葡萄球菌属检验

金黄色葡萄球菌检测方法Revised as of 23 November 2020金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。

采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。

技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。

技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。

此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。

但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。

使目视效果下降，导致计数偏低。

2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。

金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。

在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。

目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。

免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。

实验一葡萄球菌属的检验金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)在食品污染病例中占据十分重要的位置，同时也是医院临床感染导致肺炎及伤口感染的主要病原菌，占医院感染病例的l0％；而抗生素的广泛应用导致了耐药菌株尤其是耐甲氧西林葡萄球菌的大量出现，使其成为与艾滋病、乙型肝炎并列的世界三大感染顽疾。

因此对金葡菌的检测研究一直以来备受重视，其研究方向主要集中在两个方面：耐甲氧西林金葡菌的检测及产致病性毒素金葡菌的检测。

传统的检测方法先做选择性培养，然后做鉴定试验，包括血浆凝固酶试验、免疫学试验、耐热核酸酶活性试验及各种糖、醇发酵试验及新生霉素敏感试验等，其优点是操作简便，所需设备简单，但一般都存在耗时长、灵敏性差等缺点，且Baird-Parker选择性培养时无法识别受热处理而损伤的菌体；凝固酶试验及耐热核酸酶试验与传统的经典方法有很好的对应性，但一些凝固酶及耐热核酸酶阴性菌同样可以产生致病性毒素，或其他少数葡萄球菌也可以产生耐热核酸酶或相似酶而导致假阳性，一定程度上限制了酶活性检测的应用；成品凝集检测试剂盒虽有很好的特异性，但在实际样品的检测时灵敏性差异明显，且成本较高。

随着分子生物学技术的广泛应用，对金葡菌的检测也从传统方法过渡到以PCR及杂交探针、基因芯片为主的现代技术手段，从基因水平更准确、灵敏地检测病原菌的存在。

表4-1-1 三种葡萄球菌的主要性状和生化反应表4-1-2 葡萄球菌属常用试验的用途【实验目的】1. 熟悉葡萄球菌的形态、染色及培养特征。

2. 掌握葡萄球菌血浆凝固酶试验的原理、方法和临床意义。

3. 了解葡萄球菌肠毒素的测定。

【实验器材和材料】1. 菌种金黄色葡萄球菌A TCC25923、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌液体培养物（接种用、新生霉素试验用、肠毒素试验用）、沸水浴加热灭活的三种菌液1滴/组（耐热核酸酶试验用）2. 培养基普通琼脂平板、血琼脂平板、甘露醇发酵管甲苯胺蓝核酸琼脂、10g/L盐水琼脂、液体培养基（肠毒素试验用）3. 试剂新鲜兔血浆或人血浆、3%H2O2、致敏胶乳试剂、新生霉素纸片、生理盐水、载玻片、小试管、革兰染色液、肠毒素血清、标准抗毒素血清4. 接种环、打孔器、尺子5. 沸水浴6. 投影仪【方法和步骤】1. 划线接种：用接种环将三种葡萄球菌分别划线接种普通平板和血琼脂平板。

1．概述葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。

金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。

2. 标本类型血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。

3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。

3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的?溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。

在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。

表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。

3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。

3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。

金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。

3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。

链球菌属葡触酶试验阳性，试验为发酵型，O/F葡萄球菌属与链球菌属的鉴别3.4.3萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。

3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。

表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验半乳糖海藻凝固硝酸溶血菌名触酶苷酶糖酶盐金黄色葡萄球菌金黄色亚-+++++种金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+---施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND中间葡萄球菌++d+++海豚葡萄球菌++++-NDS.lutrae++++++猪葡萄球菌d+-++-注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。

3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。

金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。

采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。

技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。

技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。

此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。

但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。

使目视效果下降，导致计数偏低。

2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。

金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。

在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。

目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。

免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。

葡萄球菌属鉴定一、目的对某一细菌的鉴定水平，可提供以下几方面的价值：（1）决定治病方法；（2）作流行病学研究；（3）了解细菌与感染的关系；（4）进行学术交流。

二、原理根据葡萄球菌的形态染色、培养特性、生化反应、抗原构造等将葡萄球菌由属鉴定到具体种类。

三、标本不同病种及不同检查目的而定，可为脓汁、渗透液、咽拭子、血、脑脊液、食物、呕吐物、粪便等，置于无菌瓶内送检。

四、试剂及器材革兰氏染液、培养皿、培养瓶、生化鉴定管、血浆、玻片、接种针（环）、酒精灯等。

五、鉴定程序标本涂片、染色痰、脓汁、血、脑脊液粪便、呕吐物平皿可凝菌落纯培养涂片、染色、触酶实验葡萄状（G+）、触酶（+）血浆凝固酶、葡萄糖甘露醇分解、高盐耐受实验甘露醇分解（需O2、甘露醇分解（—）厌O2均+）血浆凝固酶（+）、新生霉素（+）血浆凝固酶（—）新生霉素S R表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌六、质量控制每周进行一次葡萄球菌标准菌株的革兰氏染色、触酶、血浆凝固酶及新生霉素实验。

七、实验室解释及临床意义1、葡萄球菌广泛存在于自然界，医院内葡萄球菌的存在成为院内交叉感染的重要因素。

2、葡萄球菌是化脓性感染的重要病原菌。

3、葡萄球菌引起尿路感染的比例很大。

八、安全防护措施在操作过程中，要穿好工作衣，戴好口罩、手套，必要时戴眼罩，严格按操作规程，结束后，用次氯酸溶液（0.2%）擦拭实验台、显微镜手柄、载物台，浸泡手，然后紫外线消毒30分钟。

九、标本处理废弃标本，培养基等统一由专门人员高压消毒处理。

十、参考文献诊断细菌学，李仲兴等主编、第一版、香港、黄河文化出版社，1992。

葡萄球菌属检验方法及临床意义摘要】目的：探讨葡萄球菌属检验方法及临床意义。

方法：选取2014年2月至2016年1月期间，我所检查的葡萄球菌属感染患者31例，对其检验方法及临床意义进行回顾性的分析。

结果：经过实验室检验后，所有患者的样本中均存在葡萄球菌属，葡萄球菌属的实验室检验对病因的确定具有较高的指导意义。

结论：同人类疾病相关的葡萄球菌属主要有表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及头状葡萄球菌，其会导致化脓性感染及病毒性休克等。

【关键词】葡萄球菌属；检验方法；临床意义【中图分类号】R378.1 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）08-0088-02葡萄球菌属细菌为一类革兰氏阳性球菌，因其常堆集排列呈葡萄串状而取名葡萄球菌属[1]。

葡萄球菌自然界与人体中广泛的存在，其大多数是非致病菌，少数于人与动物皮肤黏膜内存在的菌株会致使多种化脓性的感染，例如菌血症、痈、疖、脓肿等，其还可导致烫伤样的皮肤综合征与毒性的休克综合征等[2]。

葡萄球菌为较为常见的化脓性球菌，同时也是医源性感染中较为常见的细菌。

1.资料与方法1.1 一般资料选取2014年2月至2016年1月期间，我所检查的葡萄球菌属感染患者31例，其中男性患者16例，女性患者15例，患者年龄15至75岁，平均（43.9±15.1）岁。

31例患者中皮肤软组织感染11例，内脏器官感染10例，全身感染8例，尿路感染2例。

1.2 标本采集根据患者发生感染的疾病的不同，可采集其伤口分泌物、脓汁、渗出液、血液、痰液、粪便及脑脊液等[3]。

因葡萄球菌广泛的分布在人体皮肤及黏膜上，因此在采集时需注意避免患者病灶周围的正常菌群的污染。

2.检验2.1 标本的直接检查取患者的痰、渗出物、脓汁及脑脊液在进行离心后取其沉渣进行涂片，经过革兰染色后进行镜检，若在检查后发现革兰阳性菌，即可初步报告为疑为葡萄球菌[4]。

因在正常情况下，关节穿刺液、脑脊液等为无菌的，当检查时发现细菌则具有重要的价值，其他的体液标本中在检查时发现炎性细胞同样具有参考价值。

市第一人民医院细菌室葡萄球菌属的常规鉴定1.取平板上的菌落直接涂片、革兰染色并镜检，葡萄球菌为革兰阳性球菌，呈单个、成双或葡萄状排列，菌体呈圆形。

2.在琼脂平板上，成圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润的不透明菌落，可产生脂溶性色素，在血平板上多数葡萄球菌表现为β溶血。

3.触酶试验（3%过氧化氢试验）阳性，发酵葡萄糖产酸试验阳性。

4.血浆凝固酶试验（用混合的人血浆）。

取1﹕4稀释枸橼酸钠抗凝血浆0.5ml，加入3～5个菌落，置35℃培养箱4～6小时，观察血浆有无凝固发生。

5.耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌为MRSA，耐苯唑西林的凝固酶阴性葡萄球菌为MRSCN。

临床意义：葡萄球菌是人类化脓性感染中最重要的病原菌，能引起多组织、多系统的化脓性感染，另外还可引起脑膜炎、败血症等。

简述葡萄球菌属的鉴定要点。

葡萄球菌属是常见的细菌属，包括了许多病原菌。

对于葡萄球菌的鉴定，以下是一些要点：
1. 形态特征：葡萄球菌为革兰氏阳性球形细菌，通常呈成群聚集的形式，形成类似于葡萄串的结构。

2. 培养特性：葡萄球菌可以在常见的培养基上生长，通常需要高氧环境。

培养基上通常呈亮黄色或白色菌落。

3. 生化特性：葡萄球菌可以发酵葡萄糖，不发酵乳糖和蔗糖。

此外，一些生化反应也可以用于鉴定葡萄球菌。

4. 分子特征：现代分子生物学技术可以通过PCR、16S rRNA等方法对葡萄球菌进行鉴定，具有高度的准确性和灵敏度。

综上所述，对于葡萄球菌的鉴定，需要结合以上几个方面进行综合分析。

特别是在临床上，正确鉴定葡萄球菌的种类和特性对于治疗和预防感染非常重要。

- 1 -。

葡萄球菌属的检验程序通常包括以下步骤：
样品处理：将采集的样品用生理盐水或75%酒精进行表面消毒，然后使用无菌棉拭子擦拭样品表面，将拭子放入无菌试管中，做好标记，送往实验室进行培养。

细菌接种：将拭子接种于营养丰富的培养基中，如肉汤培养基或平板培养基。

接种时需要注意无菌操作，避免污染。

细菌培养：将接种好的培养基放入恒温器中进行培养，通常在37℃下培养24-48小时。

培养期间需要观察细菌的生长情况，记录细菌的生长情况。

细菌鉴定：根据细菌的生长情况、形态、染色等特点，对细菌进行初步鉴定。

可以采用生化反应、血清学试验等方法对细菌进行进一步鉴定。

药敏试验：对鉴定的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各种抗生素的敏感性。

药敏试验是制定合理用药方案的重要依据。

报告结果：将细菌鉴定和药敏试验结果报告给医生，以便医生根据结果制定相应的治疗方案。

需要注意的是，葡萄球菌属的检验程序需要严格的无菌操作，以避免污染。

同时，不同实验室可能采用不同的方法和试剂进行细菌鉴定和药敏试验，因此结果可能会有一定的差异。