动物组织中总DNA的提取

动物肝脏中DNA得提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid得缩写),又称去氧核糖核酸,就是脱氧核糖核酸染色体得主要化学成分,同时也就是组成基因得材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因就是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA得一部分复制传递到子代中,从而完成性状得传播。

DNA就是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高得粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来得水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间得氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 得解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常得体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中得拟核内。

染色体上得染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其她蛋白质进行交互作用,进而调节基因得转录。

脱氧核糖核酸得结构DNA得结构: DNA得结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构与四级结构四个水平。

DNA就是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。

通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。

[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。

5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。

动物dna的提取实验报告
动物DNA的提取实验报告
实验目的：
本实验旨在通过提取动物组织中的DNA，探究动物个体的遗传信息，并为后续的分子生物学研究打下基础。

实验材料与方法：
1. 实验材料：动物组织样本（如鸡肉、鱼肉等）、细胞裂解液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、异丙醇、乙醇、盐酸、磷酸盐缓冲液等。

2. 实验步骤：
（1）取动物组织样本，将其放入离心管中；
（2）加入细胞裂解液和蛋白酶K，使细胞膜破裂，使DNA释放；
（3）加入异丙醇，使DNA与蛋白质分离；
（4）加入氯仿，使DNA与异丙醇分离；
（5）加入乙醇，沉淀出DNA；
（6）用盐酸和乙醇洗涤DNA，最后用磷酸盐缓冲液溶解DNA。

实验结果：
通过上述步骤，成功从动物组织样本中提取出了DNA。

在紫外光下，DNA呈现出明显的条带状，证明提取的DNA质量较高。

实验结论：
本实验成功提取了动物组织中的DNA，为后续的分子生物学研究提供了可靠的基础。

通过对提取的DNA进行进一步分析，可以了解动物个体的遗传信息，为动物遗传育种、种群遗传结构等研究提供重要的数据支持。

同时，提取DNA的
方法简单、快速、高效，具有较高的实用价值。

在未来的研究中，我们将进一步利用提取的DNA，开展相关的分子生物学实验，探究动物遗传信息的更多奥秘，为生物多样性保护和遗传资源利用提供更多的
科学依据。

动物肝脏中DNA的提取和鉴定一、实验目的1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。

2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。

3.学习核酸染色的方法。

二、实验原理为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。

由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。

动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。

微生物中，谷氨酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。

从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。

对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。

从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。

细菌DNA相对分子质量较大，一般达2×109Da。

因此易被机械张力剪短。

细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等。

1.DNA的基本功能生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板，是生命遗传繁殖的物质基础，也是个体生命活动的基础；作为DNA分子中的某一区段，有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。

2.核酸的结构与功能核酸（nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。

天然存在的核酸有两类，一类为脱氧核苷酸（deoxyribonucleic acid,DNA)，另一类为核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)。

DNA存在于细胞核和线粒体中，携带遗传信息。

RNA存在于细胞质和细胞核内，参与细胞内DNA遗传信息的表达。

3.DNA的存在形式天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在于细胞核中。

要从细胞核中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖、RNA及无机离子等，从中分离DNA。

DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。

DNP在低浓度盐溶液中几乎不溶解，如在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中溶解度很大，比纯水高2倍。

1. 组织样品和培养细胞的裂解（1）组织样品① 将lg新鲜切取的组织在液氮中速冻，并用液氮预冷的研钵研磨。

② 液氮挥发，将组织粉末一点一点地加入盛有10倍体积裂解液的烧杯中，使其分散于裂解液表面，后振摇烧杯使粉末浸没。

③ 将悬液转移至50ml三角瓶中，并于37℃温育1h，立即进行步骤1.2.。

（2）培养细胞①单层培养细胞i.从孵箱中取出长满单层细胞的培养皿，迅速吸去培养液，用冰冷的TBS洗2次，加入1ml新鲜的冰冷的TBS。

ii. 用橡胶刮棒将细胞刮入1ml TBS中，用吸管将细胞悬液转移到冰上的离心管中。

用0.5 ml冰冷的TBS冲洗培养皿，后并入离心管的细胞悬液。

iii.于4℃3000r/min离心10min以收集细胞。

iv. 将细胞重悬于5倍~10倍体积的冰冷TBS中并再度离心。

v. 用1 ml TE（PH8.0）重新悬浮细胞，转移至50 ml三角瓶中。

vi. 每毫升细胞悬液加10 ml裂解缓冲液，于37℃温育1h，立即进行步骤1.2.。

②悬浮培养的细胞i.将细胞转移至离心管，于4℃3000r/min离心10min以收集细胞，吸去上清。

ii.用1倍体积冰冷的TBS重悬细胞并再度离心，吸去上清，小心地再次重悬细胞于冰冷的TBS中，离心收集细胞。

iii.去上清，用1ml TE（PH8.0）重新悬浮细胞，转移至50 ml三角瓶中。

iv.每毫升细胞悬液加10 ml裂解缓冲液，于37℃温育1h，立即进行步骤1.2.。

2.将裂解液转移至离心管中，裂解液不能超过1/3体积。

3.加入蛋白酶K（20mg/ml）至终浓度100µg/ml。

用一灭菌玻璃棒温和地将酶混入细胞裂解液中。

4.将细胞裂解液置于50℃水浴中保温3 h，并不时振摇。

5.将溶液冷却至室温，加入等体积的平衡酚，将离心管置于涡旋器上,使离心管缓慢颠转10min 以温和地混合两相。

6.室温下，6500r/min离心15 min以分离两相。

提取总dna的方法
提取总DNA的方法是指从生物体中获得并分离出所有的DNA分子，包括核基因组、线粒体基因组、质粒等。

以下是一种常用的总DNA提取方法，即苯酚-氯仿提取法。

1. 准备样品：将需要提取总DNA的生物样品（如细菌、植物、动物组织）收集并研磨成细胞悬浮液或粉末状。

注意，样品的处理方式应根据不同的生物物种和细胞类型来选择。

2. 细胞破碎：将研磨好的样品加入细胞破碎缓冲液（如磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液），使细胞破碎并释放出DNA。

同时，加入蛋白酶K以消化细胞膜和核酸酶以降解RNA。

3. 乙醇沉淀：将破碎后的细胞溶液离心，上清液中含有DNA、RNA和其他杂质。

将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的冷乙醇（约70%浓度），混合并静置，使DNA沉淀出来。

4. 洗涤和纯化：使用75%的乙醇溶液洗涤沉淀下来的DNA，以去除残留的盐和其他杂质。

将洗涤后的DNA溶解于Tris-EDTA缓冲液中，并使用紫外光谱仪检测DNA的浓度，以确保提取的DNA质量和浓度。

以上简述了一种常见的总DNA提取方法，但在实际操作中根据研究对象的不同
和实验目的的需求，可能需要对上述步骤进行一些修改和优化。

例如，在细胞破碎过程中，可以使用超声波破碎法或冻融破碎法来替代机械研磨；在乙醇沉淀步骤中，可以加入盐酸或乙酸以增加DNA的沉淀效率。

总之，总DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤，为后续的分子生物学实验提供了DNA样本。

随着DNA提取技术的不断改进和发展，提取出来的DNA 可应用于许多领域，包括基因检测、测序、重组DNA技术和基因工程等。

小白鼠6种组织部位总DNA不同提取方法的比较DNA是生物体的基本遗传物质。

基因组DNA的提取是分子生物学的基础试验操作，其提取效率和质量的好坏直接决定了后面一系列基因工程试验的成败，如基因分离、AFLP、RAPD、SSR等。

因此•学习、掌握DNA提取方法并对其迸行比较、总结，有利于后续试验的顺利开展。

国内外研究人员已经发现并使用了许多种DNA提取方法［2-7］，并且针对不同生物体的具体特点，对许多方法逬行了改良，摸索出适用于具体物种的高效方法［8-15］。

目前，传统的SDS法和CTAB 法由于其成本低廉、提取的DNA质量相对较好，在实际应用中仍占有主要地位。

随着生物技术的普及和应用，使用试剂盒提取基因组DNA逐渐增多［16-19］。

基因组提取试剂盒具有操作简便、节省时间等独特优势，但是对于一般的实验室、特别是普通高等学校来说，由于价格较为昂贵，在很大程度上限制了其使用范围；尤其对刚接触分子生物学试验的初学者，只知道按照说明书流程操作，不了解试剂的化学成分、具体配制方法及作用，不利于理解、掌握试验的基本原理，动手能力差、试验技能得不到提高，最终出现一旦离开试剂盒，什么试验也不会做的情况。

本试验以普通试验动物小白鼠作为提取基因组DNA的材料，选取小白鼠的6个组织部位，分别是肝、脾、肾、尾、肺和心脏，采用提取基因组DNA的经典方法SDS法和CTAB法，提取小白鼠的基因组DNA，并对其质量、浓度、纯度进行检测，从中筛选出经济、简便、易于操作、质量良好的基因组DNA，这对于今后的试验教学和科研工作具有重要的指导作用。

1材料和方法1.1材料1.1.1试验材料小白鼠购自沈阳医学院实验中心。

1.1.2试剂dNTP 'DNA Marker 高保真酶均购自宝生物工程（大连）有限公司‘引物于Invitrogen北京分公司合成» CTAB和SDS法提取液配制所需药品购自Sigma，其余所用的化学试剂（氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇等）均为国产分析纯试剂。

简述动物肝脏中dna提取的基本原理动物肝脏中DNA提取的基本原理DNA提取是分子生物学中的一项基础技术，它是研究生物学、医学、农业等领域的重要手段。

在动物肝脏中提取DNA，可以用于研究动物的遗传信息、基因表达、疾病诊断等方面。

下面将介绍动物肝脏中DNA提取的基本原理。

1. 细胞破碎首先需要将肝脏组织中的细胞破碎，使DNA从细胞内释放出来。

常用的方法有机械破碎、化学破碎和超声波破碎等。

其中，机械破碎是最常用的方法，可以用搅拌器、研钵等设备将组织细胞破碎。

2. DNA分离破碎后的细胞混合物中含有DNA、RNA、蛋白质等多种分子，需要将DNA与其他分子分离。

一般采用酚/氯仿法或商用DNA提取试剂盒进行DNA分离。

酚/氯仿法是一种传统的DNA提取方法，它利用酚的亲油性和氯仿的亲水性，将DNA与其他分子分离。

商用DNA 提取试剂盒则是一种快速、简便的DNA提取方法，其中的试剂已经经过优化，可以快速地将DNA分离出来。

3. DNA纯化分离出的DNA还需要进行纯化，去除杂质和其他分子的干扰。

纯化方法包括乙醇沉淀法、离心柱纯化法等。

其中，乙醇沉淀法是最常用的方法，它利用乙醇的亲水性和DNA的亲疏水性，将DNA沉淀下来。

离心柱纯化法则是利用离心柱的特殊结构，将DNA与其他分子分离。

4. DNA定量最后需要对提取出的DNA进行定量，以确定DNA的浓度和纯度。

常用的方法有紫外分光光度法、凝胶电泳法等。

其中，紫外分光光度法是最常用的方法，它利用DNA分子的吸收特性，测定DNA的浓度和纯度。

动物肝脏中DNA提取的基本原理包括细胞破碎、DNA分离、DNA 纯化和DNA定量。

这些步骤需要严格控制条件，以保证提取出的DNA质量和纯度。

DNA提取技术的不断改进和优化，为动物遗传学、分子生物学等领域的研究提供了有力的支持。

动物DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它涉及到从动物样本中分离出纯净的DNA，为后续的实验和研究奠定了基础。

正确的DNA提取步骤和注意事项对于实验结果的准确性和可重复性至关重要。

本文将重点介绍动物DNA提取过程中的关键步骤及注意事项。

1. 样本获取需要准备动物样本，可以是组织样本、血液样本或者细胞样本。

样本的获取需要遵循相关的伦理规定，确保动物的权益不受损害。

另外，样本的质量对DNA提取的影响非常大，因此在样本获取过程中需要尽量避免污染和损伤。

2. 细胞破碎对于组织样本和血液样本，需要先将细胞破碎，释放DNA。

通常采用细胞裂解液进行细胞破碎，可以直接购物商用的细胞裂解液，也可以根据实验需要自行配制。

细胞破碎的时间和温度需要根据样本的性质进行调整，一般来说，较坚硬的样本需要更长的破碎时间。

3. DNA沉淀经过细胞破碎后，需要加入沉淀剂（如乙醇或异丙醇）使DNA沉淀下来。

在加入沉淀剂的过程中，需要缓慢混合并避免产生气泡。

沉淀后，可以用离心机将DNA沉淀下来，然后将上清液倒掉，留下DNA沉淀。

4. DNA洗涤为了去除沉淀剂和杂质，需要对DNA进行洗涤。

这个步骤通常需要用到乙醇或异丙醇进行洗涤，之后需要用去离子水或TE溶液进行最后的洗涤。

洗涤的过程中需要小心操作，避免DNA的流失或污染。

5. 溶解DNA最后一步是将提取出的DNA溶解到特定的缓冲液中，以便于后续的存储和实验使用。

在动物DNA提取过程中，有一些注意事项需要特别关注：1. 样本的标识和存储十分重要。

正确的标识可以避免混样，影响实验结果的准确性。

2. 在细胞破碎过程中需要保持样本的温度稳定，避免因温度不恰当造成DNA的降解。

3. 使用高质量的试剂和设备是保证DNA提取质量的关键。

试剂和设备的选择应当根据实验要求进行。

4. 每一步骤都需要小心操作，避免样本的污染和DNA的流失。

动物DNA提取是一项复杂的工作，但通过仔细的操作和严格的控制，可以获得高质量的DNA。

动物基因组dna分离的原理动物基因组DNA分离的原理主要涉及到DNA的提取、纯化以及分析等过程。

以下是该过程的详细解释：第一步：DNA的提取动物基因组DNA的提取是DNA分离的第一步。

一般来说，有两种常用的提取方法：有机溶剂法和无机盐法。

有机溶剂法是指使用有机溶剂（如苯酚和氯仿）将DNA从细胞中提取出来。

首先，细胞样品被加入一个细胞裂解缓冲液中，以破坏细胞膜，并释放出DNA 和其他细胞组分。

然后，加入有机溶剂混合液对溶解后的溶液进行提取，使DNA溶解在有机相中。

最后，通过离心加速分离有机相和水相，并将DNA从有机相中重新提取出来。

无机盐法是指使用一系列含有盐的溶液将DNA从细胞中提取出来。

这种方法基于DNA在高盐浓度下与溶液中的阳离子形成离子相关物质可能性较低的原理。

首先，细胞样品被加入盐裂解缓冲液中，经裂解后，DNA与其他细胞组分分离。

然后，高盐缓冲液加入溶液中，通过离心将DNA从其他细胞组分中分离出来。

最后，通过洗涤等步骤去除残余的细胞组分和盐，并得到纯化的DNA 样品。

第二步：DNA纯化DNA纯化是为了去除提取过程中的杂质和其他细胞组分，从而得到高质量的DNA。

DNA纯化可以通过蛋白酶和蛋白质沉淀剂等酶消化、有机物沉淀和电泳等方法进行。

在酶消化方法中，蛋白酶被加入到DNA溶液中，以将DNA附着在蛋白酶或相关酶的组分上。

然后，使用有机物或其他方法除去蛋白酶和相关组分，使DNA 得到纯化。

有机物沉淀方法是通过将DNA与有机溶剂混合并离心沉淀去除其他细胞组分。

加入有机物（如异丙醇、以及其它盐类）的目的是改变DNA与溶液中的盐类和水分子的相互作用，从而促使DNA形成团状并沉淀。

离心作用向下压缩DNA并与有机溶剂一起沉淀，而其他细胞组分不受影响地保留在上层溶液中。

电泳是一种以电场为驱动力的方法，利用DNA的电荷特性将DNA分离出来。

DNA溶液被加载在含有琼脂糖的水平琼脂糖凝胶上。

然后，通过施加电场，DNA的负电荷会使其向正电极迁移。

动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。

真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、月旨类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。

提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。

在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离,EDTA则抑制细胞中Dnase的活性;而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。

二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris（pH8.0）100mmol/LEDTA（pH8.0）500mmol/LNaCL20mmol/LSDS10%胰RNA酶20ug/ml(2)蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，C20°C备用。

(3)TE缓冲液(pH8.0):高压灭菌，室温贮存。

(4)酚？氯仿？异戊醇(25:24:1)、(5)异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。

三、操作步骤1.取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3)，尽量剪碎。

置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml离心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)20pl,混匀。

在65C恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37C水浴12〜24h,间歇振荡离心管数次。

于台式离心机以12000rpm离心5min,取上清液入另一离心管中。

2•加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul吸头挑出，凉干，用200ulTE 重新溶解。