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白芍总苷对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎影响的实验研究的开题报告摘要：狼疮性肾炎是狼疮的一种重要的严重并发症，其发病率与病情严重程度成正比。
目前广泛应用于临床的免疫抑制剂和免疫调节剂虽然可以缓解病情，但其副作用常常成为限制其使用的瓶颈。
近年来，越来越多的关于天然药物的研究显示，这些药物具有治疗狼疮性肾炎的潜力，其中白芍总苷是一种具有免疫调节作用的中药成分。
本实验拟通过对MRL/lpr小鼠进行药物治疗研究和病理学检测，评估白芍总苷对狼疮性肾炎的治疗作用和可能的作用机制，为其进一步临床应用提供基础数据。
关键词：狼疮性肾炎；白芍总苷；MRL/lpr小鼠；治疗作用；作用机制一、研究背景与意义狼疮性肾炎是一种常见的自身免疫疾病，主要发生在女性，其重度的病理变化可导致肾功能受损、发生肾衰竭等严重后果。
近年来，虽然通过免疫抑制剂和免疫调节剂等手段可以缓解病情，但副作用和风险也较高，限制了其在临床上的广泛应用。
因此，探索新的治疗方法和药物成为极其重要的课题。
白芍总苷是一种具有免疫调节作用的天然成分，已经被广泛应用于中医临床实践中，其能够调节机体免疫系统，抗炎、抗氧化、抗肿瘤、促进免疫细胞的增殖等作用，因此具有广泛的应用前景。
基于此，本实验拟通过对MRL/lpr小鼠进行药物治疗研究和病理学检测，以评估白芍总苷对狼疮性肾炎的治疗作用和作用机制，为其进一步临床应用提供基础数据和科学依据。
二、研究内容和方法2.1 研究内容(1) 通过对MRL/lpr小鼠进行白芍总苷的药物治疗，评估其治疗狼疮性肾炎的效果。
(2) 对治疗后的小鼠进行流行病学、生化、免疫学和组织学检测，评估白芍总苷对狼疮性肾炎的作用机制。
(3) 分析研究结果，探讨白芍总苷在狼疮性肾炎治疗中的应用前景。
2.2 研究方法(1) 实验动物培育与处理。
选用MRL/lpr小鼠40只，分为对照组和实验组，每组20只。
实验组对小鼠注射一定剂量白芍总苷，对照组注射等量的生理盐水。
肾脏病与透析肾移植杂志第30卷第2期2021年04月•165•核因子E2相关因子2信号通路与肾脏疾病徐成综述陈朝红审校摘要核因子E2相关因子（N ri2)是调控抗氧化、抗炎类基因的关键转录因子。
N rf2激动剂具有显著肾脏 保护作用,是创新药物重要靶点。
本文将介绍N rf2信号通路和肾脏疾病的研究进展以及N rf2激动剂的临床应用。
关键词核因子E2相关因子2氧化应激糖尿病肾病急性肾损伤狼疮性肾炎Role of nuclear factor erythroid 2-related factor 2 in kidney diseaseXU Cheng，CHEN ZhaohongNational Clinical Research Center o f Kidney Diseases, Jinling Hospital, Medical School of Nanjing University, Nanjing 210016, ChinaABSTRACT Nuclear factor erythroid 2 related factor 2 (Nrf2) is a transcription factor that regulates the expression of a vast array of cytoprotective genes including antioxidant and anti-inflammatory genes.Strategy aimed at restoring Nrf2 ac-tivity could potentially retard chronic kidney disease progression.This review focuses on the research progress of the Nrf2 signaling pathway,its role in renal diseases,and the clinical application of NrO agonists.Key words nuclear factor erythroid 2 related factor 2 oxidative stress diabetic nephropathy acute kidney injury lupus nephritis氧化应激和炎症是多种肾脏疾病发生发展的关键因素，转录因子核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件[N r f2/a n t io x id a n t r e s p o n s e e le m e n t(A R E)]信号通路是机体内重要的抗氧化应激和抗炎的信号通路，调节多种抗氧化基因和解毒酶相关基因的转录，发挥抗氧化、抗炎和抗凋亡作用，维持细胞稳态，是多种疾病的药理学耙标。
IL-34和CSF-1在狼疮肾炎小鼠肾脏的表达及意义廖文慧;杜艳军;曾锐【摘要】目的探讨巨噬细胞活化因子白细胞介素-34(IL-34)和集落刺激因子-1(CSF-1)在狼疮肾炎小鼠肾脏的表达及意义.方法以自发性狼疮肾炎小鼠MRL-Faslpr和TgZ-MRL-Faslpr小鼠为模型,于6周、3月、5月末处死动物,检测尿蛋白和血肌酐的变化;PAS染色观察肾脏病理改变;实时定量PCR和ELISA法检测肾组织IL-34和CSF-1的表达;免疫组化和免疫荧光法检测肾组织F4/80+巨噬细胞数量、雪莲花凝集素(LTL)和双花扁豆凝集素(DBA)的分布;原位杂交检测肾脏IL-34的分布;X-gal染色检测肾组织CSF-1的分布.结果①随着鼠龄增加MRL-Faslpr小鼠肾脏IL-34和CSF-1 mRNA和蛋白表达均显著增加(均P＜0.01),增加的IL-34和CSF-1主要分布在皮髓交界处的肾小管中,部分分布于皮质肾小管.②肾脏IL-34和CSF-1表达增加与肾脏病理分级和肾间质巨噬细胞浸润呈量效关系.③尿蛋白定量与肾脏IL-34的表达密切相关.相关分析显示,尿IL-34含量与尿白蛋白排泌呈正相关(r=0.915 4,P＜0.01),明显优于CSF-1(r=0.150 6,P=0.07).结论与CSF-1相比,肾脏IL-34的表达和分泌与尿蛋白定量密切相关,尿IL-34含量能够反映狼疮肾炎的活动程度.【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(044)002【总页数】6页(P129-133,142)【关键词】狼疮肾炎;蛋白尿;白细胞介素-34;集落刺激因子-1【作者】廖文慧;杜艳军;曾锐【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院综合科武汉430030;湖北中医药大学针灸骨伤学院,武汉430061;华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科,武汉430030【正文语种】中文【中图分类】R593.242集落刺激因子－1，即CSF－1（colony－stimulating factor－1），又称M－CSF，是一种单核巨噬细胞生长因子，它能调节巨噬细胞的存活、增殖、分化和趋化［1］。
狼疮方对狼疮样小鼠肾脏RANTES表达的影响①梁 鸣 李幼姬 阳 晓 魏 毅② 叶任高 许韩师 周建中(中山医科大学附属第一医院肾内科卫生部肾脏病临床研究重点实验室,广州510080) 中国图书分类号 R593124 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2002)0920631205摘 要 目的:观察慢性移植物抗宿主病(G AH D)狼疮样肾炎小鼠模型肾组织中趋化因子RANTES的表达并探讨中药狼疮方对其的影响。
方法:以强的松为阳性对照,观察狼疮方对模型小鼠肾脏RANTES表达的影响,并进一步分析其对肾脏病理和功能损害的影响。
结果:狼疮方具有与强的松相似的防止和减轻狼疮样肾炎小鼠肾功能恶化、肾组织病理改变的作用(P<01001)。
这作用与减轻狼疮小鼠肾组织中RANTES表达显著相关。
结论:狼疮方明显下调狼疮肾炎肾脏RANTES表达,这与其减轻病理改变相一致。
关键词 移植物抗宿主病(G VH D) 狼疮肾炎 RANTESAmeliorate chemokine RANTES expression by the recipe of LangChangF ang in mu2 rine lupus nephritis modelLIANG Ming,LI You2Ji,Y ANG Xiao et al.Department o f Nephrology,Fir st Affiliated Hospital,Sun Yat2Sen Univer sity o f Medical Science,Guangzhou510080Abstract Objective:T o investigate chem okine RANTES(Regulated upon Activation.N ormal T cell Expressed and Secreted)expression in the chronic graft2versus2host disease(G VH D)murine lupus nephritis m odel and effect of the recipe of LangChuangFang on it.Methods:A microwave based immunohistochemistry(SP)and RT2PCR were used to detect the expression of RANTES in the kidney of m odel,therapeutic group and normal control.At the same time,the correlation between expression of RANTES and renal injures in m odel was examined.R esults: LangChuangFang protected renal function,which was coincided with amelioration of pathologic lesions especially tubulointersitial injury.This was ass ociated with the amelioration of RANTES protein and mRNA expression in m odel.Conclusion:RANTES inv olved in the process of renal injury in viv o,LangChuangFang can treat lupus as immunosuppressive agent by decreasing RANTES production.K ey w ords Lupus nephritis G raft2versus2host disease(G VH D) RANTES 狼疮肾炎(LN)患者大多伴有肾小管间质的损伤,而肾小管间质损伤是导致肾功能进行性恶化的重要原因。
肾组织中单核巨噬细胞、T细胞浸润增加是大多数肾小球肾炎和小管间质病变的共同病理表现,活化的单核巨噬细胞、T细胞通过分泌细胞因子、炎症介质及产生氧自由基造成肾组织的破坏,加速肾小球硬化及小管间质纤维化的发生。
虽然,目前对于肾组织中单核巨噬细胞、T细胞浸润的机制并不完全清楚,但是肾组织局部化学趋化因子及粘附分子的表达增高,被认为是导致单核细胞、T细胞在炎症组织局部聚集的两个重要因素1。
RANTES①国家自然科学基金资助项目(39970933)、中山医科大学“211工程”重点科研基金资助项目(98150)、广东省自然科学基金资助项目(990073)②第一军医大学中医系,广州510080作者简介:梁 鸣,女,29岁,博士生,E2mail:mimiliang@;李幼姬,女,64岁,教授,博士生导师,主要从事狼疮肾炎研究。
(Regulated upon Activation Normal T cell Expressed and Secreted)是一种T细胞特异的趋化因子,体内体外实验均表明其在肾组织中表达上调是单核巨噬细胞、T细胞浸润的主要原因2。
利用慢性移植物抗宿主(G AH D)小鼠狼疮肾炎模型。
狼疮方由白花蛇舌草、半枝莲、紫草、丹参、全蝎等七味药组成,具有消热解毒、活血祛瘀的功效,临床用于治疗狼疮肾炎有一定的疗效,且无明显的毒副作用。
狼疮肾炎属于自身免疫性疾病,本研究旨在探讨中药狼疮方治疗狼疮性肾炎的免疫学机理。
1 材料与方法111 材料11111 实验动物 C57BLΠ6J和DBAΠ2小鼠,体重(20117±1120)g,清洁级。
11112 主要试剂 RANTES多克隆抗体(R&D),SP 成套试剂盒(北京中山公司)。
抗ds2DNA抗体E LIS A检测试剂盒(上海太阳公司),HRP2羊抗小鼠IgG(北京中山公司),Trizol试剂,逆转录试剂成套试剂盒(G ibco),dNTP,T aqDNA聚合酶及缓冲系统(R&D)。
中药狼方为叶任高经验方,由第一军医大学中药系药剂炮制教研室制成浸膏,备用。
聚合酶链反应(PCR)引物RANTES3:正链5’C AT AG2 G CTCGG AC ACC ACT,负链5’AC AC ACTTGG CGG T2 TCCTTC,产物为145bp。
β2actin:正链5’G TGGG C2 CG CTCT AGG C ACC AA,负链5’CTCTTTG T ATC ACG2 C ACG ATTTC,产物为538bp,由中科院细胞所合成。
112 方法11211 狼疮样小鼠模型的建立与分组 采用慢性移植物抗宿主小鼠(G VH D)模型,参考文献4,5。
取DBAΠ2小鼠脾脏、胸腺、淋巴结细胞,制成单细胞悬液(约60%脾细胞,30%胸腺,10%淋巴结细胞),于1,3,7,10d静脉注射于8～10w雌性(C57BLΠ6JX DBAΠ2)F1杂交鼠,每次给予细胞数为50×106。
根据完全随机设计的原则,将模型动物分成B组(生理盐水)、C组(强的松)、D组(狼疮方),其中强的松为01173mgΠ20g、狼疮方含生药310gΠ20g,每日灌胃治疗。
另设A组为正常对照(生理盐水),每组6只动物,各组动物于注射细胞后第2周起分别灌胃处理,至12w处死动物,立即取下肾脏,一部分冻于液氮中保存以备提取mRNA。
一部分置中性福尔马林液中固定,常规进行HE、Mass on、PAS M染色。
11212 狼疮样小鼠生化和免疫学指标检测 处死动物前留取尿及血清,进行尿蛋白定性和血清肌酐、尿素氮、甘油三酯及白蛋白检测(自动生化分析仪)。
抗ds2DNA抗体测定参考说明书操作,在酶标仪492 nm处读取A值,计算待测样品与标准品A值之比,求出结合值数(BI)。
11213 组织学检查 计算每个肾小球横截面细胞核总数;按照文献6半定量计分法测量肾小球硬化指数,每只动物计算25个肾小球取平均值。
小管间质损害的特征按0～3+半定量计分:无变化评0分;轻度改变评1分;中度评2分;严重评3分。
小管间质损害的总积分为5个组织学特征(小管萎缩、间质纤维化、水肿、炎症、小管再生Π退行性病变)单项计分的总和7。
11214 肾组织RANTES蛋白表达的检测 采用微波免疫组织化学染色,即SP法。
具体步骤为:取3μm厚的10%中性福尔马林液固定的石蜡切片常规脱蜡,梯度酒精入水;3%过氧化氢溶液,37℃,20 min;微波抗原修复,高档8min;含10%羊血清的1%BS A封闭液在室温下封闭20min;羊抗小鼠RANTES抗体(1∶100),4℃孵育过夜:生物素偶联的兔抗羊IgG抗体,37℃,30min;辣根过氧化酶标记的链卵白素,37℃,30min;DAB显色10min;苏木素复染,中性树脂封片。
阴性对照:P BS替代一抗。
RANTES计算100个肾小管中RANTES阳性小管数。
11215 肾组织RANTES mRNA表达的检测 逆转录酶链反应(RT2PCR)法:总RNA抽提和逆转录按试剂盒说明步骤进行,RT反应条件如下:94℃孵育2 min,然后分别94℃45s、57℃45s、72℃30s,共30个循环,最后72℃延伸10min。
最后各PCR扩增产物在117%琼脂糖凝胶、015T AE中进行电泳(70V,30 min),于紫外灯下拍照,将照片用VI DAS计算机图像处理系统(OPT ON)进行面积灰度扫描,以密度代替其表达量,计算出RANTES mRNA的相对表达量。
RANTES相对表达量=RANTES的密度Πβ2actin的密度。
113 统计学处理 采用SPSS21010统计软件包进行统计学处理,所有资料均用x±s表示;多组间资料间比较采用One2Way ANOVA分析,组间两两比较采用LS D法。
2 结果211 各组狼疮样小鼠生化、免疫学指标 模型组小鼠抗ds2DNA抗体和尿蛋白持续增多,强的松组和狼疮方组抗ds2DNA抗体及尿蛋白显著减少。
实验结束时模型小鼠以有严重的低蛋白血症和高脂血症,狼疮方同强的松一样维持了正常的血清蛋白水平并矫正了脂代谢紊乱。
两治疗组小鼠肾功能正常,而未治疗的小鼠出现严重的氮质血症,见表1。
212 光镜病理 模型组肾小球系膜区明显增宽,基质大量增生,部分肾小球全球硬化;肾小管多灶性萎缩,管腔内大量蛋白管型,间质大量单个核细胞浸润并有基质沉积。
强的松组和狼疮方组仅见少数肾小球细胞和基质中度增多;偶见蛋白管型,肾间质偶见灶性单个核细胞浸润。
