实验 金黄色葡萄球菌的分离和鉴定

一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。

二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。

（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。

（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。

（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。

2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。

（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。

（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。

（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。

四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。

2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。

3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。

4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。

5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。

五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。

实验金黄色葡萄球菌的分离培养一．实验目的；1．掌握Baird-Parker培养基的配制方法2．掌握利用选择性培养基分离金黄色葡萄球菌的检验方法二．实验内容1原理；Baird-Parker培养基在含有氮源的基础上，补充了促进细菌生长的丙酮酸钠，又含有抑制剂：亚碲酸钾，故有较好的选择性。

但对于金葡萄球菌没有抑制，其能将亚碲酸钾还原为碲在菌落中心呈黑色，易于观察；加入卵黄，由于卵磷酯酶阳性特征，其菌落周围可出现明显的沉淀环。

利用选择性培养基进行常见致病菌的分离是致病菌检测中的重要部分。

2 仪器与试剂250ml三角瓶灭菌锅量筒Baird-Parker氏培养基、亚碲酸盐卵黄增菌液、7.5%氯化钠肉汤3操作步骤3.1 培养基配制Baird-Parker琼脂培养板：称取58克干粉，加热溶解于950ml蒸馏水中,分装每瓶95ml，121℃高压灭菌15分钟,冷至50℃左右,于每95 ml加入常温解冻的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 ml，摇匀后倾入无菌平皿。

7.5%氯化钠肉汤（蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠75g蒸馏水1000mlph7.4）将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225 mL，121 ℃高压灭菌15 min。

3.2增菌及分离培养挑取金黄色葡萄球菌接种于7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37℃）恒温箱中培养6-8h.3.将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。

3.3观察菌落形态4、结果判定根据菌落形态，鉴别检样中细菌种类三、实验结果实验金黄色葡萄球菌的染色镜检一．实验目的;掌握细菌革兰氏染色方法；在显微镜下观察金黄色葡萄球菌的形态。

二．实验内容1原理;革兰氏阳性菌经结晶紫染色乙醇脱色后，仍为紫色，而革兰氏阴性菌被复染为其他颜色。

2仪器与试剂；结晶紫染色液（结晶紫1g 95%乙醇20ml 1%草酸铵水溶液80ml将结晶紫完全溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

一、实验目的1. 熟悉金黄色葡萄球菌的基本生物学特性。

2. 掌握金黄色葡萄球菌的分离、纯化及鉴定方法。

3. 了解金黄色葡萄球菌的致病性及防治措施。

二、实验原理金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人类及动物体内。

该菌具有高度的致病性，可引起多种化脓性感染，如肺炎、败血症、心内膜炎等。

实验中，通过观察金黄色葡萄球菌的形态特征、生化反应和药物敏感性，实现对金黄色葡萄球菌的鉴定。

三、实验材料1. 金黄色葡萄球菌菌种：购自某生物技术公司。

2. 实验器材：显微镜、无菌操作台、接种环、接种针、无菌培养皿、营养琼脂、血液琼脂、药敏纸片、生理盐水、75%酒精、碘酒、显微镜油镜等。

3. 实验试剂：青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素等药敏纸片。

四、实验方法1. 金黄色葡萄球菌的分离与纯化（1）接种：将金黄色葡萄球菌菌种接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。

（2）挑取单菌落：用接种环挑取生长良好的单菌落，接种于新的营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。

（3）重复挑取：继续挑取单菌落，直至获得纯化后的金黄色葡萄球菌。

2. 金黄色葡萄球菌的形态特征观察（1）革兰氏染色：将纯化后的金黄色葡萄球菌涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察。

（2）菌落观察：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时，观察菌落形态。

3. 金黄色葡萄球菌的生化反应鉴定（1）糖发酵实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于糖发酵培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生气泡。

（2）氧化酶实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于氧化酶培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生颜色变化。

4. 金黄色葡萄球菌的药物敏感性实验（1）药敏纸片法：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，将药敏纸片贴于平板表面，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。

（2）最低抑菌浓度（MIC）测定：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于微量肉汤稀释法培养基，分别加入不同浓度的药物，37℃恒温培养24小时，观察生长情况，确定最低抑菌浓度。

金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。

本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。

二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。

2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。

3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。

三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。

2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。

临床样本：直接进行涂片或适当稀释。

2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。

3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。

4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。

观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。

5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。

6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。

7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。

五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。

在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。

金黄色葡萄球菌的耐药性研究一、金黄色葡萄球菌的分离及培养称取10g土样，在无菌条件下，放入无菌的三角瓶中，加入90ml的蒸馏水，再加入0.2mg复方磺胺甲恶唑振荡10min，使土样充分混合，利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性，杀死其他细菌。

从三角瓶中取1ml上清液放入一支无菌试管（15*150mm）中按10倍梯度稀释成10-5的土壤稀释液后，分别取200μL涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上，置于37℃培养箱中恒温培养24h。

利用高盐培养基抑制其它细菌的生长，从而分离得到金黄色葡萄球菌。

二、金黄色葡萄球菌的鉴定1.菌落形态：菌落较小，圆形，直径1-2mm，较湿，较透明，边缘整齐，隆起，略带淡绿色。

2.染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阴性菌，显微镜下呈单个或葡萄状排列，无芽孢、荚膜，单个菌体直径为0.5-1μm。

革兰氏染色：1.涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10μL待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂步成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。

2.干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烧枯而变形。

3.固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉得烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。

4.初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约为1min。

5.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

6.媒染：用100-1000μL移液枪吸取300μL碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。

7.水洗：重复步骤5。

8.脱色：斜置载玻片，滴加95％的乙醇脱色，至流出的乙醇不显紫色为止，大约需时20-30s，随即水洗。

实验检测牛奶中是否感染有金黄色葡萄球菌并鉴定实验目的1、认识金黄色葡萄球菌；2、学习运用PCR方法检测金黄色葡萄球菌。

实验原理金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)属于葡萄球菌属（Staphylococcus），无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。

在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。

微生物学方法是鉴定牛奶中病原菌的“金标准”，传统方法是进行细菌分类培养，通过生化试验、血清型、各种酶试验分析细菌的表型特点。

对牛奶中病原微生物培养需要很长时间用生化试验的方法进行种属特异性的鉴定至少需要48h以上传统的鉴定技术时间较长，从国外进口诊断试剂费用相对较高。

因此，本文建立了直接从牛奶中鉴别病原菌的PCR检测技术，这种快速、准确、有效、直接从牛奶中检测致病菌的方法将为检验检疫、食品安全质检系统以及兽医检疫提供技术支撑，从而为乳制品病原菌的检测提供一定的帮助。

建立一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法。

方法是根据已发表的金黄色葡萄球菌16-23SrRNA特异性序列设计并合成一对引物，通过优化反应条件建立从牛奶中直接检测金黄色葡萄球菌的PCR方法。

结果是与细菌的常规分离方法相比，PCR 法敏感性高与其它型葡萄球菌无交叉反应，特异性达100%，检测细菌基因组DNA最低浓度为35ng/L（纳克每升），能在5h内对送检的牛奶样品直接进行金黄色葡萄球菌的测定，可用于乳制品中金黄色葡萄球菌的检测。

所以，建立了一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法。

实验仪器、试剂与材料仪器：冰箱、摇床、显微镜、PCR反应管、PCR仪、微量加样器、高速离心官、水平电泳槽、恒压电泳仪和凝胶自动成像系统、紫外检测仪、电热恒温水浴槽。

品种名称：金黄色葡萄球菌显色培养基品种编号：CRM012英译名称：Chromogenic Staph. aureus Agar金黄色葡萄球菌显色培养基用途：用于金黄色葡萄球菌的分离和初步鉴别。

金黄色葡萄球菌显色培养基使用原理：蛋白胨、大豆胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;显色剂与金黄色葡萄球菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在无色透明平板上，金黄色葡萄球菌产生粉红-紫红的边缘整齐菌落;抑菌剂可抑制杂菌的生长。

操作步骤：1、称取67.4g培养基干粉，加入1L蒸馏水或去离子水(可按比例扩大增或缩小)，搅拌加热煮沸至完全溶解(避免过度加热)，无需高压灭菌，冷至50℃左右倾注平板备用;2、待检样品按照相应的标准(GB、SN、FDA等)进行取样及前增菌，挑取一环增菌液划线接种于制备好的该培养基平板上，于36±1℃培养18～24 h，观察结果，挑取典型可疑菌落进行鉴定试验。

结果判断：菌属菌落特征金黄色葡萄球菌粉红-紫红色菌落其它菌蓝绿色或无色或受抑制金黄色葡萄球菌显色培养基质量控制：外观：流动性良好的淡黄色粉末，制备好的平板呈浅黄色透明固体培养基。

生物学：下列菌株接种后于36±1℃培养24h生长情况如下表：质控菌菌落特征金黄色葡萄球菌ATCC25923 生长良好，粉红-紫红色单核增生李斯特菌ATCC19115 蓝绿色表皮葡萄球菌(CMCC(B)26069 受抑制粪肠球菌ATCC29212 受抑制普通变形杆菌CMCC(B)49027 受抑制规格：67.4克 /瓶，可配置1L的培养基。

贮存：脱水培养基：2～8℃，在标签上注明的保质期内使用。

制备好平板：2～8℃，最多保存一周。

鸡蛋卵清芽孢杆菌的分离和鉴定专业：11生技姓名：张媛梦学号：201111001086摘要：芽孢杆菌，细菌的一科，能形成芽孢（内生孢子）的杆菌或球菌。

它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。

绝大多数是一个菌体仅形成一个芽孢芽孢位于菌体内,由核心、皮层、芽孢壳和外壁组成。

核心是芽孢的原生质体，内含DNA、RNA、可能与DNA相联系的特异芽孢蛋白质以及合成蛋白质和产生能量的系统。

关键字：芽孢杆菌分离纯化革兰氏染色1、实验原理1.1芽孢杆菌的分离：芽孢杆菌无湿状态可耐低温－60℃、耐高温+280℃，耐强酸、耐强碱、抗菌消毒、耐高氧（嗜氧繁殖）、耐低氧（厌氧繁殖）。

所以，在微量的磺胺药物的环境中依然可以繁殖。

芽孢是芽孢杆菌特有的结构，其主要特点是抗性强，对高湍、紫外线、干燥、辐射等有毒化学物质有较强的抵抗力。

1.2芽孢杆菌的革兰氏染色：革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G－）两种类型，这是由于这两种细菌细胞壁结构和组合的差异所决定。

首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。

然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体的滞留能力。

之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。

革兰氏染色细菌细胞壁含糖量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。

而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加原先滞留下来的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂染色后又复变为染色剂颜色。

2、实验材料和设备2.1.培养基牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏0.75g，蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，琼脂3.75g，蒸馏水250ml，PH7.0-7.2 121℃灭菌20min后倒平板。

金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，它是引起人体多种感染的病原菌之一。

金黄色葡萄球菌检验技术是通过分离、培养和鉴定来检测和确定金黄色葡萄球菌的存在与类型。

以下是金黄色葡萄球菌检验技术的介绍及分析。

金黄色葡萄球菌的分离是检验的第一步。

样品通常是从患者的伤口、分泌物或体液中获取的，也可以从环境中收集。

分离可以通过将样品涂抹到适当的察尔染色的琼脂平板上，然后进行培养和鉴定来完成。

金黄色葡萄球菌会在琼脂平板上形成金黄色的菌落。

培养是金黄色葡萄球菌检验的关键步骤。

常用的培养基包括牛肉蛋白胨琼脂、亚洲互联网的Tag：脑心制剂琼脂、亚洲互联网的Tag：镜光菌属琼脂等。

金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌，它可以在各种营养富集培养基中生长，但最好使用富含血液、蛋白质和碳水化合物的培养基。

培养的时间通常为24小时，金黄色葡萄球菌菌落会呈现金黄色且凸起。

鉴定是确认金黄色葡萄球菌的类型的步骤。

鉴定方法包括形态学观察、生化试验和分子生物学方法。

形态学观察是通过显微镜观察菌落和细胞形态来判断。

金黄色葡萄球菌是圆形或椭圆形的，常呈簇状分布。

生化试验可以通过检测金黄色葡萄球菌对特定底物的代谢能力来进行鉴定。

一些常用的测试包括氧化酶试验、半乳糖发酵试验等。

分子生物学方法可以通过检测特定基因或DNA序列来鉴定金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌检验技术的分析主要集中在以下几个方面。

金黄色葡萄球菌的检验可以帮助医生确定感染的病原菌，从而指导合理的治疗方案。

金黄色葡萄球菌是耐药菌中的重要成员，对多种抗生素具有耐药性，因此及早检测和鉴定金黄色葡萄球菌可以避免无效的药物治疗。

金黄色葡萄球菌还可以引起食物中毒和医院相关感染等，检验技术的应用可以有助于减少相关疾病的发生。

实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验一、实验目的要求1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。

2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。

3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。

4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。

二、原理葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。

金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。

可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。

如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。

金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。

这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。

三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶1个制生理盐水3、250ml三角瓶3个制培养基等4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验5、1ml移液管2支6、10ml移液管 2 支7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板8、250ml量筒1支（二）应灭菌的其它器材剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶5.普通营养琼脂100ml/瓶1瓶250ml三角瓶6.B—P培养基95ml/瓶1瓶250ml三角瓶7.兔血液5ml四、实验内容（一）、增菌培养法样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告第一天样品处理和增菌培养（一）、样品处理固体或半固体食品：以无菌操作称取25g样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1～2min，制成1:10样品匀液。

实验题目金黄色葡萄球菌的分离和鉴定一、实验目的金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到;因而,食品受其污染的机会很多;近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌;金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占到45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多;为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害,我们要分离出它们并研究;二、实验原理典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径左右,显微镜下排列成葡萄串状;金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性;金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长,干燥环境下可存活数周;平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1—2mm;血平板菌落周围形成透明的溶血环;金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10—15%NaCl肉汤中生长;可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气;甲基红反应阳性,V—P反应弱阳性;许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶;金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感;对碱性染料敏感,十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长;三、实验材料和设备1.培养基牛肉膏蛋白胨培养基13%NaCl：牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠130g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,121℃灭菌20min后倒平板;肉汤培养基：酵母膏5g,蛋白胨10g,氯化钠10g,蒸馏水1000ml,121℃灭菌20min;甲苯胺兰-DNA平板2.试剂磺胺类药物、革兰氏染液3.仪器和设备显微镜、超净工作台、水浴锅、培养皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培养箱、试管、载玻片、接菌环;四、实验方法金黄色葡萄球菌的分离：1.称取5g土样,在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中,加入50ml蒸馏水,再加入200ul磺胺类药物,振荡10min,使土样充分混匀;利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性,杀死其他细菌;2.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只干净的试管中,30℃,200rpm,24h;3.取培养好的菌液,按梯度稀释法稀释土壤悬液,依次制备成100、1000、10000、100000倍悬液后,分别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上,置于37℃培养箱中培养24h;利用高盐培养基抑制其他细菌的生长,从而分离金黄色葡萄球菌;金黄色葡萄球菌的鉴定：1.菌落形态：菌落较小,较湿,较透明,边缘整齐,隆起;2.染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列、无芽孢、荚膜,直径—1um;3.血浆凝固酶试验：吸取兔血浆与金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性;同时做阴阳性对照;4.耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板,36±1°C培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性;本试验金黄色葡萄球菌为阳性;。

按照现行的国标方法，金黄色葡萄球菌检测方法分为第一法定性检验、第二法平板计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品），以及第三法M P N 计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品）。

第一法定性检验过程包括样品处理、样品增菌、平板分离划线、初步鉴定、确证鉴定这5个步骤，整个流程全部完成至少需要5天时间。

第二法平板计数法包括5个步骤——样品稀释、样品接种涂布、典型菌和可疑菌计数、鉴定试验、结果计算，整个流程全部完成至少需要4天时间。

第三法M P N 计数法同样包括5个步骤，即样品稀释、样品增菌、平板分离划线、鉴定试验、查MPN 表确认结果，整个流程全部完成至少需要5天时间。

以下将对金黄色葡萄球菌的检测流程进行简单介绍，并对难点、注意事项进行梳理和讲解。

1 第一法：金黄色葡萄球菌定性1.1 样品处理固态和半固态样品：称取25g样品至盛有225mL 7.5%氯化钠肉汤中，充分混匀。

液体样品：吸取25m L 样品至盛有225m L 7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀。

1.2 样品增菌将上述样品匀液置于金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析□ 李留洋 锐德检测技术（天津）有限公司重的感染。

该菌对营养的要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧。

容易受金黄色葡萄球菌污染的食品主要为乳制品、蛋及蛋制品、各类熟肉制品，其次是含有乳类的冷冻食品等，因此对于该菌的检验也被确定为食品致病性菌种检验中的重要项目。

图1 样品处理36±1℃的恒温培养箱中培养18~24h 。

1.3 平板分离划线该步骤是整个金黄色葡萄球菌检测环节中最重要的步骤之一，因为平板划线分离的效果决定了可疑菌落的判定和选择。

平板划线选择三分法或四分法则分离效果较好，更容易出现单菌落平板。

1.4 初步鉴定分离的培养基选用B a i r d -Pa r k e r 平板（B P 平板）和血平板。

结果显示，金黄色葡萄球菌在B a i r d -Pa r k e r 平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，菌落直径为2~3m m ，颜色呈灰黑色至黑色、有光泽，常有浅色（非白色）边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带，当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感；有时可见到不分解脂肪的菌株——除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同；从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其颜色常较典型菌落略浅，且外观可能较为粗糙，质地较干燥。

金黄色葡萄球菌实验报告篇一：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 XX 级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。

2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。

3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。

4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。

5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。

6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。

7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。

二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。