非小细胞肺癌耐药细胞株A549_DDP中microRNA表达的初步研究

MicroRNA与肺癌顺铂耐药相关性研究进展张芳(综述);李洋(审校);周清华(审校)【摘要】MicroRNAs (miRNAs) are a class of small, about 22 nucleotides endogenous noncoding RNAs that negatively regulate their target genes’ expression through post-transcriptional suppression. MicroRNA has a broad effect on tumorigenesis and tumor biological processes, including tumor development, differentiation, metastasis and chemoresistance. Chemoresistance represents a major obstacle in effective clinical treatment of tumors, how to conquer the chemoresistance in tumor arouses people’s interst. A growing number of studies have proved that microRNAs play a crucial role in tumor che-moresistance. hTis view will discuss the the progress research between microRNA and tumor therapy, especially the cisplatin chemotherapy in tumor.%微小RNA（microRNA, miRNA）是一类长约22 nt的非编码小分子RNA，在转录后水平上负性调节靶基因的活性。

《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是全球最常见的肺癌类型，具有较高的致死率。

随着对肺癌发病机制的不断深入，越来越多的研究关注于微小RNA（miRNA）在肿瘤发生、发展及治疗中的作用。

其中，miR-342-5p作为一种具有广泛生物活性的miRNA，其在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及其调节机制尚不明确。

本文旨在探讨miR-342-5p在非小细胞肺癌中的功能及其潜在的治疗价值。

二、材料与方法1. 材料本实验所使用的非小细胞肺癌细胞系A549和H460均购自ATCC细胞库。

实验所涉及的试剂、仪器等均经过严格筛选和校准，以确保实验的准确性。

2. 方法（1）细胞培养与转染：将A549和H460细胞在特定条件下培养，并利用脂质体转染法将miR-342-5p模拟物或抑制剂转染至细胞中。

（2）实时荧光定量PCR（RT-qPCR）：检测转染前后miR-342-5p的表达水平。

（3）Western Blot：检测相关蛋白的表达情况。

（4）细胞功能实验：包括细胞增殖、凋亡、迁移等实验，以评估miR-342-5p对细胞功能的影响。

三、实验结果1. miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系中的表达情况通过RT-qPCR实验发现，miR-342-5p在A549和H460细胞中的表达水平较正常肺组织明显升高。

2. miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞功能的影响（1）细胞增殖实验显示，过表达miR-342-5p可促进A549和H460细胞的增殖，而抑制miR-342-5p则可抑制细胞的增殖。

（2）细胞凋亡实验表明，过表达miR-342-5p可降低A549和H460细胞的凋亡率，而抑制miR-342-5p则可增加细胞的凋亡率。

（3）迁移实验显示，miR-342-5p可促进非小细胞肺癌细胞的迁移能力。

3. miR-342-5p的调节机制研究通过Western Blot实验发现，miR-342-5p可能通过调控相关信号通路中的关键蛋白，如XXX、YYY等，来影响细胞的增殖、凋亡和迁移。

《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是一种常见的恶性肺癌类型，严重影响人们的生命健康。

miRNA是一类小分子RNA，可以参与多种生物过程的调控。

其中，miR-424-5p作为其中的一种成员，近期引起了广泛的关注。

在众多研究报道中，其与非小细胞肺癌之间的关系也受到了广泛的关注。

本文旨在研究miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节机制。

二、研究背景miR-424-5p的异常表达与多种癌症的发生、发展密切相关。

在非小细胞肺癌中，miR-424-5p的表达水平与肿瘤的恶性程度、转移能力等密切相关。

然而，其具体作用机制尚不明确。

因此，研究miR-424-5p在非小细胞肺癌中的作用及调节机制，对于揭示肺癌发病机制、诊断及治疗具有重要意义。

三、研究方法1. 实验材料：非小细胞肺癌细胞A549、miR-424-5p模拟物及抑制剂、相关试剂等。

2. 实验方法：（1）利用生物信息学方法预测miR-424-5p的靶基因；（2）通过细胞实验验证miR-424-5p的靶基因；（3）研究miR-424-5p在A549细胞中的表达情况；（4）利用过表达和敲低技术，研究miR-424-5p对A549细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响；（5）通过荧光素酶报告实验等手段，研究miR-424-5p的调节机制。

四、实验结果1. 预测及验证：通过生物信息学方法预测，我们发现多个基因可能是miR-424-5p的靶基因。

通过细胞实验验证，我们确定了其中几个关键靶基因。

2. miR-424-5p在A549细胞中的表达情况：我们发现miR-424-5p在A549细胞中表达水平较高。

3. miR-424-5p对A549细胞的影响：过表达miR-424-5p可以显著促进A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力，而敲低miR-424-5p则具有相反的效果。

4. 调节机制：通过荧光素酶报告实验等手段，我们发现miR-424-5p通过调控其靶基因的表达，进而影响A549细胞的生物学行为。

《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型之一，具有高发病率和高死亡率的特点。

近年来，随着分子生物学和基因组学研究的深入，microRNA（miRNA）在肿瘤发生、发展及转移过程中的作用逐渐受到关注。

miR-342-5p作为一种重要的miRNA，在多种肿瘤细胞中表现出调控作用。

本研究旨在探讨miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节机制，为非小细胞肺癌的治疗提供新的思路和方法。

二、研究方法1. 实验材料本研究选用非小细胞肺癌细胞系A549和H460作为研究对象，同时使用miR-342-5p的模拟物和抑制剂进行实验。

2. 实验方法（1）通过生物信息学方法预测miR-342-5p的靶基因；（2）利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测A549和H460细胞中miR-342-5p的表达水平；（3）通过过表达和敲低miR-342-5p，观察其对A549和H460细胞增殖、迁移和侵袭的影响；（4）利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-342-5p与预测靶基因的结合情况；（5）通过Western blot检测靶基因在蛋白水平的表达变化。

三、实验结果1. miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的表达情况通过RT-qPCR实验发现，与非癌肺组织相比，miR-342-5p 在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的表达水平显著降低。

2. miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞系A549和H460的影响（1）过表达miR-342-5p可抑制A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭；（2）敲低miR-342-5p可促进A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭。

3. miR-342-5p的靶基因验证通过生物信息学方法预测及实验验证，发现miR-342-5p可与某靶基因的3'UTR区域结合，且过表达miR-342-5p可显著降低该靶基因在A549和H460细胞中的表达水平。

A549/DDP人非小细胞肺癌细胞说明书及注意事项1.简介：A549人非小细胞肺癌细胞，来源于58岁的白人男性肺癌组织，由D.J. Giard等人建立于1972年。

M. Lieber发现A549可以通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高比例的不饱和脂肪酸卵磷脂。

本细胞株是A549细胞经DDP筛选的耐DDP株。

不宜在细胞刚复苏或消化后呈悬浮状态下加药，一般在细胞达50%后，贴壁良好后比较好，顺铂加药浓度为2μg/ml。

在本库通过支原体检测。

所有肿瘤细胞和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，操作者需注意自身防护。

基本培养条件:培养基：89％F-12K +10％胎牛血清+1％PS温度：37℃气相：95％空气，5%二氧化碳2.细胞运输：本细胞为贴壁细胞，常规运输方式是将细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满新鲜的完全培养液并封好瓶口进行运输。

根据气温的高低及运输距离的远近，我们可能采取以下两种方式运输。

活细胞胰酶消化离心后血清发货；冻存管发货。

3.客户收到细胞后请严格按照以下要求进行操作。

3.1培养前的注意事项：A. 细胞出库前都是生长良好,我们会对出库细胞进行拍照留档(建议用户在收到细胞时拍照片,细胞拍照时请用100X 、200X倍数各拍上2~3张照片留存,可用作细胞状态的对比,拍摄的照片应当清晰)。

B. 用户在收到细胞后,先观察培养瓶是否完好,培养液是否外渗,培养液是否浑浊。

3.2新购细胞的初步培养：客户收到细胞后在未开封前,先用75％酒精将培养瓶外表擦拭干净,镜检细胞贴壁情况。

将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。

细胞恢复基本生长状态后，倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：A. 细胞密度未达85％时，用75％酒精喷洒培养瓶后放在生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸取剩余培养液，只留6~8ml培养液继续培养。

B.细胞长满（达85-95％），即可进行传代。

《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》篇一摘要：本文通过深入研究miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的表达情况及其作用机制，揭示了miR-424-5p在肺癌细胞增殖、凋亡及转移等生物学行为中的关键作用，并探讨了其潜在的调节机制。

研究结果表明，miR-424-5p的表达水平与非小细胞肺癌的发生、发展密切相关，有望成为肺癌治疗的新靶点。

一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型之一，其发病机制复杂，涉及多种基因的异常表达和调控。

MicroRNAs（miRNAs）是一类内源性的非编码小RNA，通过调控靶基因的表达参与多种生物学过程。

其中，miR-424-5p在多种癌症中表现出不同的表达模式和功能。

因此，研究miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节机制，对于深入了解肺癌的发病机制及开发新的治疗方法具有重要意义。

二、研究方法本研究采用实时荧光定量PCR技术检测非小细胞肺癌细胞A549中miR-424-5p的表达水平，通过细胞增殖、凋亡及迁移实验探究miR-424-5p对A549细胞生物学行为的影响。

同时，利用生物信息学方法预测miR-424-5p的靶基因，并通过双荧光素酶报告实验验证预测结果的准确性。

三、实验结果1. miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的表达情况通过实时荧光定量PCR检测发现，与非癌肺组织相比，非小细胞肺癌组织中miR-424-5p的表达水平显著升高。

在A549细胞中，miR-424-5p的表达也呈现高表达趋势。

2. miR-424-5p对A549细胞生物学行为的影响细胞增殖实验显示，过表达miR-424-5p的A549细胞增殖速度明显加快；而抑制miR-424-5p表达的A549细胞增殖受到抑制。

凋亡实验结果表明，过表达miR-424-5p的A549细胞凋亡率降低，而抑制miR-424-5p表达的A549细胞凋亡率增加。

非小细胞肺癌中肺耐药蛋白mRNA的表达及临床意义背景和意义非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）是一种相对常见的恶性肿瘤，目前治疗药物主要是以靶向药物为主。

然而，肺耐药蛋白（P-glycoprotein，P-gp）是一个输送膜蛋白，它可以出现在某些肺癌细胞的细胞膜中，从而导致多药耐药的现象，使治疗变得困难。

近年来，人们逐渐意识到 P-gp 基因表达的水平与多药耐药之间有着密切的关系，因此研究肺癌细胞中这一蛋白的 mRNA 表达对于治疗 NSCLC 至关重要。

研究方法本文的研究采用了大规模回顾性队列研究的方式，对 156 例 NSCLC 患者进行了 P-gp mRNA 的检测，并对这些患者的临床相关数据进行分析。

使用实时荧光定量 PCR 技术检测肺耐药蛋白 mRNA 的水平，以确定其表达水平。

同时收集相关病史、化疗和放疗等治疗方式、治疗效果及生存状况的数据进行分析，以评估 P-gp mRNA 表达和多药耐药之间的联系。

结果研究数据显示：在 NSCLC 患者中，有 66.7% 的人检测为 P-gp mRNA 高表达，这意味着他们更容易出现多药耐药的情况。

与低表达组相比，高表达组的患者在化疗后生存时间更短，长期生存率也更低。

此外，高表达组的化疗和放疗效果也更差。

这表明 P-gp mRNA 高表达是 NSCLC 多药耐药的主要原因。

结论和展望本研究结果表明 P-gp mRNA 高表达是 NSCLC 患者多药耐药的重要标志，其表达水平与化疗和放疗效果以及生存期密切相关。

此外，对 P-gp mRNA 表达进行监测可以更好地指导治疗方案和评估患者的预后。

未来，我们仍需进一步研究多种因素对 P-gp mRNA 表达的影响，并探索更为有效且有针对性的治疗方案，谋求更好地治疗 NSCLC 患者的效果。

In conclusion, P-gp mRNA expression is an important indicator of multidrug resistance in NSCLC patients. Its expression level is closely related to the efficacy of chemoradiotherapy and the overall survival rate of patients. The monitoring of P-gp mRNA expression can guide treatment plans and evaluate patient prognosis. Future studies need to explore various factors affecting P-gp mRNA expression and explore more effective and targeted treatment options to better treat NSCLC patients.。

microRNA-149在顺铂耐药非小细胞肺癌细胞中的表达变化及相关机制研究施凯;冯月娟;王建峰;王灿灿;郁东伟;陈学远【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2018(056)030【摘要】目的探讨microRNA-149(miR-149)在顺铂耐药A549细胞(A549/DDP)中的表达规律及作用机制.方法生物信息学方法分析顺铂耐药A549细胞中的microRNA表达变化.体外培养A549细胞并诱导对顺铂耐药的A549/DDP细胞系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-149在两种细胞系中的表达差异.CCK-8试验及流式细胞术检测单纯miR-149过表达以及miR-149和ABCC1同时过表达对细胞顺铂敏感性的影响.qRT-PCR及Western blot检测A549及A549/DDP细胞中ABCC1的表达差异,双荧光素酶报告试验检测miR-149以ABCC1之间的靶向关系,并利用qRT-PCR及Western blot加以证实.结果 A549/DDP细胞中的miR-149表达较低,与A549细胞相比,差异具有统计学意义(t=-4.65,P＜0.05).miR-149过表达可以降低顺铂处理后A549/DDP细胞的活力但增加其凋亡率,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(P均＜0.05).与A549细胞相比ABCC1在A549/DDP细胞中存在mRNA及蛋白水平的高表达,差异具有统计学意义(t=8.44、5.14,P均＜0.05).过表达miR-149可以降低A549/DDP细胞中ABCC1的mRNA及蛋白水平,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(t=-3.14、-4.54,P＜0.05).双荧光报告酶分析显示miR-149可直接与ABCC1 mRNA 的3'UTR结合.miR-149与ABCC1同时过表达的A549/DDP细胞与单纯miR-149过表达的细胞相比,顺铂处理后细胞活力增加,凋亡减少,差异具有统计学意义(P均＜0.05).结论 miR-149表达不足可能引起A549细胞对顺铂的耐药,该机制与miR-149对ABCC1的抑制作用有关.【总页数】6页(P1-5,9)【作者】施凯;冯月娟;王建峰;王灿灿;郁东伟;陈学远【作者单位】杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.卵巢癌顺铂耐药细胞中DNA转录与修复相关基因的表达 [J], 曹漫明;张积仁;汪森明;胡喜钢;胡利娟2.Slug和E-cadherin在非小细胞肺癌恶性胸水细胞中的表达变化 [J], 李长思;徐爱华;杨杨;李斌;李建华;孙永新3.let7a在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用及相关机制研究 [J], 彭微; 刘求梅; 刘洁; 袁桂4.miR-21在非小细胞肺癌组织细胞中的表达变化及其在细胞增殖、凋亡中的作用[J], 金文静; 顾文超; 袁亚平; 冯慧丽; 王冬冬5.EZH2蛋白在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用及其机制研究 [J], 齐慧;呼群;苏乌云;贾永峰;陈连香;曹冉华;乌日罕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

MicroRNA在非小细胞肺癌的诊断、治疗和预后评估中的作用摘要肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，居全球癌症死亡的首位。

肺癌预后差的原因是缺乏有效的早期诊断方法及治疗手段。

微小核糖核酸（MicroRNA，miRNA）是一种大小为18～23个碱基的非编码单链小分子RNA。

近年研究发现，miRNA在肺癌的发生发展发挥着重要作用。

本文对miRNA在非小细胞肺癌的诊断、治疗和预后判断中的作用做一综述。

关键词非小细胞肺癌；微小核糖核酸；诊断；治疗；预后2012年估计有180万新发肺癌病例，占所有癌症的13%，是全球男性因癌死亡的首要原因，也是发达国家女性因癌死亡的首要原因[1]。

肺癌分为小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）和非小细胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC），其中大部分为NSCLC（约80%），虽然近年来NSCLC治疗手段不断进步发展，NSCLC患者的总体治疗效果仍欠佳[2]，其主要原因是大部分NSCLC患者明确诊断时已是中晚期，已无手术治疗机会。

寻找一种可靠的早期诊断NSCLC的手段和有效的NSCLC治疗方案是目前NSCLC研究领域的重点。

目前许多研究表明，MicroRNA （miRNA）与NSCLC的发生发展关系密切，可以作为NSCLC的早期诊断、治疗和预后评估的重要指标。

1 miRNA概述自1993年第一个miRNA被发现以来，现已在人类发现了超过1000个。

miRNA是一种由18～23个碱基组成的非编码单链小分子RNA，经过Dicer 酶加工后生成，通过降解或抑制使其靶mRNA分子翻译而起作用。

目前研究认为，miRNA与人体细胞的分化、增殖、凋亡以及疾病的发生发展关系密切。

在肿瘤组织中，miRNA既可下调癌基因的活性从而抑制肿瘤的发生发展，也可下调抑癌基因来促进肿瘤的发生发展[3]。

2 miRNA与NSCLC的诊断2. 1 miRNA与NSCLC的早期诊断目前临床上NSCLC早期诊断困难，缺乏行之有效的肺癌早期诊断生物标志物，大部分NSCLC发现时已晚期，因此提高NSCLC早期诊断率尤为重要，特别是无创或微创有效的可靠的检测手段，miRNA使这一设想成为了可能。

《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》篇一摘要：本文旨在探讨miR-424-5p在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞A549中的作用及其调节机制。

通过实验研究，我们发现miR-424-5p在A549细胞中具有显著的生物学功能，并可能成为肺癌治疗的新靶点。

一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型，其发病率和死亡率均居高不下。

近年来，随着分子生物学和基因组学研究的深入，microRNA（miRNA）在肿瘤发生、发展及转移过程中的作用逐渐受到关注。

miR-424-5p作为一种重要的miRNA，其在多种肿瘤中表现出不同的生物学功能。

因此，研究miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节机制，对于深入了解肺癌的发病机制和寻找新的治疗靶点具有重要意义。

二、研究方法1. 实验材料选用非小细胞肺癌细胞A549作为研究对象，同时准备相关实验试剂和仪器。

2. miR-424-5p表达检测通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术，检测A549细胞中miR-424-5p的表达水平。

3. 功能研究通过构建miR-424-5p的过表达和敲除载体，探究其在A549细胞中的生物学功能。

4. 调节机制研究通过生物信息学分析和双荧光素酶报告实验，探讨miR-424-5p的下游靶基因及其作用机制。

三、实验结果1. miR-424-5p在A549细胞中的表达水平通过RT-PCR实验，我们发现miR-424-5p在A549细胞中的表达水平较高。

2. miR-424-5p的生物学功能过表达miR-424-5p的A549细胞表现出增殖加快、迁移和侵袭能力增强的现象；而敲除miR-424-5p的A549细胞则表现出相反的趋势。

这表明miR-424-5p在A549细胞的生长和转移过程中发挥重要作用。

3. miR-424-5p的下游靶基因及其作用机制通过生物信息学分析和双荧光素酶报告实验，我们发现在A549细胞中，miR-424-5p主要通过抑制其下游靶基因的表达来发挥其生物学功能。

microRNA-21调控A549细胞抑癌基因PTEN的研究的开
题报告
摘要：
miR-21是一种常见的microRNA，在许多肿瘤中都高表达，并与肿瘤的进展和转移有关。

然而，其作用机制仍不完全清楚。

PTEN是一种抑癌基因，与多种癌症密切相关。

本研究旨在探究miR-21对A549细胞中PTEN的调控作用。

研究内容：
1. 确认miR-21对A549细胞中PTEN的调控作用。

2. 探究miR-21对A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。

3. 单细胞转录组测序分析，进一步探究miR-21对A549细胞中基因表达的影响以及miR-21和PTEN之间的调控关系。

方法：
1. 采用Western blotting和qPCR检测miR-21和PTEN的表达水平，验证miR-21对PTEN的调控作用。

2. 采用CCK-8和Clone formation实验检测A549细胞增殖能力，采用Transwell 实验检测A549细胞侵袭能力，采用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测A549细胞凋亡率。

3. 采用10X Genomics Chromium Single Cell 3’全长转录组分析A549细胞不同个体之间的基因表达和miRNA表达差异及miRNA与基因之间的调控关系。

意义：
1. 揭示了miR-21的作用机制，有助于深入了解肺癌进展和转移的分子机制。

2. 理解miR-21和PTEN的调控关系，可能为肿瘤治疗提供新思路。

3. 单细胞转录组测序分析为进一步了解肿瘤细胞异质性及其发展提供依据。

非小细胞肺癌组织中低表达microRNA表达谱于筱舟;魏枫;闫帆;于文文;任秀宝;李慧【摘要】目的：检测非小细胞肺癌患者手术标本组织中低表达microRNA的表达谱，为进一步阐述肿瘤的发生发展机制和提供诊断或治疗的新策略提供基础，积累以国内患者为数据来源的microRNA资料。

方法：利用芯片技术初步筛选在非小细胞肺癌组织中低表达microRNA，进而利用实时荧光定量PCR验证癌组织和正常肺组织表达水平的差异。

结果：芯片结果发现有20种microRNA在非小细胞肺癌组织中发生明显下调。

实时荧光定量PCR验证发现其中的13种microRNA 表达量显著降低，分别是hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-143、hsa-miR-519a、hsa-miR-223-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-520c-3p、hsa-miR-489、hsa-miR-27a、hsa-miR-373、hsa-miR-125b、hsa-miR-27b、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-206。

结论：在非小细胞肺癌组织中发现一些表达水平显著下调的mciroRNA，这些microRNA可能与肿瘤的发生发展或某些功能相关。

%Objective:To describe the expression profiling of microRNAs of patients with non-small cell lung cancer. Methods:We reduced the scope of downregulated microRNAs in patients with non-small lung cancer by high throughput microarray based on quantitative real-time PCR (qRT-PCR). In this process, the downregulated microRNAs of non-small cell lung cancer tissues can be de-tected and compared with adjacent healthy lung tissues with relatively small samples. Different microRNA expression levels in non-small cell lung cancer and adjacent healthy lung tissues were verified in a large sample by RT-PCR. Results:A total of 20 types of microRNAs were significantly downregulated in non-small cell lung cancertissues compared with adjacent healthy lung tissues. These microRNAs were listed as follows: hsa-miR-1; hsa-miR-22; hsa-miR-27a; hsa-miR-27b; hsa-miR-125a-5p; hsa-miR-125b;hsa-miR-142-5p;hsa-miR-143;hsa-miR-148a;hsa-miR-148b;hsa-miR-370;hsa-miR-373;hsa-miR-381;hsa-miR-489;hsa-miR-519a;hsa-miR-376c;hsa-miR-206;hsa-miR-380-5p;hsa-miR-223-5p;and hsa-miR-520c-3p. Among these microRNAs, 13 types were down-regulated in non-small cell lung cancer tissues as verified by RTPCR. These 13 types of microRNAs were listed as follows:hsa-miR-125a-5p; hsa-miR-143; hsa-miR-519a; hsa-miR-223-5p; hsa-miR-1; hsa-miR-520c-3p; hsa-miR-489; hsa-miR-27a;hsa-miR-373; hsa-miR-125b; hsa-miR-27b; hsa-miR-142-5p; and hsa-miR-206. Conclusion: In non-small lung cancer tissue, several kinds of microRNAs were significantly downregulated. Changes in microRNA expressions were significantly associated with tumori-genesis, progression, or other cancer cell functions in non-small cell lung cancer.【期刊名称】《中国肿瘤临床》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P291-295)【关键词】microRNA;非小细胞肺癌;qRT-PCR【作者】于筱舟;魏枫;闫帆;于文文;任秀宝;李慧【作者单位】天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所免疫研究室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室天津市300060;天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所免疫研究室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室天津市300060;天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所免疫研究室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室天津市300060;天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所免疫研究室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室天津市300060;天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所免疫研究室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室天津市300060;天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所免疫研究室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室天津市300060【正文语种】中文目前世界范围内，肺癌是最常见的恶性肿瘤之一和第一位肿瘤致死原因，预后较差［1］。

RNAi沉默A549肺癌细胞CAR基因表达的研究的开题报告一、选题背景肺癌是一种常见的恶性肿瘤，威胁人类健康和生命。

目前，治疗肺癌的主要方法包括手术、放疗和化疗等。

但是，这些方法的治疗效果受到很多限制，所以需要寻找新的治疗方法。

CAR（Chimeric Antigen Receptor）是一种基因工程技术，可以将CAR引入患者的T细胞中，从而使T细胞具有识别癌细胞的能力。

然而，在CAR基因治疗中，一些患者可能会产生CAR基因沉默，从而影响治疗效果。

RNAi（RNA interference）是一种基因沉默技术，可以通过介导特定的小分子RNA靶向降解基因RNA的方式来抑制目标基因的表达。

因此，我们可以通过RNAi技术来沉默A549肺癌细胞中的CAR基因，以研究CAR基因对肿瘤细胞生长和存活的影响。

二、研究目的本研究旨在通过RNAi技术沉默A549肺癌细胞中的CAR基因，研究CAR基因对肿瘤细胞生长和存活的影响，从而为CAR基因治疗的临床应用提供参考。

三、研究方法1. 实验材料：A549肺癌细胞、质粒载体、RNAi质粒载体、RNAi试剂、荧光标记的抗体等。

2. 质粒构建：将RNAi片段插入质粒载体中，构建RNAi质粒。

3. 转染：将RNAi质粒转染进A549细胞中，使其表达RNAi片段。

4. 蛋白质检测：使用荧光标记的抗体检测CAR蛋白在细胞中的表达情况。

5. 细胞增殖和凋亡分析：通过CCK-8和PI/Annexin V双染法分析RNAi对A549细胞增殖和凋亡的影响。

四、研究意义本研究将探究A549肺癌细胞中CAR基因的作用机制，为CAR基因治疗的临床应用提供实验依据。

同时，本研究也将为RNAi技术在肿瘤治疗中的应用提供参考。

MicroRNA-98对A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响向琼;唐惠芳;殷杰;虞佳;杨晓燕;朱炳阳;雷小勇【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2011(039)003【摘要】目的探讨MicroRNA-98（miR-98）对肺腺癌耐顺铂细胞系A549／DDP顺铂耐药性的影响。

方法利用MicroRNA（miRNA）芯片及生物信息学筛选出miR-98。

将miR-98质粒载体瞬时转染至A549／DDP细胞：M．rr检测细胞药物敏感性的改变。

结果在A549／DDP细胞中miR-98表达水平下调。

转染miR．98的A549／DDP细胞生长抑制率明显增高。

结论miR-98能够增加肺腺癌耐药细胞株A549／DDP对顺铂的药物敏感性。

【总页数】4页(P262-265)【作者】向琼;唐惠芳;殷杰;虞佳;杨晓燕;朱炳阳;雷小勇【作者单位】南华大学药物药理研究所,湖南衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.十全大补汤含药血清对A549和A549／DDP细胞株顺铂耐药性及凋亡的影响[J], 高原;陈奇;于宁;张洪源;敬一夫;关蕊;田子鹤;张城城;李春晖2.miRNA-223对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响 [J], 胡敏;魏晓霞;邹杰;崔发财;庞晓辉3.miRNA-192对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响 [J], 杨育才;刘晶;万里;刘凤珍;王鹤;王朝霞4.MicroRNA-98对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响 [J], 向琼;唐惠芳;殷杰;虞佳;杨晓燕;朱炳阳;雷小勇5.黄芪多糖对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的影响及其机制 [J], 柳叶;陈龙云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

靶向OPN的miRNA对人肺腺癌细胞株A549顺铂敏感性的影响* 目的通过miRNA介导RNAi沉默OPN表达探讨其对人肺腺癌细胞株A549顺铂(DDP)敏感性的影响。

方法利用体外构建的靶向OPN的miRNA表达质粒瞬时转染A549,酶联免疫吸咐法(ELISA)检测转染后48h细胞OPN蛋白表达;转染后24、48、72、96h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测转染细胞和转染联合5μg/mL顺铂作用后细胞的增殖;于转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,MTT 法检测细胞增殖抑制率。

结果(1)转染后48h,OPN蛋白表达水平下调了47.34%(P ＜0.01)。

(2)转染后24h细胞增殖开始受抑制(P＜0.05),48、72、96h细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性差异均有统计学意义(P＜0.01)。

(3)转染联合顺铂作用24 h细胞增殖开始受抑(P＜0.05),48、72、96h细胞增殖明显受抑,细胞增殖活性转染组与未转染组及非特异性转染组差异均有统计学意义(P＜0.01)。

转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/mL时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P＜0.01)。

结论靶向OPN的miRNA抑制人肺腺癌细胞A549增殖,增强细胞对DDP的敏感性。

[Abstract]Objective To explore the drug sensitivity of lung adenocarcinoma cell line A549 to cisplatin(DDP) by miRNA specific for OPN gene. MethodsMicroRNA targeting OPN gene was transfected transiently to A549 cells by the expression plasmids which were constructed in vitro. The level of OPN protein in the A549 cells at 48 h after transfection was measured with ELISA. The cells incubated and non-incubated with 5μg/mL DDP were detected by MTT at 24,48,72 and 96 h after transfection. And the cells were cultured at different concentrations of cisplatin(DDP) for 48h,the growth inhibition rate was evaluated by MTT. Results(1)The OPN protein level was decreased by 47.34% at 48 h after transfection(P＜0.01). (2)The cell proliferation started to be inhibited at 24 h after transfection(P＜0.05),and was significantly inhibited at 48,72 and 96 h after transfection,with a significant difference(P＜0.01). (3)After the treatment with 5μg/mL DDP,the cell proliferation started to be inhibited at 24h after transfection(P＜0.05),and was significantly inhibited at 48,72 and 96h after transfection,with a significant difference in the cell proliferation activity between the transfection group and non-transfection group or non-specific transfection group(P＜0.01). At 2.5,5,10 and 20μg/mL DDP,the cell proliferation was significantly inhibited,with a significant difference in the cell proliferation inhibition rate(P＜0.01). ConclusionMicroRNA targeting OPN gene can effectively inhibite the cell proliferation of lung adenocarcinoma cell line and enhances the cell chemosensitization to DDP.[Key words]Lung adenocarcinoma; OPN; miRNA; Cisplatin肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,我国肺癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势且发病年龄日趋年轻化[1]。

肺腺癌耐药(A549/DDP)与非耐药(A549)细胞株蛋白质差异比较的开题报告背景与意义：肺癌是世界范围内发病率和死亡率较高的恶性肿瘤，其中肺腺癌是最常见的类型之一。

在肺腺癌的化疗治疗过程中，靶向药物耐药问题日益凸显。

因此，深入研究肺腺癌耐药机制，寻找与之相关的分子靶点，对于其临床治疗具有很重要的意义。

本文旨在比较肺腺癌细胞株中耐药(A549/DDP)和非耐药(A549)两种组织的蛋白质差异性，为肺腺癌耐药机制的研究提供基础数据和依据。

研究内容：1.建立肺腺癌细胞株非耐药(A549)和耐药(A549/DDP)两组实验条件。

2.收集两组细胞株的蛋白质样品，包括耐药和非耐药细胞的全细胞蛋白样品以及膜蛋白提取物（例如，膜蛋白样品可以通过磷脂双层离心技术制备）。

3.采用双向电泳技术对两组样品进行分析。

4.通过相关蛋白质质谱技术对样品蛋白质进行定量和鉴定。

5.对两组实验样品中蛋白质的差异进行统计学分析和数据处理，并筛选出与耐药性相关的高表达或低表达的蛋白质。

6.对筛选出的蛋白质进行生物信息学分析，包括功能分类、通路分析和互作蛋白分析等。

预期结果：通过上述的实验，预期可以获得以下结果：1.收集了A549和A549/DDP两组蛋白质样品，并进行了双向电泳分析。

2.定量和鉴定了两组样品中的蛋白质，包括全细胞蛋白样品和膜蛋白提取物。

3.找到了与肺腺癌耐药性相关的高表达或低表达的蛋白质。

4.对筛选出的蛋白质进行了生物信息学分析，并找到了相关的通路和功能分类。

意义与价值：通过本实验的研究，可以深入了解肺腺癌耐药机制，并为肺腺癌的精准治疗提供参考依据，有重要的临床意义。

另一方面，本实验的研究方法和技术，在转化医学和肿瘤生物学研究中都具有借鉴意义。

《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是全球范围内最常见的肺癌类型，对人类健康造成巨大威胁。

miRNAs（微小RNA）作为一类内源性、非编码小RNA，近年来在肺癌的发病机制、诊断和治疗中发挥了重要作用。

其中，miR-342-5p在多种肿瘤中的表达和功能已被广泛研究。

本文旨在探讨miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节机制。

二、研究方法1. 实验材料选用非小细胞肺癌细胞系A549和H460作为研究对象，通过生物信息学分析预测miR-342-5p的靶基因。

实验中使用的试剂和仪器均符合相关标准。

2. 实验方法（1）通过生物信息学分析预测miR-342-5p的潜在靶基因；（2）利用荧光定量PCR技术检测A549和H460细胞中miR-342-5p的表达水平；（3）构建过表达和敲低miR-342-5p的A549和H460细胞模型；（4）通过细胞增殖、迁移和侵袭实验，观察miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响；（5）利用Western blot技术检测相关蛋白的表达水平，探究miR-342-5p的调节机制。

三、实验结果1. miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系中的表达通过荧光定量PCR技术检测发现，miR-342-5p在A549和H460细胞中的表达水平显著高于正常肺组织细胞。

这表明miR-342-5p可能参与非小细胞肺癌的发生和发展。

2. miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响（1）过表达miR-342-5p可促进A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力；（2）敲低miR-342-5p则可抑制这些生物学行为。

这表明miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞的生长和转移过程中发挥重要作用。

3. miR-342-5p的调节机制通过Western blot技术检测发现，过表达miR-342-5p可降低肿瘤抑制基因PTEN的表达，同时提高与肿瘤发生和发展相关的基因如MMPs的表达。