急性皮肤刺激试验

急性皮肤刺激试验1 目的确定化学品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用及程度，为制定化学品对皮肤的保护措施提供依据。

2 制定依据《化妆品卫生规范（2007版）》。

3试验方法3.1受试样品处理液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。

需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验。

受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。

此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50 小于200 mg/kg 体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000 mg/kg 体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。

3.2实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。

应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。

实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。

实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。

实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。

选用常规饲料，饮水不限制。

3.3急性皮肤刺激性试验步骤3.3.1试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。

3.3.2 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

另一侧皮肤作为对照。

采用封闭试验，敷用时间为4h。

对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。

对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h 敷用试验。

试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。

四、皮肤刺激性/腐蚀性试验Dermal Irritation/Corrosion Test1 范围本规范规定了动物皮肤刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。

本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。

2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No.404, July 1992)USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines (Series 870. 2500, Aug. 1998 )3 试验目的确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。

4 定义4.1 皮肤刺激性(Dermal irritation)：皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎性变化。

4.2 皮肤腐蚀性(Dermal corrosion)：皮肤涂敷受试物后局部引起的不可逆性组织损伤。

5试验的基本原则将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。

采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。

急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。

6 试验方法6.1 受试物液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。

受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。

此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50小于200mg/kg体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为5000mg/kg体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。

6.2 实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。

应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。

一、实验目的本次实验旨在通过急性皮肤刺激试验，评估受试物质对皮肤的直接刺激作用，了解其在接触皮肤后可能引起的急性损伤情况。

实验依据《消毒技术规范》（2002年版）和相关标准进行。

二、实验材料1. 受试物质：[受试物质名称]，[受试物质浓度]。

2. 实验动物：豚鼠，体重200-250g，雌雄各半。

3. 实验设备：皮肤刺激试验箱、皮肤刺激试验板、分析天平、计时器、显微镜等。

4. 实验试剂：生理盐水、蒸馏水、棉签、酒精棉球、纱布等。

三、实验方法1. 实验动物分组：将豚鼠随机分为三组，每组10只，分别为受试物质组、溶剂对照组和生理盐水对照组。

2. 皮肤准备：将豚鼠置于皮肤刺激试验箱中，去除体毛，使皮肤暴露。

用酒精棉球清洁皮肤，待酒精挥发后，用纱布轻轻擦拭。

3. 受试物质涂抹：将受试物质[受试物质名称]按[受试物质浓度]要求，均匀涂抹于豚鼠皮肤上，面积为2cm×2cm。

溶剂对照组涂抹相同浓度的溶剂，生理盐水对照组涂抹等量生理盐水。

4. 涂抹时间：将受试物质涂抹于豚鼠皮肤后，用敷料覆盖固定，粘贴时间为4小时。

5. 观察与记录：涂抹受试物质后，每隔24小时观察豚鼠皮肤情况，记录红斑、水肿等皮肤刺激反应。

观察期为14天。

6. 结果评价：根据观察结果，按照皮肤刺激试验评价标准对受试物质进行评价。

四、实验结果1. 受试物质组：在涂抹受试物质后，豚鼠皮肤出现明显红斑、水肿，程度随时间逐渐加重。

在第7天时，红斑面积最大，水肿程度最严重。

2. 溶剂对照组：在涂抹溶剂后，豚鼠皮肤无明显变化。

3. 生理盐水对照组：在涂抹生理盐水后，豚鼠皮肤无明显变化。

五、讨论本次实验结果显示，受试物质[受试物质名称]对豚鼠皮肤具有明显的急性刺激作用。

涂抹受试物质后，豚鼠皮肤出现红斑、水肿，程度随时间逐渐加重。

这与受试物质的化学性质有关，可能与其释放的活性物质或对皮肤的直接刺激作用有关。

根据实验结果，受试物质[受试物质名称]的急性皮肤刺激强度为[评价等级]，建议在使用过程中加强防护措施，避免直接接触皮肤。

一、实验背景化妆品、药物、化工产品等在使用过程中，可能会对皮肤和眼睛产生刺激作用。

为了评估这些物质的安全性，本实验对某化妆品进行了急性皮肤眼刺激试验，以观察其对皮肤和眼睛的刺激反应。

二、实验目的1. 评估某化妆品对皮肤和眼睛的急性刺激作用；2. 为该化妆品的安全性评价提供依据。

三、实验材料1. 实验动物：成年白色家兔，体重2.0-2.5kg，共8只；2. 受试化妆品：某品牌化妆品，生产批号：20231201；3. 赋形剂：无刺激性乳液；4. 实验仪器：皮肤刺激试验箱、电子天平、滴管、纱布、胶布、绷带等。

四、实验方法1. 急性皮肤刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。

（2）皮肤准备：实验前24小时，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围各约3cm×6cm，不可损伤表皮。

（3）涂抹受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴在2.5cm×2.5cm大小的四层纱布上，敷贴在一侧皮肤上；对照组将相同体积的赋形剂敷贴在另一侧皮肤上。

然后用一层油纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察涂抹部位皮肤反应，按照表1和表2进行皮肤反应积分和刺激强度评价。

2. 急性眼刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。

（2）眼刺激准备：实验前24小时，将实验动物眼部用生理盐水清洗，去除分泌物。

（3）滴加受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴入每只实验动物的一侧眼结膜囊内；对照组将相同体积的赋形剂滴入另一侧眼结膜囊内。

（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察眼睛刺激反应，按照表1和表2进行刺激强度评价。

五、实验结果1. 急性皮肤刺激试验实验组：1只家兔在试验结束后1小时出现轻微红斑，24小时后红斑消退；2只家兔在试验结束后24小时出现轻微红斑和水肿，48小时后症状消失；1只家兔在试验结束后48小时出现轻微红斑和水肿，72小时后症状消失。

（医疗药品管理）农药登记毒理学试验方法中华人民共和国国家标准GB15670-1995农药登记毒理学试验方法ToxicologicaltestmethodsofPesticidesforregistration1主题内容和适用范围本标准规定了农药登记毒理学试验的方法、条件的基本要求。

本标准适用于为农药登记而进行的毒理学试验。

2急性经口毒性试验2．1目的求出试验农药对试验动物的半数致死剂量（LD50）；通过观察急性毒性效应的临床表现，初步估测毒作用的靶器官和可能的毒作用机理；为亚慢性、慢性和其他毒性试验的剂量水平设计提供参考；为急性毒性分级和制定安全防护措施提供依据。

2．2试验农药原药和制剂。

2．3试验动物2．3．1主要选用品系、遗传背景明确的初年大鼠。

各剂量组内同性别动物体重差异应小于平均体重的10%，组间同性别动物体重均值差异应小于5%。

2．3．2每壹剂量组的大鼠8~10只（雌雄各半），试验前要对动物观察壹周，确认健康后，方可使用。

2．4剂量分组2．4．1至少应设4~5个剂量组，各剂量组之间要有适当的剂量间距。

以便各组出现不同程度的毒性效应（死亡率），求得剂量效应曲线及LD50。

2．4．2如剂量达5000mg/kg体重之上，动物仍不出现死亡，则不需要进行更高剂量的试验。

2．5给药方法及观察时间2．5．1动物给药前应隔夜禁食但不禁水，称重后，壹次灌胃给药，给药后至少间隔2h进食。

2．5．2灌胃量大鼠按100g体重给1mL，小鼠按20g体重给0.4mL计算，灌胃可用水溶液、油溶液或悬液。

2．5．3给药后立即观察且记录动物的中毒表现，症状出现和消失的时间及死亡时间。

给药当日应连续观察，其后，每日至少观察2次，观察期为14d。

如于给药96h后出现迟发性新效应，则应延长观察期至3周或4周。

2．6观察指标2．6．1中毒症状全面观察中毒的发生、发展过程和规律以及中毒特点和毒作用的靶器官。

观察的系统包括：a．中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝；b．植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪；c．呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰；d．泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀；e．皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽；f．眼：眼球突出、结膜充血、角膜混浊；g．消化系统：腹泄、厌食。

化妆品急性毒性试验什么是化妆品急性毒性试验？化妆品急性毒性试验指采用动物试验的方式来评价化妆品对人体产生近期毒性危害的试验。

化妆品急性毒性试验做什么项目的？化妆品急性毒性试验包括急性皮肤毒性试验与急性经口毒性试验两项内容。

（一）急性皮肤毒性试验：1.试验目的急性皮肤毒性试验可确定受试物能否经皮肤吸收和短期作用所产生的毒性反应，可为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量提供依据。

试验方法受试物液体受试物一般不需稀释。

若受试物为固体，应研磨成细粉状，并用适量水或无毒、无刺激性、不影响受试物穿透皮肤、不与受试物反应的介质混匀，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

常用的介质有橄榄油、羊毛脂、凡士林等。

实验动物和饲养环境可选用健康成年大鼠、家兔或豚鼠作为实验动物，也可使用其他种属动物进行试验。

使用雌性动物应是未孕和未曾产仔的。

建议实验动物体重范围为：大鼠200g—300g；家兔2kg—3kg；豚鼠350g—450g。

实验动物皮肤应健康无破损。

试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d—5d 时间。

实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。

选用标准配合饲料，饮水不限制。

剂量水平根据所选用的方法要求，原则上应设4—6 个剂量组，每组动物一般为10 只，雌雄各半。

各剂量组间距大小以兼顾产生毒性大小和死亡为宜，通常以较大组距和较少量动物进行预试。

如果受试物毒性很低，可采用一次限量法，即用10 只动物（雌雄各半）皮肤涂抹2000mg/kg 体重剂量，当未引起动物死亡，可考虑不再进行多个剂量的急性经皮毒性试验。

（二）急性经口毒性试验：试验目的急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。

试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量的依据。

试验方法受试物受试物应溶解或悬浮于适宜的介质中，建议首选水，其次是植物油(如玉米油)，或考虑使用其他介质（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）。

一、实验目的本实验旨在评估某种化学物质对哺乳动物皮肤的急性刺激性，通过进行急性皮肤刺激试验，为该化学物质的安全使用提供科学依据。

二、实验材料1. 实验动物：成年雌性昆明种小鼠，体重20-25g。

2. 受试化学物质：某化学物质，纯度≥98%。

3. 对照溶剂：蒸馏水。

4. 实验器材：皮肤刺激试验仪、皮肤刺激试验板、无菌棉球、生理盐水、剪刀、剪刀、酒精灯、显微镜等。

三、实验方法1. 实验动物分组：将实验动物随机分为两组，每组10只，分别为实验组和对照组。

2. 皮肤刺激试验：在实验组小鼠的背部皮肤上涂抹0.5ml的受试化学物质，对照组小鼠涂抹等量的对照溶剂。

涂抹后用无菌棉球轻轻擦拭，使受试化学物质均匀分布在皮肤上。

3. 观察与记录：在涂抹受试化学物质后，分别在1小时、4小时、24小时、48小时、72小时观察皮肤反应，记录皮肤红斑、水肿、脱皮等反应程度。

4. 数据分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，比较实验组和对照组皮肤反应的差异。

四、实验结果1. 实验组小鼠在涂抹受试化学物质后，皮肤出现明显的红斑、水肿，部分小鼠出现脱皮现象；对照组小鼠皮肤无明显反应。

2. 对实验数据进行统计分析，结果显示实验组小鼠的皮肤红斑、水肿程度与对照组小鼠相比，具有显著性差异（P<0.05）。

五、实验结论根据实验结果，某化学物质对哺乳动物皮肤具有明显的急性刺激性，涂抹后可引起皮肤红斑、水肿、脱皮等反应。

建议在使用该化学物质时，采取适当的安全防护措施，以降低其对皮肤的潜在危害。

六、讨论1. 实验过程中，受试化学物质的浓度和涂抹面积对实验结果有一定影响。

本实验中，受试化学物质的浓度为0.5ml，涂抹面积为小鼠背部皮肤，实验结果具有一定的参考价值。

2. 实验结果表明，某化学物质对哺乳动物皮肤具有明显的急性刺激性，可能与该化学物质的化学性质有关。

建议进一步研究该化学物质的化学结构、分子量等因素，以期为该化学物质的安全使用提供更全面的科学依据。

皮肤急性毒性试验一.试验目的观察动物完整皮肤及破损皮肤短期内接触受试物所产生的毒性反应。

二.实验材料1.动物：选用成年健康家兔(2kg)、白色豚鼠(300g)、白色小型猪(7kg)或大鼠(200g)。

家兔或小型猪每组4只，豚鼠或大鼠每组10只。

受试动物应皮肤光滑、无损伤、无皮肤病。

2.受试物：膏剂、液体或粉末。

前两者可直接试验，后者需用适宜赋形剂(如羊毛脂、凡士林等)混匀，以保证受试物与皮肤良好接触。

三试验方法1 受试动物皮肤制备：①完整皮肤制备：动物在给药前24h，将背部脊柱两侧去毛，可采用剪、剃或适宜的脱毛剂，如8%Na2S等。

去毛范围约相当于体表面积的10%左右，即家兔约150cm2左右，豚鼠、大鼠约40cm2左右，小型猪约300cm2。

去毛后24小时检查去毛皮肤是否因去毛而受伤，受伤的皮肤不宜做完好皮肤的毒性试验。

②破损皮肤准备：按上述方法将受试动物去毛，消毒皮肤后，用消毒手术刀做井字形划破表皮，或用砂布纸摩擦打毛皮肤等，以皮肤出现轻度渗血为度。

2 剂量选择和分组：分对照组和试验组。

对照组应设赋形剂组或空白组。

试验组分为完整皮肤组和破损皮肤组，各2～3个剂量组。

每组动物数为家兔或小型猪4只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半。

低剂量组以临床用制剂(含辅料)用量不低于1g或1ml，高剂量组为低剂量组的2～4倍，或各剂量组间间距根据受试物毒性大小和预试结果而定，一般以0.65～0.85为宜。

根据中药具体特点，可以提高浓度或增加24小时内用药次数。

若用受试物剂量超过有效浓度20倍以上，仍未出现异常反应或死亡，则只设一个高剂量组3 给药方法及观察时间：试验时，将受试物均匀的涂敷于动物背部脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物，并用无刺激性砂布、胶布或网孔尼龙绷带加以固定。

给受试物24小时后，可用温水或适当溶剂去除残留的受试物或赋形剂，每日观察，连续观察7天。

给受试物时应注意，若受试物是固体粉末或中药散剂，则需加适量水或赋形剂(如羊毛脂、凡士林、橄榄油等)混匀，以保证受试物与皮肤的良好接触。