猪肉源金黄色葡萄球菌毒力基因检测与耐药性分析_陶晓亚

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猪肉源金黄色葡萄球菌毒力基因检测与耐药性分析
陶晓亚ａ，徐明悦ａ，王新ａ，周婷ｂ，夏效东ａ，杨保伟ａ，席美丽ａ，孟江洪ａ
（）西北农林科技大学ａ食品科学与工程学院，陕西杨凌７ｂ动物医学院，１２１００
［摘要］目的】了解陕西关中地区猪肉中金黄色葡萄球菌（的污染状况、耐药性及其Ｓｔａｈｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）【ｐｙ／毒素基因的分布。【方法】采集陕西关中６个地区的猪肉１按国标Ｇ对其中的金黄６５份，ＢＴ４７８９．１０２０１０的方法，－色葡萄球菌进行分离，采用Ｐ如ｎ进行检测，最ＣＲ方法对该菌进行确证并对其相关基因（ｕｃ、ｍｅｃＡ、ＰＶＬ、ＳＥｓ和ＥＴｓ）在Ｂ后采用琼脂稀释法检测金黄色葡萄球菌对１１种抗菌药物的耐药性。另外，Ｐ平板中分别添加头孢西丁（４／／，。【和苯唑西林（分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（结果】ｍＬ）４μ ｍＬ）ＭＲＳＡ）１６５份样品的金黄色葡萄球菌污ｇｇ μ ／）；染率为３从中分离出１但未检测出ＭＲ这些菌对甲氧苄啶的耐药性最强，３．３３％（５５１６５０３株金黄色葡萄球菌，ＳＡ，耐药率为１其次对红霉素和四环素的耐药率较高，分别为５对苯唑西林、庆大霉素、氯霉素、００％；７．２８％和３４．９５％；环丙沙星的耐药率分别为２．所有菌株对头孢西丁、头孢哌酮、万古霉素、阿米卡星均９１％，１０．６８％，２．９１％和３．８８％；敏感，同时得到２多重耐药率达２１种耐药谱，０．３９％。猪肉金黄色葡萄球菌中杀白细胞素基因（Ｐａｎｔｏｎｖａｌｅｎｔｉｎｅｌｅｕ－－）、的检出率为３肠毒素基因（中ｓ为９然后依次为ｓｋｏｃｉｄｉｎ，ＰＶＬ）４．９５％，ＳＥｓｅ８．０６％，ｅａ（５０．４９％）ｓｅｅｊ的检出率最高，（、、（、、（、；和ｓ同时得到７３４．９５％）ｓｅｄ（３１．０７％）ｓｅｃ１３．５９％）ｓｅｈ（８．７４％）ｓｅｉ８．７４％）ｓｅ６．８０％）ｅｂ（１．９４％）１种毒素ｇ（（（，基因型，以ｓ最为流行，分布地区不尽相同，其次为Ｐ耐红霉素的金黄色ｅａ＋ｓｅ１１．６５％）ＶＬ＋ｓｅａ＋ｓｅｅ＋ｓｅ９．７１％）ｊｊ葡萄球菌含的毒素基因类型比较复杂，均ｓｅ８．６８％。在ＢＰ平板中分别添加头孢西丁和苯唑西林，ｊ基因检出率高达９未检测出ＭＲ结论】猪肉存在金黄色葡萄球菌的污染，其污染菌株存在多重耐药性并携带较多毒素基因，提示ＳＡ。【／／应加强猪肉金黄色葡萄球菌的监测。在Ｂ和苯唑西林（筛选ＭＲＰ平板中分别添加头孢西丁（４μ ｍＬ）４μ ｍＬ）ＳＡｇｇ的方法不一定可靠，其可信度有待证明。［关键词］金黄色葡萄球菌；毒素基因；耐药性猪肉；
（１ＣｏｌｌｅｅｏＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｉｎｅｅｒｉｎ２ＣｏｌｌｅｅｏＶｅｔｅｒｉｎａｒＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｇｆｇｇ，ｇｆｙ
ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔＹａｎｌｉｎＳｈａａｎｘｉ７１２１００，Ｃｈｉｎａ）ｙ，ｇｇ，
网络出版时间：２０１３０１２５７：２３－－１：／／／／／网络出版地址：ｈｔｔｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔｋｃｍｓｄｅｔａｉｌ６１．１３９０．Ｓ．２０１３０１２５．１７２３．０１２．ｈｔｍｌｐ
收稿日期］０１２０６２０［２－－）；）基金项目］西北农林科技大学博士科研启动费项目（Ｚ１１１０２０００１０１１４０４０７［长江学者讲座教授奖励计划项目（，：作者简介］女，河南漯河人，在读本科生，主要从事食品科学与工程研究。Ｅ－ｍ１９９０－）ａｉｌｔａｏｘｉａｏａ００＠１６３．ｃｏｍ［陶晓亚（ｙ，通信作者］男，四川邛崃人，副教授，博士，主要从事食源性病原及分子生物学和食品安全研究。１９７３－）［王新（：Ｅ－ｍａｉｌｘｉｎｗａｎ７５１６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎｇ
：【】，ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅＴｈｅａｉｍｏｆｔｈｅｓｔｕｄｗａｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｔｏｘｉｎａｎｄｅｎｅｒｏｅｒｔｉｅｓｊｙｇｇｐｐ，ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｏｆｉｌｅｏｆＳｔａｈｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｏｒｋｉｎＧｕａｎｚｈｏｎｒｅｉｏｎＳｈａａｎｘｉｐｐｇｇｐｙ【】Ａｒｏｖｉｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｔｏｔａｌｏｆ１６５ｐｏｒｋｓａｍｌｅｓｆｒｏｍｓｉｘｒｅｉｏｎｓｉｎＳｈａａｎｘｉｒｏｖｉｎｃｅｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｎｄｐｐｇｐ
第４１卷第３期２０１３年３月
西北农林科技大学学报（自然科学版）（）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔＮａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．ｙ
Ｖｏｌ．４１Ｎｏ．３Ｍａｒ．２０１３
１６６
西北农林科技大学学报（自然科学版）
第４１卷
ｓｃｒｅｅｎｅｄｆｏｒｔｈｅｒｅｓｅｎｃｅｏｆＳ．ａｕｒｅｕｓａｎｄＭＲＳＡ．Ｓ．ａｕｒｅｕｓｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｕｓｉｎａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｇ，ｅｎｅｓｓｕｓｃｅｔｉｂｉｌｉｔａｎｄＰＣＲ．ＴｏｘｉｎｉｎｃｌｕｄｉｎＰＶＬ，ＳＥｓａｎｄＥＴｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄａｓｗｅｌｌ．ＩｎａｄｄｉｔｉｏｎＭＲＳＡｇｐｙｇ／／，【】ｌａｔｅｓｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｂＢＰｗｉｔｈｃｅｆｏｘｉｔｉｎ（４μ ｍＬ）ａｎｄｏｘａｃｉｌｌｉｎ（４μ ｍＬ）ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．ＲｅｓｕｌｔＯｆｔｈｅｐｇｇｙｐｙ，ｓａｍｌｅｓ３３．３３％ｗｅｒｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ．１０３Ｓ．ａｕｒｅｕｓｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄＭＲＳＡｗａｓｎｏｔｄｅ１６５ｐｏｒｋ－ｐ，ｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅｏｂｓｅｒｖｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａａｉｎｓｔｅｒｔｈｒｏｍｃｉｎｗｅｒｅｈｉｈｅｓｔ（１００％）ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｅｒｔｈｒｏｍｃｉｎｇｙｙｇｙｙｙ（，，，，５７．２８％）ｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅ（３４．９５％）１０．６８％）ｃｉｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ（３．８８％）ｏｘａｃｉｌｌｉｎ（２．９１％）ａｎｄｅｎｔａｍｉｃｉｎ（ｙｐｇ，，ｃｈｌｏｒａｍｈｅｎｉｃｏｌ（２．９１％）．ＡｌｌｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＳ．ａｕｒｅｕｓｗｅｒｅｓｕｓｃｅｔｉｂｌｅｔｏｃｅｆｏｘｉｔｉｎｃｅｆｏｅｒａｚｏｎｅｖａｎｃｏｍｃｉｎｐｐｐｙ，ｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｅｎｅａｎｄａｍｉｋａｃｉｎ．Ｏｆｔｈｅ１０３ｓｔｒａｉｎｓｏｆＳ．ａｕｒｅｕｓ２０．３９％ｗｅｒｅｍｕｌｔｉｒｅｓｉｓｔａｎｔ．Ｔｈｅｔｏｘｉｎｗａｓｐｇ，，ｓｅ９８．０６％）ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｓｅａ（５０．４９％）ｓｅｅａｎｄＰＶＬ（ｅａｃｈ３４．９５％）．６８．９３％ｉｓｏｌａｔｅｓｈａｒｂｏｒｅｄｏｎｅｏｒｙｊ（，（），ｍｏｒｅｅｎｅｓａｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｅｎｅａｔｔｅｒｎＳＥｇｎｄｔｈｅｔｏｘｉｎｗａｓｓｅａ＋ｓｅ１．６５％ｆｏｌｌｏｗｅｄｂＰＶＬ＋ｓｅａ＋ｐｇｐｙｊ１

哈尔滨市动物源性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

ａｃｃｏｕｎｔｅｄｆｏｒ６０％ｏｆｔｈｅｔｏｔａｌｎｕｍｂｅｒｏｆｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔｈｅｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎａｎｉｍａｌｄｅｒｉｖｅｄＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｉｎＨａｒ－
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ｍｏｓｔｓｅｒｉｏｕｓａｎｄｔｈｅｒａｔｅｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｗａｓ７６％．Ｏｎｌｙ４ｓｔｒａｉｎｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａａｒｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌａｎｄｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｒａｔｅｗａｓ２４％．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｓｅｖｅｒｅｌｙｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｉｓｏｌａｔｅｓ，ｍｕｌｔｉ－ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｂａｃｔｅｒｉａ
金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，ＳＡＵ）有较强致病性，具有分布广、传播途径多样的特点。近年来由于广谱抗菌药物的乱用及滥用，ＳＡＵ耐药性不断增强，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）成为多重耐药医院感染最常见的革兰阳性菌，是医院感染重点监测对象。［１］金葡菌感染可以引发多种疾病，包括皮肤和软组织感染（ＳＳＴＩ）、肺炎、心内膜炎、菌血症和败血症。［２］该病原体还可引起反刍动物（牛、绵羊、山羊等）、家禽和猪的大规模感染。［３］为了对哈尔滨市动物源性金黄色葡萄球菌

市售生猪肉中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药性分析

市售生猪肉中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药性分析作者：邬元娟张树秋王文博李鸳鸯来源：《山东农业科学》2020年第02期摘要：为了解市售生猪肉中金黄色葡萄球菌的污染及耐药性状况，于2019年从济南、寿光、德州、兖州、临沂、济宁6地市采集生猪肉（后腿肉）样品共计300份，对其金黄色葡萄球菌污染状况进行检测分析。

结果表明，300份样品中，金黄色葡萄球菌检出率为13.0%（38/300）;进一步进行金黄色葡萄球菌对9种抗生素的药敏试验，结果表明，猪肉样品中的金黄色葡萄球菌对红霉素、四环素有较高耐药性，且多数为多重耐药菌株。

综上，市售猪肉产品中金黄色葡萄球菌污染情况仍比较严重，建议相关部门进一步加强猪肉产品市场监管，采取针对性风险监测预警措施。

关键词：生猪肉;金黄色葡萄球菌;污染状况;耐药性中图分类号：S851.34+7 ;文献标识号：A ;文章编号：1001-4942（2020）02-0140-04Abstract To investigate the contamination situation of Staphylococcus aureus in raw pork sold on the markets and its drug resistance in Shandong Province， 300 raw pork samples were collected from Jinan， Shouguang， Dezhou， Yanzhou， Linyi and Jining in 2019. The results showed that Staphylococcus aureus was found in 38 samples， which accounting for 13.0% （38/300）. The susceptibility test of the Staphylococcus aureus strains to 9 types of antibiotics was conducted and the results were as follows. The Staphylococcus aureus strains isolated from raw pork had higher resistance to erythromycin and tetracycline， and most strains had multidrug resistance. In conclusion， the contamination of Staphylococcus aureus in raw pork sold on the markets in Shandong Province was more serious， so it was recommended that relevant governmental departments and agencies should further strengthen the market supervision and take actions for risk monitoring and early warning.Keywords Raw pork; Staphylococcus aureus; Contamination situation; Drug resistance近年来，世界各国食品安全事件频繁发生，食品安全问题成为全世界共同关注的问题[1]。

食源性金黄色葡萄球菌的耐药机制及检测方法研究进展

食源性金黄色葡萄球菌的耐药机制及检测方法研究进展作者：韦志萍解艳秋来源：《中外医学研究》2018年第23期【摘要】金黄色葡萄球菌（SA）可产生多种毒素及多种酶类，易引起人和动物化脓感染、人食物中毒。

SA可在食品加工、包装及运输过程污染食品。

其耐药机制主要为不合理的使用抗生素和消毒剂。

目前，SA对大环内酯类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、环脂肽、糖肽类、唑烷酮类药物及消毒剂均有耐药性，对食源性SA的检测除了传统的“金标准”检测方法外，还有多种基于分子生物学和免疫学的现代检测技术，这些检测技术对食源性SA检测各有优缺点，需多种技术结合以提高其整体检测效果。

【关键词】食源性金黄色葡萄球菌；耐药；检测方法doi：10.14033/ki.cfmr.2018.23.086 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2018）23-0-03金黄色葡萄球菌（SA）是常见的化脓性感染致病菌，它可产生多种毒素及多种酶类，易引起人和动物化脓感染、人食物中毒[1]。

SA可在食品加工、包装及运输过程污染食品，其分泌的毒素对热不敏感，即便加热煮沸30 min仍可致病[2]。

近年来，随着抗生素大量使用，SA 感染率的升高，耐药率也随之升高，并出现多重耐药性。

目前，在医院、社区环境中均存在耐药性强、毒力强的耐药型SA，这给金黄色葡萄球菌感染的防治增加了难度。

本文就近年来SA 的耐药机制及检测方法进展做一综述。

1 耐药机制不合理的使用抗生素、消毒剂是SA耐药菌株增加、多重耐药菌出现的主要原因。

1.1 大环内酯类SA质粒和染色体含有erm基因，这些基因是SA对大环内酯类药产生耐药性的主要原因[3]。

erm基因主要有ermA、B、C基因。

大环内酯类药的抗菌作用是通过抑制细菌内的核糖体23S rRNA基因活性，阻断蛋白质合成来实现的[4]。

其耐药性是因甲基转移酶erm基因催化该基因甲基化，致使药物与RNA亲和力降低而产生[5]。

另外，核糖体大亚基23S rRNA碱基、核糖体蛋白L4的突变均可导致大环内酯类药的耐药性[6]。

金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测及耐药性分析的开题报告

金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测及耐药性分析的开题报告一、研究背景金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，常常存在于人类的皮肤和鼻腔中。

具有致病性的金黄色葡萄球菌可以引起多种疾病，如皮肤感染、食物中毒和败血症等。

其中，金黄色葡萄球菌肠毒素是引起食物中毒的主要原因之一。

金黄色葡萄球菌肠毒素基因是导致肠毒素合成的关键基因，其存在与否可以决定金黄色葡萄球菌是否能够产生肠毒素。

因此，检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因是判断其致病性和食品安全的关键之一。

同时，金黄色葡萄球菌耐药性的发展也已成为全球卫生界的重要问题。

二、研究目的本研究旨在开展金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测及耐药性分析，为食品安全提供科学依据和实验结果，进一步了解金黄色葡萄球菌在食品中的污染情况，从而更好地维护人类健康。

三、研究方法和步骤1. 样本采集和处理首先需要采集不同来源的金黄色葡萄球菌样本，如食品、环境、医院手术室等，采集的样本需尽量覆盖不同区域和不同来源。

将样本进行初步筛选和预处理，去除杂质和微生物污染，以保证实验数据的准确性和可靠性。

2. DNA提取和PCR扩增采用常规的DNA提取方法，提取样本中的金黄色葡萄球菌DNA。

利用PCR扩增技术，扩增金黄色葡萄球菌肠毒素基因，同时检测耐药性相关基因，如mecA、blaZ等。

3. 聚合酶链反应和电泳分析将PCR扩增的产物进行聚合酶链反应（PCR）和电泳分析，检测是否扩增出金黄色葡萄球菌肠毒素基因。

同时，通过PCR扩增得到的产物经测序，进行序列分析，探究金黄色葡萄球菌肠毒素基因的多样性和差异性。

4. 统计分析和结果解释收集实验数据，利用统计学方法进行分析和解释，比较不同来源和不同区域的金黄色葡萄球菌肠毒素基因检测结果和耐药性检测结果，研究其相关性和影响因素，总结结论并提出相应的建议和对策。

四、研究意义本研究的开展可以进一步了解金黄色葡萄球菌肠毒素的检测方法和耐药性的相关研究结果，为食品安全提供科学依据和实验数据，为保障人类健康和食品安全做出贡献。

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