在生物化学学生实验及酶学实验中, 酶的特征 常数 米氏 常数 Km 的 测定 是必 须做 的一 个试验。 但是该实验对实验者在操作中的要求较高。通过几 年的教学实验, 笔者发现学生往往很难得到理想的 结果。不是因为学生的能力差 , 而是实验本身在设 计上有值得改进之处。 一、 实验中存在的问题 生物化学实验教学中 , 多年来药学院校一直采 用的教材是 生物化学实验与指导 ( 中国医药科技 出版社, 韦平和主编 ) 。米氏常数的实验是测定酵母 中蔗糖酶的 Km, 通常将它作为考试实验, 学生在做 实验时更紧张, 更容易出现问题, 常常不能取得预期 的结果。 该实验原理为: 蔗糖酶水解蔗糖生成葡萄糖, 葡 萄糖与二硝基水杨酸反应生成有颜色的物质, 经比 色分析, 测定生成的还原性葡萄糖的含量, 以确定酶 的反应活力。 在该实验教材中 , 显色是以 3 ml 的二硝基水杨 酸与葡萄糖进行反应 , 溶液稀释至 25 ml, 然后进行 显色沉淀以确定蔗糖 水解的反应初速 度。以 5 ml 0 1mol/ L NaOH 终止酶反应。然而使用 这种方法 , 大部分学生难以在初次做酶学 实验获得理想 的结 果。 二、 教学中改进 基于酶学实验的特性和学生实验的特点, 在教 学中首先做了如下改进: 1 将 3 ml 二硝基水杨酸改为 1 ml 进行反应。 因为加入 3 ml 二硝基水杨酸后反应总体积为 5 ml, 已经适合做比色测定 , 并且不浪费。
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