鸡蛋中蛋黄抗体提取及鸡蛋综合利用

抗鸡球虫卵黄抗体制备及初步应用作者：钱玮霖指导老师：徐前明（安徽农业大学植保学院合肥 230061）摘要：本项目旨在研制抗鸡球虫卵黄抗体，为防治鸡球虫病提供一种新的手段。

利用对临床所分离的球虫，经超声波裂解制备粗抗原，然后将所得抗原分别于弗氏完全佐剂和不完全佐剂混合，经肌肉注射方式对鸡蛋进行免疫，收集免疫后的卵黄；采用饱和硫酸铵法分离卵黄中的抗体，并用聚乙二醇浓缩获得较高浓度的抗体；采用凝集试验确定其抗体水平，并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法进行抗体纯度分析；最后将所分离的抗鸡球虫卵黄抗体用于鸡感染球虫保护试验。

结果表明：（1）临床所分离得球虫多为混合感染，达3种以上；（2）蛋鸡经免疫后，经凝集试验可证实其抗体水平可达1:28，SDS-PAGE电泳显示：纯化后抗体大小为67.0kD 和23kD，且纯度较高。

基于上述情况，认为本试验制备出抗鸡球虫卵黄抗体方法并初步阐明了其抗鸡球虫的基本功能。

关键词：鸡球虫病；卵黄抗体；保护试验引言鸡球虫病广泛存在于养鸡业中，常造成大批死亡，其死亡率可最高达80％，且病愈鸡生长严重受阻，抵抗力降低，易继发其他疾病。

每年，全世界因为鸡球虫病造成的损失高达数十亿美元[1]。

因此，鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一。

在我国，特别是在南方地区，由于气温高、湿度大，这种环境利于球虫卵囊的孢子发育，本病常常呈暴发性流行，危害更加严重。

然而，目前对鸡球虫病的防治措施绝大部分多依赖于药物的预防和治疗上,即化学合成药物和抗生素两大类，自从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种，但是因为球虫对药物极易产生抗药性，大量使用化学药物势必会造成严重的药物残留问题等，这也是当今养禽业所遇到最棘手的问题之一。

上述问题存在，为临床防治鸡球虫病提出紧迫任务。

卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。

不同方法提取卵黄抗体效果的比较吴博;王爽;樊兴冬;刘宇;李丹;史同瑞【摘要】In order to optimize the extraction process of IgY and provide technical reference for industrial production, this experiment not only selected several appropriate methods including the water dilution method, the octanoic acid method, the HAc - sodium acetate method, the phenol precipitation method and the sodium alginate method, but also compared the extraction process, production costs, the extract - amount and antibody titer of egg yolk antibody of these methods. The results showed that the octanoic acid method had the highest rate of liquid recovery which reached 171% and the highest protein concentration which was 6. 6 mg/mL. The highest agglutination titre of extracting IgY was 1 ： 128 by the octanoic acid method and the sodium alginate method. These results demonstrated that the octanoic acid method was most appropriate for IgY extraction.%为了优化卵黄抗体提取工艺以及产业化生产提供技术参考，从众多方法中初步筛选了较为适宜的水稀释法、辛酸法、乙酸-乙酸钠法、酚沉淀法和海藻酸钠法，并比较了5种方法的提取工艺、生产成本、卵黄抗体提取量及其效价。

鸡蛋工业用途鸡蛋是人类重要的食品来源之一，除了被广泛应用于食品制作之外，它也有许多其他用途。

下面将详细介绍鸡蛋在工业上的应用。

1. 医药行业在医药学领域，鸡蛋在疫苗制造过程中扮演了重要角色。

许多疫苗都是通过使用鸡蛋中的天然抗体来生产的，例如红痘疫苗和流感疫苗。

制造过程中，病毒会被注入到鸡蛋中，然后病毒会生长和复制，使得病毒可以被提取和充分利用。

这种生产方式的优点是可以生产大量的疫苗，同时成本和复杂度相对较低，因此是一种经济实惠的方法。

2. 面包和蛋糕行业鸡蛋在面包和蛋糕制作中也是必不可少的原料之一。

鸡蛋可以帮助面团和面糊中形成起泡和张力，从而提高制品的蓬松度和口感。

鸡蛋蛋白和蛋黄还可以分别用于制作不同的食品。

例如，蛋白可以用来制作蛋糕和糖霜，为制品增加空气性，而蛋黄则可以用来制作云石状的面包和蛋糕，以及奶黄馅等。

3. 印이터进行备份与存储在数字储存领域中，鸡蛋也被用作保护文件和数据的一种方法。

鸡蛋可以作为一种物理储存介质，通过把数据刻录到鸡蛋中，达到数据存储以及备份等目的。

国外一家公司利用鸡蛋中的腐殖土和钙质复合物，刻录数据存储在蛋壳里。

如果放在常温下，这些“蛋壳硬盘”可以存储数百年甚至上千年之久，相比于一些数码设备更加耐用且无需外界能源供应，相信未来可能更多的人会找到并利用这种鸡蛋存储技术。

4. 皮革制品行业在皮革制品行业中，鸡蛋清可以用于制作革面的颜料。

清蛋液可以与天然鞣料混合，然后被涂到皮革表面，以达到强化皮革、去污和调节皮革颜色的效果。

此外，天然的鸡蛋清膜也可以用作制作高质量皮革中柔软弹性的润滑剂。

综上所述，鸡蛋不仅是人类饮食中的重要食品之一，同时也可以在各种工业领域中大有应用。

鸡蛋在医药、面包蛋糕、数字储存和皮革制品等领域都有广泛的应用，表明鸡蛋的价值不仅仅体现在人类的饮食上，还可以给各个行业带来更大的效益和价值。

随着科技和工业的不断进步，相信鸡蛋在工业领域的应用也将不断创新和发展。

卵黄抗体的分离提取和纯化方法
卵黄抗体的分离提取和纯化是一种重要的实验技术，用于从蛋黄中获取纯化的抗体。

以下是一种常见的卵黄抗体分离提取和纯化的方法。

首先，收集需要提取卵黄抗体的鸡蛋，并分离出蛋黄。

接下来，利用一种物理方法，如离心或冷冻解冻循环，将蛋黄细胞破裂开放，使得抗体被释放到溶液中。

然后，使用晶体胶过滤或离心的方法，去除残留的细胞碎片和大分子物质。

接下来，使用一种亲和层析技术，例如蛋白A/G层析，选择性地吸附卵黄抗体在固定相上，在此过程中可以选择不同的缓冲条件和负载材料，以便优化抗体与固定相之间的亲和性。

随后，通过洗脱步骤，用适当的洗脱缓冲溶解固定相上的抗体，使其从固定相上脱落，得到纯化的卵黄抗体。

最后，通过浓缩和纯化步骤，使得卵黄抗体的浓度得到提高，并去除可能的污染物。

综上所述，卵黄抗体的分离提取和纯化方法包括蛋黄细胞破裂、去除残留物、亲和层析、洗脱、浓缩和纯化等步骤。

这些方法可以有效地提取和纯化卵黄抗体，为后续的实验研究和应用提供优质的抗体材料。

生物制品技术实验指导生物工程系目录实验规则⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 2 实验一、猪瘟、口蹄疫抗体间接血凝实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 3 实验二、鸡新城疫灭活疫苗的制备—照蛋及接毒⋯⋯⋯⋯ 4实验三、鸡新城疫灭活疫苗的制备—鸡胚收毒及测效价⋯⋯ 5 实验四、鸡新城疫灭活疫苗的制备—油乳苗的制备⋯⋯⋯⋯ 6实验五、氢氧化铝和蜂胶的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7 实验六、法氏囊炎病高免卵黄抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8 实验七、法氏囊炎病高免卵黄抗体效价的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯9 实验八、兔瘟灭活苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10 实验九、大肠杆菌自家灭活疫苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11 实验十、动物实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12 实验十一、鸡白痢平板抗原的制备及使用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15 实验十二、免疫血清的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16 实验十二、细菌冷冻真空干燥实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18实验规则实验中所用材料，多具有传染性（如病原微生物、含病原微生物的血、尿、便、痰、脓汁及感染动物等），在实验过程中，必须严肃认真地进行无菌操作，以保证结果准确，防止实验室感染，防止病原微生物污染环境。

必须遵守以下各项。

1、实验前必须预习实验指导书。

若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。

、进实验室不得将书包、衣物等放在实验1台上，不必需的物品勿携入室内。

2、实验室内严禁饮食、吸烟及用嘴舔湿铅笔及瓶签，、如发生感染或污染等意外时，应立即报告指导老师，进行紧急处理。

5、保持实验室安静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。

实验进行时不准随意进出。

实验室中物品未经许可不准带出室外。

6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。

7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。

不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。

一、实验目的通过本实验，了解蛋黄蛋白的提取原理和过程，掌握蛋黄蛋白的提取方法，并对其提取效果进行评估。

二、实验原理蛋黄蛋白是鸡蛋蛋黄中的一种重要蛋白质，具有丰富的营养价值。

蛋黄蛋白的提取方法主要有酸沉法、碱沉法、盐析法等。

本实验采用碱沉法提取蛋黄蛋白，即利用碱性溶液使蛋黄蛋白发生变性，从而使其从蛋黄中分离出来。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：- 新鲜鸡蛋- 蒸馏水- 氢氧化钠（NaOH）溶液- 硫酸铵（(NH4)2SO4）溶液- 乙醇- 无水硫酸钠（Na2SO4）2. 试剂：- 酚红指示剂- 1mol/L的盐酸（HCl）- 0.1mol/L的氢氧化钠（NaOH）溶液- 0.1mol/L的硫酸铵（(NH4)2SO4）溶液四、实验仪器1. 研钵2. 烧杯3. 漏斗4. 滤纸5. 搅拌棒6. 电子天平7. 酸度计8. 离心机五、实验步骤1. 将新鲜鸡蛋洗净，打破，取出蛋黄。

2. 将蛋黄捣碎，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。

3. 用酚红指示剂检测溶液的pH值，调整至pH值为8.0。

4. 向蛋黄溶液中加入适量的1mol/L的氢氧化钠（NaOH）溶液，搅拌均匀。

5. 将溶液静置30分钟，使蛋黄蛋白充分沉淀。

6. 用漏斗和滤纸将沉淀物过滤，收集滤液。

7. 向滤液中加入适量的硫酸铵（(NH4)2SO4）溶液，搅拌均匀。

8. 将溶液静置30分钟，使蛋黄蛋白进一步沉淀。

9. 用漏斗和滤纸将沉淀物过滤，收集滤液。

10. 将滤液置于离心机中，以3000r/min离心10分钟。

11. 取出离心后的沉淀物，用无水硫酸钠（Na2SO4）进行干燥。

12. 将干燥后的蛋黄蛋白进行称重，计算提取率。

六、实验结果与分析1. 蛋黄蛋白提取率：根据实验数据，本实验蛋黄蛋白的提取率为80%。

2. 蛋白质含量：通过比色法测定，本实验提取的蛋黄蛋白中蛋白质含量为70%。

七、实验讨论1. 实验过程中，pH值的调整对蛋黄蛋白的提取效果有重要影响。

pH值过高或过低都会影响蛋白质的溶解度，从而影响提取率。

氯仿法、水解法、卡拉胶法提取鸡蛋中卵黄抗体【摘要】卵黄抗体（egg-yolk antibody，IgY）具有一些IgG所没有的优良特性，与哺乳动物的IgG相比，IgY 的提取具有方法简单，提取率高且方法多样等优点。

本文旨在对当前条件下卵黄抗体的提取方法进行比较。

选取水溶法（Water Dilution，WD）、氯仿法（Chloroform，CHL）和卡拉胶法（Carrageenan，CAR）制备IgY，根据电泳结果，比较三种方法得率高低。

SDS-PAGE结果表明，氯仿法的得率较其他两种方法高一些。

【关键词】卵黄抗体；提取；电泳1.1 卵黄抗体的发现和命名1893年，Klemperer首次报道了鸡蛋中存在抗体，发现蛋黄中抗体以IgG占优势，而IgM和IgA的含量很少，现已证明了免疫鸡的蛋是提供特异性IgG抗体最方便，最廉价的来源[1]。

由于鸡蛋黄的英文名称是“Yolk”，故将鸡蛋黄中的免疫球蛋白IgG称为IgY。

1.2 卵黄抗体的一般性质卵黄抗体相对分子量约为180kDa，有两条轻链和两条重链组成（2H+2L）。

其中轻链（L）相对分子量约为22～30kDa，重链（H）相对分子量约为67～70kDa，等电点接近5.2，含氮量为14.8%，IgY的氨基酸组成与鸡血清IgG和牛IgG不同。

此外，还具有以下优点：（1）鸡卵黄中IgY纯度高，含量大。

（2）特异性高。

（3）稳定性好。

在室温保存半年，其抗体活性不变，在4℃冰箱贮存6-7年，经免疫扩散法测定其活性降低不超过5%[2]。

（4）产量高。

（5）IgY不激活补体。

（6）IgY能耐酸耐热。

（7）安全。

服用安全可靠，王泽中等用治疗剂量（80-300mg/kg）的10-40倍进行试验，没有发现毒性反应。

1.3 IgY的分离、提纯方法卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，比例为1：2。

大部分蛋白质都是脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄球蛋白（α、β、γ）是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。