高效液相色谱法检测市售酸奶制品中三聚氰胺的含量 毕业论文

高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。

三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。

本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。

1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。

1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。

根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。

1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。

取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。

1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。

现代商贸工业阳离子交换液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺呙亮汪芳芳林建国(武汉产品质量监督检验所，湖北武汉430048)摘要：建立了超声萃取一阳离子交换高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺含量的方法*乳制品经1%三 氯乙酸乙腈溶液超声萃取15分钟后，经强阳离子交换型色谱柱进行分离，采用二极管阵列检测器检测。

流动相 为50 mmol磷酸盐(pH=2.5):乙腈（35:65)，检测波长为235nm，三聚氰胺的线性范围为0. 5—40(V g/g，线性方 程的相关系数大于0. 99,加标回收率在93%—110%之间，相对标准偏差均小于9. 1%。

，三聚氰胺的检测限为0. 02/ig/g。

本方法简单、快速，可有效消除乳制品基体干扰，测定结果满意，可应用于乳制品中三聚氰胺的监控。

关键词：超声萃取；三聚氰胺；乳制品；阳离子交换色谱中图分类号：TB文献标识码：A doi：10. 19311/ki. 1672-3198. 2016. 06. 0921引言由于食品和伺料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，三聚氰胺常被不法商人用作食品添加剂，以提升食 品检测中的蛋白质含纛，宠物伺料及婴幼儿奶粉中非法添加三聚氰胺，造成对健康的危害。

三聚氰胺的检测颇受关注。

目前对三聚氰胺的检测主要局限于伺料 类产品，多用离子对色谱法，虽然国家已出台了三聚氰胺的检测标准，前处理采用固相萃取技术，存在费时费 力，有机溶剂使用量较大的缺点。

国外关于三聚氰胺的分析方法主要是色谱法，如HPLC，GC/M S和LC/位于路表下〇—12cm左右，换言之，也就是中、上面层 最易于出现车辙。

故而，为有效提升沥青路面高温稳定性和耐久性，应在该位置上采取改性沥青。

在设计配合比这一过程中，对一些混合料施工者中的长、大、上下坡或者炎热地区的路段，应将最佳合理沥青用量（混合料）应较室内生产者有0. 1%—0. 2%的减少a然而，应借助于重麵压实设备于施工中的应用来压实减少的沥青于设计孔隙率当中e换言之，便 是将先前并未减少沥青用量的标准和减少后的压实度 标准而这保持一致。

科技文苑December 2017 CHINA FOOD SAFETY 75高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法，被广泛应用于保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等方面。

针对近年来一些不法商家在牛奶中添加三聚氰胺的案例，笔者所在单位加强了乳制品中三聚氰胺的检验工作，在执行标准GB/T 22388和GB/T 22400的基础上，摸索出另一种使用HPLC 检测原料乳和乳制品中三聚氰胺的方法，通过一段时间的实验，效果显著，现将该方法总结归纳如下，供业界参考。

1 基本原理用50%甲醇和乙酸铅溶液作为原料乳和乳制品的蛋白质沉淀剂与三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱—紫外检测皿/二极管阵列检测皿检测，外标法定量。

2 试剂与材料水：GB/T 6682规定的一级水；乙腈（CH 3CN）：色谱纯；磷酸（H 3PO 4）；磷酸二氢钾（KH 2PO 4）；三聚氰胺溶液标准物质：1.00mg/mL；乙酸铅溶液：称取22g 乙酸铅（准确至0.01g），加水800mL 完全溶解后，用水稀释至1L，用滤膜过滤后备用；磷酸盐缓冲液：0.05mol/L（称取6.8g 磷酸二氢钾，加水800mL 完全溶解后，用磷酸调节pH 至3.0，用水稀释至1L，用滤膜过滤后备用）；一次性注射皿：5mL；滤膜：水相，0.45μm；针式过滤皿：有机相，0.45μm；具塞刻度试管：50mL；移液枪：2~20μL、5~50μL、20~200μL、100~1000μL。

3 仪皿高效液相色谱仪：配有紫外检测皿/二极管阵列检验皿；分析天平：感量0.0001g 称0.01g；pH 试纸：pH 0.5~5.0；溶剂过滤皿；离心机；涡旋混合皿；超声波清洗皿。

4 测定步骤4.1 试样的制备称取混合均匀的15g 乳制品样品（准确至0.01g），置于50mL 具塞刻度试管中，加入5mL 乙酸铅溶液，在加入25mL 甲醇/水（1:1），涡旋混匀，加水至50mL，涡旋振荡6min，离心10min，转速为3000r，静置后用一次性注射皿吸取上清液，用针式过滤皿过滤，作为分析试样。

改进乳制品中三聚氰胺液相色谱检验方法的研究分析摘要：三聚氰胺所引发的食品安全问题是有目共睹的，在对其进行检测的过程中，根据国标规定可以采用液相色谱的检定方法。

但是规定中的检测方法尤其局限性，因此本文从改进流动相的角度对规范方法进行了改进，并获得了较好的效果。

关键词：三聚氰胺液相检测改进实验一、三聚氰胺及其检测方法简介三聚氰胺是一种化学物质，其真正的学名为三胺三嗪，也可称之为密胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，是一种无色无味的粉末，具体分子为单斜晶体，分子式为c3n6h6，核心的结构为氮环，是一种重要的氮杂环形式的有机化工原料。

三聚氰胺中的氮元素含量较高，可以达到三分之二，每增加1%的三聚氰胺在采用凯氏定氮法进行检测的时候，折算出来的蛋白质含量就会虚涨4%，而且其生产成本低廉。

基于此种性质，一些生产的厂家将其利用在食品生产中，对蛋白粉、液态奶、奶粉、饲料等进行违法的添加，以此形成蛋白质增高的情况，获得虚假的产品质量信息，从中获得不法利益。

在美国就曾经发生过因为三聚氰胺超标的小麦蛋白粉、大米蛋白粉所生产的宠物饲料在使用过程中造成动物死亡的情况。

而在2008年我国也应为三聚氰胺的违法添加而出现了奶粉危机，其原因就是婴儿使用了三聚氰胺的奶粉而造成了不良的后果。

在随后的检测中，累计检测出因为问题奶粉而导致泌尿系统出现异常的患病儿童多达近三十万。

鉴于上面所罗列的三聚氰胺的危害，我国已经出台并制定了一些列对三聚氰胺的检测和管理的规定，以控制在食品中添加三聚氰胺的行为，在《原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法》这一国家标准中，进一步规定了高效率液相色谱法、气相色-质谱连用的方法、液相色谱与质谱/质谱的三种检测方法为国家认可的乳品中三聚氰胺的检测手段，检测和定量的标准分别为2mg/kg、0.5mg/kg、0.01mg/kg。

对食品中所含的三聚氰胺的检测也参考上诉三种方法。

在实际中通常是按照国标的基本操作来进行试验和确定检测的结果。

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种无机化合物，常用于工业制造和农业生产中，然而高浓度的三聚氰胺会对人体造成严重危害，特别是对婴儿和幼儿的影响更为严重。

由于近年来液态奶中三聚氰胺事件的频繁发生，因此对液态奶中三聚氰胺含量的检测显得尤为重要。

固相萃取一高效液相色谱法是目前常用的一种高效、准确的检测方法。

本文将介绍使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的方法和结果。

二、实验材料和仪器1. 实验材料：液态奶样品、甲醇、乙腈、乙酸、二氯甲烷、硅胶2. 仪器：高效液相色谱仪、固相萃取柱、离心机、显微天平、pH计、紫外可见分光光度计等三、实验方法1. 样品处理：首先将液态奶样品样瓶放在冰箱中冷藏，取出一定量的样品后使用显微天平称取出适量样品，并将其加入样品离心管内。

然后加入适量的甲醇，进行振荡混合，最后使用离心机离心沉淀，得到混合物的过滤液。

2. 固相萃取：将得到的过滤液加入到固相萃取柱中，使用甲醇等洗脱混合物，得到固相萃取柱的萃取液。

3. 色谱分析：将获取到的固相萃取液置于高效液相色谱仪中进行色谱分析，根据三聚氰胺的特征峰进行定性和定量分析。

四、实验结果经过实验验证，使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的结果显示，样品中三聚氰胺的含量为xmg/kg，达到了食品卫生安全标准。

五、实验结论通过该实验结果可以得出结论：固相萃取一高效液相色谱法是一种准确可靠的测定液态奶中三聚氰胺含量的方法。

该方法操作简便，结果准确，可以满足食品安全检测的需求。

六、实验改进尽管该方法已经得到了实验结果的验证，但在实际操作中还是存在一些可以改进的地方。

例如固相萃取柱的选择、色谱分析条件的优化等方面可以进行进一步的改进，以提高该方法的灵敏度和稳定性。

固相萃取—液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺含量[摘要】目的：建立固相萃取高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺含量的方法。

方法：样品经三氯乙酸溶液-乙腈提取，离心后，取5 ml上清液于预平衡的Cleanert PCX固相萃取柱净化，浓缩后以乙腈—水溶液定容，过0.2um微孔滤膜，采用RP—HPLC—UV法测定，外标法定量。

结果：试验对色谱分离条件进行了优化，三聚氰胺(Melamine) 简称三胺,别名氰尿酰胺、蜜胺，是一种用途广泛具有氮杂环结构的有机化工原料[3]，主要用于生产三聚氰胺一甲醛树脂，用于木材加工、塑料、涂料等行业，是重要的尿素后加工产品。

一．仪器和试剂EX1600型液相色谱仪（套）；JL-120超声清洗器；XW-80A旋涡混合器；TDZ4A-WS型离心机（4000r/min）；MTN-2800D氮吹仪浓缩装置；ASE系列固相萃取装置；DT-230A柱温箱Cleanert PCX 阳离子交换柱（60mg /3ml）。

甲醇、乙腈(色谱纯)，三氯乙酸、辛烷磺酸钠、柠檬酸、氨水(含量约25%~28％)、RO DI超纯水；三聚氰胺参考物质(含量超过99．5％)二．实验部分2. 1．1 标准储备液的配制准确称取50mg（精确到0.1mg）三聚氰胺标准品于50ml容量瓶中，用甲醇一水(体积比为5：5)溶液定容，配制成浓度为1．0 mg／mL的标准储备液，于4℃避光保存。

按实际检测需要，用乙腈-水（体积比2：8）溶液将储备液逐级稀释到相应的浓度，制成0.5mg/l; 1.0mg/l; 5.0mg/l; 10mg/l; 20mg/l;50mg/l;100mg/l标准工作溶液。

2. 1. 2 重复性取浓度为10mg/l的浓度标准溶液，重复进样6次，结果如下表：项目保留时间（min）峰面积(10uAU*s) 一次进样8.7430 61361.00二次进样8.7600 62827.00三次进样8.7480 62346.10四次进样8.7450 62390.80五次进样8.7550 62407.90六次进样8.7430 62574.10 RSD% 0.08 0.80表 1 浓度为10mg/l标准溶液的重复性图 1 浓度为10mg/l的标准溶液谱图2. 1. 3 线性实验取浓度为0.5mg/l; 1.0mg/l; 5.0mg/l; 10mg/l; 20mg/l; 50mg/l; 100mg/l 标准工作溶液进行分析，并计算线性范围。

高效液相色谱法测定乳制品中的三聚氰胺袁东;刘光增;刘国鹏【摘要】To optimize a quantitative high performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of melamine in dairy products, an HPLC method was set up. Chromatographic condition: The chromat ocolumn was ODS- SP C18 column, 150mm ×4. 6mm (i. d. )5urn. The mobile phase consisted of ion-pair buffer (pH =3.0) - acetonitrile (85:15), the flow rate was 1.0 ml/min, the column temperature was 35℃ and the UV detection wavelength was 242 nm. Results: The linearity was obtained over the range of 1. 0 - 50. 0μg/ml ( R = 0.9997), the average recovery was 90.1 - 105.9%, RSD was 2.04 - 5.26%.%优化测定乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱方法。

色谱条件：ODS—SPe18柱，250mm×4．6mm （i．d．），5μm；流动相：A为离子对缓冲液（2．02g庚烷磺酸钠和2．10g柠檬酸，加入约950mL水溶解，调节pH值至3．0后，定容至1L），B为乙腈，配制比例为85％A＋15％B；1．0mL／min；柱温：35℃；波长：242nm；选样量：20灿。

2010级化学教育仪器化学综合性与设计性实验—高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量——2012-06-03一、实验题目：乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法）二、摘要、关键词：[摘要]三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。

它是白色单斜晶体,为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取,离心, 结合高效液相色谱进行样品测定。

A液：0.9508 g辛烷磺酸钠（5mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。

色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm）,检测波长：240nm。

[关键词] 高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品三、引言1、对三聚氰胺的概述：三聚氰胺(Melamine) (化学式:C3H6N6 ) ,俗称密胺、蛋白精,国际纯粹与应用化学联合会命名为「1 ,3 ,5 - 三嗪- 2 ,4 ,6 - 三氨基」,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。

它是白色单斜晶体,几乎无味,微溶于水(311g/PL常温) ,可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等,对身体有害,不可用于食品加工或食品添加物。

三聚氰胺的结构式如下：三聚氰胺最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂(MF) 的原料。

三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。

该树脂硬度比脲醛树脂高, 不易燃,耐水、耐热、耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀,有良好的绝缘性能、光泽度和机械强度,广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业。

蛋白质主要由氨基酸组成。

蛋白质平均含氮量为16 %左右,而三聚氰胺的含氮量为66 %左右。

通用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过检测含氮量来估算蛋白质含量,因此,添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高,从而使劣质食品通过食品检验机构的测试。