高效液相色谱法对丹参中丹参酮ⅡA,丹参酮Ⅰ

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ ，tanshinone Ⅱ A in Salviae miltiorrhizae from different habitats. METHODS： RP-HPLC method was adopted. The determination was performed on Kromasil TMC18 （250 mm× 4.6 mm，5 µm） column with mobile phase consisted of methanol-water （75 ʒ 25） at flow rate of 1 mL ㊃ min-1. The detection wavelength was set at 270 nm and the column temperature was 30 ℃ . The injection size was 10 µL. RESULTS： The linear ranges of cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ，tanshinone ⅡA in S. miltiorrhizae were 1.45～10.19 µg （r＝0.999 8） ， 2.16～15.12 µg （r＝0.999 6） ， 3.15～22.06 µg （r＝0.999 7） ，repsectively. The average recoveries were 99.44％ ，99.48％ ，99.34％ ， respectively. RSDs were 0.2％ ，0.1％ ， 0.1％ （n＝6） . There were significant differences in the contents of cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ，tanshinone ⅡA in S. miltiorrhizae from different habitats. CONCLUSION：The method is stable，reliable and reproducible for the quality control of S. miltiorrhizae. KEY WORDS Salviae miltiorrhizae；Cryptotanshinone；Tanshinone Ⅰ；TanshinoneⅡA；RP-HPLC；Habitats；Content determination 丹参是唇形科植物丹参的根及根茎 ， 主产四川 、 山西 、 河 北、 江苏 、 安徽等省 。 中医理论认为丹参性味苦 、 微寒 ， 归心 、 肝二经 ， 具有祛瘀止痛 、 活血通络 、 清心除烦的功效 。 丹参的 有效成分包括脂溶性成分 （二萜醌类） 和水溶性成分 （酚酸 类） ， 均具有一定的生理活性。由于受产地、 品种、 气候和生态 环境、 炮制方法等影响， 不同丹参药材所含主要活性成分差异 较大。 《中国药典》 丹参项下脂溶性成分以丹参酮ⅡA 作为质控 指标[1]， 而近年研究表明， 丹参的脂溶性成分还包括隐丹参酮、 3] 丹参酮Ⅰ等 ， 且含量较高 、 活性较强 [2， 。 本试验收集了河北 、 山东 、 江苏 、 河南和安徽等主产地的丹参 ， 包括不同栽培方法 的丹参 ， 采用反相高效液相色谱 （RP-HPLC） 法对其中所含隐 丹参酮、 丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA 的含量进行测定和比较， 以为丹 参的选优与临床应用提供一定的参考依据[4]。 超声仪器有限公司） ； BP211 十万分之一电子分析天平 （德国赛 多利斯公司） 。 隐丹参酮 （批号 ： 110852-200305， 供含量测定用） 、 丹参酮 Ⅰ （批 号 ： 0867-200205， 供 含 量 测 定 用） 、 丹参酮ⅡA （批 号 ： 110766-200417， 供含量测定用） 均购自中国药品生物制品检定 所； 丹参购于不同产地 （1、 2 号： 河北； 3、 4 号： 山东； 5、 6 号： 江 苏； 7、 8 号： 河南； 9、 10 号： 安徽） ， 均经北京市海淀区药品检验 所韩杰副主任中药师鉴定为真品。

学 术 论 坛
科技资讯 ２０１０ ＮＯ．２２
ＳＣＩＥＮＣＥ ＆ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ
炮制对丹参有效成分含量的影响
李懿 （ 吉林农业工程职业技术学院 吉林四平 １ ３ ６ ０ ０ ０ ）
摘 要：目的：探索炮制过程对丹参药材质量的影响。方法：以丹参酮ＩＩＡ和丹酚酸Ｂ为检测指标，采用高效液相色谱法检测。结果：按照现
《 中 国 药 典 》２００５ 年 版 规 定 丹 参 酮 ⅡＡ 含量不得少于０．２０％，丹酚酸Ｂ含量不得少 于３．０％。
另外，对比３种不同规格的丹参饮片有 效成分含量，可以发现，丹参饮片和自制饮 片在经过水洗干燥后有效成分含量有所降 低 。所 以 可 以 肯 定 炮 制 方 法 对 丹 参 有 效 成 分含量影响很大。
２２１
版社，１７２～１７５． ［２］ 国 家 药 典 委 员 会．中 国 药 典（ ２００５ 版一
部）［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００５． ［３］ 徐莉莎，吴航宇，徐江平，等．丹酚酸Ｂ对
家兔血液流变性的影响［Ｊ］．微循环学杂 志，２００３，１３（１）：１９～２０．
科技资讯 ＳＣＩＥＮＣＥ ＆ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ
对照品溶液的制备：精密称取丹参酸Ｂ 对照品适量，加７５％甲醇制成每１ｍｌ含０．１４ｍｇ 的 溶 液 。即 得 。
供试品溶液的制备：取本品粉末（过三 号筛）０．２ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密加入７５％甲醇５０ｍＬ，称定重量，加热回流 １小时，取出，放冷，再称定重量，用７５％甲醇 补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即 得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与 供试品溶液各１０μＬ，注入液相色谱仪，测 定，即得。
表 １ 各样品检测数据

高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量何玲玲【摘要】目的建立高效液相色谱法测定中药丹参不同部位中丹参酮IIA 的含量.方法采用反相高效液相色谱法,选择色谱柱Hypersil ODSC18 柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇∶水=75:25;流速为1.2mL/min;柱温为30℃;检测波长为268 ～ 270nm.结果丹参酮IIA 浓度在1.25 ～21.45μg/mL(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.83%,RSD=2.04%(n=6).结论采用反相高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA 的含量,该方法快速、灵敏、准确,可以为丹参的种植、品质鉴定、扩展药用部位以及控制丹参药材的质量提供测定依据.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2012(010)011【总页数】2页(P36-37)【关键词】高效液相;丹参;丹参酮IIA;色谱柱【作者】何玲玲【作者单位】佛山市中医院,广东,佛山,528000【正文语种】中文【中图分类】R282.710.3丹参（Salvia Miltiorrhiza Bunge）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属多年生草本植物，传统以根入药。

丹参味苦，性微寒，具活血化瘀、凉血消痈、清心除烦之功效。

活性成分主要包括脂溶性成分和水溶性成分，丹参酮IIA是其脂溶性代表成分之一，相对含量较高，有扩张冠脉，抗心肌缺血等作用[1]。

目前，高效液相色谱法（HPLC）已经成为控制中药质量的最为有效的手段，而且很多资料中记录了对丹参高效液相色谱的研究[2,3]，但对丹参的根、茎、叶中丹参酮IIA的含量测定鲜有报道，本文通过对丹参各部位中丹参酮IIA含量的测定，以为今后中药丹参的采集、部位选择及加工提供一定的理论参考，现将研究结果报道如下。

1 实验材料1.1 实验仪器Waters 700高效液相色谱仪（美国 Waters公司）；Waters 700紫外检测器；色谱柱Hypersil ODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm ）；BS110S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；干燥箱（浙江省金坛市正基仪器有限公司，型号CS-202），电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂，型号：HH S11-2），超声仪（ AUTOSC I ENCE，型号：AS5150A ）。

中药鉴定学考卷（附答案）一、选择题（每题1分，共5分）1. 下列哪种方法不属于中药鉴定的传统方法？A. 性状鉴定B. 显微镜鉴定C. 气相色谱法D. 理化鉴定答案：C2. 下列哪项不是中药材鉴定的主要目的？A. 确保药材质量B. 鉴别药材真伪C. 提高中药材价格D. 研究药材成分答案：CA. 甘草B. 人参C. 黄连D. 丹参答案：D4. 下列哪个器官不是中药材的主要药用部位？A. 根B. 茎C. 叶D. 花粉答案：D5. 中药材的哪种特性与采收季节密切相关？A. 颜色B. 气味C. 味道D. 硬度答案：A二、判断题（每题1分，共5分）1. 中药鉴定的现代方法主要包括色谱法、光谱法和质谱法。

（√）2. 中药材的形状、大小、色泽等特征对鉴定药材具有重要意义。

（√）3. 所有中药材都可以通过外观性状进行准确鉴定。

（×）4. 显微镜鉴定是中药鉴定的重要手段之一。

（√）5. 中药材的采收季节对药材质量没有影响。

（×）三、填空题（每题1分，共5分）1. 中药鉴定的三大任务是____、____、____。

答案：鉴别真伪、评价质量、研究成分2. 中药材的____、____、____等特征是药材鉴定的主要依据。

答案：形状、大小、色泽3. 中药材的____、____、____等部位常作为药用部位。

答案：根、茎、叶4. 中药鉴定的现代方法主要包括____、____、____。

答案：色谱法、光谱法、质谱法5. 中药材的____、____、____等特性与采收季节密切相关。

答案：颜色、气味、味道四、简答题（每题2分，共10分）1. 简述中药鉴定的意义。

答案：确保药材质量、保障人民用药安全、促进中医药事业发展。

2. 中药材性状鉴定的主要内容有哪些？答案：形状、大小、色泽、气味、味道、质地。

3. 简述中药材显微鉴定的步骤。

答案：制片、观察、描述、绘图。

4. 影响中药材质量的因素有哪些？答案：品种、产地、采收季节、加工方法、贮存条件。

ｖ （ ｏ ． １ ％磷 酸 ）＝８ ５ ： １ ５混合 溶 液为 流动 相 ， 检 测 波长 为 ２ ５ ４ ａ ｍ， 流速 为 １ ． ０ ｍＬ ／ ｍ ｉ ｎ ． 在 上述 色谱
条件 下隐丹参酮、 丹参酮 Ｉ 和丹参酮 Ⅱ 在 １ ０ ｍ ｉ ｎ内实现有效分 离和准确测定， 加标 回收率在
ｈ ｔ ｔ ｐ： ／ ／ ｘ ｂ ． ｙ ｎ ｎ ｉ ． ｅ ｄ ｕ ．丹 参 及 其 复 方 制剂 中的 ３个 丹 参酮
马志刚 ， 曹秋娥 ， 丁 中涛
（ 云南大学 化学 科学与工程学 院 ， 教育部 自然资源药物化学 重点 实验 室 ， 云南 昆明 ６ ５ ０ ０ ９ １ ）
云南 民族大学 学报 ： 自然科 学版 ， ２ ０ １ ３ ， ２ ２ （ ６ ） ： ３ ９ １ —３ ９ ３
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２—８ ５ １ ３ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ６ ． ０ ０ １
ＣＮ ５ ３一ｌ １ ９ ２ ／Ｎ Ｉ Ｓ Ｓ Ｎ １ ６ ７ ２—８ ５ １ ３
摘要： 建立了同时测定丹参及其复方制剂 中隐丹参酮、 丹参酮 Ｉ 和丹参 酮 Ⅱ 的反相 高效液相
色谱 法． 采 用 Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ Ｓ ｐ ｈ ｅ ｒ ｉ ｓ ｏ ｒ ｂ Ｏ Ｄ Ｓ ２ （ ５ ｍ， ４ ． ６ ｍ ｍ ｉ ． ｄ ．Ｘ２ ５ ０ ｍｍ） 为 色谱 柱 ， （ 甲醇 ） ：
Ｓ ａ ｌ ｖ ｉ ａ ｍｉ ｌ ｔ ｉ ｏ ｒ ｒ ｈ ｉ ｚ ａ Ｂ ｇ ｅ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｂ ｙ ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｄ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｈ ｉ ｇ ｈ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ（ Ｒ Ｐ—

高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮ⅡA 含量的方法褚晶晶【摘要】　目的　观察采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量进行测定的效果。

方法　本研究检测供试品溶液以超声波提取法对丹参片进行制备, 对照品采用丹参酮ⅡA, 测定方法采用高效液相色谱法, 选择合适的色谱柱、流动相以及检测波长, 并控制适宜的流速以及进样量, 测定温度选择为室温。

结果　在0.5126~4.8700 μg/ml 范围内丹参酮ⅡA 与峰面积具有良好的线性关系, 求的回归方程为Y =1425.3X +28.75, r =0.9996, n=5；平均回收率为99.63%, RSD 值为1.46%(n=9)。

结论　采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量进行测定具有操作方法简便, 测定结果稳定的优势, 适用于丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量控制, 值得推广。

【关键词】　高效液相色谱法；丹参片；丹参酮ⅡA ；含量测定DOI ：10.14164/11-5581/r.2017.12.112作者单位：123000　阜新市药品检验所业务办公室丹参片在2015年版《中国药典》中质量标准只有丹酚酸B 的含量测定, 本文采用高效液相色谱法对丹参片中丹参酮ⅡA 的含量测定方法进行了研究。

1　仪器与材料本研究采用的高效液相色谱仪为美国waters E2695高效液相色谱仪。

丹参片(批号分别为161011, 161012, 161013), 丹参酮ⅡA 对照品(中国药品生物制品检定所, 批号为0766-200201)。

本研究所用甲醇均为色谱纯, 所用水为纯化水。

2　方法与结果2. 1　色谱条件　选择规格为(4.6 mm×250 mm, 5 μm)的waters symmetry C18色谱柱, 以甲醇-水(80∶20)为流动相, 控制流速为1.0 ml/min, 选取270 nm 为检测波长, 并控制适宜的冲柱比例以及进样量。

2. 2　溶液的制备　①对照品溶液：称取20 mg 丹参酮ⅡA 对照品, 将其放于100 ml 棕色量瓶中, 采用甲醇溶解后稀释至刻度。

ｒｖ ｒｅ －ｈａｅ ｈｇ ｅ ｆ ｍ ａ ｃ ｉｕ ｄｃ ｒ ｍａｏ ｒｐｈ ｎ ｔｅｃ ｎ ｅ ｔｏｆｔｎ ｈｎｏ ｅＩＡ ｎ Ｄａ ｈ ｎ， ｈ ｔ ｄｉ ａ ｉ ｓ ｎ ｉｖｅ ｃ ｕ ａｅ， ｎｄ ｃ ｎ ｅ ｅ ｓ ｄｐ ｓ ｉｈ ｐ ｒｏｒ ｎ ｅｌｑ ｉ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｙ ｉ ｈ ｏ ｔｎ ｓ ｉ ｎ Ｉ ｉ ｎｓ ｅ ｔ ｅｍｅｈｏ ｓｒｐｄ， ｅ ｓｔ ，ａ ｃ ｒｔ ａ ａ ａ ｉ ｐ ｏ ｉｅｍｅ ｓ ｒｍ ｅ ｔ ａ ｉ ｏ ｅｐｌｎ ｅ ａｖａ ｃ ｒｃｅ ｉａｉｎ ａ ｘ ｎ ｉｎｏ ｒ ｖｄ ａ ｕ ｅ ｎ ｓｓｆ ｒｔ ａ ｔｄＳ ｌｉ， ｈａａ ｔｒｚ ｔ ， ｎｄｅ ｐａ ｓｏ ｆｍｅ ｉｉａ ｒｓｏ ｈ ｕａｉ ｃ ｎｒ ｌ Ｄａ ｈ ｎ ｂ ｈ ｏ ｄｃｎ ｌ ｔ ｆｔｅｑ ｌｙ ｏ ｔｏ ｐａ ｔ ｏｆ ｎｓｅ ．
ｃ ｎｅ ｔ ｔ ｎｉ １ ５ １ ５ ｇ Ｌ（ ０ ９ ７ ｈ ｄａ ｏ ｄ ｉｅ ｌ ｉ ｓｉ ｔｅ ｖ ｒ ｅ ｅｏ ｅ ａ ９ ． ％ Ｒ Ｄ ２ ４ （ 二６． ｏ ｃ ｓ ｎ Ｂ ｏ ｃｎ ａ ｏ ． ～２ ． ｇ ／ ｒ ． ９ ） ａ ｇ ｏ ｎａ ｒ ａ ｏ ｈ ， ｅ ｇ ｃ ｖｒ ｗ ｓ ９ ３ ， Ｓ ． ％ ｎ。 ）Ｃ ｎ ｌ ｉ ｙ ｒｉ ｎ ２ ４ ｍ ９ ｌ ｒ ｅ ｔｎ ｐ ｈ ａ ａ ｒ ｙ ８ ０ ｕｏ
参 药材 的质 量提 供测 定依据 。 【 关键 词】 高效 液相 ；丹参 ；丹 参酮 Ｉ Ｉ 色谱柱 Ａ；
中 图分 类号 ：Ｒ ８ ．１ ． ２ ２７ ０３
文献标 识码 ：Ｂ
文 章编号 ：１ ７－ １４ （０ ２ １－ ０６ ０ ６ １ ８９ ２ １） ｆｔ ｅ Ｄ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｈｅ Ｃｏｎｔ ｎ ｎｓ ｉ ｎｅ Ｉ Ａ ｎ ａ ｈｅ ｅ ｔ ｏｆ Ｔａ ｈ ｎｏ Ｉ ｉ Ｄ ｎｓ ｎ

应用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量目的：分析高效液相色谱法在中药丹参不同部位中丹参酮IIA含量测定中的应用价值。

方法：建立反相高效液相色谱测定模式，选用Hypers110DS（C18）色谱柱，以75甲醇/25水为相液流动相比例，分别检测丹参不同部位有效成分丹参酮IIA的含量，并通过实验验证这一方法的有效性、稳定性等。

结果：丹参酮IIA面积和浓度呈线性相关，在1.25-21.45yg/ml浓度范围内线性最佳；加样溶液丹参酮IIA回收率平均为99.52%，相对标准偏差值为2.02%；丹参茎、叶未含丹参酮IIA。

结论：反相高效液相色谱法，可在短时间内精准获知丹参不同部位丹参酮IIA的含量，为丹参品质鉴定、药用价值和剂量研究工作提供可靠参考资料。

标签：高效液相；丹参；丹参酮IIA；色谱柱丹参是药用价值极高的草本植物，其根部内含丹参酮，常被入药调经疏络、活血祛瘀、消肿镇痛，其中丹参酮IIA是丹参脂溶性成分的代表物质，被广泛用于冠心病防治。

但是，丹参入药采购、运输、选品等各个环节均存在危险因素，如部分不法分子试图用伪劣品以假乱真牟取利益，制药工作人员专业水平不达标不能准确鉴别真伪、优劣，严重影响了中医药学的发展。

鉴于此，本院开展了丹参不同部位丹参酮IIA含量测定研究，旨在证实高效液相色谱法的应用价值并为丹参药用研究提供参考资料。

1 材料和设备1.1 实验材料本实验研究材料包括由中国药品生物制品检定所提供的丹参酮IIA标准品，江阴祥辉化工有限公司提供的色谱纯甲醇，广州致信中药饮片有限公司提供的干燥丹参根（6个月龄）、茎和叶子，实验用超纯水。

1.2 实验设备本实验研究设备包括高效液相色谱仪（杭州汉泽仪器有限公司，型号为LC-2010HT），紫外检测器（Genesys系列）、色谱柱（Hypersi10DSC18，长度为250mm，内径为4.6mm，填料颗粒直径为Sμm）、电子分析天平（瑞士梅特勒一托利多AB-S系列）、精密可程式干燥箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司，BXH-130S）、电热恒温水槽（上海精密仪器仪表有限公司，CU系列）、实验室色谱超生仪（必能信超声上海有限公司，SB2200）。

高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA含量的系统适用性优化目的：对丹参酮ⅡA的高效液相色谱含量检测方法进行系统适用性优化。

方法：对照品经配制后，在其他实验条件相同的情况下，采用不同比例的流动相甲醇：A（甲醇∶水为75∶25）、B（甲醇∶水为80∶20）、C（甲醇∶水为85∶15）进行试验比较。

结果：经与《中国药典》2010年版提供的方法比较，在流动相为甲醇∶水（85∶15）的条件下丹参酮ⅡA的峰形更好、出峰时间更短、柱效更高。

结论：优化本试验的系统适用性后，该法操作简便、快速、稳定性好、精密度高，并且可进一步节约试验成本，适合丹参酮ⅡA的含量测定。

[Abstract] Objective: To optimize the system applicability of HPLC measurement of TanshinoneⅡA content. Methods: After the compound reference substance, using different proportion of mobile phase: A (CH3OH∶H2O for 75∶25);B (CH3OH∶H2O for 80∶20);C (CH3OH∶H2O for 85∶15) comparative experiments in other experiments under the same conditions. Results: Comparing with the method providing by the 2010 Ch. P, the peak shape of TanshinoneⅡA was better, the peak time was shorter, the column efficiency was higher, when the mobile phase was C (CH3OH∶H2O for 85∶15). Conclusion: After optimizing system applicability of the experiment，the method is more simple, faster, good stability and high precision and save test cost. It is suitable for the content determination of TanshinoneⅡA.[Key words] TanshinoneⅡA; HPLC; System applicability丹参酮ⅡA是丹参的重要有效成分之一，临床上能够改善冠心病、心绞痛和胸闷等症状[1]，并具有抗血管炎症的作用[2]。

高效液相色谱测定丹参酮ⅡA含量【原理】利用各组分在两相中的分配系数的不同而获得分离。

【仪器与试剂】1.仪器：液相色谱仪；微量注射器；C18反相色谱柱；棕色瓶（25ml，50ml）；吸量管（2ml）；超神提取器。

2.试剂：甲醇（色谱纯）；蒸馏水。

3.试药：丹参酮ⅡA对照品，单身药材。

【实验内容】色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270 nm，理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000.对照品溶液的制备取丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含16.25ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

【实验数据及处理】运用外标法定量分析，分别精密量取一定量的对照品和试样，分别进样相同体积的对照品溶液和试样溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测的峰面积，用下式可以计算出供试品的浓度。

C供/C对=A供/A对 => C供=（A供/A对）*C对20片总重量：0.6025gC对=16.25μg/mlA供=2999.47（mv/sec）A对=1088.09（mv/sec）C供=（A供/A对）*C对=（2999.47/1088.09）*16.25=44.80μg/mlW（%）=（M丹参酮ⅡA/M药材）×100%=（44.80×10-6g/0.6025g）×100%=0.744%20片复方丹参片中含丹参酮ⅡA量：4.48mg。

每片含丹参酮ⅡA量：0.224mg。

i. d. × 250 mm） ； 流动相： 甲醇 － 0. 1% 磷酸水溶液混 合物（ V （ 甲 醇） ∶ V （ 0. 1% 磷 酸） = 85 ∶ 15 ） 流 速： 1. 0 mL / min； 柱 温： 40 ℃ ； 检 测 波 长： 254 nm； 进 样 量： 20 μL． 色谱图见图 1．
（ Key Laboratory of Medicinal Chemistry for Nature Ｒesource，Ministry of Education， Yunnan University，Kunming 650091，China）
Abstract： Development of a method for the determination of cryptotanshinone，tanshinoneⅠand tanshinoneⅡA in Salvia miltiorrhiza Bge and its preparations by reversed phase high performance liquid chromatography （ ＲP － HPLC） . The separation and determination was carried out in the Waters Spherisorb ODS2 column（ 5 μ m，4. 6 mm i. d. × 250 mm） using methanol － 0. 1% phosphoric acid （ 85∶ 15，V / V） as mobile phase with the flow rate of 1. 0 mL / min and detective wavelength of 254 m. Cryptotanshinone，tanshinoneⅠand tanshinoneⅡA in Salvia miltiorrhiza Bge and its preparations such as fu － fang － dan － shen － pian and fu － fang － dan － shen － di － wan could be separated and determined availably within 10 minutes． The average recoveries were in the range of 90% to 110% . The method is simple，rapid and of high accuracy Key words： Salvia miltiorrhiza Bge； preparations； reversed phase high performance liquid chromatography

度洗脱 ， 洗脱程序见表 １ ， 流速 １ ． ０ ｍｌ Ｍｍ ｉ ｎ ； 柱温 ３ Ｏ℃ ； 检测
波长 ２ ８ ０ ｎ ｍ， 进样量 ｌ ０ Ｌ 。
表 １ 梯度洗脱程序
ⅡＡ含量为两大类成分的代表物 ， 分别测定 ， 所采用 的色谱 系 统及样 品的前处理方法等各不相同 ， 操作繁琐 ， 不能全面反映
２ 方 法 与 Βιβλιοθήκη 果 成分为丹酚酸 Ｂ 、 丹参素、 原儿茶醛 ， 脂溶性 的丹参酮类 的主 要成分为迷迭香酸、 二氢丹参酮 、 隐丹参酮 、 丹参酮 Ｉ、 丹参酮 ⅡＡ。现代药理学研究表明 ， 丹参中酚酸类 和丹参酮类成分均 具有显著 的生物活性 ， 因此 可以通过 测定这些 化合物 的 含量来全面评价丹参的质量 。《 中华人 民共 和国药典》 （ ２ ０ １ ０
版） 中对丹参 含量 的控制 方法 ， 只以丹酚酸 Ｂ含量和丹参 酮
２ ． １ 色谱条件
色谱柱 ：Ｓ ｈ ｉ ｍ ｐ ａ ｋ Ｃ ｌ ８ （４ ． ６ ｎ ｌ ｌ ｎ ×１ ５ ０ ｍ ｍ， ５ ｌ ａ ， ｍ） ； 流动
相： Ａ为 ０ ． ２ ％ 甲酸的乙腈溶液 ， Ｂ为 ０ ． ２ ％ 甲酸的水溶液 ， 梯
药材 中多个活性成分的含量 以及成分间的相关性 。本研究采
用高效液相色谱 （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） 法， 建 立 以同一色谱 条件 和样 品前
处理方法 ， 同 时测定 丹参 中多 个活 性成 分 （ 丹 参素 、 原 儿 茶
醛、 丹酚酸 Ｂ 、 隐丹参 酮、 丹参酮 Ｉ和丹参酮 ⅡＡ等 ） 的分析 方 法， 操作简便 易行 ， 并对 ６个不 同产地丹参药材 中活性成分 进
脂溶性丹参 酮类 和水溶性丹 酚酸类 ， 水溶性丹 酚酸类的主要

临床和实验 医学杂志
２ ０ １ ３年 ４月 第１ ２卷 第８期
・５９１・
高效液相色谱法检测不同产地的丹参中丹参酮Ｉ Ｉ Ａ的含量 圜
钱 之光 （ 上 海市 第八人 民 医院 药剂科
【 摘 要】 目的
上海
２ ０ ０ ２ ３ ５ ）
观察 高效液相 色谱（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） 法检测 丹参饮 片 中丹参酮 Ⅱ Ａ的含 量的性 能特点和 应用价值 。方法
ｈ ｉ ｇ ｌ ｌ ｅ ｓ ｔ ， ａ ｎ ｄ ｈｏ ｔ ｓ ｅ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ｗ ａ ｓ ｈｅ ｔ ｍｉ ｎ ｉ ｍｕ ｍ．Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ＨＰ Ｌ Ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｃ ａ ｎ ｑ ｕ ｉ ｃ ｋ ｌ ｙ ａ ｎ ｄ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ｌ ｙ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｔ ａ ｎ ｓ ｈ ｉ ｎ ｏ ｎ ｅ Ｉ Ｉ Ａ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ
丹参 酮 ⅡＡ对 照品的 线
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 色谱柱采 用 Ｋ ｒ ｏ ｍ ａ ｓ ｉ ｌ Ｃ １ ８ ， 以甲醇 一水 （ ８ ２ ：１ ８ ） 为流动相 ， 检 测波长为 ２ ７ ０ ｎ ｍ。结果
性方程为 Ｙ＝ ４ ． ９ ８×１ ０ 。 Ｘ一 ３ ． ７ ９×１ ０ ， Ｒ ２＝ ０ ． ９ ９ ９ ６ 。丹参 酮 ⅡＡ在 ０ ． ０ ３ Ｉ ｇ～ ０ ． ５ １ ｇ的质量范 围内线性关 系良好 。对 不 同产地 的丹参饮 片进 行检 测 ， 结果表 明云南地 区生产的丹参饮 片 中丹参 酮 ⅡＡ的含量最 高， 而 山西地 区生产 的丹参饮 片 中丹参 酮 ⅡＡ的含 量最低。结论 运用 ＨＰ Ｌ Ａ法可以准确快速 地对丹参饮 片 中的丹参 酮 ⅡＡ的含 量进 行检 测 ， 应用 该方法对不 同产地 的丹参饮 片进行检 测 ， 具有精 密度好 、 稳定性 高、 重现性好 、 准确度高等优点 。 【 关键词 】 丹参饮 片 丹参 酮 ⅡＡ 高效液相 色谱

丹参提取物适用范围
（1） 对冠状动脉作用：治疗冠心病，能改善冠状动脉循环，抑制血栓疾病发生。 丹参素具有显著扩张冠状动脉，增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量，减慢心率和 增加心肌收缩力的作用。 （2） 对心肌修复作用：丹参素及丹参酮IIA均能显著延长小鼠耐缺氧时间，减轻 缺氧引 起的心肌损伤，同时，改善心肌收缩力，促进心肌再生。 （3） 对微循环作用：丹参舒心胶囊能扩张动物微动脉，使毛细管网开放数量增 多，加 快血液流速、流量，从而改善微循环障碍。 （4） 对血液流变性作用：丹参素及丹参酮IIA有抑制ADP诱导血小板凝集、抑 制血小板 TXA2的合成与释放缩血管物质及促进纤维蛋白降解作用。可降低冠心病、 脑缺血中风及 心肌梗塞病人的全血和血浆粘度，减少红细胞压积，通过抗凝降 粘的作用使患者血液流变学指标恢复正常。 （5） 对血脂的作用：丹参素可抑制内源性胆固醇的合成，降低氧化低密度脂蛋 白（LDL ）的生成，降低中性脂肪，可用于高脂血症引起的动脉粥样硬化。 （6）抗感染，用于化脓性和外科感染（急性扁桃体炎，外耳道炎、骨髓炎、手 术感染）。 （7）用于治疗宫颈糜烂。
建议用量
唇形科草本植物丹参的根和根茎。产于江苏、安徽、河北、四川等地。春、秋采挖，洗净，晒干。切片、 段，生用或酒炒用。 [性能]味苦，性微寒。能活血化瘀，凉血，安神。 [参考]含丹参酮、原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、维生素E等。 能扩张冠状动脉，增加冠脉流量，改善心肌缺血、梗塞和心脏功能，调节心律，并能扩张外周血管， 改善微循环；能提高机体耐缺氧能力；有抗凝血，促进纤溶，抑制血小板凝聚，抑制血栓形成的作用； 能降低血脂，抑制冠脉粥样硬化形成；能抑制或减轻肝细胞变性、坏死及炎症反应，促进肝细胞再生， 并有抗纤维化作用；能缩短红细胞及血色素的恢复期，使网织细胞增多，能促进组织的修复，加速骨折 的愈合；有中枢神经有抑制作用；有抗肿瘤作用；能增强机体免疫功能；能降低血糖；对结核杆菌等多 种细菌有抑制作用。 [用途]用于血瘀所致月经不调、痛经、经闭，产后瘀滞腹痛；冠心病心绞痛，动脉粥样硬化；慢性肝炎、 肝硬化，腹腔包块或肿瘤；慢性肺心病，支气管哮喘；血不养心或心火偏亢，心悸不安，心烦失眠。 [用法]一日5～15g。煎汤，浸酒，泡茶。 [附方] 1，田七丹参：三七100g，丹参15g。水煎取浓汁，加白糖适量，干燥成颗粒。每次20g，温水溶 化饮。亦可将二药研为细末，每次10g，加糖适量，泡茶饮。 源于《全国医药产品大全》。本方用二药活血化瘀，并降血脂，增加冠脉流量。用于冠心病心绞痛。 2，丹参饮：丹参15g，檀香、砂仁各5g。以水先煎丹参，后下檀香、砂仁煎沸饮。可加适量红糖 调味。 源于《时方歌括》。本方以丹参活血化瘀，檀香、砂仁行气止痛。用于血瘀气滞，脘腹疼痛。现亦 用于冠心病心绞痛。 3，丹红酒：丹参60g，红花、月季花各15g。以白酒500g浸渍。每次饮1~2小杯。 本方以三者活血化瘀，调经。用于血瘀经闭，月经不调，痛经。亦用于冠心病心绞痛。 4，丹参玉楂饮：丹参、玉竹、山楂各15g。煎水饮。 本方以丹参活血化瘀，并同玉竹、山楂降血脂。用于冠心病心绞痛，动脉粥样硬化，高脂血症。

丹参中丹参酮ⅡA，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮的高效液相色谱分析——外标法定量目的要求(1) 掌握高效液相色谱梯度洗脱分析方法；(2) 掌握外标法定量。

基本原理高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出）由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。

本实验采用十八烷基硅烷键合相为固定相，甲醇-水溶液为流动相分离丹参脂溶性提取物。

当两组分在固定相和流动相间分配时，极性大的物质在流动相中的溶解度较大，而极性小的物质在流动相中的溶解度较小，组分的流出顺序是极性大的化合物在前，极性小的化合物在后。

一、仪器岛津LC-20A，恒流泵，脱气机，紫外检测器，高压六通进样阀，色谱工作站，电子天平，超声波仪二、试剂超纯水，丹参酮ⅡA对照品，丹参酮Ⅰ对照品，隐丹参酮对照品，甲醇（色谱纯），乙醇（分析纯），磷酸（分析纯）三、实验条件1. 色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）2. 流动相：A- 0.1% 磷酸水溶液，B- 甲醇；流速0.8mL/min0~75 min，60%~68% B；75~80 min，68%~70% B3. 紫外检测器：测定波长254 nm4. 柱温箱：30℃5. 进样量：10μL四、实验步骤1. 称取0.2g干燥样品粉末，置于具塞三角瓶中，准确加入25.00mL 80%乙醇，称重，超声提取25min，补重，过滤，得到待测液。

2. 取对照品，加75%甲醇配置成系列标准液。

2. 将流动相至于超声波清洗器上脱气20min。

3. 根据实验条件，将仪器调节至进样状态，色谱工作站基线呈平直，即可进样4. 使用一次性针筒过滤器分别将对照品和待测液过滤到进样瓶中，进样对照品和样品并记录数据。

丹参中主要丹参酮的超高效液相色谱法测定摘要：建立了用超高效液相色谱法（uplc）同时测定中药材丹参中隐丹参酮、丹参酮ⅰ、丹参酮ⅱa和二氢丹参酮的超高效液相色谱法。

中药材样品中的丹参酮用高速匀浆法提取，采用waters acquity uplc beh c18（1.7um，φ2.1mm×50mm，超高效液相色谱柱为固定相，40%的乙腈（内含0.1%的磷酸）为流动相分离，检测波长为254nm，流速为0.6ml/min。

在上述色谱条件下隐丹参酮、丹参酮ⅰ、丹参酮ⅱa和二氢丹参酮在5.0min内实现基线分离，加标回收率在91.5%～98.6%之间，日内相对标准偏差为2.1%，日间相对标准偏差为2.8%，结果满意。

关键词：丹参酮；丹参；超高效液相色谱法中图分类号: r917 文献标识码：b 文章编号：1004-7484(2012)06-0123-03丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参的干燥根，是一种常用的临床中药。

脂溶性丹参酮类化合物是丹参的主要有效成分，具有增加血流量和扩张冠状动脉的作用。

对心肌梗塞、心肌损害、心绞痛和冠心病具有一定疗效，因此丹参药材中丹参酮含量的测定对药材质量评价具有一定意义［1］，目前报道的丹参酮类化合物的含量测定方法主要有毛细管气相色谱法[2]、薄层扫描色谱法[3]和高效液相色变法等[4-7]，其中最常用的是高效液相色谱法，常规高效液相色谱法分离时间长、流动相消耗大。

超高效液相色谱分析比常规高效液相色谱分析速度更快、灵敏度更高，它使用1.7um颗粒度的色谱柱填料，能够获得更高的柱效，还能节省分析时间和增加峰容量[8-13]。

文献[10]报道了超高效液相色谱测定药材中的丹酚酸b和丹参酮ⅱa含量，样品处理方法采用超声提取法，但超声提取法噪音污染大，而且色谱分离也需要15min。

本文研究了用匀浆法提取，超高效液相色谱法测定中药材丹参中的隐丹参酮、二氢丹参酮、丹参酮ⅰ和丹参酮ⅱa的方法，样品前处理速度显著加快，而且4种丹参酮在5min内可达到完全分离，大大缩短了分离时间。

・
６１ ２ ・
中国药物与临床 ２ ０ １ ３ 年５ 月第 １ ３ 卷第 ５ 期Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｒ ｅ ｍ ｅ ｄ ｉ ｅ ｓ ＆Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ｓ ， Ｍ ａ ｃ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． １ ３ ， Ｎ ０ ． ５
・
药 物 研 究 ・
高效液相色谱法同时测定丹参中 丹参酮Ⅱ Ａ和丹酚酸 Ｂ含量
死等作用 。 两种有效成分 的含量测定文献虽有报道 ， 但均采 用梯度洗脱 的高效液相 色谱法 ， 本文采用 了 甲醇． 水（ ８ ０ ： ２ ０ ） 为流动相 ，建立了 同时测定丹参酮 ⅡＡ和丹酚酸 Ｂ的方法 ， 本方法简便 、 准确、 重现性好 ， 可用于丹参药材 的质量控制。
１ 仪器与试药
２ ． １ 检测波长的选择 ： 通过 １ ９ ０ ～ ４ ０ ０ ｎ ｍ波长紫外扫描 ， 丹参
酮 ⅡＡ在 ２ ７ ０ ｎ ｍ波长处有特征吸 收 ， 丹酚酸 Ｂ ２ ７ ０ ｎ ｍ波长
验条件下 ， 样 品溶液在 ２ ４ ｈ内稳定性 良好。
２ ． ８ 重复性试验 ： 取 同一 批号样品进行 ６次平行试 验 ， 测定
刘锐 玲 郭 琼 赵 正 保
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
丹参 为唇 形科植 物丹参 （ Ｓ ａ ｌ ｖ ｉ ｚ ｍｉ ｌ ｔ ｉ ｏ ｒ ｒ ｈ ｉ ｚ ａ Ｂ ｇ ｅ ） 的 干燥
酚酸 Ｂ为 ５ ０ ｇ的溶液 ， 即得 。
根及根茎 ， 始 载于《 神农本草经 》 ， 具有祛瘀止 痛 ， 活血通经 ，
清心 除烦之功效 。它是我 国传统 医学 中常用药物之一 ， 具有 悠久 的临床应用历史 。对丹参化学及药理学研究表明 ： 丹参 中的有效成分 有两类 ， 一类是脂溶 性丹参酮类 化合物 ， 如丹 参 酮 ⅡＡ、 隐丹参 酮等 ； 另 一类 是水溶性 的丹参 酚酸类成分 。 丹参 酮 ⅡＡ作为脂溶性成分的代表具有清除氧 自由基 、 抗脂 质氧化 、 抑 制血栓形成或改善微循环 、 保护肝细胞等作 用［ ” 。 丹酚酸 Ｂ为丹参主要水溶性成分 ，具有消除活性氧 自由基、