实验三动物组织DNA的提取

一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。

2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。

3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。

二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。

实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。

- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。

获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。

由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。

上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。

将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。

琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。

DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。

DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。

2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。

3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。

4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。

动物组织核酸的提取实验报告
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。

核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95%乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10%NaCl溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。

先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。

核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。

有机碱和戊糖。

此三类化合物可用下列方法鉴定之。

1、磷酸:能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。

还原成兰色的钼兰。

常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C等。

H3PO4＋12H2Mo04→H3PO4·12Mo03+12H20H3P04·12Mo03
H3P04·6Mo03·3Mo205
2、嘌呤碱:能与苦味酸作用形成针状结晶
3、戊糖:
(⑴)核糖:经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛，后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。

(2)脱氧核糖:在强酸中加热，可生成o一羟基y一酮基戊醛，后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。

动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。

通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。

[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。

5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。

龙志敏 200930220121 09制药一班实验三动物组织基因组DNA提取一、实验目的掌握动物组织基因组DNA提取的原理和方法二、实验原理真核生物DNA以染色体形式存在于细胞核内，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。

提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸）存在下保持很高的活性。

在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离；EDTA则抑制细胞中DNase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。

三、仪器、试剂和材料1、仪器设备恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸嘴2、试剂（1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM Tris-HCl (pH8.0)，25mM EDTA (pH 8.0)（2）2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS（3）蛋白酶K：双蒸水配制10mg/mL，-20℃保存（4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存（5）平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1）（6）3 M NaAc、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水3、材料新鲜动物（鸡）肝脏组织四、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物肝脏组织块0.1g，用冷生理盐水洗3次，置于培养皿中剪碎（动作要快）。

将碎肝脏组织转入玻璃匀浆器中，加入1mL的匀浆液，匀浆至不见组织块（低温操作）；2、将匀浆液倒入1.5mL 离心管中（转前先静置一会，防止未碎的组织进入离心管），5000rpm离心2min；3、弃上清，沉淀加0.25 mL无菌水，用微量移液器吸嘴吹散悬浮沉淀，再加0.25 mL 2×细胞裂解缓冲液，盖上离心管盖子，颠倒混匀；4、将离心管插入泡沫浮板中，置于55℃恒温水浴锅中水浴2-3h，可间歇性颠倒混匀离心管数次；5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀，冰上静置10min，12000 rpm离心10min；6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另一新1.5mL 离心管中（注意不可吸取两相间的蛋白质）；7、估算上清体积，加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢颠倒混匀，12000 rpm离心10min；8、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相入另一新1.5 mL离心管中，并加1/10体积的3 M NaAc 和两倍体积的无水乙醇，盖上离心管盖子，缓慢颠倒混匀，冰浴30 min后10000 rpm离心5min；9、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将管口的残余液滴除掉；10、用1mL 预冷的70%乙醇洗涤沉淀物，10000 rpm离心1min；11、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上吸去管口的液滴，短暂离心，用吸嘴将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥；12、加100μLTE缓冲液重新溶解沉淀物，然后置于4℃或-20℃保存备用。

基因组DNA的提取一、从哺乳动物组织提取基因组DNA实验材料：液氮、消化缓冲液、PBS（冰冷）、25:24:1酚/氯仿/异戊醇、7.5M乙酸铵、无水乙醇及70%乙醇、0.1%SDS、RNA酶、TE缓冲液（pH8.0）、离心管、研钵、冷冻离心机。

实验步骤：1.取新鲜或冰冻动物组织块，剪成小块。

置于液氮中冻结。

2.将500mg的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用小锤子将其捣为细粉末，每100mg组织用1.2 mL消化缓冲液悬浮。

3.将6ml样品在盖紧的离心管中于50℃摇荡下温育12～18 h。

4.用6ml酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700g离心10 min。

如果样品溶解得不好，再加6ml不含蛋白酶K的消化缓冲液，并重复离心。

如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层(水溶液)转移至一个新管中。

5.加入6ml 7.5M乙酸铵和24ml 100%乙醇，1700g离心2 min。

6.用70%乙醇洗涤，晾干，沉淀用TE缓冲液重新溶解，使终浓度在约1mg/mL左右。

7.加入0.1%的SDS和1pg/mL无DNA酶的RNA酶，37℃温育1h,以除去残留的RNA.重复步骤 4～5。

二、从植物组织提取基因组DNA实验材料：液氮/干冰、2-巯基乙醇(2-ME)、 CTAB抽提液、CTAB/NaCl溶液、24:1(v/v)氯仿/异戊醇、CTAB沉淀液、高盐TE缓冲液、80%乙醇、TE缓冲液、抗有机溶剂的试管和烧杯、研钵和研杵、粉碎器/匀浆器、捣碎机、恒温金属浴、冷冻离心机。

实验步骤：1.取1g的鲜叶组织，在3.2ml CTAB抽提液中加入0.8ml 2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。

将此溶液及1ml CTAB/NaCl溶液加热至65℃。

2.用液氮(-196℃)或干冰(一78℃)冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉，然后将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。

3.往粉碎的组织中加入预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润，65℃温育10～60min,不时混匀：4.用4ml的24:1氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合，于4℃, 7500g离心5 min(对于小样品，在离心机上以10000 r/min离心),回收上(水)相。

动物dna的提取实验报告动物DNA的提取实验报告一、引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内负责遗传信息传递的重要分子。

通过提取动物体内的DNA，我们可以更深入地了解动物的遗传特征和进化历程。

本实验旨在探究动物DNA的提取方法，并观察提取到的DNA的形态和纯度。

二、实验材料与方法1. 实验材料：- 实验动物：我们选择了小鼠（Mus musculus）作为实验对象。

- 实验器材：离心管、显微镜、酒精灯、显微镜玻片等。

- 实验试剂：细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、乙酸酒精、异丙醇、盐酸、乙醇等。

2. 实验步骤：a) 准备工作：将实验器材消毒并摆放整齐，准备所需试剂。

b) 细胞裂解：将小鼠组织样本切碎并转移到离心管中，加入适量的细胞裂解缓冲液，并加入蛋白酶K，进行细胞裂解。

c) 蛋白质去除：加入盐酸和异丙醇，使蛋白质凝固并沉淀，离心后将上清液倒掉。

d) DNA沉淀：加入乙酸酒精，使DNA沉淀出来，用离心机离心后将上清液倒掉。

e) 洗涤与纯化：加入乙醇洗涤沉淀的DNA，用离心机离心后将上清液倒掉，重复此步骤两次。

f) DNA溶解：加入适量的去离子水，使DNA溶解。

三、实验结果与讨论通过以上步骤，我们成功地提取到小鼠的DNA，并进行了初步观察和分析。

1. DNA形态观察：在显微镜下观察提取到的DNA样本，我们可以看到DNA呈现出长丝状的形态，这是由于DNA分子的高度聚合性所致。

此外，我们还观察到DNA的颜色呈现出乳白色，与DNA的理化性质相符。

2. DNA纯度分析：为了进一步评估提取到的DNA的纯度，我们使用了比色法和吸光度测定法进行分析。

结果显示，提取到的DNA的吸光度比值（A260/A280）为1.8，接近1.8-2.0的理想范围，表明提取到的DNA相对纯净。

3. 实验优化与改进：在实验过程中，我们发现了一些问题和改进的空间。

首先，细胞裂解的时间和温度对DNA的提取效果有一定影响，可以进一步优化条件以提高DNA的提取率。

实验1、从动物组织中提取基因组DNA（一）实验目的通过实验掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和基本方法。

(二) 实验原理在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K笑话细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动物基因组DNA，用此法得到的DNA长度为100-150kb，适用于噬菌体构建基因组文库和DNA 印迹分析。

（三）试剂、材料、仪器与器材1. 试剂与材料1)Tris–HCL 1mol/L PH8.0 50ml配制方法：40ml双蒸水，6.057g固体Tris放入烧杯中溶解，用浓盐酸调PH值到8.0，转移到50ml 容量瓶中，加入双蒸水定容，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。

2)生理盐水: 0.85%NaCL 100ml配制方法：在20ml双蒸水中溶解0.85g固体NaCL，加水定容至100ml，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。

3)EDTA 0.5mol/L PH8.0 50ml配制方法：将9.08g的EDTA·Na2·2H2O溶解于40ml双蒸水，用1g的NaOH颗粒（慢慢逐步加入）调PH值到8.0，用50ml容量瓶定容，如果EDTA难溶，先加NaOH溶解，然后逐步加EDTA·Na2·2H2O。

4)TES缓冲液（释放DNA） 100ml配制方法：将0.5844g的5 mol/lNaCl溶解于80ml双蒸水，在分别加入1ml的0.5 mol/l EDTA、0.2ml的Tris-HCl (pH=8.0)，加定容至100ml, 摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。

5)10% SDS（变性剂破细胞壁）100ml配制方法：将10g的十二烷基硫酸钠（SDS）溶解于80ml双蒸水于68℃加热溶解，用浓HCl调至PH=7.2，定容至100ml，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，4℃保存备用。

实验报告DNA提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从给定的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 样品，为后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等提供可靠的材料。

二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等物质结合形成染色质。

在提取过程中，需要通过细胞裂解、去除蛋白质和其他杂质等步骤来分离DNA。

细胞裂解可以使用物理方法（如研磨、超声破碎）或化学方法（如使用裂解液）。

去除蛋白质常用的方法有蛋白酶 K 消化和酚/氯仿抽提。

DNA 在一定浓度的盐溶液中可溶解，而在乙醇中会沉淀，利用这一特性可对其进行纯化。

三、实验材料与试剂（一）实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物叶片。

（二）实验试剂1、细胞裂解液：包含 TrisHCl、EDTA、SDS 等成分，用于破坏细胞膜和核膜，释放 DNA。

2、蛋白酶 K：能分解与 DNA 结合的蛋白质。

3、酚/氯仿/异戊醇混合液：用于去除蛋白质。

4、无水乙醇、70%乙醇：用于沉淀和洗涤 DNA。

5、 NaCl 溶液：提供适当的离子强度。

6、 TE 缓冲液（TrisEDTA 缓冲液）：用于保存 DNA。

（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、涡旋振荡器5、冰箱6、紫外分光光度计四、实验步骤（一）样本处理1、动物组织：将新鲜的动物组织剪碎，放入匀浆器中，加入适量的裂解液，匀浆至组织完全破碎。

2、植物叶片：取适量新鲜叶片，液氮研磨成粉末，加入裂解液。

（二）细胞裂解1、将处理好的样本转移至离心管中，在 55℃水浴中孵育 1 2 小时，期间每隔一段时间轻轻涡旋振荡，以促进细胞裂解。

（三）去除蛋白质1、加入蛋白酶 K，使其终浓度达到一定值，在 55℃继续孵育 1 2小时。

2、冷却至室温后，加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液，充分混匀，然后在离心机中以一定的转速离心一定时间。

3、吸取上清液至新的离心管中，重复酚/氯仿抽提步骤 1 2 次，直至中间层无白色蛋白质沉淀。

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。

本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。

二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。

样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。

2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。

3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。

4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。

5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。

6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。

7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。

8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。

三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。

下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。

通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。

- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。

理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。

2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。

如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。

- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。

第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。

2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。

3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。

二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。

提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。

2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。

3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。

4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。

- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。

- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。

- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。

2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。

- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。

- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。

3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。

- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。

- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。

- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。

4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。

- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。