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口腔粘膜细胞研究报告
口腔粘膜细胞研究报告
摘要：
口腔粘膜细胞是口腔黏膜内部的一类细胞，在口腔健康和疾病过程中起着重要的作用。
本研究旨在探究口腔粘膜细胞的形态结构、生理功能以及相关疾病的发生机制。
通过采集正常口腔黏膜样本和患有口腔疾病的患者样本，对口腔粘膜细胞进行细胞学和分子生物学实验，得出以下研究结果。
结果：
1. 口腔粘膜细胞的形态结构：口腔粘膜细胞主要包括上皮细胞和间质细胞两类。
上皮细胞呈多层鳞状，并具有细胞间连接和微绒毛结构。
间质细胞分布在上皮细胞下方，包括纤维细胞、免疫细胞等多种类型。
2. 口腔粘膜细胞的生理功能：口腔粘膜细胞具有保护口腔黏膜的屏障功能，可以分泌黏液和蛋白质，形成保护性粘液层。
同时，口腔粘膜细胞还参与免疫反应和炎症调节等生理过程。
3. 口腔疾病与口腔粘膜细胞：口腔炎症和口腔癌等口腔疾病与口腔粘膜细胞的异常功能和变异有关。
口腔炎症导致口腔粘膜细胞的炎症反应增加，如细胞凋亡、炎性因子的释放增加等。
口腔癌则可能与口腔粘膜细胞的突变和异常增殖有关。
结论：
口腔粘膜细胞在口腔健康和疾病过程中扮演重要角色。
研究口
腔粘膜细胞的形态结构和生理功能，有助于进一步了解口腔疾病的发生机制和寻找相应的治疗策略。
然而，本研究还存在一些局限性，如样本数量有限以及分子机制的详细研究尚未展开。
未来研究可以进一步扩大样本量，并利用最新的技术手段深入研究口腔粘膜细胞的功能和相关疾病的发生机制。
体外连续培养人口腔粘膜角化细胞中华口腔医学杂志2000年第6期第35卷论著作者：周海文周曾同商庆新曹谊林单位：周海文周曾同（200011 上海第二医科大学口腔医学院口腔内科）；商庆新曹谊林（上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室）关键词：细胞培养；口腔粘膜；角蛋白【摘要】目的建立一个稳定的人正常口腔粘膜角化细胞体外培养体系。
方法取正常口腔粘膜,经Dispase及胰蛋白酶消化获取细胞，采用无血清培养液进行原代及传代培养，并进行形态学观察和角蛋白免疫组化染色等一系列细胞定性研究。
结果获取的细胞为单一上皮细胞；细胞可连续传4～5代，成活30～50d；细胞呈铺路石状，为上皮细胞的典型形态；电镜下见细胞具有丰富的张力丝和桥粒等特征性超微结构；角蛋白免疫组化染色阳性。
结论应用Dispase酶及无血清培养液，在无3T3细胞的条件下可成功进行人正常口腔粘膜角化细胞连续传代培养。
Serial cultivation of normal human oral keratinocytesZHOU Haiwen, ZHOU Zengtong,SHANG Qingxin, et al.(Department of Oral Medicine, School of Stomatology，Shanghai Second Medical University, Shanghai 200011，China)【Abstract】Objective To establish a method of culturing normal human oral keratinocytes. Methods Specimens obtained from healthy humans undergoing oral surgery were dissociated by Dispase and trypsin into a single cell suspension. The cells were grown in serum-free medium. Morphological characteristics were studied under light microscope and electron microscope (EM). Cytokeratins were showed by immunohistochemistry.Results The cells could be maintained in culture up to 4～5 passages, or 30～50 days. EM revealed that there were desmosomes and tonofibrils in the culture cells. The cells showed positive staining for cytokeratin antibody.Conclusions The culture technique for growing normal human oral keratinocytes has been established.【Key words】Cell culture；Mouth mucosa；Keratin多年来，我们依托金黄地鼠为动物模型对口腔粘膜癌前病变的发生、发展及阻断进行了大量的研究，取得了一定的成果。
第1篇一、前言口腔黏膜学是口腔医学的一个重要分支，主要研究口腔黏膜的生理、病理、诊断及治疗等方面的知识。
本报告旨在总结口腔黏膜学在近年来的研究成果和发展趋势，为临床医生提供参考。
二、口腔黏膜学的研究进展1. 口腔黏膜生理研究近年来，口腔黏膜生理研究取得了显著成果。
通过对口腔黏膜细胞生物学、分子生物学、免疫学等方面的研究，揭示了口腔黏膜的生理功能、生长调控、防御机制等。
这些研究为口腔黏膜疾病的治疗提供了理论基础。
2. 口腔黏膜病理研究口腔黏膜病理研究在近年来的发展迅速，对口腔黏膜疾病的诊断和治疗具有重要意义。
通过对口腔黏膜肿瘤、炎症、感染等疾病的病理学特征进行深入研究，有助于提高口腔黏膜疾病的诊断准确率和治疗效果。
3. 口腔黏膜疾病的诊断技术随着医学技术的不断发展，口腔黏膜疾病的诊断技术也取得了很大进步。
如荧光显微镜、电子显微镜、免疫组化、分子生物学等技术，为口腔黏膜疾病的诊断提供了有力支持。
4. 口腔黏膜疾病的治疗方法口腔黏膜疾病的治疗方法主要包括药物治疗、手术治疗、物理治疗等。
近年来，药物治疗在口腔黏膜疾病治疗中的应用越来越广泛，如免疫调节剂、抗病毒药物、抗生素等。
手术治疗在口腔黏膜肿瘤等疾病治疗中具有重要作用。
物理治疗如激光治疗、冷冻治疗等，也在一定程度上提高了口腔黏膜疾病的治疗效果。
三、口腔黏膜学的发展趋势1. 个性化治疗随着口腔黏膜学研究的深入，个体化治疗将成为未来口腔黏膜疾病治疗的发展趋势。
根据患者的具体情况，制定针对性的治疗方案，以提高治疗效果。
2. 多学科合作口腔黏膜疾病涉及多个学科，如口腔医学、皮肤病学、免疫学等。
多学科合作有助于提高口腔黏膜疾病的诊断和治疗水平。
3. 生物治疗生物治疗在口腔黏膜疾病治疗中的应用越来越广泛，如基因治疗、干细胞治疗等。
这些治疗方法有望为口腔黏膜疾病的治疗带来新的突破。
4. 人工智能与大数据人工智能和大数据技术在口腔黏膜学领域的应用将有助于提高疾病的诊断准确率和治疗效果。
口腔上皮细胞实验报告口腔上皮细胞实验报告引言：口腔上皮细胞是口腔黏膜最外层的细胞，具有保护口腔组织免受外界刺激和感染的重要功能。
本实验旨在研究口腔上皮细胞的生长特性、细胞周期以及对不同刺激的应答能力，为口腔疾病的预防和治疗提供理论依据。
材料与方法：1. 实验材料：采集自健康人口腔黏膜组织的上皮细胞。
2. 细胞培养基：含有适宜的营养物质和生长因子。
3. 细胞培养器具：培养皿、离心管等。
4. 细胞培养条件：37°C恒温培养箱，5% CO2培养箱。
实验步骤：1. 细胞采集：采用口腔黏膜刮取法，将采集的组织样本转移到含有PBS的离心管中，用离心机离心收集上皮细胞。
2. 细胞培养：将上皮细胞转移到含有培养基的培养皿中，放入37°C恒温培养箱中培养。
3. 细胞生长曲线测定：每隔24小时观察细胞的形态变化，并用显微镜拍摄照片，计算细胞的增殖速率。
4. 细胞周期测定：采用流式细胞术分析细胞在G1、S和G2/M期的比例。
5. 细胞刺激实验：将细胞暴露于不同的刺激物，如病原微生物、药物等，观察细胞的应答能力。
结果与讨论：1. 细胞生长特性：口腔上皮细胞在培养基中呈现出典型的“培养皿覆盖率”生长曲线，即呈指数增长。
初期细胞黏附于培养皿表面，随着时间的推移，细胞数量逐渐增多，最终覆盖整个培养皿。
2. 细胞周期：流式细胞术结果显示，口腔上皮细胞主要集中在G1期，其次是S 期和G2/M期。
这表明口腔上皮细胞在培养条件下具有较长的细胞周期，细胞增殖速率相对较慢。
3. 细胞对刺激的应答能力：口腔上皮细胞对不同刺激物的应答能力表现出差异。
在病原微生物的刺激下，细胞可能产生炎症反应，如细胞浸润和炎性因子的释放。
而在药物刺激下，细胞可能表现出增殖抑制或细胞凋亡等反应。
结论：口腔上皮细胞具有较快的生长能力和较长的细胞周期，能够对外界刺激做出相应。
然而，口腔上皮细胞对不同刺激的应答能力可能存在差异，这可能与个体差异、环境因素以及细胞状态等有关。
口腔上皮细胞生物论文5300字_口腔上皮细胞生物毕业论文范文模板口腔上皮细胞生物论文5300字(一)：不同生物状态白色念珠菌对口腔上皮细胞的黏附能力及ALSmRNA表达论文[摘要]目的观察不同生物状态白色念珠菌对口腔上皮细胞的黏附能力及ALS mRNA表达，以期揭示口腔白色念球菌感染机制。
方法将白色念珠菌3683、SC 5314、3630与来源于50名健康志愿者的口腔上皮细胞混合培养，采用革兰阳性染色观察白色念珠菌的黏附能力，采用荧光定量RT-PCR法检测白色念珠菌368 3、SC5314、3630中ALS2及ALS3mRNA表达情况。
采用SPSS15.0统计学软件进行数据分析。
结果黏附实验结果显示，3株白色念珠菌均可黏附于口腔上皮细胞，且菌株3683黏附数量明显多于菌株SC5314和菌株3630，统计学比较显示，差异有统计学意义（P<0.05），而菌株SC5314和菌株3630黏附数量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
荧光定量RT-PCR结果显示，白色念珠菌3683、SC5314、3630中均能检测到ALS2及ALS3mRNA表达，其中，菌株3683ALS2及ALS3mRNA表达水平均高于菌株SC5314和菌株3630，统计学比较显示，差异有统计学意义（P<0.05）；菌株3630ALS2及ALS3mRNA表达水平均高于菌株SC5314，但两者比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
结论不同生物状态白色念珠菌的口腔上皮细胞黏附能力不同，菌株黏附能力的强弱可能与其ALS2及ALS3基因情况表达相关。
[关键词]白色念珠菌；口腔上皮细胞；黏附能力；基因表达[中图分类号]R781[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2015）09（b）-0 016-04白色念珠菌为条件致病菌，长居于人体口腔、皮肤、胃肠道等部位，在维持机体生态平衡方面发挥重要作用。
近年来由于免疫抑制剂、抗生素等的广泛使用，及糖尿病、艾滋病等发病率的逐年增加，导致患者机体免疫力低下，菌群失衡，使得白色念球菌大量繁殖，口腔白色念球菌感染率增加。
口腔内科论文口腔上皮细胞论文：口腔黏膜上皮细胞体外培养的影响因素分析及改进方法[摘要] 目的分析人口腔黏膜上皮细胞培养的影响因素，并建立稳定的细胞培养体系。
方法新洁尔灭和硫酸庆大霉素联合处理口腔黏膜标本，比较不同浓度的Dispase对上皮的分离作用，酶消化法分离细胞，采用无血清培养液进行原代和传代培养。
结果微生物污染得到有效控制，0.40%的Dispase 的上皮分离效果优于0.25%的Dispase，细胞在短期内快速稳定增殖。
结论人口腔黏膜上皮细胞的原代培养方法经改进后可简化操作，并提高成功率。
[关键词] 细胞培养；口腔黏膜；上皮细胞人口腔黏膜上皮细胞的体外培养对于研究口腔黏膜上皮细胞的生理、病理变化，上皮癌变过程以及组织工程化黏膜的构建具有重要意义。
多年来，国内外许多学者一直致力于获得更为完善有效的口腔黏膜上皮细胞的培养体系。
但是微生物的污染、人类黏膜组织来源的限制、上皮细胞不能贴壁以及所需营养成分复杂等仍然是上皮细胞培养成功的主要影响因素[1]。
本研究对这些影响因素进行分析，试图通过培养体系的改进而探索更好的口腔黏膜上皮细胞的体外培养方法。
1材料和方法1.1组织来源2004年10月—2005年6月于吉林大学口腔医院口腔颌面外科取唇裂修复术、智齿拔除术和鳞癌手术切除的口腔黏膜正常组织24例，患者年龄6个月～76岁。
其中，鳞癌患者的正常黏膜取自手术切除组织的边缘，并经病理切片证实无上皮异常增生，也未发生癌变。
1.2主要试剂分离酶Dispase和角化细胞无血清培养液（keratinocyte-serum free medium，K-SFM）（Gibco公司，美国）；胰蛋白酶（上海生物工程有限公司）；胎牛血清（天津灏洋）；鼠抗人广谱单克隆角蛋白抗体AE1/AE3及SP免疫组化试剂盒（福州迈新）；其余试剂均为国产分析纯。
1.3主要仪器和器材CO2饱和湿度细胞培养箱（Napco公司，美国）；倒置相差显微镜（Olympus公司，日本）；超净工作台（苏州净化设备厂）；一次性细胞培养板和培养皿（NUNC公司，丹麦）；0.22μm微孔滤器（Corning公司，美国）。
口腔黏膜上皮细胞体外培养的影响因素分析及改进方法王翔;高文信;王莉;魏秀峰;陈英新;王晓峰【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】2007(25)1【摘要】目的分析人口腔黏膜上皮细胞培养的影响因素,并建立稳定的细胞培养体系.方法新洁尔灭和硫酸庆大霉素联合处理口腔黏膜标本,比较不同浓度的Dispase 对上皮的分离作用,酶消化法分离细胞,采用无血清培养液进行原代和传代培养.结果微生物污染得到有效控制,0.40%的Dispase的上皮分离效果优于0.25%的Dispase,细胞在短期内快速稳定增殖.结论人口腔黏膜上皮细胞的原代培养方法经改进后可简化操作,并提高成功率.【总页数】4页(P79-82)【作者】王翔;高文信;王莉;魏秀峰;陈英新;王晓峰【作者单位】吉林大学口腔医院,黏膜病科,吉林,长春,130041;吉林大学口腔医院,黏膜病科,吉林,长春,130041;吉林大学基础医学院,免疫学教研室,吉林,长春,130021;吉林大学口腔医院,黏膜病科,吉林,长春,130041;吉林大学口腔医院,黏膜病科,吉林,长春,130041;吉林大学口腔医院,黏膜病科,吉林,长春,130041【正文语种】中文【中图分类】R781.5【相关文献】1.门诊输液室工作效率影响因素分析及改进方法 [J], 胡绮红2.HVDC直流有源滤波器容量的影响因素分析及其改进方法 [J], 孙正;李可军;王宇红;牛林3.口腔黏膜上皮细胞体外培养的研究 [J], 潘宣;周健;曾融生4.江汉大学图书馆文献流通工作的影响因素分析及其改进方法研究 [J], 周红5.基于灰色关联度改进方法的PPP模式的影响因素分析及对策研究 [J], 宋健民;张志伟;陶涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
口腔粘膜上皮细胞原代培养影响因素分析
丁桂聪;毛天球;陈富林;杨维东;陶凯
【期刊名称】《口腔医学纵横》
【年(卷),期】2001(17)2
【摘要】目的 :分析影响口腔粘膜上皮细胞原代培养影响因素 ,探讨理想的培养条件。
方法 :观察不同的标本处理方法 ,上皮分离方法以及上皮消化酶对原代培养成功率、细胞融合和活细胞率的影响。
结果 :标本处理方法、上皮分离方法以及上皮消化酶分别对原代培养污染机率 ,细胞融合时间和活细胞率有影响。
结论 :口腔粘膜上皮细胞原代培养按优化方法可获得较高的成功率。
【总页数】2页(P111-112)
【关键词】口腔粘膜;上皮细胞;细胞培养
【作者】丁桂聪;毛天球;陈富林;杨维东;陶凯
【作者单位】第四军医大学口腔医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R329－33
【相关文献】
1.口腔黏膜上皮细胞体外培养的影响因素分析及改进方法 [J], 王翔;高文信;王莉;魏秀峰;陈英新;王晓峰
2.原代HUVECs分离培养关键影响因素分析 [J], 朱丹;古丽丽;黄秀兰
3.五种抗肿瘤药物对原发性乳腺癌原代培养细胞化疗效果的影响因素分析 [J], 姜
鹏玲;尼杰;谷峰;李春艳;张敏;付丽;只向成
4.影响人胃癌原代细胞纯化培养结果的临床因素分析 [J], 许洪伟;朱菊人;王春霞;劳萍;姜军梅
5.鸡BCs原代培养贴壁性影响因素分析 [J], 王坤;张佰忠;易康乐;蒋隽;王庆桥;李昊帮;燕海峰
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
_观察人的口腔上皮细胞_实验细节的改进_李连成“观察人的口腔上皮细胞”实验细节的改进李连成田小菲李明新疆乌鲁木齐市实验学校（830026）用嘴吹气来配合左右手将盖玻片擦拭干净。
建议：教师在取盖玻片或递盖玻片给学生时，用手指对捏其两边，学生用手接住时也轻捏着对边；在放置时，斜搭在某一物品旁，以便于取用，且不易破碎。
二、滴———滴加生理盐水在正常情况下，用滴管滴一滴即可。
教师注意强调两点：一是在使用滴管时不要倒置，二是请学生思考为什么要滴生理盐水。
三、刮———刮取口腔上皮细胞取材的部位和取材的多少都会影响到学生的观察效果，这一步很关键。
“口腔内侧壁”使用通俗语言解释就是“腮帮子内侧”，这样表述学生更容易明白；教师使用整个左手掌（手指伸开）稍向内侧弯曲，伸到左脸颊旁边，直观表示口腔壁，右手用铅笔（或中性笔、其他物品）的钝端代表牙签，在手掌内侧自上而下刮几下即可。
向下时用力，并且边刮边转动牙签，让钝端四周尽可能都刮取好上皮细胞。
强调：刮的力度以自己能承受为准。
另外，人们在使用牙签时，一般都是手持钝端，用尖锐的一端来刮取；不少学生看到教师或其他同学使用尖锐端在口腔内侧壁上刮时，自然产生一定担忧而影响刮取的效果。
建议：购买只有一端尖锐的牙签，且使用牙签的钝端在口腔壁内侧刮取（向下时用力，并且边刮边转动牙签），使整个牙签钝端的四周都刮取好口腔上皮细胞，以保证材料充足，效果明显。
四、涂———将口腔上皮细胞涂抹在生理盐水中将牙签钝端在生理盐水中转动涂抹，以便使刮下的细胞尽可能洗落在生理盐水中；之后不要丢弃牙签，而是用纸擦一擦牙签的钝端，放在一旁备用。
五、染———使用碘液染色笔者将教材上使用的染色方法称为常染法，即通常使用的染色方法。
下面笔者介绍一种方法———加滴法。
如今看来，叫做“直染法”、“先染法”或是“染盖法”更合适。
具体方法：当涂抹之后，用滴管吸取碘液直接滴在生理盐水上，再盖好盖玻片。
根据（下转第36页）在人教版义务教育教科书生物学七年级上册教材中，“观察人的口腔上皮细胞”是继“观察植物细胞”之后的又一个练习临时装片制作的实验。
口腔内科论文口腔上皮细胞论文：口腔黏膜上皮细胞体外培养的影响因素分析及改进方法[摘要] 目的分析人口腔黏膜上皮细胞培养的影响因素，并建立稳定的细胞培养体系。
方法新洁尔灭和硫酸庆大霉素联合处理口腔黏膜标本，比较不同浓度的Dispase对上皮的分离作用，酶消化法分离细胞，采用无血清培养液进行原代和传代培养。
结果微生物污染得到有效控制，0.40%的Dispase 的上皮分离效果优于0.25%的Dispase，细胞在短期内快速稳定增殖。
结论人口腔黏膜上皮细胞的原代培养方法经改进后可简化操作，并提高成功率。
[关键词] 细胞培养；口腔黏膜；上皮细胞人口腔黏膜上皮细胞的体外培养对于研究口腔黏膜上皮细胞的生理、病理变化，上皮癌变过程以及组织工程化黏膜的构建具有重要意义。
多年来，国内外许多学者一直致力于获得更为完善有效的口腔黏膜上皮细胞的培养体系。
但是微生物的污染、人类黏膜组织来源的限制、上皮细胞不能贴壁以及所需营养成分复杂等仍然是上皮细胞培养成功的主要影响因素[1]。
本研究对这些影响因素进行分析，试图通过培养体系的改进而探索更好的口腔黏膜上皮细胞的体外培养方法。
1材料和方法1.1组织来源2004年10月—2005年6月于吉林大学口腔医院口腔颌面外科取唇裂修复术、智齿拔除术和鳞癌手术切除的口腔黏膜正常组织24例，患者年龄6个月～76岁。
其中，鳞癌患者的正常黏膜取自手术切除组织的边缘，并经病理切片证实无上皮异常增生，也未发生癌变。
1.2主要试剂分离酶Dispase和角化细胞无血清培养液（keratinocyte-serum free medium，K-SFM）（Gibco公司，美国）；胰蛋白酶（上海生物工程有限公司）；胎牛血清（天津灏洋）；鼠抗人广谱单克隆角蛋白抗体AE1/AE3及SP免疫组化试剂盒（福州迈新）；其余试剂均为国产分析纯。
1.3主要仪器和器材CO2饱和湿度细胞培养箱（Napco公司，美国）；倒置相差显微镜（Olympus公司，日本）；超净工作台（苏州净化设备厂）；一次性细胞培养板和培养皿（NUNC公司，丹麦）；0.22μm微孔滤器（Corning公司，美国）。
1.4方法1.4.1标本处理无菌条件下所取的口腔黏膜组织立即保存于D-Hank′s液中，半小时内运送至细胞培养室。
超净台内组织标本经PBS洗净血迹，0.06%的新洁尔灭（苯扎溴铵）溶液浸泡2 min，再用含有硫酸庆大霉素的PBS（2g/L）依次浸泡10min、3min和2min。
处理后的标本经眼科剪剪去部分黏膜下组织，并修剪成0.3 cm×0.8 cm大小的组织块。
1.4.2黏膜上皮的分离所有黏膜组织被随机分为2组。
一组黏膜标本放入0.25%的Dispase中，另一组黏膜标本放入0.40%的Dispase中，2组均置于4℃下消化22 h。
取出后用眼科镊分别夹持标本的上皮层和上皮下层，将上皮分离下来，弃去上皮下层。
经3位实验者完成操作，并一致确认每例标本上皮分离的结果，评判标准如下。
①有分离作用：标本的上皮被完整或部分分离下来；②完整分离作用：每块标本的上皮均被完整分离下来；③无分离作用：每块标本的上皮均不能分离下来。
分别记录每组有上皮分离作用的例数，计算分离率。
分别记录每组有完整分离作用的例数，计算完整分离率。
比较2组分离率和完整分离率。
1.4.3上皮细胞的培养原代培养方法：上皮经PBS冲洗后加入到0.125%胰蛋白酶与0.01%EDTA（1∶1）的混合消化液中37℃下消化5～10 min（2 min振荡1次），轻轻吹打，用含10%胎牛血清的D-Hank′s液终止消化，用吸管吹打成细胞悬液，经200目无菌尼龙滤网过滤。
PBS洗涤2遍，离心500 r/min×10 min。
细胞沉淀在K-SFM中重悬，血球计数板计数。
细胞悬液以2.5×105个/cm2的密度接种于培养板中，置37℃5%CO2细胞培养箱中静置培养。
第3天首次换液，培养液移入新孔中使未贴壁细胞继续贴壁。
以后隔天换液1次。
传代培养方法：当细胞达到80%～90%汇合时，吸去培养液，0.25%胰蛋白酶与0.02%EDTA（1∶1）的混和消化液消化细胞，至镜下观察细胞突起回缩，细胞变圆时终止消化，吸管反复吹打，离心800 r/min×8 min，K-SFM重悬细胞沉淀，细胞悬液以1∶2的比例接种于培养板或培养皿中继续培养，以后隔天换液1次。
1.4.4细胞形态学观察采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化及生长增殖情况并拍摄照片。
1.4.5免疫细胞化学染色取第2代细胞制细胞爬片，PBS洗涤3次后，4%的多聚甲醛溶液固定30 min，0.3%Trtion-100室温下处理10 min。
用广谱单克隆角蛋白抗体及SP免疫组化试剂盒按试剂盒说明书进行免疫组化染色。
以正常口腔黏膜组织石蜡切片为阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照。
1.5统计学分析将各组数据输入SAS 6.12统计软件，经Fisher确切概率法（Fisher′s exact test）检验，P<0.05具有统计学意义。
2结果2.1上皮分离结果在4℃下，0.25%的Dispase对上皮的分离效果差，多例分离结果为无分离作用，极少结果为完整分离作用；而0.40%的Dispase分离效果较好，多例分离结果为有分离作用，有些上皮可完整地脱离下来或用镊子轻轻一揭即可完整分离。
两种浓度Dispase的上皮分离作用的比较见表1，经Fisher 确切概率法检验，2种浓度的Dispase对人口腔黏膜上皮均有分离作用，但两组分离率的差异无统计学意义（P>0.05），0.40%浓度组有更高的趋势；2组完整分离率的差异有统计学意义（P<0.05）。
2.2标本处理效果和原代培养成功率各例上皮细胞原代培养过程中均未发生微生物污染。
原代培养成功率为12.5%（3/24），其中13例有上皮分离作用的原代培养成功率为23.1%（3/13）。
2.3原代形态学观察结果倒置相差显微镜下，胰酶消化后的上皮细胞大小不一，形态多样，其中小圆形细胞为具有增殖能力的健康细胞。
接种后24 h，部分细胞贴附于孔底，随后细胞继续贴壁。
刚贴壁的细胞折光性强，一般为圆形、椭圆形和三角形。
随后细胞双极或多级伸出短小伪足，胞质逐渐展开。
完全伸展的细胞呈扁平的椭圆形或多角形，胞核清晰，位于细胞中央，核仁1~2个。
细胞一贴壁生长，就开始分裂增殖；2～3 d后，细胞数量明显增多，大小均一或散在个别不均一的大细胞。
培养5 d左右时，细胞接近汇合，如铺路石状镶嵌（图1），高倍镜下可见部分细胞间波浪状或细丝状连接，似细胞间桥样结构。
首次换液移出的细胞在换液后20 d左右达到80%的汇合，也呈铺路石状外观，但部分细胞胞浆内出现空泡，而且伸出细长伪足的细胞数量较多。
2.4传代形态学观察结果细胞生长至80%～90%汇合时传代。
传代细胞贴壁比原代细胞快。
12~24 h传代细胞即可贴壁伸展。
第2~3代是细胞生长的“黄金时期”，在增殖期间细胞呈椭圆形、短梭形或多角形，核分裂相多见，出现接触抑制现象，仍呈铺路石状排列，并散在个别较大的细胞（图2）。
第4~5代，细胞形态逐渐变得不规则，有的细胞伸出长的伪足与邻近或远隔细胞相接。
细胞胞浆内出现细小空泡和黑色颗粒，细胞增殖减慢，直至停滞。
细胞逐渐衰老枯萎脱落。
2.5免疫细胞化学检测结果实验组：角蛋白染色阳性，可见胞浆呈均匀的棕黄色，胞核呈淡蓝色（图3）。
阳性对照组：上皮全层染色阳性，胞浆棕黄色；阴性对照：阴性。
3讨论由于口腔黏膜处于有菌的环境中，所以微生物污染是上皮细胞培养的主要问题[1-2]，而且利用癌症患者的口腔黏膜标本进行原代培养时，组织带菌量更高[3]，可能是导致污染率增加的原因之一[1]。
本研究的部分上皮组织来源于口腔癌患者，因此标本的消毒处理对于原代培养的成功显得尤为重要。
以往的研究[1]指出甲醛溶液和乙醇等消毒剂在灭菌的同时也杀死了细胞，抗生素浓度的增加又导致细胞生长和形态的异常。
新洁尔灭是阳离子表面活性广谱杀菌剂，一般对G+菌杀菌效果较强，而对G-菌杀灭效果较差。
已有学者在牛眼小梁细胞和兔口腔黏膜细胞的原代培养中将新洁尔灭溶液用于标本的消毒处理，成功地进行了体外细胞培养[4-5]。
考虑到口腔微生物群中G-菌和兼性厌氧菌占很大的比例，硫酸庆大霉素对G-菌杀灭效果较好，而且是抗需氧菌和兼性厌氧菌的有效药物，因此本研究采用硫酸庆大霉素溶液进行标本的进一步处理。
本实验将新洁尔灭和硫酸庆大霉素联合应用于人口腔黏膜标本的处理，原代培养过程中均未发生污染，并且缩短了处理时间，简化了操作，避免传统方法中多种抗生素长时间作用对细胞生长和形态的影响。
因为上皮角化细胞生长需要局部分泌的生长因子，只有达到一定的细胞接种密度才能自我维持，所以组织大小对口腔黏膜上皮细胞培养的成功也是重要的[1]。
Dispase是芽孢杆菌产生的一种中性蛋白酶，能选择性分解基膜的纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原，可将上皮层从基膜处完整分离，保留上皮细胞的活力，作用快速、温和。
与胰酶相比，Dispase完整分离上皮可获得单一的上皮细胞，避免成纤维细胞的污染，而且完整分离上皮可更好地保留基底细胞层，从而获取更多的增殖细胞。
合适浓度的Dispase分离的上皮越完整则从有限的人口腔黏膜组织中获得的上皮细胞也越多。
目前，国内外学者多采用0.25%或0.40%的Dispase进行上皮或表皮的分离，但有关Dispase浓度对上皮或表皮分离作用的影响报道极少。
Fujita等[6]研究表明，裸鼠真皮表皮分离的效果取决于Dispase的浓度和皮肤所在的部位。
伍津津等[7]对人真皮表皮分离方法的研究表明，在4℃下0.1%浓度的Dispase基本上没有分离作用，0.2%浓度有一定的分离效果，但不能完全分离表皮，而0.5%浓度分离效果非常理想，用镊子轻轻一揭便可将整个表皮完整地揭下来。
本实验借助统计学研究方法，对常用浓度的Dispase分离口腔黏膜上皮的作用进行分析，认为4℃下0.40%的Dispase对人口腔黏膜上皮分离效果优于0.25%的Dispase，可获得更多完整的上皮。
此外笔者以高密度接种细胞，使原代培养细胞快速增殖，在短期内达到传代要求。
上皮细胞不能贴壁是上皮细胞原代培养失败的一个常见原因。
胰酶对上皮细胞的损伤可能是细胞不贴壁的重要原因。
胰酶分解细胞膜表面蛋白质，增加细胞通透性，加重离心对细胞损伤，而且细胞粘附相关的蛋白质也可能被消化，从而使细胞难以贴壁。
因此，笔者采用低浓度的胰酶和EDTA 的混合消化液进行单细胞悬液的获取，并且采用低强度，较长时间离心，从而降低细胞的损伤，并尽量避免细胞的丢失。
另外，笔者将首次换液移出的细胞接种，使未贴壁细胞继续贴壁，在较长时间的增殖后，细胞达到了汇合，增加了可扩增的细胞数量。
