【米氏常数】 米氏常数测定实验报告.docx

米氏常数实验报告米氏常数实验报告引言：米氏常数是物理学中的一个重要常数，它描述了光在真空中的传播速度。

在本次实验中，我们将通过测量光的传播时间和光程差来确定米氏常数的数值。

通过这个实验，我们将更深入地了解光的性质和光在空间中的传播规律。

实验目的：本实验的目的是通过测量光的传播时间和光程差来确定米氏常数的数值，并验证光在真空中的传播速度是否恒定。

实验器材：本实验所需的器材包括：激光器、分光镜、反射镜、光电探测器、计时器等。

实验步骤：1. 首先，我们将激光器置于实验室的一端，并将其打开。

确保激光器产生的光束是稳定的。

2. 接下来，我们将分光镜放置在激光器的光路中，并调整其角度，使得光束被分光镜分为两束相等的光束。

3. 将两束光束分别引导至反射镜，并使其分别反射回来。

4. 在光束返回的路径上，我们将安装光电探测器，并将其与计时器相连。

5. 开始实验时，我们同时启动激光器和计时器，并记录下光束从激光器发出到光电探测器接收到的时间。

6. 重复实验多次，取平均值作为最终的测量结果。

实验结果：通过多次实验测量，我们得到了光的传播时间和光程差的数据。

根据这些数据，我们可以计算出米氏常数的数值。

讨论与分析：在本次实验中，我们得到了光的传播时间和光程差的数据，进而计算出了米氏常数的数值。

通过比较实验结果与已知的米氏常数数值，我们可以验证光在真空中的传播速度是否恒定。

此外，本实验还可以用于研究光在不同介质中的传播速度。

通过将光束传播到不同介质中，我们可以测量光的传播时间和光程差，并计算出不同介质中的米氏常数。

这有助于我们更深入地了解光在不同介质中的传播规律。

结论：通过本次实验，我们成功地测量了光的传播时间和光程差，并计算出了米氏常数的数值。

实验结果与已知的米氏常数数值相符，验证了光在真空中的传播速度是恒定的。

此外，本实验还为研究光在不同介质中的传播速度提供了一种方法。

总结：米氏常数实验是一项重要的实验，通过测量光的传播时间和光程差，我们可以确定光在真空中的传播速度。

底物浓度对酶促反应速度的影响——米氏常数的测定一．目的要求1.1了解底物浓度对酶促反应的影响。

1.2掌握测定米氏常数K m 的原理和方法。

二．实验原理酶促反应速度与底物浓度的关系可用米氏方程来表示：式中：v ——反应初速度（微摩尔浓度变化/min ）；V ——最大反应速度（微摩尔浓度变化/min ）； [s]——底物浓度（mol/L ）； K m ——米氏常数（mol/L ）。

这个方程表明当已知K m 及V 时，酶促反应速度与底物浓度之间的定量关系。

K m 值等于酶促反应速度达到最大反应速度一半时所对应的底物浓度，是酶的特征常数之一。

不同的酶，K m 值不同，同一种酶与不同底物反应K m 值也不同，K m 值可以近似地反应酶与底物的亲和力大小：K m 值越大，表明亲和力小；K m 值小，表明亲和力大。

则测K m 值是酶学研究的一个重要方法。

大多数纯酶的K m 值在0.01～100mmol/L 。

Linewaeaver-Burk 作图法（双倒数作图法）是用实验方法测K m 值的最常用的简便方法：实验时可选择不同的[s]，测定对应的v ，以 对 作图，得到一个斜率为V Km的直线，其截距][1s 则为mK 1，由此可求出K m 的值（截距的负倒数）。

本实验以胰蛋白酶消化酪蛋白为例，采用Linewaeaver-Burk 双倒数作图法测定双倒数作图法。

胰蛋白酶催化蛋白质中碱性氨基酸（L-精氨酸和L-赖氨酸）的羧基所形成的肽键水解。

水解时有自由氨基生成，可用甲醛滴定法判断自由氨基增加的数量而跟踪反应，求得初速度。

][][s K s V v m +=V s V K v m 1][1.1+=v 1][1s三．试剂和器材3.1 试剂A.10～30g/L的酪蛋白溶液（pH8.5）：分别取10、20、25、30g酪蛋白溶于约900mL水中，加20mL 1mol/L NaOH 连续振荡，微热直至溶解，以1mol/L HCl 或1mol/L NaOH调pH至8.5，定容1L，即生成四种不同[s]的酪蛋白标准溶液。

酶活米氏常数实验一、实验前准备1、24孔板洗净烘干，准备足够枪头。

2、准备催化剂，在光下呈透明状为分散性较好，否则用超声清洗器（位于化学间）超声分散5min，期间准备底物（如TMB或者ABTS），浓度依照自己实验的要求定（10mg/mL 或5mg/mL），一般1mL足够用，可在1.5mL离心管中溶解。

TMB（外间冰箱上层）溶于DMSO（二甲亚砜，位于化学间王春雨的柜子里），ABTS（与TMB放在一起）溶于二次水。

3、将缓冲液、催化剂、底物、H2O2、200µL和10µL移液枪、50µL排枪（位于称量处上方模拟酶专用枪的柜中）、96孔板、24孔板、卷纸一起放入纸盒中，放到对面酶标仪前，开空调定室温（25℃，提醒其他人随手关门），24孔板中其中一排加入适量H2O2（每孔1mL 左右，注意避光，可在板上盖一张卷纸），将缓冲液、催化剂、底物放实验台上，静置0.5-1h。

4、记录本上提前写好实验的加样顺序：催化底物TMB（或ABTS）的酶促动力学过程加样顺序：①200µL缓冲液②10µL催化剂③底物TMB（ABTS）(0，0.5，1，2，4，6，8，10µL) ④32µLH2O2（排枪加）催化底物H2O2的酶促动力学过程加样顺序：①200µL缓冲液②10µL催化剂③H2O2（2，4，6，8，10，16，32，64µL）④10µL底物TMB（ABTS）（排枪加）数据记录按下表记，Code为每次读板时的微孔板编号，Time为对应的读板时的时间，一般30s读板一次，可根据反应的快慢来确定读板的时间。

Code 1 2 3 4 5 6 7TimeTMB 0 0.5 1 2 4 6 8 10V01Code 1 2 3 4 5 6 7TimeH2O2 2 4 6 8 10 16 32 64V01二、实验1、打开酶标仪（开关在仪器后部，若仪器没反应，请检查电源是否接通），密码为5个0，按Enter键进入系统。

【米氏常数】米氏常数测定实验的报告.docx米氏常数是一个经验参数，它是用于测量基质和溶质之间相互作用的重要参数。

米氏常数的测定涉及到溶质和基质的相互作用，主要是通过溶解度进行测定。

下面就是本实验的报告。

实验背景米氏常数是用来描述溶质在溶液中浓度度量的非线性关系的参数。

米氏方程如下：Ksp = [A+]^m [B-]^n其中Ksp是溶解度积常数，[A+]和[B-]分别表示电离度为1的正离子和负离子的浓度，m和n分别为正离子和负离子在配位物中的摩尔数。

溶解度积（或离解平衡常数）是可以直接从溶解度数据中获得的参数，这些参数是根据溶解度测量推导出来的，通常采用天平法或者滴定法进行测量。

实验目的本实验的目的是测定铅酸盐的米氏常数，用溶解度法测定铅酸盐的溶度积常数，并根据米氏方程计算米氏常数。

实验原理铅酸盐在水溶液中的离解方程式：PbSO4(s) ⇆ Pb2+(aq) + SO42-(aq)溶解度积常数是根据溶解度求出的：对于低溶度度超取6.5，我们软件系统一压根对孔直接忽略其离子反应方程中的y。

实验流程1. 准备1 L的稀铅酸溶液（2 × 10-5 mol/L）2. 取0.2 mL的稀铅酸热解，目测重量大概是0.03 g左右。

3. 将稀铅酸加入100 mL的无铅纯水溶液中，然后调整pH值，使稀铅酸与水达到最大的平衡浓度。

4. 记录溶解度数值，并计算铅酸盐的溶解度积常数。

实验结果1. 初始重量为0.03 g的铅酸盐溶解后，其溶解度为5.5 × 10-5 mol/L。

2. 根据铅酸盐的溶解度计算溶解度积常数Ksp为3.025 × 10-9。

3. 根据米氏方程Ksp = [Pb2+][SO42-]，计算出米氏常数为1.79。

一、实验目的1. 理解并掌握米氏常数（Km）及其与最大反应速度（Vmax）的关系。

2. 通过实验测定酶的米氏常数，了解酶与底物之间的亲和力。

3. 学习并掌握酶促反应动力学的基本原理和实验方法。

二、实验原理米氏常数（Km）是酶的特征性常数，表示酶与底物结合的亲和力。

在一定的实验条件下，酶促反应的初速度（v）与底物浓度（[S]）之间的关系可用米氏方程表示：\[ v = \frac{V_{max} [S]}{Km + [S]} \]当底物浓度很低时，酶促反应速度与底物浓度成正比，随着底物浓度的增加，反应速度逐渐加快，但增速逐渐减慢。

当底物浓度增加到一定程度时，反应速度达到最大值（Vmax），此时酶已全部被底物饱和。

本实验采用分光光度法测定酶的米氏常数。

实验中，通过改变底物浓度，测定不同浓度下酶促反应的初速度，根据米氏方程绘制v/[S]对1/[S]的曲线，通过线性回归分析求出曲线的斜率和截距，进而计算出Km和Vmax。

三、实验材料与仪器材料：1. 酶制剂（如蔗糖酶、淀粉酶等）2. 底物溶液（如葡萄糖溶液、淀粉溶液等）3. 碳酸盐缓冲液4. 4-氨基安替比林5. 铁氰化钾6. 0.1 mol/L NaOH溶液7. 葡萄糖标准溶液仪器：1. 分光光度计2. 移液管3. 移液器4. 恒温水浴5. 试管6. 比色皿四、实验步骤1. 制备酶溶液：将酶制剂溶解于适量的碳酸盐缓冲液中，调节pH值至最适值，稀释至一定浓度。

2. 制备底物溶液：将底物溶液稀释至不同浓度，备用。

3. 测定酶促反应初速度：a. 将不同浓度的底物溶液分别加入试管中，加入适量的酶溶液。

b. 将试管放入恒温水浴中保温一段时间。

c. 取出试管，立即加入适量的4-氨基安替比林和铁氰化钾，充分混匀。

d. 在分光光度计上测定溶液的吸光度，记录数据。

4. 数据处理：a. 以底物浓度[S]为横坐标，酶促反应速度v为纵坐标，绘制v/[S]对1/[S]的曲线。

b. 对曲线进行线性回归分析，求出曲线的斜率和截距。

碱性磷酸酶米氏常数测定P60【实验原理】在环境的温度、pH和酶的浓度一定时，酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时，酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。

若继续增加底物浓度，反应速度的增加率将减少。

当底物浓度增加到某种程度时，反应速度会达到一个极限值，即最大反应速度(V max)，如图所示。

底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。

V = V max[S]/(K m+[S])上式中V max为最大反应速度，[S]为底物浓度，K m为米氏常数(Michaelis constant)，而其中V则表示反应的起始速度。

当V= V max/2时，K m=[S]。

所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。

因此K m的单位以摩尔浓度(mol／L)表示。

K m是酶的最重要的特征性常数，测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法，大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。

酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定，K m值也就不易准确测出。

林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程，推导出如下方程式，即：1/V = （K m +[S]）/ V max[S]或1/V = K m/ V max·（1/[S]）+1/ V max此式为直线方程，以不同的底物浓度1/[S]为横坐标，以1/V为纵坐标，并将各点连成一直线，向纵轴方向延长，此线与横轴相交的负截距为-1/ K m，由此可以正确求得该酶的K m值，如图所示。

本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同底物浓度的酶活性，再根据Lineweaver-Burk法作图，计算其K m值。

可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多，底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。

本实验以磷酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催化水解，生成游离酚和磷酸盐。

酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化，生成红色的醌衍生物，颜色深浅和酚的含量成正比。

双倒数法测定过氧化物酶的米氏常数学院/专业/班级____________________________________________ 姓名_______________ 合作者___________________________________________________ 教师评定___________【实验目的】以过氧化物酶为例，掌握测定酶促反应初速率和米氏常数的原理及方法【实验原理】1913年，Michaelis 和Menten 运用酶反应过程中形成中间络合物的原理，首先提出了底物浓度和酶促反应速率的关系式，即著名的米氏方程：[][]S K S V v m max +⋅= 式中：v 为反应初速率（微摩尔浓度变化/min ）；V max 为最大反应速率（微摩尔浓度变化/min ）；[S ]为底物浓度（mol/L ）；K m 为米氏常数（mol/L ）。

这个方程式表明当已知K m 及V max 时，酶反应速率与底物浓度之间的定量关系。

K m 值等于酶促反应速率达到最大反应速率一半时所对应的底物浓度，是酶的特征常数之一。

不同酶的K m 值不同，同一种酶与不同底物反应K m 值也不同，K m 值可以近似的反应酶与底物的亲和力大小：K m 越大表明亲和力越小；K m 越小表明亲和力越大。

大多数纯酶的K m 值在0.01~100 mmol/L 。

通过米氏方程的不同变形，可有多种求算米氏常数的方法，一般较常用的双倒数法，即取米氏方程的倒数式：[]max max m V 1S 1V K v 1+⋅=以v 1对[]S 1作图得一直线，该直线与横轴截距[]m K 1S 1=-。

过氧化物酶是一种对氢受体（H 2O 2） 底物有特异性，对氢供体底物缺乏特异性的酶，它可催化过氧化氢氧化许多多元酚或多元胺类底物发生显色、荧光或化学发光反应，可用于微量过氧化氢含量测定，也可以和其它酶反应系统偶联可用于测定许多与生命相关的物质：如葡萄糖、半乳糖、氨基酸、尿酸及胆甾醇等，亦是免疫分子和核酸分析中常用的标记物。