肠杆菌科的检验 微生物实验

肠杆菌科其他菌属的微生物学检验发表时间：2014-01-16T10:14:43.513Z 来源：《医药前沿》2013年12月第34期供稿作者：孙来芬朱瑞敏[导读] 克雷伯菌是医院感染中常见的条件致病菌，以肺炎克雷伯菌感染较多见。

孙来芬朱瑞敏（黑龙江省鹤岗市人民医院 154101）【关键词】微生物检验肠杆菌【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）34-0205-02 肠杆菌科除上述主要对人致病的菌属外，还有克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属等，为条件致病菌，在临床上感染性疾病中较常见。

1 克雷伯菌属克雷伯菌属主要包括肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌等，为条件致病菌，临床上感染性疾病中以肺炎克雷伯菌多见。

肺炎克雷伯菌包括肺炎亚种、臭鼻亚种和鼻硬结亚种。

1.1微生物学检验：克雷伯菌检验程序可按肠杆菌科细菌进行检验。

据不同疾病采集不同标本，如血液、痰、脓汁、尿液、脑脊液、胸水和腹水等。

取痰、脓汁、尿液、脑脊液、胸水、腹水标本，离心后将沉淀物涂片做革兰染色镜检，可见革兰阴性球杆菌，有明显的荚膜。

血液标本或穿刺液标本接种于肉汤培养基增菌培养，其他标本接种于血平板和MAC平板。

35℃孵育18～24 h，取血平板上灰白色大而黏稠的菌落和 MAC上乳糖不发酵型黏液菌落，作进一步鉴定。

菌落性状、形态染色特性符合克雷伯菌的特点，氧化酶阴性、硝酸盐还原阳性，在KIA试验斜面产酸、底层产酸产气、H2S阴性，MIU试验为－－+／－，V－P试验为阳性，可初步鉴定为克雷伯菌。

然后可进一步进行生化反应鉴定到种和亚种，并结合荚膜肿胀试验进行鉴别。

1.2生物学性状：形态与染色：克雷伯菌为革兰阴性杆菌，卵圆形或球杆状，常成双排列，有菌毛；无芽胞，无鞭毛。

有明显的荚膜，荚膜肿胀试验是本属菌与其他类似菌的主要鉴别方法；培养特性：克雷伯菌兼性厌氧，营养要求不高，在血平板上形成较大凸起、灰白色、不透明、不溶血、黏液型菌落，用接种环挑起时可出现拉丝现象。

微生物检验-肠杆菌科笔记一、共性(一)【形态染色】●G –中等大小杆菌或球杆菌●多数有鞭毛，有动力，除“三个半”：克雷伯菌、志贺菌、鼠疫、小肠耶氏菌●小肠耶尔森菌25℃阳性, 35℃阴性●少数有荚膜，无芽胞●动力：志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌阴性（无鞭毛）(二)【培养】●兼性厌氧●营养要求不高，普通培养基或麦康凯均能生长●常用选择培养基或鉴别培养基双糖铁琼脂（红－黄－黑）（乳糖、葡萄糖）上层红色原因：发酵糖类和分解蛋白胨产生的胺中和了。

●麦康凯（红－无色））（乳糖）红色表示发酵乳糖产酸 S●S琼脂（红－无色－黑）（乳糖）柠檬酸铁产黑(三)生化反应※●1.发酵葡萄糖●2.氧化酶－（邻单胞菌除外）●3.触酶＋●4.硝酸盐还原试验＋●吲哚阳性：大肠、爱德华菌属、摩根菌属、邻单胞菌属、普通变形杆菌、普罗威登斯菌属大爱魔林普阳气呼呼（产气，弧菌+）●H2S阳性：沙门菌属、变形杆菌属、弗劳地枸橼酸杆菌、爱德华菌属老刘爱杀蝙蝠●VP阳性（葡萄糖酸盐）：克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、肠杆菌属、沙雷菌属让VIP客人赴长沙●尿酶阳性：摩根菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属（摸个遍）●甲基红阴性：肠杆菌属、克雷伯菌属（抢客人）(四)致病●侵袭力：K（Vi）抗原：保护菌毛：粘附、侵袭肠粘膜●内毒素：毒性部位在类脂A，所有革兰阴性杆菌产生的内毒素一样，引起如发热、休克、DIC等。

●肠毒素（外毒素）：大肠、志贺、鼠疫耶尔森二、埃希菌属(一)【概述】正常菌群，可以合成人类不能合成的微生物，例如B1、B2(二)【形态特征】革兰阴性短杆菌，不规则排列，有鞭毛、菌毛、有些有荚膜(三)【培养特性】兼性厌氧●在普通营养琼脂上生长良好，形成较大的圆形、光滑、湿润、灰白色的菌落，有特殊气味。

●麦康凯和SS琼脂平板发酵乳糖形成红色菌落(四)【生化反应】●发酵多种糖产酸产气●在克氏铁琼脂（KIA）上斜面和底层均产酸、产气，●H2S阴性（AA+-）●吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐（IMVC）等4个试验的结果为++--●在动力、吲哚、脲酶（MIU）结果为++-(五)【ESBL超广谱β内酰胺酶（耐药）】三、沙门菌属(一)【概述】人类食物中毒的主要病原之一。

肠道细菌的实验报告引言肠道细菌是人体消化道中存在的微生物，对人体健康和免疫功能具有重要作用。

本实验旨在通过培养和研究肠道细菌，了解其特性和影响因素，为进一步研究肠道健康提供科学依据。

实验方法实验材料1. 肠道细菌样本（人体粪便样本）2. 营养琼脂培养基3. 石蜡瓶4. 培养皿5. 无菌试管、噻唑蓝试剂6. 实验室标准设备和仪器实验步骤1. 用无菌试管采集肠道细菌样本，并在无菌条件下将其转移到石蜡瓶中。

2. 在培养皿中加入营养琼脂培养基，石蜡瓶中的肠道细菌样本均匀涂抹在培养皿上。

3. 将培养皿置于恒温培养箱中，以37摄氏度培养24小时。

4. 观察培养皿中的细菌生长情况，并记录结果。

实验结果经过24小时培养，我们观察到培养皿中出现了多种不同形态和颜色的细菌。

其中，主要观察到以下几种常见肠道细菌：1. 大肠杆菌（Escherichia coli）：呈现圆形、鲜亮的橙红色菌落。

2. 肠球菌（Enterococcus faecalis）：呈现小形或中形、呈黄色或乳白色菌落。

3. 梭状芽胞杆菌（Clostridium difficile）：呈现长条形的白色菌落。

4. 腺病毒（Adenovirus）：呈现透明的圆形菌落。

讨论与分析肠道细菌是人体肠道内的共生微生物，在人体的消化和免疫功能中起着重要作用。

此次实验观察到的肠道细菌具有多样性，这与人体消化道中存在的多种微生物种类相符。

其中，大肠杆菌和肠球菌是人体肠道中最常见的细菌，其在人体内的生存和繁殖与人体健康密切相关。

肠道细菌的种类和数量对人体健康有重要影响。

正常肠道菌群的稳定和平衡与人体的免疫功能、营养代谢和防病能力密切相关。

一些研究发现，肠道细菌的失调可能与多种疾病的发生和发展有关，如肠道炎症、肠道肿瘤和肠易激综合征等。

结论通过这次实验，我们成功培养出了肠道细菌样本，并观察到了不同菌种的生长情况。

肠道细菌的多样性和数量对人体健康具有重要影响，进一步研究肠道菌群的组成和功能，有助于理解人体免疫和消化系统的运作机制，为肠道健康的保护和促进提供科学依据。

微生物检验实验室肠杆菌标准操作规程1. 概述肠杆菌属包括阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、阪崎肠杆菌、格高肠杆菌、中间肠杆菌、河生肠杆菌、日沟肠杆菌、生癌肠杆菌和梨形肠杆菌等14个种。

2. 标本类型痰液、脑脊液、穿刺液、脓液、血液等标本。

3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阴性粗短杆菌，有周身鞭毛，无芽胞，与其他肠杆菌科细菌相似。

3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落呈灰白色，不溶血；在麦康凯等培养基上因发酵乳糖形成红色、较大菌落；在中国蓝琼脂平板上形成中等大小、蓝色菌落。

3.3生化反应氧化酶试验阴性，TSI为A/A；发酵葡萄糖、乳糖、山梨醇等多种糖类，不发酵卫矛醇；IMViC--++，动力、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶和硝酸盐还原试验均阳性，H2S、赖氨酸脱羧酶试验阴性。

3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征：发酵葡萄糖等多种糖类，IMViC--++，动力、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶试验均为阳性。

3.4.2 阴沟肠杆菌与成团泛菌的鉴别阴沟肠杆菌鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶试验均阳性，赖氨酶脱羧酶试验阴性；成团泛菌鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧酶试验均阴性，并产黄色色素。

3.4.3 阴沟肠杆菌与产气肠杆菌的鉴别阴沟肠杆菌精氨酸双水解酶试验阳性，赖氨酸脱羧酶试验阴性；产气肠杆菌相反。

3.4.4 产气肠杆菌与成团泛菌的鉴别前者鸟氨酸脱羧酶和赖氨酶脱羧酶试验阳性，而后者相反。

3.5 操作步骤3.5.1 氧化酶试验参见氧化酶试验标准操作规程。

3.5.2 从麦康凯琼脂平板上挑取可疑菌落，用微生物鉴定仪或传统生化法进行细菌鉴定。

4. 药敏参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSI M100-S20最新版本文件。

5. 质量控制参见质量管理程序。

检验结果解释与分析阴沟肠杆菌既存在ESBLs问题，有存在AmpC酶的问题，故耐药情况严重，应根据药敏试验和耐药机制检测报告选药。

如果检出上述两种酶，体外试验对对青霉素类、头孢菌素类或氨曲南敏感，也应报告对其耐药；同时对头霉素、酶抑制剂也耐药。

一、实验目的1. 掌握肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点。

2. 掌握肠道杆菌的主要生化反应。

3. 掌握肠道杆菌的分离鉴定方法。

4. 掌握粪便标本细菌学检测流程。

二、实验原理肠道杆菌科细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。

少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。

这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。

有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。

三、实验材料与仪器材料：1. 粪便标本2. CB培养基3. SS培养基4. 基础培养基5. 双糖铁发酵培养管6. 鉴别培养基7. 血清学反应试剂8. 药敏试剂仪器：1. 高压灭菌锅2. 试管3. 锥形瓶4. 接种环5. 酒精灯6. 无菌玻片7. 显微镜、载玻片8. 镊子四、实验步骤1. 粪便标本的处理- 将粪便标本用无菌生理盐水进行稀释，制成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4四个浓度的悬液。

- 取各浓度悬液适量，分别接种于CB培养基、SS培养基、基础培养基和双糖铁发酵培养管。

2. 培养与观察- 将接种后的培养基放入37℃恒温培养箱中培养24小时。

- 观察并记录各培养基上的菌落特征，包括菌落大小、形状、颜色、边缘、表面等。

3. 生化反应- 取纯培养的菌落，进行糖发酵试验、氧化酶试验、触酶试验、硝酸盐还原试验等。

- 根据试验结果，初步鉴定菌种。

4. 血清学反应- 取纯培养的菌落，进行血清学反应，进一步鉴定菌种。

5. 药敏试验- 取纯培养的菌落，进行药敏试验，了解菌株的耐药性。

五、实验结果与分析1. 菌落特征- 在CB培养基上，观察到典型的肠道杆菌菌落，菌落呈圆形、光滑、湿润、乳白色。

- 在SS培养基上，观察到菌落呈红色，并有金属光泽。

- 在基础培养基上，观察到菌落呈黄色。

- 在双糖铁发酵培养管中，观察到斜面和底层均呈红色，并产生气泡。

肠道杆菌实验论文班级：检验一班实验日期：2013-09-24~30 实验组：第二组指导老师：综合实验报告专业班级：医学检验时间：2013年 9月 24日～9月30日实验名称肠道杆菌指导教师熊亚南一、预习报告1. 实验目的1.1掌握肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点。

1.2掌握肠道杆菌的主要生化反应。

1.3掌握肠道杆菌的分离鉴定方法。

1.4掌握粪便标本细菌学检测流程2. 实验基本原理肠道杆菌的细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。

少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。

这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。

有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。

3. 实验流程图高压灭菌锅试管锥形瓶接种环酒精灯无菌玻片显微镜、载玻片镊子二、实验报告1.材料与方法1.1材料2号菌液双糖铁培养基CB培养基SS培养基基础培养基青霉素庆大霉素氯霉素复方新诺明志贺氏诊断血清沙门氏诊断血清无菌生理盐水、结晶紫染液、卢戈碘液、95%乙醇溶液、稀释石碳酸复红染液、无水乙醇、松柏油1.2方法1.2.1标本分离将菌种用平板划线法，分别接种于CB和SB培养基中，37℃温室培养24小时，进行菌落分离。

操做人：1.2.2 鉴别实验1.2.2.1 双糖铁实验用接种针以无菌操作技术挑取可疑菌落，立即垂直插入培养基中心至接近管底处，再循原路退出到斜面上；接种针自斜面最低处向上划一直线（要求通过试管培养基的中心点），然后再从斜面低处向上轻轻来回作蜿蜒划线；接种完毕，盖好试管塞。

贴上标签纸。

37℃培养18~24小时，取出观察结果并分析，观察结果。

1.2.2.2 Gram stain实验1.2.2.2.1 涂片于洁净无油的载玻片上,加无菌生理盐水一滴,按无菌操作法用接种环取待检标本少许，研入无菌盐水中，使成一个均匀、极薄菌膜，直径在1cm 左右。

医学检验—微生物基础（九）一、肠杆菌科概述1.肠杆菌科的定科实验：（1）发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）、触酶（+），氧化酶（-），可将硝酸盐还原至亚硝酸盐。

（2）乳糖发酵试验：非致病菌+，致病菌-（除外变形杆菌）。

（3）氧化酶试验：常用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别2.肠杆菌科共同特性：无芽孢、多数有鞭毛（有鞭毛，则有动力）、有致病性的菌株多数有菌毛3.肠杆菌科中没有鞭毛的：耶尔森菌属、E I EC（肠侵袭型埃希菌）、克雷伯菌属、志贺菌属二、大肠埃希菌的生化反应特性1.大肠埃希菌IMVC ++--区别：产气肠杆菌IMVC --++拓展：I:吲哚试验M:甲基红试验V:V-P试验C:枸橼酸盐试验另外V-P试验：常与甲基红试验一起使用，因为前者为阳性的细菌，后者通常为阴性。

2.MIU：++-（动力、吲哚、尿素）3.麦康凯MAC平板和SS平板：粉红色或红色菌落区别：沙门和志贺是无色透明菌落4.导致腹泻的大肠埃希菌分为5类（1）肠产毒型大肠埃希菌（entero t oxigenic, E T EC）：引起霍乱样肠毒素腹泻（水泻），旅行者腹泻。

（2）肠致病型大肠埃希菌（entero p athogenic, E P EC）：主要引起婴儿腹泻。

（3）肠侵袭型大肠埃希菌（entero i nvasive, E I EC）：引起痢疾样腹泻（黏液脓血便）。

（4）肠出血型大肠埃希菌（entero h emorrhagic, E H EC）：其中O157：H7可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征（HUS）。

（5）肠黏附型大肠埃希菌（entero agg regative,E Agg EC）：不能用O:H分型。

5.致病性大肠埃希菌与正常菌群中的大肠埃希菌鉴别的主要依据是血清学分型。

6.细菌性胆道感染时，胆汁中最常见的致病菌是大肠埃希菌。

7.山梨醇麦康凯培养基可作为O157：H7的鉴别培养基。

8.ESBLs:超广谱β内酰胺酶对产ESBLs 的菌株所致感染，需要采用碳青霉烯类（亚胺培南、美罗培南）或头霉素类（头孢西丁）或加酶抑制剂的药物进行治疗。