丹参中丹参酮_A受热降解规律研究_赵新杰

中国美容医学2012年12月第21卷第12期(上)Chinese Journal of Aesthetic Medicine.Dec.2012.Vol.21.No.12基础研究基金项目：２０１１年广西研究生教育创新计划项目（项目编号：２０１１１０５９８１００２Ｍ２０７），广西自然科学基金项目（桂科自０７２８１２９）通讯作者：蒙诚跃，广西医科大学第一附属医院烧伤整形外科，５３００２１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｃｙ８０６０＠１２６．ｃｏｍ·论著·丹参酮ⅡＡ对瘢痕成纤维细胞超微结构和自由基代谢平衡影响的实验研究刘华，杨华莲，蒙诚跃（广西医科大学第一附属医院烧伤整形外科广西南宁５３００２１）［摘要］目的：探究丹参酮ⅡＡ磺酸钠（ＳＴＳ）对人增生性瘢痕（ＨＳ）的成纤维细胞（Ｆｂ）超微结构及自由基代谢平衡的影响，从抗氧化途径寻找一种新的治疗ＨＳ的有效方法。

方法：收集术中７例ＨＳ组织进行Ｆｂ体外培养，取第３～６代传代细胞进行实验观察，设置实验组和对照组，实验组设置不同浓度组ＳＴＳ（０．０５，０．０７５，０．１０，０．１２５，０．１５，０．２０ｍｇ／ｍｌ）干预培养，对照组加入等量不含ＳＴＳ的ＤＭＥＭ培养液。

①干预培养４８ｈ后应用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态及超微结构改变；②分别于培养１２ｈ，２４ｈ，４８ｈ后，应用化学比色法检测细胞内丙二醛（ＭＤＡ）含量、黄嘌呤氧化酶（ＸＯＤ）活力、总超氧化物歧化酶（Ｔ－ＳＯＤ）活力及谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活力变化。

结果：①透射电镜见实验组细胞内线粒体肿胀及空泡样变性，粗面内质网扩张、囊泡变及脱颗粒，胶原纤维束减少，细胞坏死等现象；②与对照组比较，实验组ＭＤＡ含量及ＸＯＤ活力明显降低（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），且存在浓度－时间效应。

与对照组比较，实验组Ｔ－ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ活力水平有不同程度升高，其升高程度受药物浓度和作用时间影响。

与对照组比较，药物作用１２ｈ时，高浓度组（０．１５ｍｇ／ｍｌ和０．２０ｍｇ／ｍｌ）Ｔ－ＳＯＤ活力水平升高明显（Ｐ＜０．０５）；２４ｈ时，０．１２５～０．２０ｍｇ／ｍｌ组显著升高（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；４８ｈ时，０．０５ｍｇ／ｍｌ～０．１０ｍｇ／ｍｌ组显著升高（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），０．１５ｍｇ／ｍｌ和０．２０ｍｇ／ｍｌ组显著降低（Ｐ＜０．０１）。

丹参酮ⅡA对 ox－LDL诱导血管内皮细胞自噬效应蛋白Beclin1表达的影响郝国强;邢壮杰;郑新;李润生;赵晖;邓芝徽【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2015(000)012【摘要】目的：氧化型低密度脂蛋白（ oxidized low－densitylipoprotein，ox－LDL）可诱导血管内皮细胞发生自噬，造成血管内皮损伤，从而导致动脉粥样硬化的发生。

该研究拟探讨丹参酮ⅡA对ox－LDL诱导的血管内皮细胞自噬效应蛋白Beclin1表达的影响。

方法（1）运用不同浓度ox－LDL处理人脐静脉血管内皮细胞HUVECs，MDC染色、流式细胞仪检测ox－LDL对HU-VECs自噬水平的影响，采用免疫印迹技术检测自噬标记蛋白Beclin1表达；（2） ox－LDL处理后，运用不同浓度丹参酮ⅡA干预，MDC染色、流式细胞仪HUVECs自噬水平变化，免疫印迹检测Beclin1蛋白水平变化。

结果 ox－LDL能诱导HUVECs发生自噬，丹参酮ⅡA能抑制ox－LDL诱导的HUVECs自噬效应蛋白Beclin1表达。

结论丹参酮ⅡA通过抑制ox－LDL诱导的HUVECs自噬，从而对ox－LDL所致的HUVECs损伤起保护作用。

【总页数】4页(P2393-2396)【作者】郝国强;邢壮杰;郑新;李润生;赵晖;邓芝徽【作者单位】大连大学附属中山医院普外一科，辽宁大连 116001;大连大学附属中山医院普外一科，辽宁大连 116001;大连大学附属中山医院普外一科，辽宁大连 116001;大连大学附属中山医院普外一科，辽宁大连 116001;大连大学附属中山医院普外一科，辽宁大连 116001;大连大学附属中山医院普外一科，辽宁大连116001【正文语种】中文【相关文献】1.三七总皂苷对顺铂诱导肾损伤大鼠模型自噬蛋白LC3和Beclin1的影响 [J], 刘新文;邹小琴;黄振光;张文宇;杨玉芳2.Decorin基因过表达对HEK293T细胞微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响 [J], 赵婷婷;古艳婷;李平;朱斌;董晞;张浩军3.缺氧缺糖诱导心肌细胞损伤中Notch信号对HIF-α及自噬相关基因Beclin1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ表达的影响 [J], 孔令宇;席錾;马文婷;杨飞云;牛丽丹;石金河4.丹参酮ⅡA对ox-LDL诱导的小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞蛋白质组的影响 [J], 闫昭芫;耿伸;刘佳;卢德赵;柴惠5.沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响 [J], 张政军;郝钰;万婷婷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RP-HPLC测定不同月份康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、
丹参酮ⅡA的含量
岳会兰;赵晓辉;邵云;陶燕铎
【期刊名称】《分析试验室》
【年(卷),期】2008(0)S1
【摘要】建立一种RP-HPLC方法,用于测定康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量,为康定鼠尾草开发利用提供依据。

采用Thermo C18色谱柱,以
V(甲醇)∶V(水)=75∶25为流动相,流速1 mL/min,检测波长270 nm,柱温30℃。

结果表明3个化合物在测定的范围内具有良好的线性(r>0.9997),平均回收率为98.6%。

康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量八月份较高。

方
法可作为康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量测定的方法。

【总页数】3页(P416-418)
【关键词】康定鼠尾草;隐丹参酮;丹参酮Ⅰ;丹参酮ⅡA;RP-HPLC
【作者】岳会兰;赵晓辉;邵云;陶燕铎
【作者单位】中国科学院西北高原生物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R284
【相关文献】
1.RP-HPLC测定制萎扶胃丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量 [J], 刘效栓;焦正花;李喜香;徐思羽
2.RP-HPLC法测定消痤丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量 [J], 张长坡;张延博
3.RP-HPLC测定消炎醌中隐丹参酮和丹参酮II_A的含量 [J], 何虹
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活性氧在密旋链霉菌Act12诱导丹参毛状根中丹参酮积累中的作用作者：阎岩赵欣张顺仓刘岩梁宗锁来源：《中国中药杂志》2014年第11期[摘要] 作者前期研究成果显示密旋链霉菌Act12可以上调丹参酮生物合成途径上的关键酶基因的表达大幅提高丹参毛状根中丹参酮含量。

该实验则进一步研究了活性氧在Act12诱导丹参毛状根中丹参酮积累的作用。

在继代培养21 d的丹参毛状根中添加Act12不同的诱导子及诱导子组合，分别测定不同收获期毛状根的生物量，毛状根中活性氧积累量，丹参酮类成分的积累量和关键酶基因表达量。

Act12诱导后丹参毛状根中活性氧含量上升，HMGR和DXR基因表达上调，最高分别达到对照的32.4，4.8倍，毛状根中丹参酮积累增加，最高达到对照的10.2倍；加入活性氧抑制剂CAT和SOD后，丹参毛状根中的活性氧含量较Act12处理显著下降，HMGR和DXR基因表达也明显下降，毛状根中丹参酮含量较Act12处理下降了74.6%。

活性氧介导了Act12诱导丹参酮积累，Act12很可能是通过ROS信号通路激活了MVA和MEP 途径，从而提高了丹参酮在毛状根中的含量。

[关键词] 丹参毛状根；活性氧；密旋链霉菌Act12；次生代谢；3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶； 1-脱氧-D-木酮糖-5磷酸还原异构酶[收稿日期] 2013-10-27[基金项目] 国家自然科学基金项目（81373908）；陕西省重大产业集群荐项目（2012KTCL02-07）[通信作者] 梁宗锁，教授，博士生导师，主要从事中药材规范化栽培的理论与技术研究， Tel：（029）87014582，Fax：（029）87092262，E-mail：liangzs@[作者简介] 阎岩，博士研究生，主要从事药用植物次生代谢研究， E-mail：sunnylikeme@丹参为唇形科植物丹参Salvia militorrhiza Bge.的干燥根及根茎，在我国很早就有把丹参作为药材使用的记录，最早记载于《神农本草经》，被列为上品，在梁朝，唐朝，五代以及明朝的中医药著作中也都有对丹参入药的记载[1]。

提取、浓缩及干燥工艺对复方丹参片中丹参酮ⅡA含量的影响

陈占立;孙爱平;张卉朱;韩月芝;李奉勤 【期刊名称】《中国药业》 【年(卷),期】2006(15)5 【摘 要】目的考察提取、浓缩及干燥工艺对复方丹参片中丹参酮ⅡA含量的影响,优选出最佳工艺条件.方法以高效液相色谱法(HPLC法)检测丹参酮ⅡA含量,对提取、浓缩及干燥工艺条件进行筛选和比较.结果采用不低于95%的乙醇回流、真空浓缩和喷雾干燥,丹参酮ⅡA损失少,且含量稳定.结论筛选出的工艺能满足大生产的需要,并且产品质量符合要求.

【总页数】1页(P59-59) 【作 者】陈占立;孙爱平;张卉朱;韩月芝;李奉勤 【作者单位】河北以岭医药集团有限公司,河北,石家庄,050035;河北以岭医药集团有限公司,河北,石家庄,050035;河北以岭医药集团有限公司,河北,石家庄,050035;河北以岭医药集团有限公司,河北,石家庄,050035;河北以岭医药集团有限公司,河北,石家庄,050035

【正文语种】中 文 【中图分类】TQ460.6 【相关文献】 1.RP-HPLC测定复方丹参片中丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量 [J], 柳仁民;邓爱霞;刘道杰 2.复方丹参片中丹参的提取干燥工艺的初步研究 [J], 汤丽萍 3.浓缩、精制及干燥对复方丹参提取液中水溶性成分的影响 [J], 富志军;林以宁;亢俊伟 4.浓缩干燥对丹参提取液中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的影响 [J], 曾令杰;李小燕 5.不同提取方法对复方丹参片中丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量测定的影响 [J], 陈宇;赵芝兰;朱河水

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多维度综合评价瞬时高温灭菌对丹参质量的影响庄新慧;焦连庆;于敏;田齐聪;张凤清【期刊名称】《化学试剂》【年(卷),期】2024(46)6【摘要】为考察瞬时高温灭菌对丹参质量的影响,采用HPLC法测定10批灭菌前后丹参中8种化学成分含量,DPPH·法测定丹参灭菌前后抗氧化活性,MTT法测定灭菌前后丹参大鼠肝星状细胞(HSC-T6)存活率。

建立HPLC指纹图谱,液质联用(LC-MS)法确定共有峰结构,采用聚类分析和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)预测不同丹参差异性质量标志物;通过丹参与过量DPPH反应后的HPLC峰面积变化,筛选丹参抗氧化成分;采用偏最小二乘法回归(PLS-DA)分析法,得出共有峰与DPPH·抗氧化活性间的谱效关系,结合单体化合物抗氧化活性大小,最终确定丹参抗氧化活性质量标志物。

灭菌前后8种化学成分含量、DPPH·清除率及细胞存活率经t检验均无显著性差异(P>0.05);灭菌前后指纹图谱相似度均大于0.9,同一批次样品灭菌前后聚为一类,瞬时高温灭菌对丹参质量未产生影响;紫草酸甲酯、丹酚酸B、丹参酸甲酯、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹酚酸F、丹参酮ⅡA、二氢丹参酮Ⅰ可作为丹参质量差异标志物;迷迭香酸、丹酚酸B、紫草酸、丹酚酸F可作为抗氧化活性的质量标志物。

【总页数】8页(P9-16)【作者】庄新慧;焦连庆;于敏;田齐聪;张凤清【作者单位】吉林省中医药科学院;长春工业大学化学与生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】R284【相关文献】1.超高温瞬时灭菌乳的质量控制2.高温瞬时灭菌技术对啤酒质量影响的研究3.超高温瞬时灭菌对米酒品质的影响4.高温瞬时灭菌对开心散有效成分含量及微生物学指标的影响5.高温瞬时灭菌对米酒品质的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

丹参根干燥工艺初步研究
赵欣
【期刊名称】《中国民族民间医药》
【年(卷),期】2013(022)015
【摘 要】目的:为了使干燥过程中丹参根有效物质含量损失降到最低,比较原料前期
不同干燥处理,得出一个最优工艺.方法:采用四种不同的干燥处理方法对丹参根进行
一个外形和目标物含量测定的实验.结果:丹参根原料经过不同方式的前处理,以隐丹
参酮的含量为考量标准,60℃烘干处理的丹参材料隐丹参酮的含量最高,为丹参最佳
的处理方法.

【总页数】2页(P15-16)
【作 者】赵欣
【作者单位】陕西国际商贸学院医药学院,陕西,咸阳,712046
【正文语种】中 文
【中图分类】R912
【相关文献】
1.丹参醇提液在浓缩,干燥工艺过程中的化学成分变化研究（I）——丹参酮ⅡA湿
热 [J], 苏子仁;刘中秋
2.鲜丹参的干燥工艺研究 [J], 喻芳君;钱浩;马志国
3.复方丹参片中丹参的提取干燥工艺的初步研究 [J], 汤丽萍
4.丹参干燥工艺参数的研究 [J], 张仲欣;谢桂兰
5.丹参叶保质干燥工艺的研究 [J], 杨协力;朱文学
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土壤菲污染对丹参根生物量和丹参酮类成分的影响赵海燕;林江辉;李辉信;刘德辉【期刊名称】《南京农业大学学报》【年(卷),期】2010()5【摘要】采用温室盆栽试验,研究了不同含量菲处理对丹参根生物量、脂溶性有效成分(丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ)的影响及菲在丹参根内的累积。

结果表明:丹参收获后,土壤中的菲残留量为0.09～0.26mg·kg-1,丹参根内菲含量为0.45～0.57mg·kg-1;添加菲处理的丹参根生物量比对照略有增加,其有效成分丹参酮ⅡA 的含量高于对照,但未达显著水平,隐丹参酮、丹参酮Ⅰ的含量显著高于对照(P<0.05),3种丹参酮含量随土壤菲初始含量的增加而增加。

菲含量在31.1和234.8mg·kg-1时,对丹参根的生长有一定的刺激作用,促进了丹参酮在丹参根内的累积。

【总页数】4页(P107-110)【关键词】菲;丹参;根生物量;丹参酮【作者】赵海燕;林江辉;李辉信;刘德辉【作者单位】南京农业大学资源与环境科学学院【正文语种】中文【中图分类】S567.53;X131.3【相关文献】1.培养基中不同营养元素对丹参毛状根生长及丹参酮类积累的影响 [J], 沈双;张顺仓;杨东风;梁宗锁2.土壤水分对新鲜和采后干燥丹参根中活性成分含量的影响 [J], 王微;周国军;李焱;周铜水3.丹参根不同组织部位丹参酮类成分分布的拉曼光谱研究 [J], 王清蓉;李晓艳;孙莹;穆帝秀;严铸云;陈新4.茉莉酸甲酯对丹参毛状根中丹参酮类成分积累和释放的影响 [J], 王学勇;崔光红;黄璐琦;邱德有5.诱导子对丹参毛状根中丹参酮类成分积累影响 [J], 王学勇;崔光红;黄璐琦;邱德有因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

由于本方法采用丙酮干燥,因此,在吉非替尼样品中存在少量丙酮,其含量低于限量,样品合格.«中国药典»规定,甲醇和二氯甲烷属于第二类溶剂,其限度分别为０．３％和０．０６６％,乙醇㊁丙酮和乙酸乙酯属于第三类溶剂,其限度均为０．５％.本实验采用峰面积外标法对吉非替尼样品中的残留溶剂进行测定,要求吉非替尼样品中各溶剂残留的峰面积均小于溶剂对照品的峰面积.经过上述验证,表明本文建立的方法线性㊁精密度㊁回收率㊁定量限㊁检测限以及系统适用性实验结果均较好,能够准确㊁迅速地检测出吉非替尼原料药中残留的甲醇㊁乙醇㊁丙酮㊁二氯乙烷和乙酸乙酯,从而保证用药的安全性.参考文献:[１]㊀高应勤,冯水土,陈毅德．吉非替尼治疗晚期肺癌不良反应３５例分析[J]．福建医药杂志,２０１０,３２(２):１２２Ｇ１２３．[２]㊀刁圆圆,张庆文．吉非替尼的合成[J]．中国医药工业杂志,２００８,３９(６):４０１Ｇ４０３．[３]㊀谢良辉,欧阳贵．吉非替尼的合成工艺改进[J]．合成化学,２０１０,１８(４):５２３Ｇ５２５．[４]㊀肖华玲,王鹏,王玉杰,等．吉非替尼合成方法改进[J]．中国海洋大学学报:自然科学版,２０１０,４０(８):１０３Ｇ１０６．[５]㊀金波,陈国华,邹爱峰,等．吉非替尼的合成[J]．中国药科大学学报,２００５,３６(１):９２Ｇ９４．[６]㊀B a b e rN．I n t e r n a t i o n a lc o n f e r e n c e o n h a r m o n i s a t i o n o f t e c h n i c a l r e q u i r e m e n t sf o rr e g i s t r a t i o no f p h a r m a c e u t iＧc a l s f o rh u m a n u s e(I C H)[J]．B rJ C l i n P h a r m a c o l,１９９４,３７(５):４０１Ｇ４０４．[７]㊀F a r a j z a d e h M,M a r d a n iA．A n a l y s i so f r e s i d u a l s o l v e n t si na m p i c i l l i n p o w d e rb y h e a d s p a c es p e c t r o p h o t o m e t r i cm e t h o d[J]．A n a l S c i,２００２,１８:１７１Ｇ１７５．[８]㊀陆烨,夏宇沁,昌军,等．毛细管气相色谱法测定１３种有机溶剂残留[J]．复旦学报:医学版,２０１３,４０(２):２２２Ｇ２２６．[９]㊀王英瑛,李俊．毛细管气相色谱法测定舒必利中有机溶剂残留量[J]．中国药师,２０１４,１７(６):９３４Ｇ９３６．[１０]刘惠萍．毛细管气相色谱法测定托拉塞米有机溶剂残留量[J]．中国化工贸易,２０１３,(１２):３１８．[１１]于生,单鸣秋,邵霞,等．毛细管气相色谱法测定甲磺酸伊马替尼原料药中有机溶剂残留量[J]．中国药房,２０１３,２４(９):８３８Ｇ８４０．[１２]戴正琳,陶志,章平荣．顶空毛细管气相色谱法测定阿折地平中的溶剂残留[J]．中国药师,２０１２,１５(２):１９７Ｇ１９８．[１３]陈利国,曹小彦,黄辉,等．毛细管气相色谱法直接测定食品中４种对羟基苯甲酸酯[J]．食品与机械,２０１０,２６(１):６７Ｇ６９．[１４]张云平．盐酸头孢他美酯利用毛细管气相色谱法测定其残留溶剂[J]．医学美学美容,２０１４,(１０):２５１Ｇ２５２．[１５]陈伟,陈蓉,江国荣,等．毛细管气相色谱法测定保健茶中９种有机氯农药残留量[J]．西北药学杂志,２０１５,３０(６):６８５Ｇ６８８．[１６]刘瑞萍,邢军,刘文娟,等．毛细管气相色谱法测定盐酸头孢卡品酯原料药中残留溶剂[J]．药学研究,２０１４,３３(６):３３９Ｇ３４０．[１７]王发,王嫦鹤,王莉,等．顶空毛细管气相色谱法测定奥硝唑原料的溶剂残留[J]．西北药学杂志,２０１６,３１(２):１４６Ｇ１４８．[１８]程奇珍,肖小武,罗跃华,等．顶空毛细管气相色谱法测定盐酸头孢卡品酯中的残留有机溶剂[J]．中国抗生素杂志,２０１２,３７(２):１２０Ｇ１２２．[１９]朱蓉,李欣,曹俊涵．顶空毛细管气相色谱法测定异丙托溴铵中７种残留有机溶剂[J]．药学进展,２０１４,３８(２):１４６Ｇ１４９．[２０]李娟,蔡蓝洁,艾朝辉,等．顶空毛细管气相色谱法测定琥珀酸舒马普坦中７种有机溶剂的残留量[J]．广东化工,２０１５,４２(５):１２４Ｇ１２５．[２１]丁玲,张崇生．盐酸头孢卡品酯中溶剂残留量的气相色谱法测定[J]．中国卫生标准管理,２０１６,７(１１):１２８Ｇ１３０．(收稿日期:２０１８Ｇ０１Ｇ１２)H P L C法测定益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量王艳伟,代雪平,王晓伟(河南省食品药品检验所,郑州㊀４５００１８)摘要:目的㊀建立同时测定益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量的H P L C法.方法㊀采用L u n a５μm C１８(２) (２５０m mˑ４．６m m,５μm)色谱柱,流动相为甲醇Ｇ水(６７ʒ３３);检测波长:２７０n m;流速:１．０m L m i n－１;柱温:４０ħ.结果㊀丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的线性范围分别为０．０４２~１．２６０(r＝１．０００),０．０３６~１．０７３(r＝１．０００)和０．０３２~０．９４８μg(r＝１ ０００),平均回收率分别为９７．４％(R S D＝１．２％),９９．５％(R S D＝１．６％)和９７．６％(R S D＝０．８％).结论㊀经方法学验证,本方法合理可行㊁重复性好,可用于益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量测定,为益心通脉颗粒的质量控制提供依据.关键词:益心通脉颗粒;丹参酮Ⅰ;隐丹参酮;丹参酮ⅡA;H P L C法D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００４Ｇ２４０７．２０１８．０４．０１３中图分类号:文献标志码:文章编号:()D e t e r m i n a t i o no f t a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h i n o n ea n dt a n s h i n o n eⅡAi n Y i x i nＧt o n g m a iG r a n u l e s b y H P L CWA N G Y a n w e i,D A IX u e p i n g,WA N G X i a o w e i(H eᶄn a n I n s t i t u t e f o rF o o da n dD r u g C o n t r o l,Z h e n g z h o u４５００１８,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o e s t a b l i s ha nH P L C m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o no f t a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h i n o n e a n d t a n s h i n o n eⅡAi n Y i x i n t o n g m a iG r a n u l e s．M e t h o d s T h eH P L Ce x p e r i m e n t sw e r e p e r f o r m e do naL u n a５μm C１８(２)c o l u m n(２５０m mˑ４．６m m,５μm)w i t h２７０n ma s t h e d e t e c t i o nw a v e l e n g t h,a n dm e t h a n o lＧw a t e r(６７ʒ３３)a s t h em o b i l e p h a s e．T h e c o l u m n t e m p e r a t u r ew a s４０ħ,a n d t h e f l o wr a t ew a s１．０m L m i n－１．R e s u l t s T h e l i n e a r r a n g e s o f t a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h i n o n e a n d t a n s h i n o n eⅡA w e r e ０．０４２Ｇ１．２６０(r＝１．０００),０．０３６Ｇ１．０７３(r＝１．０００)a n d０．０３２Ｇ０．９４８μg(r＝１．０００)r e s p e c t i v e l y．T h ea v e r a g er e c o v e r i e sw e r e ９７ ４％(R S D＝１．２％),９９．５％(R S D＝１．６％)a n d９７．６％(R S D＝０．８％)r e s p e c t i v e l y．C o n c l u s i o n T h e i m p r o v e dm e t h o d s a r e r e aＧs o n a b l e,f e a s i b l e a n d r e p r o d u c i b l e,w h i c hc o u l db eu s e d f o r t h e q u a l i t y c o n t r o l o fY i x i n t o n g m a iG r a n u l e s．K e y w o r d s:Y i x i n t o n g m a iG r a n u l e s;t a n s h i n o n eⅠ;c r y p t o t a n s h i n o n e;t a n s h i n o n eⅡA;H P L C㊀㊀益心通脉颗粒处方由黄芪㊁人参㊁北沙参㊁玄参㊁丹参㊁川芎㊁郁金和炙甘草８味药组成,具有益气养阴㊁活血通络的功效,主治气阴两虚㊁瘀血阻络所致的胸痹,症见胸闷心痛㊁心悸气短㊁倦怠汗出和咽喉干燥及冠心病心绞痛见上述证候者[１].丹参具有活血祛瘀㊁通经止痛㊁清心除烦和凉血消痈的功效,广泛应用于心血管疾病的治疗,为方中主药.该制剂质量标准收载于«中国药典»２０１５年版一部,采用H P L C法测定丹参酮ⅡA的含量.在实际检验工作中,我们发现该含量测定方法,不能准确测出丹参酮ⅡA的含量.因丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA是丹参中活性较强㊁含量较高的有效成分[２Ｇ９],为了提高标准的可操作性,对该标准进行了完善和提高,研究建立了同时测定益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA 的含量测定方法,为全面控制益心通脉颗粒的质量提供科学依据.１㊀仪器与试药１．１㊀仪器㊀A g i l e n t１２６０高效液相色谱仪,A g i l e n t １２６０D A D检测器(美国安捷伦科技有限公司);K QＧ３００V D E型双频数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);X P E２０５电子天平(梅特勒Ｇ托利多国际贸易(上海)有限公司);X MT DＧ２０４数显式电热恒温水浴锅(上海跃进医疗器械有限公司).１．２㊀试药㊀丹参酮Ⅰ对照品(批号１１０８６７Ｇ２０１６０７)㊁隐丹参酮对照品(批号１１０８５２Ｇ２００８０６)和丹参酮ⅡA对照品(批号１１０７６６Ｇ２０１５２０),均购自中国食品药品检定研究院;益心通脉颗粒(河南辅仁堂制药有限公司提供,批号:２０１６１２０１,２０１７０１０２,２０１７０３０５,２０１７０６０１,２０１７０６０２);甲醇㊁乙腈为色谱纯(德国M e r c k公司);水为超纯水;其余试剂均为分析纯.２㊀方法与结果２．１㊀色谱条件色谱柱为１８m mˑ４．６m m,５μm);流动相为甲醇Ｇ水(６７ʒ３３);检测波长:２７０n m;流速:１．０m L m i n－１;柱温:４０ħ.理论塔板数按照丹参酮ⅡA峰计算应不低于５０００[１０Ｇ１３].２．２㊀溶液的制备２．２．１㊀混合对照品溶液㊀取丹参酮Ⅰ对照品㊁隐丹参酮对照品和丹参酮ⅡA对照品适量,精密称定,置于同一棕色量瓶中,加甲醇制成丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA质量浓度分别为４２．０,３５．８和３１．６μg m L－１的混合对照品溶液.２．２．２㊀供试品溶液㊀取本品,研细,精密称取５g,置于棕色具塞锥形瓶中,精密加入甲醇２５m L,称定质量,加热回流１h,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得[１４Ｇ１５].２．２．３㊀阴性样品溶液㊀按照益心通脉颗粒处方比例和工艺制备缺丹参的阴性样品,按照２．２．２项下方法制备阴性样品溶液.２．３㊀专属性实验㊀按照２．１项下色谱条件,取混合对照品溶液㊁供试品溶液及阴性样品溶液各１０μL,进样测定.供试品色谱中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA与其相邻色谱峰均能达到良好的分离,阴性样品无干扰.见图１.２．４㊀线性关系考察㊀精密吸取２．２．１项下制备的混合对照品溶液１,２,５,８,１０,１５,２０和３０μL,按照２．１项下色谱条件测定.以峰面积y对进样量x进行线性回归,得丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的线性回归方程分别为:y＝２５６２．４x＋７ ５３０７,r＝１ ０００; y＝４５６６x－９ ７６５２,r＝１ ０００;y＝５２８１ ９x－１０ ７４６,r＝１ ０００.结果表明,丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA进样量分别在０ ０４２~１．２６０,０ ０３６~１ ０７３和０ ０３２~０ ９４８μg范围内线性关系良好.２．５㊀精密度实验㊀取２．２．１项下制备的混合对照品溶液次,测定丹参酮和丹参酮ⅡA的峰面积,结果丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA峰面积的R S D值分别为０．２％,０．２％和０．２％,表明仪器精密度良好.图１㊀H P L C图A．混合对照品;B．供试品;C．阴性对照;１．丹参酮Ⅰ;２．隐丹参酮;３．丹参酮ⅡA.F i g．１H P L Cc h r o m a t o g r a m sA．m i x e dr e f e r e n c es u b s t a n c e s;B．s a m p l e s;C．n e g a t i v ec o n t r o l s a m p l e s;１．t a n s h i n o n eⅠ;２．c r y p t o t a n s h i n o n e;３．t a n s h i n o n eⅡA．２．６㊀稳定性实验㊀取益心通脉颗粒(批号２０１６１２０１),按照２．２．２项下方法制备供试品溶液,分别于０,２,４,６,８,１０和１２h进样分析.结果丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA峰面积的R S D值分别为１．１％,０ ２％和０ ２％,表明供试品溶液在室温放置１２h内稳定.２．７㊀重复性实验㊀取益心通脉颗粒(批号２０１６１２０１)６份,按照２．２．２项下方法制备供试品溶液.按照２．１项下色谱条件进样测定,计算其中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量.结果丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的平均含量分别为０．０９９４,０．１３９５和０．１４２４m g g－１,其R S D值分别为０ ５％,０．７％和０．６％.２．８㊀回收率实验㊀精密称取已知含量的益心通脉颗粒(批号２０１６１２０１,丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA 含量分别为０．０９９４,０．１３９５和０．１４２４m g g－１)６份,每份２．５g,精密加入混合对照品溶液(丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA质量浓度分别为１６．８７,２２ ３２和２０．２２μg m L－１)２５m L,按照２．２．２项下方法制备供试品溶液.按照２．１项下色谱条件进样测定,计算回收率,结果见表１.表１㊀丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA回收率实验结果T a b．１T h e r e s u l t s o f r e c o v e r y t e s t o f t a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h i n o n e a n d t a n s h i n o n eⅡA成分取样量/g样品中含量/m g加入量/m g测得量/m g回收率/％平均回收率/％R S D/％丹参酮Ⅰ２．５００２０．２４８５０．４２１８０．６５７８９７．０３９７．４１．２２．５００９０．２４８６０．４２１８０．６５４０９６．１１２．５０１２０．２４８６０．４２１８０．６５８８９７．２５２．５０２２０．２４８７０．４２１８０．６６２２９８．０３２．５０１００．２４８６０．４２１８０．６６７６９９．３４２．５００５０．２４８５０．４２１８０．６５４９９６．３４隐丹参酮２．５００２０．３４８８０．５５８００．８９７６９８．３６９９．５１．６２．５００９０．３４８９０．５５８００．９００９９８．９３２．５０１２０．３４８９０．５５８００．９０５７９９．７８２．５０２２０．３４９１０．５５８００．９１００１００．５３２．５０１００．３４８９０．５５８００．９０４１１０２．０４２．５００５０．３４８８０．５５８００．９１８２９７．６５丹参酮ⅡA２．５００２０．３５６００．５０５５０．８４４２９６．５７９７．６０．８２．５００９０．３５６１０．５０５５０．８５１２９７．９４２．５０１２０．３５６２０．５０５５０．８４８２９７．３４２．５０２２０．３５６３０．５０５５０．８４９５９７．５６２．５０１００．３５６１０．５０５５０．８４６７９７．０５２．５００５０．３５６１０．５０５５０．８５５７９８．８４２．９㊀样品含量测定㊀按照２．２．２项下的供试品溶液制备方法和２．１项下色谱条件,测定５批益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,结果见表２.表２㊀样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量测定结果T a b．２D e t e r m i n a t i o nr e s u l t so ft a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h iＧn o n e a n d t a n s h i n o n eⅡAi n s a m p l e s(m g g－１)生产批号丹参酮Ⅰ含量隐丹参酮含量丹参酮ⅡA含量２０１６１２０１０．０９９４０．１３９５０．１４２４２０１７０１０２０．２１０２０．２４１３０．３３３４２０１７０３０５０．１８３００．１８５８０．２７１５２０１７０６０１０．１７４４０．２６０７０．３６２４２０１７０６０２０．１３５１０．１９６７０．２７９９３㊀讨论３．１㊀提取方法的选择㊀以甲醇为提取溶剂,分别超声㊁加热回流１h制备供试品溶液,测定样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,结果回流提取的含量较高,故选择回流提取[１６Ｇ１７].３．２㊀提取溶剂的选择㊀分别以体积分数为５０％的甲醇㊁体积分数为７０％的甲醇㊁甲醇和二氯甲烷Ｇ甲醇(１ʒ１)为提取溶剂,加热回流１h制备供试品溶液,测定样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,结果使用甲醇提取含量最高,故选择甲醇提取[１８Ｇ２０].３．３㊀提取时间的选择㊀以甲醇为提取溶剂,分别加热回流３０,６０和９０m i n制备供试品溶液,测定样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,结果回流提取６０m i n后含量不再增加,故选择回流提取６０m i n.４㊀结论«中国药典»２０１５年版一部益心通脉颗粒含量测定项下采用二氯甲烷Ｇ甲醇(１ʒ１)混合溶液作为提取溶剂,实验研究表明,采用甲醇作为提取溶剂与采用二氯甲烷Ｇ甲醇(１ʒ１)混合溶液作为提取溶剂测得样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量差异较大,采用甲醇为提取溶剂能更准确地测定３种成分的含量.样品的含量测定结果表明,不同批次的产品３种成分含量差异较大,反映厂家需要关注不同批次产品之间的稳定性.新建立的含量测定方法优化了供试品溶液的制备方法,同时测定丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA等多个有效成分,有利于控制益心通脉颗粒的稳定性,保证药品的有效性.参考文献:[１]㊀国家药典委员会．中国药典:２０１５年版:一部[S]．北京:中国医药科技出版社,２０１５:１３９６Ｇ１３９７．[２]㊀姜雪,史磊．丹参活性成分及药理作用研究进展[J]．药学研究,２０１７,３６(３):１６６Ｇ１６９．[３]㊀李巧玉,刘杨,包华音．近５年丹参化学成分及药理作用研究进展[J]．食品与药品,２０１４,１６(２):１４５Ｇ１４６．[４]㊀刘娟,刘颖．丹参药理活性成分研究进展[J]．辽宁中医药大学学报,２０１０,１２(７):１５Ｇ１７．[５]㊀杨吕洪,刘强．丹参化学成分在心血管疾病中的研究进展[J]．黑龙江中医药,２０１５,(６):６４Ｇ６６．[６]㊀黄海亮．丹参的化学成分分离及其抗氧化活性研究[J]．中国现代药物应用,２０１５,９(２１):２７７Ｇ２７８．[７]㊀赵娜,郭治昕,赵雪,等．丹参的化学成分与药理作用[J]．国外医药 植物药分册,２００７,２２(４):１５５Ｇ１６０．[８]㊀徐丽君,黄光英．丹参的化学成分及其药理作用研究概述[J]．中西医结合研究,２００９,１(１):４５Ｇ４８．[９]㊀曹金仪．丹参的化学成分及临床用途[J]．中国医药指南[J]．２０１２,１０(２９):５３Ｇ５５．[１０]程茜菲．高效液相色谱法同时测定丹参中６种化学成分的含量[J]．西北药学杂志,２０１６,３１(６):５５１Ｇ５５４．[１１]姜晓燕,张琳,窦志华,等．反相高效液相色谱法同时测定丹参中５种成分含量[J]．医药导报,２０１６,３５(９):９９７Ｇ１０００．[１２]张琳琳,王淳,宋志前,等．H P L 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