金黄色葡萄球菌检测方法

一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。

二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。

（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。

（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。

（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。

2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。

（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。

（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。

（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。

四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。

2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。

3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。

4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。

5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。

五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌的测定1 卫生学意义金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。

2 检验方法2.1 术语与定义金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。

显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。

是常见的引起食物中毒的致病菌。

常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。

2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。

（2）冰箱：2℃～5℃。

（3）恒温水浴箱：37℃～65℃。

（4）天平：感量0.1g。

（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

（6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。

（7）无菌培养皿：直径90mm。

（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。

2.3 培养基和试剂（1）7.5%氯化钠肉汤1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4；2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。

（2）B－P琼脂平板1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.22）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。

3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。

分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。

临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL摇匀后倾注平板。

培养基应是致密不透明的。

使用前在冰箱储存不得超过48h。

金黄色葡萄球菌肺炎的检查金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，可以引起多种感染，其中包括金黄色葡萄球菌肺炎。

金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的肺部感染，会给患者的健康带来危害。

在临床上，及早诊断金黄色葡萄球菌肺炎至关重要，而检查是确诊这种感染的关键步骤之一。

临床症状金黄色葡萄球菌肺炎的临床表现多样，患者可能出现以下症状：•发热•咳嗽•咳痰•胸痛•呼吸困难•胸部 X 光检查有异常表现如果患者出现以上症状，尤其是在有金黄色葡萄球菌感染风险的情况下，应及时进行检查以明确诊断。

检查方法1. 血液标本检查通过抽取患者的血液标本进行实验室检查，可以检测出金黄色葡萄球菌的存在。

一般情况下，金黄色葡萄球菌会在血液中产生感染相关的标志物，比如 C 反应蛋白和白细胞计数增高等。

2. 咳痰标本检查金黄色葡萄球菌肺炎患者常常伴有咳嗽和咳痰，通过检测患者的咳痰标本，可以确定是否存在金黄色葡萄球菌的感染。

实验室会对咳痰标本进行培养和鉴定，以确定感染的病原体。

3. 气管镜检查在严重病例下，可以通过气管镜检查，直接观察患者的肺部情况。

医生会通过气管镜进入气管和肺部，对肺部病变进行观察和取样，以确诊金黄色葡萄球菌肺炎。

4. 胸部 X 光检查胸部 X 光检查是金黄色葡萄球菌肺炎的重要诊断手段之一。

通过 X 光片可以观察肺部是否存在感染病变，比如肺实变、肺不张等。

结合临床表现和其他检查结果，有助于确诊金黄色葡萄球菌肺炎。

结语金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的感染疾病，及早诊断和治疗对患者的健康至关重要。

通过上述检查方法，可以帮助医生明确金黄色葡萄球菌肺炎的诊断，从而制定有效的治疗方案。

建议患者在出现肺部感染症状时及时就医，并根据医生建议进行相应检查，以获得及时有效的治疗。

金黄葡萄球菌检测方法金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种广泛存在于自然环境中的细菌。

它可以引起多种感染，包括皮肤感染、伤口感染、食物中毒等。

因此，对金黄色葡萄球菌的检测方法非常重要，可以帮助我们预防和控制感染的传播。

金黄色葡萄球菌的检测方法有多种，其中包括传统的培养方法和分子生物学方法。

下面将介绍一些常用的金黄色葡萄球菌检测方法。

1. 传统培养方法传统的培养方法包括使用营养琼脂平板、Baird-Parker平板等。

首先，需要从样品中采集细菌样本，例如食物、空气、表面等。

然后，将细菌样本涂布在培养基上，利用大肠杆菌选择性培养基限制非金黄色葡萄球菌的生长。

接下来，在适当的培养条件下，金黄色葡萄球菌会在培养基上形成典型的黄色菌落。

最后，可以通过形态学特征、生化试验（如氧化酶试验、凝胶酶试验等）或其他方法来确认是否为金黄色葡萄球菌。

2. DNA检测方法分子生物学方法主要利用特异性DNA序列来检测金黄色葡萄球菌。

这种方法通常包括PCR、实时荧光PCR、等温扩增等。

首先，需要从样品中提取细菌的DNA。

然后，利用特定的引物和荧光探针（如果使用实时PCR）扩增金黄色葡萄球菌特异性DNA序列。

最后，可以通过检测是否产生了特定的扩增产物或荧光信号来确认是否存在金黄色葡萄球菌。

3. 免疫检测方法免疫检测方法基于金黄色葡萄球菌表面的特定抗原与抗体的反应。

这些抗原通常包括蛋白质A、蛋白质H等。

免疫检测方法可以采用多种形式，例如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫层析试验等。

通过将样品与特异性抗体反应，可以检测金黄色葡萄球菌的存在并产生特定的信号。

此外，金黄色葡萄球菌的检测方法还可以结合使用多种方法，以增加检测结果的准确性和可靠性。

例如，可以同时使用培养方法和PCR方法，以便同时检测菌落和特定的DNA序列。

需要注意的是，金黄色葡萄球菌的检测方法应根据不同的场景和需求选择合适的方法。

例如，在食品安全监测中，可以使用培养方法来定性检测金黄色葡萄球菌的存在与否；而在临床诊断中，可采用分子生物学方法来检测金黄色葡萄球菌的DNA，从而快速、准确地确定感染的类型和治疗方案。

方法验证报告公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013(5)胰酪胨（或胰蛋白胨17g 植物蛋白胨（或大豆蛋白胨） 3g 氯化钠 100g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖 2.5g蒸馏水1000m L制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH 为7.2~7.3，分装，121C 、20min高压灭菌。

2.1.2氯化钠肉汤(75g/L)成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 氯化钠 75g 蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，调pH 为7.4,分装，121°C 、20min 高压灭菌。

2.1.3BairdParker 平板成胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 酵母浸膏1g 丙酮酸钠 10g甘氨酸 12g1. 目的验证平皿鉴定法测定公共用品用具微生物中的金黄色葡萄球菌，来判断在本实验室此方法的适用性。

2.培养基和试剂2.1培养基和试剂2.1.1胰酪胨大豆肉汤成分：氯化锂（LiCl.6H2O）琼脂5g 20g蒸馏水950mL增菌剂的配制：卵黄盐水（30%,体积分数）50mL与除菌过滤的亚碲酸钾溶液（质量浓度=1%）10mL混合，保存于冰箱内。

制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25°C校正pH至7.0±0.2。

分每瓶95mL,121C高压灭菌15min,临用时加热熔化琼脂，每95mL加入预热至50C的卵黄亚碲酸钾增菌5mL,摇匀后倾注平板。

培养基应是致密不透明的。

使用前在冰箱储存，不得超过48h。

2.1.4血琼脂培养基成分：营养琼脂100mL脱纤维羊血（或兔血）10mL制法：将营养琼脂加热溶化,待冷至50C左右以无菌方法加人脱纤维羊血摇匀，制成平板，置冰箱内备用。

2.1.5革兰氏染色液2.1.5.1结晶紫染色液成分：结晶紫1g乙醇（95%,体积分数）20mL草酸铵水溶液（质量浓度=1%）80mL制法：将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合2.1.5.2革兰氏碘液成分：碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL制法：将碘与碘化钾先进行混合，加人蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。

食品金黄色葡萄球菌的检验方法
1，仪器和设备
1．1恒温培养箱：36±1℃
1．2恒温水浴箱：45±1℃
1．3高压灭菌锅
1．4均质器
1．5试管:18×150mm 18×180mm
1．6锥形瓶:500ml 250ml
1．7平皿：直径为90mm
1．8灭菌吸管
1．9灭菌均质杯
1．10酒精棉
1．11天平:感量0.1g
1．12冰箱：0-4℃和-15～-20℃
2．培养基的制备
2.1生理盐水
称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和18×150mm试管内，每管吸9ml,121℃高压灭菌15min。

2.2胰蛋白胨大豆肉汤
称大豆肉汤30g和氯化钠95g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18×180mm试管内，每管吸10ml,121℃高压灭菌15min。

2.3Baird-parker培养基
称6.3g溶于95ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装锥形瓶内，121℃高压灭菌15min。

冷却至50℃，加入1瓶亚碲酸钾卵黄增菌液（冻干粉加5ml无菌生理盐水溶解）混匀。

倾注平板备用，待平板凝固后放入冰箱0-4℃。

2.4普通肉汤培养基
称18g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18×180mm试管，每管吸10ml，121℃高压灭菌15min。

2.5冻干血浆（凝固酶试验）。