最新高效液相色谱法测丹参酮含量汇编

高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量何玲玲【摘要】目的建立高效液相色谱法测定中药丹参不同部位中丹参酮IIA 的含量.方法采用反相高效液相色谱法,选择色谱柱Hypersil ODSC18 柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇∶水=75:25;流速为1.2mL/min;柱温为30℃;检测波长为268 ～ 270nm.结果丹参酮IIA 浓度在1.25 ～21.45μg/mL(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.83%,RSD=2.04%(n=6).结论采用反相高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA 的含量,该方法快速、灵敏、准确,可以为丹参的种植、品质鉴定、扩展药用部位以及控制丹参药材的质量提供测定依据.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2012(010)011【总页数】2页(P36-37)【关键词】高效液相;丹参;丹参酮IIA;色谱柱【作者】何玲玲【作者单位】佛山市中医院,广东,佛山,528000【正文语种】中文【中图分类】R282.710.3丹参（Salvia Miltiorrhiza Bunge）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属多年生草本植物，传统以根入药。

丹参味苦，性微寒，具活血化瘀、凉血消痈、清心除烦之功效。

活性成分主要包括脂溶性成分和水溶性成分，丹参酮IIA是其脂溶性代表成分之一，相对含量较高，有扩张冠脉，抗心肌缺血等作用[1]。

目前，高效液相色谱法（HPLC）已经成为控制中药质量的最为有效的手段，而且很多资料中记录了对丹参高效液相色谱的研究[2,3]，但对丹参的根、茎、叶中丹参酮IIA的含量测定鲜有报道，本文通过对丹参各部位中丹参酮IIA含量的测定，以为今后中药丹参的采集、部位选择及加工提供一定的理论参考，现将研究结果报道如下。

1 实验材料1.1 实验仪器Waters 700高效液相色谱仪（美国 Waters公司）；Waters 700紫外检测器；色谱柱Hypersil ODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm ）；BS110S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；干燥箱（浙江省金坛市正基仪器有限公司，型号CS-202），电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂，型号：HH S11-2），超声仪（ AUTOSC I ENCE，型号：AS5150A ）。

高效液相色谱法测定五明丹胶囊中丹参酮ⅡA含量孟建升;杨文文【摘要】Objective To establish an HPLC method to determining the Tanshinone ⅡA content in Wumingdan Capsules. Methods The chromatographic system consisted of Eclipse XDB - C18 column, using methanol - water(75 : 25) as the mobile phase. The detection wavelength was 270 nm and the flow rate was 1. 0 mL/min. Results The sample size of tanshinone ⅡA in the range of 17. 2 - 154. 8 μg had a good linear relation with the peak area(r = 0.999 8). The average recovery rate was 98.74％, RSD = 1. 22％ ( n =9). Conclusion The established method is simple, highly sensitive and accuracy, which can be used for the quality control of Wumingdan Capsules.%目的建立测定五明丹胶囊中丹参酮ⅡA含量的高效液相色谱法.方法采用Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),甲醇-水(75:25)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm.结果丹参酮ⅡA进样量在17.2～154.8 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为98.74％,RSD=1.22％(n=9).结论该方法操作简便,专属性强,结果准确,可用于五明丹胶囊的质量控制.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2012(021)019【总页数】2页(P40-41)【关键词】丹参酮ⅡA;高效液相色谱法;含量测定【作者】孟建升;杨文文【作者单位】河南省商丘市食品药品检验所,河南商丘 476000;天狮集团有限公司,天津 301700【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R286.0五明丹胶囊(豫药制字Z05140124)是由五味子、羚羊角、丹参、决明子加工制成的医院制剂，具有平肝潜阳、活血化瘀、软肝散结之功效，用于急慢性肝炎、肝硬化。

高效液相色谱法对丹参中丹参酮ⅡA ，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮的同时测定摘要 本实验采用高效液相色谱法对中药材丹参中丹参酮ⅡA ，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮三种成分采用外标定量法进行同时测定，根据其色谱图相应保留时间的谱峰与标准曲线进行对比，可知其三种成分在该样品中的含量，通过测定可知样品中丹参酮ⅡA ，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮三种成分的百分含量分别为0.1011%、0.0259%、0.0155%。

关键词 HPLC 丹参 参酮ⅡA 丹参酮Ⅰ 隐丹参酮 外标法1、引言丹参酮ⅡA 、丹参酮Ⅰ和隐丹参酮是从唇形科鼠尾草属植物丹参的根部提取的脂溶性二萜类物质。

其分子结构、分子式、分子量如下： O H 3C C H 3C H 3O OO O O OOOC 18H 12O 3 294.33 C 18H 12O 3 276.29 C 19H 20O 3 296.36丹参酮ⅡA 丹参酮Ⅰ 隐丹参酮本实验将采用高效液相色谱法对丹参中的三种脂溶性提取物（丹参酮ⅡA 、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮）进行同时测定。

高效液相色谱分析包括两种洗脱方式：等度洗脱和梯度洗脱。

梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗提，即在分离过程中使两种或者两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变他们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH 值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分离时间的目的。

梯度洗脱可以使一个复杂样品中性质差异较大的组分，都能在各自适宜的分离条件（容量因子k 适宜）下实现分离。

色谱定量分析的依据是各分析组分的质量或者浓度与检测器的响应信号(色谱图上表现为峰面积A或峰高h)成正比，即m=f’错误！未找到引用源。

A(f’称为定量校正因子)。

色谱法中常用的定量分析方法有归一化法，内标法和外标法。

外标法是应用待测组分的纯物质来制作标准曲线，即配置不同质量分数（浓度）的标准溶液，取固定量标准溶液进样分析，从所得的色谱图上测出响应信号（峰高或峰面积），然后绘制峰高或峰面积对含量(质量或浓度)的标准曲线。

应用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量目的：分析高效液相色谱法在中药丹参不同部位中丹参酮IIA含量测定中的应用价值。

方法：建立反相高效液相色谱测定模式，选用Hypers110DS（C18）色谱柱，以75甲醇/25水为相液流动相比例，分别检测丹参不同部位有效成分丹参酮IIA的含量，并通过实验验证这一方法的有效性、稳定性等。

结果：丹参酮IIA面积和浓度呈线性相关，在1.25-21.45yg/ml浓度范围内线性最佳；加样溶液丹参酮IIA回收率平均为99.52%，相对标准偏差值为2.02%；丹参茎、叶未含丹参酮IIA。

结论：反相高效液相色谱法，可在短时间内精准获知丹参不同部位丹参酮IIA的含量，为丹参品质鉴定、药用价值和剂量研究工作提供可靠参考资料。

标签：高效液相；丹参；丹参酮IIA；色谱柱丹参是药用价值极高的草本植物，其根部内含丹参酮，常被入药调经疏络、活血祛瘀、消肿镇痛，其中丹参酮IIA是丹参脂溶性成分的代表物质，被广泛用于冠心病防治。

但是，丹参入药采购、运输、选品等各个环节均存在危险因素，如部分不法分子试图用伪劣品以假乱真牟取利益，制药工作人员专业水平不达标不能准确鉴别真伪、优劣，严重影响了中医药学的发展。

鉴于此，本院开展了丹参不同部位丹参酮IIA含量测定研究，旨在证实高效液相色谱法的应用价值并为丹参药用研究提供参考资料。

1 材料和设备1.1 实验材料本实验研究材料包括由中国药品生物制品检定所提供的丹参酮IIA标准品，江阴祥辉化工有限公司提供的色谱纯甲醇，广州致信中药饮片有限公司提供的干燥丹参根（6个月龄）、茎和叶子，实验用超纯水。

1.2 实验设备本实验研究设备包括高效液相色谱仪（杭州汉泽仪器有限公司，型号为LC-2010HT），紫外检测器（Genesys系列）、色谱柱（Hypersi10DSC18，长度为250mm，内径为4.6mm，填料颗粒直径为Sμm）、电子分析天平（瑞士梅特勒一托利多AB-S系列）、精密可程式干燥箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司，BXH-130S）、电热恒温水槽（上海精密仪器仪表有限公司，CU系列）、实验室色谱超生仪（必能信超声上海有限公司，SB2200）。

高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参酮含量计算方法高效液相色谱法是一种常用的分离和定量分析技术，广泛应用于药物分析、环境分析等领域。

复方丹参片是一种中药制剂，其中主要有效成分是丹参酮。

测定复方丹参片中丹参酮含量的计算方法如下：1.实验仪器和药品准备：高效液相色谱仪、C18色谱柱、甲醇、乙腈、纯化水、复方丹参片样品。

2.样品制备：取复方丹参片样品约0.3 g，粉碎并称取适量样品，加入50 mL锥形瓶中，用甲醇提取。

放置15 min，并用超声波处理15 min，过滤取液，并用甲醇补足至50 mL。

3.色谱条件：采用C18色谱柱，流动相为甲醇-水（70:30, v/v），流速1.0 mL/min，柱温为25°C，检测波长为270 nm。

4.系统适用性：在上述色谱条件下，进行系统适用性实验，得到丹参酮在该条件下的保留时间和峰形。

5.制备标准曲线：取不同浓度的丹参酮标准品，分别加入甲醇中，制备一系列浓度的标准溶液。

分别进行色谱分析，记录各峰的峰面积。

6.标定曲线：以丹参酮的质量浓度C为横坐标，以峰面积A为纵坐标制成标定曲线。

对曲线上每个浓度点进行线性回归，得到方程：A = aC + b。

7.样品测定：取经过提取的复方丹参片样品溶液，进行色谱分析，记录峰面积A。

8.计算含量：带入标定曲线方程，计算出复方丹参片样品中丹参酮的质量浓度C。

9.计算百分含量：将复方丹参片样品中丹参酮的质量浓度C除以样品的总质量m，并乘以100，得到丹参酮的百分含量。

在该测定方法中，高效液相色谱仪为分离和定量提供了可靠的保障。

C18色谱柱选择了较常用的色谱柱，用于对复方丹参片中的丹参酮进行分离和测定。

甲醇和水被选为流动相，以达到较好的分离效果。

检测波长为270 nm，可以选择丹参酮的最大吸收波长。

通过制备标准曲线，可以建立丹参酮浓度和色谱峰面积之间的线性关系。

通过回归分析，得到标定曲线的方程，进而可以通过测定复方丹参片样品的色谱峰面积，计算出丹参酮的质量浓度。

高效液相色谱测定丹参酮ⅡA含量【原理】利用各组分在两相中的分配系数的不同而获得分离。

【仪器与试剂】1.仪器：液相色谱仪；微量注射器；C18反相色谱柱；棕色瓶（25ml，50ml）；吸量管（2ml）；超神提取器。

2.试剂：甲醇（色谱纯）；蒸馏水。

3.试药：丹参酮ⅡA对照品，单身药材。

【实验内容】色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270 nm，理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000.对照品溶液的制备取丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含16.25ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

【实验数据及处理】运用外标法定量分析，分别精密量取一定量的对照品和试样，分别进样相同体积的对照品溶液和试样溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测的峰面积，用下式可以计算出供试品的浓度。

C供/C对=A供/A对 => C供=（A供/A对）*C对20片总重量：0.6025gC对=16.25μg/mlA供=2999.47（mv/sec）A对=1088.09（mv/sec）C供=（A供/A对）*C对=（2999.47/1088.09）*16.25=44.80μg/mlW（%）=（M丹参酮ⅡA/M药材）×100%=（44.80×10-6g/0.6025g）×100%=0.744%20片复方丹参片中含丹参酮ⅡA量：4.48mg。

每片含丹参酮ⅡA量：0.224mg。