准偏差为0.996%～4.46%。
该方法具有操作简单、快捷、灵敏度高等特点，可用于水产品中硝基呋喃类等药物残留的批量检测。
【关键词】水产品；液相色谱-串联质谱法；硝基呋喃类硝基呋喃类药物是通过影响细菌体内的氧化还原酶体系，干扰细菌正常代谢的一类广谱抗生素，曾普遍应用于水产、畜牧业养殖等行业中疾病的预防和治疗。
后续学者陆续研究发现，该类药物对对人体具有致畸胎作用，可能诱发癌症等重大疾病。
为此，2019年12月农业农村部发布的第250号公告中将其归类为食品动物中禁止使用的药物。
硝基呋喃类常用的有４种：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林。
硝基呋喃类药物进入鱼体后的代谢产物分别为：3-氨基-2-恶唑烷基酮（AOZ）、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）、氨基脲（SEM），由于这些代谢产物与蛋白质结合而相当稳定，所以目前主要通过检测代谢物的残留量，反映硝基呋喃类药物的残留状况。
目前检测兽药残留常见的方法主要有：高效液相色谱－串联质谱法、液相色谱法、常规理化检测法、酶联免疫法、毛细管电泳法等。
本研究基于《国家标准GB31656.13-2021食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》，结合实验室设备及当地检测需求，建立了准确、高效、快速的硝基呋喃代谢残留量检测方法。
高效液相色谱法检测虾肉中硝基呋喃类药物残留 毕业论文
高效液相色谱法具备分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、检测器的重复性好、线性范围宽、分析速度快、操作自动化等特点，可用于分离高沸点、相对分子质量大、热稳定性差的有机化合物，还可用于各种离子的分离分析。
1.7.1.2
高效液相色谱仪的主要部件有：贮液罐、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。其基本的工作流程是：贮液罐中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来[15]。
2.3.4加标回收率和精密度9
3结果与分析9
3.1衍生温度的确定9
3.2提取方式的影响11
3.3提取时间的影响13
3.4线性关系、线性范围的确定14
3.5检测限的确定16
3.6加标回收率和精密度16
4讨论19
5小结与展望20
致谢21
参考文献22
1
1.1
我国是水产品生产与出口大国,自20世纪80年代以来,我国的水产品产量一直居世界首位，然而制约我国水产业发展的突出问题,其中之一便是水产品的质量安全问题，其中就包括药物残留超标。目前常见的因残留超标引起水产品质量安全事件的药物主要有氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃类代谢物和甲醛等,当人们食用了残留超标的水产品后,会出现不同程度的中毒反应,轻者影响健康,重者危及生命。而硝基呋喃类药物在水产品中的残留问题是近年来我国水产品出口中重点监控的项目[1]。
1.2
在我国，硝基呋喃类药物曾经得到广泛使用。呋喃唑酮在畜禽养殖、水产养殖上应用非常广泛，曾广泛用于防治畜禽肠道感染、防治水生动物疾病。作为医药，呋喃唑酮用于治疗细菌和原虫引起的腹泻、结肠炎和霍乱等[3]。呋喃西林一般用作外用消毒药物，也有拌饵投喂防治水生动物疾病的报道[4]。从藻类中提取的卡拉胶(食品增稠剂)中也存在呋喃西林[5]。此外，硝基呋喃类药物也有可能添加到化妆品种以实现某些功效。
1.7.1.2
高效液相色谱仪的主要部件有：贮液罐、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。其基本的工作流程是：贮液罐中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来[15]。
2.3.4加标回收率和精密度9
3结果与分析9
3.1衍生温度的确定9
3.2提取方式的影响11
3.3提取时间的影响13
3.4线性关系、线性范围的确定14
3.5检测限的确定16
3.6加标回收率和精密度16
4讨论19
5小结与展望20
致谢21
参考文献22
1
1.1
我国是水产品生产与出口大国,自20世纪80年代以来,我国的水产品产量一直居世界首位，然而制约我国水产业发展的突出问题,其中之一便是水产品的质量安全问题，其中就包括药物残留超标。目前常见的因残留超标引起水产品质量安全事件的药物主要有氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃类代谢物和甲醛等,当人们食用了残留超标的水产品后,会出现不同程度的中毒反应,轻者影响健康,重者危及生命。而硝基呋喃类药物在水产品中的残留问题是近年来我国水产品出口中重点监控的项目[1]。
1.2
在我国，硝基呋喃类药物曾经得到广泛使用。呋喃唑酮在畜禽养殖、水产养殖上应用非常广泛，曾广泛用于防治畜禽肠道感染、防治水生动物疾病。作为医药，呋喃唑酮用于治疗细菌和原虫引起的腹泻、结肠炎和霍乱等[3]。呋喃西林一般用作外用消毒药物，也有拌饵投喂防治水生动物疾病的报道[4]。从藻类中提取的卡拉胶(食品增稠剂)中也存在呋喃西林[5]。此外，硝基呋喃类药物也有可能添加到化妆品种以实现某些功效。
高效液相色谱-质谱法检测肉和水产品中硝基呋喃类药物的代谢物残留量
高效液相色谱-质谱法检测肉和水产品中硝基呋喃类药物的代
谢物残留量
朱坚
【期刊名称】《质谱学报》
【年(卷),期】2003(024)0z1
【摘要】本工作建立了用LC-MS法测定肉和水产品中硝基呋喃类药物代谢物3-氨基-2-恶唑酮(AOZ)和3-氨基-5-吗啉代甲基-2-恶唑酮(AMOZ)残留量的方法,样品经酸水解,用邻氯苯甲醛衍生化.经SPE柱净化,用液相色谱MSD检测器检测.当添加浓度为1.5×10-8量级时,平均回收率为87.5%,检测低限为0.3×10-9量级.……
【总页数】2页(P121-122)
【作者】朱坚
【作者单位】上海出入境检验检疫局,上海 200135
【正文语种】中文
【中图分类】O6
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1.高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中硝基呋喃和硝基咪唑类药物残留量[J], 万建春;王文君;占春瑞;郭平
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3.水产品中硝基呋喃类代谢物残留量高效液相色谱串联质谱快速检测法的研究 [J], 周道志
4.超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪联用检测测定水产品中硝基呋喃类代谢物的残留量 [J], 黄宇;邱雄雄;刘嘉飞
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水产品中硝基呋喃类代谢物残留量高效液相色谱串联质谱快速检测法的研究
结果与分析
样品衍生条件的优化。4 种硝基呋喃的分子量在 75 ～ 201，在这个质量范围内质谱背景噪音很大，4 种代谢产物 的电离效率比较低，因此它们的质谱检测灵敏度低。而在 酸性条件下，利用邻硝基苯甲醛上的醛基 ( 一 CHO) 可以 与 AMOZ、SEM、AHD、AOZ 等 4 种代谢物上的含氮亲核 基团胺基 ( 一 NH ) 发生醛胺亲核加成反应，可以分别形成 较好的特性衍生物，使衍生物的分子离子质荷比大于 200， 处于相对适于检测的质量区域，质谱检测灵敏度会有很大 提高。在实验室多年的硝基呋喃类检测的经验和参考相关 资料的基础上，选择采用盐酸水解，邻硝基苯甲醛衍生化。 本试验比较了 37℃恒温（空气浴）振荡 16h, 60℃恒温（空
分析步骤。 （1）提取步骤。称取经肉类组织粉碎机粉碎的试样 2g （精确至 0.01g）于 50mL 离心管中，加入 10mL 0.2 Mol/ L 盐酸溶液在匀浆机上以 16000r/min 速度匀浆 15 秒，用 5mL 0.2 Mol/L 盐酸溶液洗涤匀浆刀 , 合并提取液。 （2） 样 品 恒 温 孵 育 提 取。 离 心 管 中 加 入 400μL 100mMol/L 新配制的 2- 硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂振 荡 1 分钟 ；放在 60℃恒温水浴锅中反应 0.5 小时。孵育过 程要注意避光操作。 （3）净化方法。离心管在 4500 r/min 下离心 10 min， 上清液转入另一离心管中，残渣弃去。上清液中加入 5 mL 0.1 Mol/L KH2PO4 溶液，用 1 Mol/L KOH 溶液调节 pH 值在 7 ～ 7.5 范围。离心管中加入 10mL 乙酸乙酯，在振荡器上震 荡 5 分钟，以 4500 r/min 速度离心 10 min，吸取 5mL 上 层清液（相当于 1g 样品）移至吹氮浓缩仪的吹氮管中，在 50℃下用氮气将试管内的溶剂挥干，残渣用 1mL 纯净水溶 解，漩涡振荡器上混漩 60 秒，加入 3 mL 正己烷，漩涡振 荡器上混漩 60 秒，在 4500 r/min 下离心 10 min 后，样液 经 0.22 μm 滤膜过滤后上机测定。 仪器参数与测定。 （1） 色 谱 测 定 条 件。 色 谱 柱 ： 菲 罗 门 C18，150 mm×2.0 mm（id）， 粒 度 5µm，luna ；流 动 相 ：乙 腈 +0.1% 甲酸水溶液，梯度洗脱模式。 （2）质谱条件。离子源 ESI，正模式，多反应选择离子 监测方式（MRM）。
样品衍生条件的优化。4 种硝基呋喃的分子量在 75 ～ 201，在这个质量范围内质谱背景噪音很大，4 种代谢产物 的电离效率比较低，因此它们的质谱检测灵敏度低。而在 酸性条件下，利用邻硝基苯甲醛上的醛基 ( 一 CHO) 可以 与 AMOZ、SEM、AHD、AOZ 等 4 种代谢物上的含氮亲核 基团胺基 ( 一 NH ) 发生醛胺亲核加成反应，可以分别形成 较好的特性衍生物，使衍生物的分子离子质荷比大于 200， 处于相对适于检测的质量区域，质谱检测灵敏度会有很大 提高。在实验室多年的硝基呋喃类检测的经验和参考相关 资料的基础上，选择采用盐酸水解，邻硝基苯甲醛衍生化。 本试验比较了 37℃恒温（空气浴）振荡 16h, 60℃恒温（空
分析步骤。 （1）提取步骤。称取经肉类组织粉碎机粉碎的试样 2g （精确至 0.01g）于 50mL 离心管中，加入 10mL 0.2 Mol/ L 盐酸溶液在匀浆机上以 16000r/min 速度匀浆 15 秒，用 5mL 0.2 Mol/L 盐酸溶液洗涤匀浆刀 , 合并提取液。 （2） 样 品 恒 温 孵 育 提 取。 离 心 管 中 加 入 400μL 100mMol/L 新配制的 2- 硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂振 荡 1 分钟 ；放在 60℃恒温水浴锅中反应 0.5 小时。孵育过 程要注意避光操作。 （3）净化方法。离心管在 4500 r/min 下离心 10 min， 上清液转入另一离心管中，残渣弃去。上清液中加入 5 mL 0.1 Mol/L KH2PO4 溶液，用 1 Mol/L KOH 溶液调节 pH 值在 7 ～ 7.5 范围。离心管中加入 10mL 乙酸乙酯，在振荡器上震 荡 5 分钟，以 4500 r/min 速度离心 10 min，吸取 5mL 上 层清液（相当于 1g 样品）移至吹氮浓缩仪的吹氮管中，在 50℃下用氮气将试管内的溶剂挥干，残渣用 1mL 纯净水溶 解，漩涡振荡器上混漩 60 秒，加入 3 mL 正己烷，漩涡振 荡器上混漩 60 秒，在 4500 r/min 下离心 10 min 后，样液 经 0.22 μm 滤膜过滤后上机测定。 仪器参数与测定。 （1） 色 谱 测 定 条 件。 色 谱 柱 ： 菲 罗 门 C18，150 mm×2.0 mm（id）， 粒 度 5µm，luna ；流 动 相 ：乙 腈 +0.1% 甲酸水溶液，梯度洗脱模式。 （2）质谱条件。离子源 ESI，正模式，多反应选择离子 监测方式（MRM）。
水产品中硝基呋喃类药物残留的检测与控制
水产品中硝基呋喃类药物残留的检测与控制摘要介绍水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物的残留危害，分析当前本类药物残留检测的最新方法：高效液相色谱、液相色谱质谱联用和酶联免疫吸附分析等。
同时从多方面对控制水产品中硝基呋喃类药物残留提出建议。
关键词水产品；硝基呋喃；残留；检测；控制近年来，我国水产养殖业发展迅猛，由于养殖集约化程度提高，养殖病害日益严峻，各类药物在生产中广泛使用，水产品药物残留问题日益突出。
硝基呋喃类药物（Nitrofurans）对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌和原虫等病原体均有杀灭作用，曾经在水产养殖业中广泛使用。
但随着其毒副作用日益为人们所认识，作为水产养殖的药物已被大多数国家禁用。
不过由于此类药物价格低，药效好，很多养殖单位还在继续使用。
近年来，水产品硝基呋喃类药物残留超标事件屡屡发生，严重威胁着人民身体健康和我国水产品出口贸易。
加强对硝基呋喃类药物残留检测和控制有着十分紧迫的现实意义。
1药物概况1.1理化性质与作用机理硝基呋喃类药物是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物，主要是指呋喃唑酮（Furazolidone）、呋喃它酮（Furalta-done）、呋喃西林（Nitrofurazo-ne）、呋喃妥因（Nitrofuran-toin）。
代谢产物见表1。
呋喃类化合物均为性质稳定的黄色粉末，无味或味微苦。
呋喃西林难溶于水，微溶于乙醇，呋喃唑酮几乎不溶于水和乙醇；呋喃妥因几乎不溶于水，微溶于乙醇。
其抗菌作用是通过干扰细菌体内的氧化还原酶系统，使细菌代谢发生紊乱。
呋喃类药物抗菌谱较广，抗菌力不受血液、粪便、脓汁和组织分解产物影响，外用对组织刺激性小，细菌对本类药物亦较少产生耐药性。
1.2残留危害1.2.1对养殖动物有毒性作用。
大剂量或长时间使用硝基呋喃类药物均能对养殖动物产生毒性作用，其中呋喃西林的毒性最大，呋喃唑酮的毒性最小，为呋喃西林的1/10左右，以呋喃西林对动物体的毒性作用最常见。
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中国是对虾养殖大国，但是近年来，硝基咲喃类药物残留超标事件仍时有发 生。2008年1月22日，我国产速食虾就因检测出含有硝基咲喃而被欧盟食品和饲 料委员会通报。在2010年度水产苗种质量安全监督抽査结果中，广东、海南、福 建等地部分生产单位的虾苗、罗非鱼苗中检测出硝基咲喃类代谢物。
硝基咲喃类药物是人工合成的具有5•硝基味喃基本结构的广谱抗菌药物，常 用于治疗和预防沙门菌、大肠埃希菌感染引起的猪、鱼、禽类消化系统感染I叫 但是长时间或大剂量应用硝基咲喃类药物及其代谢物均能使动物体产生毒性作 用，还有致畸致癌致突变的副作用。
1.2硝基咲喃类药物的应用情况
在我国，硝基咲喃类药物曾经得到广泛使用。咲喃哇酮在畜禽养殖、水产养 殖上应用非常广泛，曾广泛用于防治畜禽肠道感染、防治水生动物疾病。作为医药,咲喃1^5酮用于治疗细菌和原虫引起的腹泻、结肠炎和霍乱等I叽咲喃西林一 般用作外用消毒药物，也有拌饵投喂防治水生动物疾病的报道⑷。从藻类中提取 的卡拉胶（食品增稠剂）中也存在咲喃西林⑸。此外9硝基咲喃类药物也有可能添 加到化妆品种以实现某些功效。
16
3.6加标回收率和精密度
16
4讨论
19
5小结与展望
20
致谢
21
参考文献
22
1前言
11选题研究背景
我国是水产品生产与出口大国，自20世纪80年代以来，我国的水产品产量 直居世界首位，然而制约我国水产业发展的突出问题，其中之一便是水产品的质 量安全问题，其中就包括药物残®超标。目前•常见的因残留超标引起水产品质量 安全事件的药物主要有氯霉素、孔雀石绿、硝基咲喃类代谢物和甲醛等，当人们 食用了残留超标的水产品后，会出现不同程度的中毒反应，轻者影响健康,重者危 及生命。而硝基咲喃类药物在水产品中的残留问题是近年来我国水产品出口中重 点监控的项口⑴。
关键词：硝基咲喃类药物；高效液相色谱法；残留
High performance liquid chromatographic method for detection
of nitrofurans drugs residue in the shrimps
Food Science and Engineering 2008 Pan Zhenfeng
Instructor Cai Qiuxing
Abstract
In this study, the HPLC method was used for the determination of four nitro furan drugs metabolites SEM, AHD. AO乙AMOZ in the shrimps. The different sampies with acetic acid-methanol and adjacent chlorobenzene formaldehyde were bathed in 40water conditions at the same time the oscillation extraction for 12h,then centrifuged, adjusted the pH 7,0, with 2 times the volume of ethyl acetate extracted derivatives, and then with 1 mL50% acetonitrile solution dissolved the residue after nitrogen blowed solvent dry, and high performance liquid chromatography (HPLC) was used for the determination, external standard method was used for quotation. The method simplified the procedures, had good stability, with the addition amount in 0・2~20nmol range, four nitro furan kinds of metabolites* recovery range were between 77-8% and98,8%,the relative standard deviation were less than 15%. The limit of detections for SEM, AHD, AO乙AMOZ were 0・93ng/g and l・40ng/g and 0.84ng/g and l・90ng/g・
231样品处理
231・1不同衍生温度的对比试验
231・2不同提取方式的对比试验
231.3不同提取时间的对比试验
232色谱条件
233相关系数、线性范和检测限的确定
234加标回收率和精密度
3结果与分析
3.1衍生温度的确定
3.2提取方式的影响
11
3.3提取时间的影响
13
34线性关系、线性范围的确定
14
3.5检测限的确定
Key words: Nitrofurans,HPLC.Residues
1前言
1.7.1高效液相色谱法（HPLC）
1.7.L1高效液相色谱法的原理、特点
L7-1.2高效液相色谱仪
1・7」・3高效液相色谱法的研究进展
L8课题研究U的及意义2实验部分
2.1实验材料
2.2仪器与试剂
221仪器:
222试剂
验方法与步骤
钦州学院
本科生毕业论文（设计）
指导教师单位
指导教师姓名
指导教师职称
2012年4月
高效液相色谱法检测虾肉中硝基咲喃类药物残留
食品科学与工程2008级潘珍凤
指导教师蔡秋杏
本研究采用高效液相色谱法测定虾肉中4种硝基咲喃类药物代谢物SEM、
AHD、AOZ、AMOZo样品加入三氯乙酸■中醇和邻氯苯屮醛在4(rC水浴条件下 振荡捉取同时进行衍生化12h,然后离心，将提取液pH值调节至7.0左右，用2倍 体积乙酸乙酯萃取衍生物，氮气吹干溶剂后再用1mL50%乙睛水溶液溶解残渣， 高效液相色谱法检测，外标法定量。本方法简化了操作步骤，稳定性好，添加量 在0.2〜20nmol范圉时，4种硝基咲喃类代谢物回收率在77.8%〜98.8%之间，相对 标准偏差小于15%°SEM、AHD、AOZ、AMOZ的检测限分别为0・93ng/g、l・40ng/g、 0.84ng/g、1.90ng/g。
硝基咲喃类药物是人工合成的具有5•硝基味喃基本结构的广谱抗菌药物，常 用于治疗和预防沙门菌、大肠埃希菌感染引起的猪、鱼、禽类消化系统感染I叫 但是长时间或大剂量应用硝基咲喃类药物及其代谢物均能使动物体产生毒性作 用，还有致畸致癌致突变的副作用。
1.2硝基咲喃类药物的应用情况
在我国，硝基咲喃类药物曾经得到广泛使用。咲喃哇酮在畜禽养殖、水产养 殖上应用非常广泛，曾广泛用于防治畜禽肠道感染、防治水生动物疾病。作为医药,咲喃1^5酮用于治疗细菌和原虫引起的腹泻、结肠炎和霍乱等I叽咲喃西林一 般用作外用消毒药物，也有拌饵投喂防治水生动物疾病的报道⑷。从藻类中提取 的卡拉胶（食品增稠剂）中也存在咲喃西林⑸。此外9硝基咲喃类药物也有可能添 加到化妆品种以实现某些功效。
16
3.6加标回收率和精密度
16
4讨论
19
5小结与展望
20
致谢
21
参考文献
22
1前言
11选题研究背景
我国是水产品生产与出口大国，自20世纪80年代以来，我国的水产品产量 直居世界首位，然而制约我国水产业发展的突出问题，其中之一便是水产品的质 量安全问题，其中就包括药物残®超标。目前•常见的因残留超标引起水产品质量 安全事件的药物主要有氯霉素、孔雀石绿、硝基咲喃类代谢物和甲醛等，当人们 食用了残留超标的水产品后，会出现不同程度的中毒反应，轻者影响健康,重者危 及生命。而硝基咲喃类药物在水产品中的残留问题是近年来我国水产品出口中重 点监控的项口⑴。
关键词：硝基咲喃类药物；高效液相色谱法；残留
High performance liquid chromatographic method for detection
of nitrofurans drugs residue in the shrimps
Food Science and Engineering 2008 Pan Zhenfeng
Instructor Cai Qiuxing
Abstract
In this study, the HPLC method was used for the determination of four nitro furan drugs metabolites SEM, AHD. AO乙AMOZ in the shrimps. The different sampies with acetic acid-methanol and adjacent chlorobenzene formaldehyde were bathed in 40water conditions at the same time the oscillation extraction for 12h,then centrifuged, adjusted the pH 7,0, with 2 times the volume of ethyl acetate extracted derivatives, and then with 1 mL50% acetonitrile solution dissolved the residue after nitrogen blowed solvent dry, and high performance liquid chromatography (HPLC) was used for the determination, external standard method was used for quotation. The method simplified the procedures, had good stability, with the addition amount in 0・2~20nmol range, four nitro furan kinds of metabolites* recovery range were between 77-8% and98,8%,the relative standard deviation were less than 15%. The limit of detections for SEM, AHD, AO乙AMOZ were 0・93ng/g and l・40ng/g and 0.84ng/g and l・90ng/g・
231样品处理
231・1不同衍生温度的对比试验
231・2不同提取方式的对比试验
231.3不同提取时间的对比试验
232色谱条件
233相关系数、线性范和检测限的确定
234加标回收率和精密度
3结果与分析
3.1衍生温度的确定
3.2提取方式的影响
11
3.3提取时间的影响
13
34线性关系、线性范围的确定
14
3.5检测限的确定
Key words: Nitrofurans,HPLC.Residues
1前言
1.7.1高效液相色谱法（HPLC）
1.7.L1高效液相色谱法的原理、特点
L7-1.2高效液相色谱仪
1・7」・3高效液相色谱法的研究进展
L8课题研究U的及意义2实验部分
2.1实验材料
2.2仪器与试剂
221仪器:
222试剂
验方法与步骤
钦州学院
本科生毕业论文（设计）
指导教师单位
指导教师姓名
指导教师职称
2012年4月
高效液相色谱法检测虾肉中硝基咲喃类药物残留
食品科学与工程2008级潘珍凤
指导教师蔡秋杏
本研究采用高效液相色谱法测定虾肉中4种硝基咲喃类药物代谢物SEM、
AHD、AOZ、AMOZo样品加入三氯乙酸■中醇和邻氯苯屮醛在4(rC水浴条件下 振荡捉取同时进行衍生化12h,然后离心，将提取液pH值调节至7.0左右，用2倍 体积乙酸乙酯萃取衍生物，氮气吹干溶剂后再用1mL50%乙睛水溶液溶解残渣， 高效液相色谱法检测，外标法定量。本方法简化了操作步骤，稳定性好，添加量 在0.2〜20nmol范圉时，4种硝基咲喃类代谢物回收率在77.8%〜98.8%之间，相对 标准偏差小于15%°SEM、AHD、AOZ、AMOZ的检测限分别为0・93ng/g、l・40ng/g、 0.84ng/g、1.90ng/g。