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酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核糖核酸的结构和功能的理解。
实验原理，酵母核糖核酸是由核糖核苷酸单元组成的，核糖核酸的主要结构是由磷酸、核糖和碱基组成的链状分子。
核糖核酸通过加热、冷却和酸性条件下，可将其分离成RNA的不同组分，如tRNA、rRNA和mRNA等。
实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获，将酵母菌落接种在含有葡萄糖和氨基酸的培养基中，培养一定时间后，收获酵母细胞。
2. 酵母细胞的裂解，将收获的酵母细胞用裂解液处理，使细胞膜破裂，释放出细胞内的核糖核酸。
3. 酵母核糖核酸的分离，利用差速离心法，将裂解后的酵母细胞液在不同离心速度下进行离心，分离出不同密度的RNA组分。
4. RNA组分的鉴定，通过琼脂糖凝胶电泳，将分离出的RNA组分进行电泳，根据不同RNA组分的迁移速度和位置，进行鉴定和分析。
实验结果：经过实验，成功分离出了酵母核糖核酸的不同组分，包括tRNA、rRNA和mRNA等。
通过琼脂糖凝胶电泳，得到了不同RNA组分的电泳图谱，根据图谱分析，确认了各个RNA组分的存在和相对含量。
实验结论：通过本次实验，我们成功掌握了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深了对核糖核酸的结构和功能的理解。
同时，实验结果也为进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
实验中遇到的问题及解决方法：在实验过程中，可能会遇到RNA的降解、污染等问题，可以通过在实验中加入RNase抑制剂、严格控制实验条件等方法来解决。
总结：本次实验为我们提供了一种了解RNA结构和功能的方法，也为我们今后的科研工作提供了重要的参考。
通过实验，我们不仅学会了实验操作技能，还深化了对核糖核酸的理解，为我们今后的学习和研究打下了坚实的基础。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告一、实验目的本次实验旨在通过实验方法，对酵母细胞中的核糖核酸进行分离和组分鉴定，了解酵母细胞中核糖核酸的基本特性和组成。
二、实验原理1. 酵母细胞中RNA的基本特性RNA是一种由核苷酸构成的生物大分子，它与DNA类似，但其主要功能是参与蛋白质合成。
RNA包括mRNA、tRNA和rRNA三种类型。
其中mRNA是转录过程中产生的信息分子，tRNA则将氨基酸运输到肽链上进行合成，而rRNA则是构成核糖体的重要组成部分。
2. RNA的提取方法常用的RNA提取方法包括：碱裂解法、有机溶剂提取法、硫酸盐沉淀法等。
其中硫酸盐沉淀法在提取纯度高、效率高等方面表现较好。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品经过琼脂糖凝胶电泳后可以得到不同大小的带状图谱，根据不同大小可以初步判断出样品中含有哪些类型的RNA。
三、实验步骤1. 酵母细胞的培养和收获将酵母菌株接种到含有YPDA培养基的锥形瓶中，在室温下静置培养48小时，直至菌落生长到一定程度。
然后将菌液离心收获，去除上清液。
2. RNA的提取和纯化将离心后的酵母细胞加入10ml Tris-EDTA缓冲液中，加入等体积的酚/氯仿混合液混合均匀，离心分离上清液中的DNA和蛋白质。
再用等体积异丙醇沉淀RNA，在70%乙醇中洗涤，最后用DEPC水重悬RNA。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，经过染色后在紫外线下观察不同大小带状图谱。
四、实验结果与分析通过实验方法得到了纯化后的RNA样品，并进行了琼脂糖凝胶电泳。
实验结果显示，在琼脂糖凝胶电泳中可以看到明显的28S、18S两种大小不同的RNA带，表明样品中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
五、实验结论通过本次实验，成功地提取出了酵母细胞中的RNA，并进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
结果表明，酵母细胞中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
这为我们深入了解酵母细胞内部核糖核酸的组成和特性提供了基础数据。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三是关于酵母核糖核酸（RNA）的提取和测定的实验。
1. 提取酵母RNA：
a. 取一份含有酵母的培养基培养液，将其转移到离心管中。
b. 将离心管在12000转/分钟的速度下离心5分钟，将沉淀（酵母细胞）收集到离心管底部。
c. 弃去上清液，加入适量的稀释RNA保护剂，如TRIZOL 或RNeasy试剂。
d. 快速颠倒离心管以完全溶解酵母细胞，并使RNA与纯化试剂进行结合。
e. 加入氯仿溶液，再次快速颠倒离心管混合，形成水相和有机相层。
f. 离心管在12000转/分钟的速度下离心15分钟，使两个相分离。
g. 将水相（含有RNA）转移到新的离心管中，并加入同等体积的异丙醇。
h. 用洗涤液和乙醚混合洗涤RNA样品，最后用无水乙醚洗涤RNA。
i. 最后，将RNA用无水乙醚洗涤并直接转移到无附加盐的水中得到纯化的RNA样品。
2. 测定酵母RNA：
a. 使用分光光度计在260nm波长下测量纯化的RNA溶液的吸光度。
b. 根据吸光度读数，用以下公式计算RNA的浓度：浓度（μg/mL）= 吸光度读数 ×稀释倍数 × 50。
c. 可选的是用琼脂糖凝胶电泳分析纯化的RNA样品，以确定RNA的完整性和纯度。
这是一个简单的方法，用于提取和测定酵母中的RNA。
根据需要，还可以使用其他提取试剂和测定方法。
酵母核糖核酸的提取、水解及组成成分的鉴定目的和要求了解核糖核酸（RNA）的提取方法及其组成成分的定性测定原理核酸在机体生命活动中具有重要意义，核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。
酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开，然后用乙醇提取。
加酸水解核酸，可鉴定其组成成分。
用硫酸水解RNA时，可以生成磷酸、戊糖和碱基。
各种成分以下列反应鉴定：（1）磷酸与钼酸铵试剂作用能产生黄色的磷钼酸铵沉淀。
（2）核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。
（3）嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化物沉淀。
用硫酸水解RNA时，可以生成磷酸、戊糖和碱基。
各种成分以下列反应鉴定：（1）磷酸与钼酸铵试剂作用能产生黄色的磷钼酸铵沉淀。
（2）核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。
（3）嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化物沉淀。
操作方法一、酵母RNA的提取（1）取酵母3克置于研钵中，加入25毫升0.5%氢氧化钠溶液研成匀浆。
（2）将匀浆移入三角瓶中，在沸水浴上加热水30分钟。
（3）离心沉淀10-15分钟。
（4）取上清液用3M醋酸4-5滴酸化至兰色石蕊试纸变红色。
（5）一面搅拌一面加入含2%HCL的95%酒精溶液10毫升。
（6）离心5分钟，将沉淀用无水乙醇5毫升洗涤一次，离心5分钟，沉淀再用3毫升洗涤一次，离心5 分钟，回收。
（7）用手心握住离心管并不断搅拌使挥发而使RNA迅速干燥。
二水解RNA 取1/2左右的RNA粉末于试管中加入8%硫酸4毫升在沸水浴上水解5分钟。
三、组成成分鉴定（1）嘌呤碱基的检查取水解液6滴，于试管中加氨水10滴，再加0.1M硝酸银溶液6滴，在沸水浴上加热，观察变化，何故？（2）磷酸的检查取水解液5滴，于试管中加5滴浓硝酸酸化，再加入5滴钼酸铵溶液在沸水浴上加热，冷却静止有何现象。
（3）核糖的检查取水解液6滴，于试管中加10%氢氧化钠，使其成碱性，然后加地衣酚3毫升，在沸水浴上加热，观察变化，何故？试剂和器材一、试剂（1）0.5% NaOH（2）3M 醋酸（3）8% 硫酸（4）无水酒精（5）氨水（6）含2% HCL的95%酒精（7）浓硝酸（8）0.1M AgNO3（9）酵母（10）石蕊试纸（11）钼酸铵试剂：将2克钼酸铵溶解在100毫升10% 硫酸中。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定—预习报告一、研究背景生物大分子物质通常是指动物植物微生物进行新陈代谢时所产生的蛋白质和核酸等有机化合物。
它不仅是生物科学工作者研究者的重要对象，且与化学、医学和食品等工业部门有密切关系。
在科研和医学方面，探讨结构与功能、防治某些疾病时常需要较纯的生物大分子物质。
然而这类物质往往与自然界存在的各种不同的化合物结合在一起或自身之间相互结合在一起，离体后稳定性较差，含量偏低，且提取的材料复杂，因此纯化的方法也很多。
微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中酵母最为理想。
本次实验以干酵母粉为实验材料，提取RNA，并测定其含量。
二、研究目标掌握核酸分离纯化的基本设计思想及主要操作细节和生物制品开发的基本思路。
三、研究策略酵母细胞中RNA通常与蛋白质结合。
要提取RNA就要破细胞壁，让它释放出来。
浓盐法通过改变细胞膜的通透性释放出胞内物质，然后沸水浴使RNA水解酶失活。
再通过调节pH将RNA充分沉淀，洗涤，干燥，测量。
四、研究方案及可行性分析浓盐法是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
提取RNA时需注意掌握温度，直接在90~100℃浸提，避免在20~70℃之间的时间过长，磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
洗涤沉淀时要反复抽提，离心以纯化RNA。
测定提取的核酸含量，只需测定组成核苷酸的任意一种组分即可。
碱基在260nm有光吸收，采用紫外吸收法可测定核酸含量。
五、具体实验设计1、所需主要材料：食品用干酵母粉；试剂：10%NaCl, 6MHCl , 95%乙醇，2%氨水，RNA沉淀剂（0.5g钼酸铵+193ml水+7ml70%过氯酸）；仪器设备：烘箱，离心机，天平，紫外分光光度计，移液器，恒温水浴锅，玻璃匀浆器，pH计。
主要器皿：研钵，离心管，容量瓶25ml 50ml；具塞试管；三角瓶；小烧杯。
2、具体操作步骤1.提取：称取7g酵母粉，于研钵中小心研磨成面粉状粉末，转移至三角瓶。
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定一、目的了解从酵母中提制 RNA的方法并掌握其测定手段。
二、原理微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中以酵母最为理想，这是因为酵母核酸中主要 是 RNA (2.67~10.0%), DNA很少 (0.03~0.516%), 菌体容易收集, RNA也易于分离。
此外， 抽提后的菌体蛋白质（占干菌体的 50%）还具有很高的利用价值。
RNA提制过程是先使 RNA从细胞中释放, 并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去，再 根据核酸在等电点溶解度最小的性质，将 pH 调到 2.0~2.5 使 RNA沉淀，进行离心收集。
提取 RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱性和浓盐法，前者利用碱使细菌细 胞壁溶解，使 RNA 释放出来，这种方法抽提时间短，但 RNA 在此条件下不稳定，容易分 解；后者是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞腹的通透性，使 RNA释放出来，此法 易掌握，产品颜色较好，用浓盐法提取 RNA 时应注意掌握温度，避免在 20~70℃之间仪时 间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使 RNA因降解而降低 提取率，利用加热，至 90~100℃使蛋白质变性，破坏该类酶，有利于 RNA的提取。
若要提取接近天然状态的 RNA，可采用苯酚法或氯仿――异戊醇法去蛋白，然后用乙 醇沉淀 RNA，离心收集。
本实验采用浓盐法（10% NaCl）核酸不论是DNA还是 RNA， 都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物， 而核苷酸是由糖， 碱基和磷酸构成。
要测定生物体内核酸的含量或者测定提取出来的核酸含量， 只需测定组成核苷酸的一种 成份，如磷、糖或碱基，便可计算出核酸的含量，因为核酸分子中这三个组份是以等分子比 例存在的，即每一个嘌呤或嘧啶分子都与一分子戊糖及一分子磷酸相连接的，所以只要测出 其中任何一组分的含量即可求出核酸的含量。
目前测定核酸含量的方法如下：1．定磷法，测量 RNA和 DNA2．戊糖测定法，测 RNA3．脱氧戊糖测定法测 DNA4．紫外吸收法测 RNA和 DNA5．微生物测定法，测 DNA6．应用同位素研究的方法，测定 DNA和 RNA其中方法 5、6 为一些特殊研究之用，应用面较窄，方法 1、2、3、4为较普遍的核酸测 定手段。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核酸的理解。
实验仪器和试剂，离心机、pH计、琼脂糖凝胶电泳仪、琼脂糖、酵母细胞、蛋白酶K、RNase A、RNase T1、DNase I、酚/氯仿、异丙醇、无水乙醇、三氯乙酸、乙醇、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K缓冲液、RNase A 缓冲液、RNase T1缓冲液、DNase I缓冲液。
实验步骤：1. 酵母细胞的裂解。
将酵母细胞加入磷酸盐缓冲液中，加入蛋白酶K，用pH计调节至碱性，加入酚/氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀。
2. RNA的提取。
将上清液加入异丙醇，离心，取上清液，加入无水乙醇，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
3. RNA的纯化。
将RNA加入三氯乙酸和乙醇混合液，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
4. RNA的酶切。
将RNA加入RNase A缓冲液，RNase T1缓冲液和DNase I缓冲液进行酶切反应。
5. RNA的电泳分析。
将酶切后的RNA样品加入琼脂糖凝胶电泳仪中进行电泳分析，观察RNA的组分鉴定。
实验结果：经过琼脂糖凝胶电泳分析，我们观察到了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定结果。
根据不同的迁移率，我们可以清晰地看到RNA在凝胶上的分布情况，从而确定RNA的组成和大小。
实验结论：通过本次实验，我们成功地实现了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定。
通过实验，我们加深了对核酸的理解，掌握了相关的实验技术和方法。
实验总结：本次实验不仅是对课堂知识的巩固和实践，也是对科学研究方法的探索和运用。
通过实验，我们不仅学到了理论知识，更加深了对实验技术和方法的理解和掌握。
在今后的学习和科研工作中，我们将继续努力，不断提高实验技术水平，为科学研究做出更大的贡献。
以上就是本次酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验的报告内容，谢谢阅读。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定预习思考题1.作为商品开发，我们更多的是应该考虑市场需求的共性还是个性？为什么？相应的，如何完成相关欲开发产品的定位？答：我认为作为商品开发，更多的应该是考虑需求的共性，尤其是市场开发前期，只有更多的考虑市场需求共性，符合消费群体的需求，产品才能推广开，在市场发展相对稳定时，可再根据不同的消费人群制定相关个性产品。
完成产品的定位，需要先做市场调研，从已有的产品入手，调查产品的需求程度，主要消费群体，市场份额等，根据调研报告进一步定位产品。
2.基于生物制药的产业开发，探讨实验室的科学研究和大工业生产之间的关系和异同之处？答：实验室的科学研究是大工业生产的基础和必要条件，在实验室研究成熟的基础上才能进行大工业生产。
二者相同之处就是基本的实验生产原理相同，不过实验室研究的条件和精准度都比较高，得到微量的目的产物；而大工业生产主要利用仪器操作，得到大量的目的产品。
一．研究背景随着人们对生物专业重视程度的增加，生物相关产业也逐渐发展起来，目前人们比较关注的就是生物制药。
在食品医药卫生领域，RNA制剂是很有前景的一个产业方向，如今市场上已有一些核糖核酸制剂产品出现。
而微生物则是工业上大量生产核酸的原料，其中以酵母最为理想。
本次实验就是酵母核糖核酸的提取及测定，通过实验让大家更了解物质分离纯化的基本设计思想及操作细节。
二．研究目标提取RNA的方法很多，工业上常采用稀碱法和浓盐法，本次实验采取浓盐法，通过对酵母的核糖核酸的提取，再用紫外吸收法测定，使学生掌握物质分离出暖的基本设计思想及主要操作细节。
三．研究策略提取RNA使用浓盐法，再用紫外吸收法测定RNA和DNA。
四．研究方案及可行性分析提取RNA使用浓盐法，在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜通透性，使RNA释放出来。
再用紫外吸收法测定RNA和DNA，紫外吸收法操作简便快速，虽易受蛋白质及含有共轭双键物质的干扰，但其结果仍具有一定可信性。
酵母RNA的提取和含量测定姓名：周超学号：201100140067班级：11级生命基地同组者：刘炳煜时间：2011年3月26日【实验目的】1.掌握稀间法提取酵母RNA的原理和方法2.了解测量核算浓度的不同方法的原理3.掌握紫外吸收法测定核酸浓度的原理和技术4.学会使用紫外分光光度计5.学会使用离心机【实验原理】1.酵母RNA提取的原理：（1）酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少与2%（2）RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加入乙醇使其沉淀，由此可制得粗RNA制品。
（3）用碱提取的RNA有不同程度的降解。
2.紫外吸收法测RNA含量的原理：（1）核酸具有吸收紫外线的性质，在波长260nm处有最大吸收，且在一定浓度范围内光吸收值与浓度成正比（5-45ug/ml），符合朗伯-比尔定律。
（2）优点：操作简单，样品用量少，不用显色，测完后样品可以继续使用。
（3）缺点：当有大分子物质存在时，也会有一定的吸收，会影响测量精确度。
【实验试剂】1.提取试剂：0.2% NaOH溶液酸性乙醇：5ml浓HCl加入到500ml95%乙醇中混匀 95%乙醇无水乙醇2.含量测定试剂：0.2% NaOH溶液pH试纸（1-14）标准核酸：200ug/ml待测样品核酸【实验步骤】1.酵母RNA的提取：（1）将4g干酵母粉放入200ml锥形瓶中，加入40ml 0.2%的NaOH溶液混匀。
（2）沸水浴30min，然后用流水冷却（3） 4000转/分离心 15秒，保留上清液（4）在上清液中加入40ml酸性乙醇，边加边搅拌，静置5分钟左右，再4000转/分离心5分钟，保留沉淀（5）用20ml 95%乙醇分两次洗涤沉淀，每次洗后3000转/分离心5分钟（6）用20ml无水乙醇分两次洗涤，每次洗后3000转/分离心5分钟（7）收集沉淀于滤纸上备用。
2.RNA含量的测定：（1）准确称取0.2-0.25g（因提取到的RNA粗品量太少，本次实验使用的RNA 量仅为0.1910g）样品核酸，加2ml 0.2% NaOH溶液和1ml水溶解，调成糊状（2）再加入50ml左右的水溶解，边溶解边转移到100ml烧杯中，用0.2% NaOH 调至中性，定容至100ml（3）再分3次取2.5ml定容至100ml备用，做平行实验（4）取200ug/ml的标准RNA 20ml，加水定容至100ml，得到40ug/ml的RNA 备用（5）再将40ug/ml的RNA按表一加样稀释，得到5ug/ml、10 ug/ml、20 ug/ml、30 ug/ml、40 ug/ml的标准溶液（6）用紫外分光光度计测量吸光值，绘制标准曲线，计算样品纯度。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
一.研究背景及目的
核苷酸类物质及其衍生物是遗传工程、医药、食品、农业生产和科研领域十分重要的生化试剂和原料。
其功能有：
二.原理
微生物是工业上大量生产核酸的主要原料。
采取酵母因为核酸的提取不需要很高活性的菌体，酵母是啤酒厂废弃的原料，从经济角度讲，用来提取核糖核酸最为理想。
提取RNA的方法很多，常见的有如下几种：（本次实验采取浓盐法10%NaCl）
核酸是由糖、碱基、磷酸以一定比例构成的，理论上定量核酸只需测定其中一种即可。
定磷法准确、微量、快速，是最好的方法。
紫外吸收法简单快速，但是当体系内有蛋白质及其他含共轭双键物质存在时干扰较大。
本次实验采用紫外吸收法。
基本的提取策略为：我们可以通过使用化学因素破坏细胞膜，使其中的核酸流出来，接着纯化、测定含量即可。
其中影响我们纯度和定量的主要因素就是蛋白质及有共轭双键物质的干扰，所以，我们的主要目标就是排除蛋白质和有共轭双键物质对含量测定的影响。
尽量保持RNA的完整性有利于提取率。
对于RNA酶的干扰，工业生产的流水化作业，使得人员参与较少，而且工业生产并不像实验室对RNA的完整性要求那么高，所以工业生产中RNA酶的存在不是主要矛盾。
三.仪器与试剂
试剂：10%NaCl；6MHCl；95%乙醇（分析纯）；2%氨水；RNA沉淀剂
仪器：722-分光光度计（上海分析仪器总厂）；微量可调手动移液器(大龙牌)；具塞试管（15ml）;漏斗（25ml一只，50ml两只）；研钵；匀浆器；低速离心机（飞鸽牌，TDL-40B，上海安亭科学仪器厂）；药物天平（HCTP12B1，北京宣武天平厂制）；硫酸纸；烘箱（）
四.实验步骤
按下表进行操作：
五.数据整理与结果计算
I.干燥RNA 样品含量：
260260280一般RNA 的OD 260/ OD 280>2;DNAOD 260/ OD 280约为1.9；样品中有蛋白质含量较高时比值下降。
因此，可推断，该体系为RNA 且较纯。
紫外法测定蛋白质含量校正数据OD 280/ OD 260的最小值为0.595.因此没有办法得到蛋白质的准确值。
根据下公式得到制品纯度和产率：
260
1
%=100%
OD ⨯⨯⨯⨯样品制品纯度（）定量样品稀释倍数定量样品体积比消光系数定量样品重=57.9%
%=100%7RNA ⨯⨯制品纯度总制品重
提取率（）克=42.9%
六.质疑:
1.为什么采取紫外吸收法定量核酸.由于蛋白质含量较低时，对吸光度的影响不大，因为在260nm下，蛋白质的吸收值约为核酸的1/10.本次实验经过多次乙醇的洗涤，核酸的纯度
已经达到一定的浓度，紫外法操作简便，因此可使用紫外法。
2.测定W3之前需要烘干一下。
这样测量的才是转入匀浆器的样品量。
3.为什么A不做多组平行管。
因为没有意义，如果从稀释后的溶液中取出3只试管的待测液，相当于同一个待测测量3次；如果我们从定容那步开始做平行，也是相当于同一溶液测3次。
追根溯源，如果想要做平行，就要从加热浓盐法破壁开始，实际上，如果想要测出这种方法所能达到的纯化程度，这样做是有意义的，如果作为学生实验，这么做意义并不大反而增加工作量。
4.文献《影响浓盐法提取啤酒酵母RNA的工艺参数研究》中认为浓盐法破壁的原理是高盐使得酵母自身破裂放出RNA，这点我不敢苟同。
浓盐法是改变细胞膜的透性，并没有使细胞裂解。
5.有的组测量了以蒸馏水为空白对照组的OD260和OD280，结果发现管A,B之间的吸光度不是简单的加和关系，这点让我很费解。
可能的原因也没有猜到，难道是狼比尔定律在浓度很低（B管）时也不适用吗？
总结：
抓主要矛盾！这是我这次实验后感受最深的一句话。
举个例子在称量RNA制品重时，以
下几个事件对重量的影响：
被人碰了撒地上了>称量时一碰撒天平上>速度慢样品吸水
我这回称量完成后虽然想到了人太多，小心样品！但是没有重视，就真出事了。
实验时一定要避免不必要的意外。
我不犯人，但也要防止人犯我。
在撒了样品后，我们从新收集了较为干净的样品，那个时候，应该再次烘干称量的，但是由于手忙脚乱的收集过后，不太清醒，直接就称量了。
但是，我们在称量W3时又从新回去烘干的，这就导致了RNA实际转入进匀浆器的要少，因此，导致我们算出的纯度有所下降。
虽然洗了四次，而且产率开始很好，但是一次意外过后，都化作云烟了。
这就告诫我，实验时要注意意外事件的发生。
参考文献
[1].中国农业大学.生物化实验室.生物化学实验指导 26-28页
[2].王定昌.核酸酵母产品的开发和应用[J].粮油食品科技第10卷 2002年第4期
[3].乔宾福. 实用微生物技术[M].上海:上海科学技术文献出版社, 1994.
思考题：
1、本实验为何选用酵母为生产原料？在分离纯化的实验选材上有哪些主要原则？
选择酵母的原因：①微生物繁殖快、代谢旺盛、体积小、培养成本低利于工业生产②
啤酒酵母是啤酒厂的副产品，来源广、成本低，合理的处理酵母也能防止对环境的污
染③微生物中酵母的RNA含量比较高（2.7-11%）[3]④酵母的生活规律为人熟知，用
于生产、使用较为安全。
分离纯化原则: 选材:①材料中所含目标产物较多②材料中的其他杂质易于除去③材料
易得
2、浓盐法的选择是基于怎样的考虑？
仅仅从RNA回收率和纯度上看，稀碱法略优于浓盐法，且时间短，反应温度低。
但是稀
碱法对酵母有选择，提取颜色较深，很难溶解，而且对设备要求较高，设备一次性投资较大，再加上管理和维护等原因，一般采用浓盐法。
同时，流水线作业可以大幅度缩减时间，浓盐法慢些也是可以承受的。
本次的实验就是实现工业生产核酸的过程，所以采用浓盐法。
3、本方法为何选用等电点沉淀作为最主要的纯化步骤？
RNA等电点和大多数蛋白质相差较大，因此决定我们有等电点沉淀的理论基础。
实验室中为得到RNA的自然结构，会采取有机溶剂沉淀的方法，但工业生产的核苷酸多为食用、药用，有机溶剂不易除去，会造成安全隐患。
同时有机溶剂较昂贵，通常可燃，
也不适于工业生产中大量使用。
4、DNA的去除本方法是怎样考虑的？
本实验中，采取浓盐法改变细胞膜的透性，使得细胞质中的RNA流出来，但是并没有破
坏到核膜的透性，因而大多数的DNA还留在细胞内。
有可能有部分核膜被损坏，或是部
分DNA夹在线粒体中流出来时，实验主要利用DNA等电点和RNA差别较大的特点除去
这部分DNA（RNA等电点在2.0-2.5，而DNA由于蛋白质修饰等原因等电点在4.0-4.5）所以在我们调等电点沉淀RNA时，DNA就留在了溶液中而被除去了。
同时DNA在10%的NaCl溶液中溶解度较小，大部分以沉淀形式存在于溶液中，也起到一定的去除DNA的作用。
5、大量的乙醇洗涤在工业生产上有否危险隐患？厂家是如何考虑的？
乙醇属于易燃易爆的危险品，大量使用一定是有危险隐患的。
但是只有经过乙醇的洗涤才
能除去RNA中掺杂的无机盐、色素、脂溶性杂质。
高浓度的盐会水和大量的水分子，
RNA分子之间容易形成氢键发生沉淀，乙醇与水任意比例互溶，因而可以洗去盐和与
RNA结合在一起的水。
同时，乙醇易挥发，易于除去。
同时乙醇较为廉价，毒性低、回收容易，因此适于工业使用。
6、本实验在用紫外法测定RNA含量时，为什么要固定测定液的pH值，若pH值不固定，会影响测定结果吗？为什么？
会影响测定。
因为紫外法需要在中性条件下测定吸光度。
因为核酸在强酸或强碱条件下，会发生氢键断裂，紫外吸收升高，这种现象称为增色效应。
因此，测定核酸含量时需
要调至中性，我们所使用的比消光系数也是在中性条件下测定的。
7、在测定中，加钼酸铵-过氯酸沉淀剂的作用是什么？离心除去沉淀后，其上清液为什么
要稀释100 倍？
加钼酸铵-过氯酸沉淀剂的目的是沉淀RNA，作为对照组（透光度100%）。
因为A管稀
释了100倍，如果B管想要作为A管的对照组，就必须相应的稀释相同的倍数才行。
如果我们加入的试剂对吸光度有影响的话，我们就更有必要进行相应的稀释了。
