肠杆菌科的分类与鉴定

肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。

1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。

1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。

1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。

1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。

血标本不要冷冻。

1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。

2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。

4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。

结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。

注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。

（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。

所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。

若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。

4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。

结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。

4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。

结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。

4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。

结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。

4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。

结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。

肠杆菌科细菌归纳总结肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性菌，它包括了许多与人类和动物相关的致病菌，同时也包括了许多与环境和食品卫生相关的菌株。

肠杆菌科细菌的特点是在普通培养基上能够产生气体，并且在革兰染色中呈现棒状。

1. 肠杆菌属（Enterobacter）肠杆菌属是肠杆菌科中的一个重要属，常见的菌株包括粪肠杆菌（Enterobacter cloacae）和黄色肠杆菌（Enterobacter aerogenes）等。

这些菌株广泛存在于土壤、水体以及人及动物的肠道中，有些种类具备耐药性，并且可能引发医院感染。

2. 大肠杆菌属（Escherichia）大肠杆菌属是肠杆菌科中的另一个重要属，其中最著名的是大肠杆菌（Escherichia coli），它一般存在于人和动物的肠道中。

大肠杆菌是一种常见的致病菌，可以引起腹泻、尿路感染等疾病。

此外，某些大肠杆菌菌株还产生毒素，如致命的肠毒性大肠杆菌产生的毒素可以引起严重的食物中毒。

3. 鲍曼不动杆菌属（Klebsiella）鲍曼不动杆菌属是肠杆菌科中的另一个重要属，常见的菌株包括肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）等。

这类菌株是常见的医院感染病原菌，可以引起肺炎、尿路感染以及败血症等严重疾病。

而产超强粘多糖的黏质性肺炎克雷伯菌更是具有高度的传染性和致病性，是医疗环境中的重要威胁之一。

4. 沙门氏菌属（Salmonella）沙门氏菌属是肠杆菌科中的一类重要致病菌，它包括众多血清型，其中一些血清型可以引起食物中毒和沙门氏菌感染。

这些菌株主要存在于动物及其产品中，比如家禽、牛奶和蛋等。

如果不注意食品的卫生状况，摄入被污染的食物可能导致人体感染引起胃肠炎等症状。

5. 艰难梭菌属（Clostridium）虽然肠杆菌科主要是指肠道相关的菌属，但在其中也包括一些与人体肠道无关或者少数与肠道关联不紧密的菌株。

艰难梭菌属是其中之一，该属的细菌广泛存在于土壤和水体中。

肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌，可以通过一系列
生化鉴定实验来进行鉴定。

以下是一些常用的肠杆菌科生
化鉴定实验：
1. 硫代硫酸亚铁（TSI）琼脂糖培养基实验：在TSI琼脂
糖培养基上培养菌株，观察菌落的颜色和气体产生情况。

肠杆菌科细菌在该培养基上产生酸和气体，导致培养基中
的pH下降，产生黄色酸性反应。

2. 尿素水解试验：将菌株接种到尿素水解培养基上，观察
培养基的颜色变化。

肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生
尿素酶，将尿素水解为氨和二氧化碳，导致培养基变为粉
红色。

3. 大肠杆菌甲醛试验：将菌株接种到含有甲醛的培养基上，观察培养基的颜色变化。

肠杆菌科细菌中的大肠杆菌能够
利用甲醛作为唯一的碳源，产生酸和气体，导致培养基变
为黄色。

4. 气体产生试验：将菌株接种到气体产生管中，观察管内
气体的产生情况。

肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生气体，如氢气和二氧化碳。

5. 青霉素酶试验：将菌株接种到含有青霉素的培养基上，
观察菌落的形成情况。

肠杆菌科细菌中的一些种类能够产
生青霉素酶，使得培养基中的青霉素失活，导致菌落形成。

需要注意的是，肠杆菌科细菌的鉴定通常需要结合多个实验结果进行综合判断，单一实验结果可能不足以确定菌株的分类。

此外，不同的肠杆菌科细菌种类可能在生化反应上有差异，因此具体的实验步骤和判断标准可能会有所不同。

河生肠杆菌科菌种鉴定一、背景介绍河生肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性菌，包括多种与人和动物健康相关的致病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌等。

这些细菌不仅会引起人类和动物的感染，还会对水质和食品安全造成威胁。

因此，对这些细菌进行鉴定非常重要。

二、鉴定方法1. 生化鉴定法：通过观察细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来进行鉴定。

2. 分子生物学鉴定法：利用PCR技术或基因测序分析目标细菌的DNA序列来确定其种属和亚属分类。

三、生化鉴定法1. 常用培养基：(1) MacConkey琼脂培养基：用于筛选革兰氏阴性肠道杆菌，能够区分乳糖发酵阳性和阴性细菌。

(2) Eosin Methylene Blue琼脂培养基：适合于检测大肠杆菌等肠道杆菌，能够区分乳糖发酵强度。

(3) Triple Sugar Iron琼脂培养基：可用于区分肠道杆菌的糖代谢类型，如葡萄糖、乳糖和蔗糖。

2. 常用生化测试：(1) 氧化/发酵试验：通过观察细菌在含糖和底物的培养基上产生气体或酸碱变化来判断其代谢类型。

(2) 非葡萄糖发酵试验：检测细菌对非葡萄糖类底物的代谢能力，如甘油、琼脂和麦芽糖等。

(3) 酶反应试验：检测细菌对不同酶的产生情况，如氧化酶、羟丁酸氧化酶和尿素酶等。

四、分子生物学鉴定法1. PCR技术：(1) 16S rRNA基因PCR：利用通用引物扩增16S rRNA基因片段，进行序列比对来确定目标细菌种属和亚属分类。

(2) 特异性PCR：利用特异性引物扩增目标细菌的DNA片段，进行电泳分离和检测来确定其存在与否。

2. 基因测序：(1) 16S rRNA基因测序：通过对PCR扩增的16S rRNA基因片段进行测序，进行比对和分类鉴定。

(2) 多基因组合测序：通过同时对多个基因进行测序，提高鉴定准确性和可靠性。

五、鉴定结果的判断1. 生化鉴定法：根据细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来判断其种属和亚属分类。

肠杆菌科及检验肠杆菌科及检验（一）●考点﹥概述概念；命名与分类原则；共同特点；自然与人体内的分布；微生物学检查方法；临床意义。

﹥埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。

生物学性状；微生物学检验；临床意义。

[讲义编号NODE70103300140100000101：针对本讲义提问]【内容讲解】一、概述（共性）肠杆菌科是由多个菌属组成，G-杆菌，生物学性状相似。

大多数肠道杆菌属于正常菌群。

当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。

部分为致病性细菌。

[讲义编号NODE70103300140100000102：针对本讲义提问]（一）分类肠杆菌科细菌的种类繁多。

主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。

根据《伯杰系统细菌学手属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威属等。

[讲义编号NODE70103300140100000103：针对本讲义提问]（二）生物学特性1.形态与染色G-，杆菌，大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。

多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。

[讲义编号NODE70103300140100000104：针对本讲义提问]2.培养需氧或兼性厌氧；营养要求不高；普皿和麦康凯培养基：中等大小、表面光滑的菌落；液体培养基：混浊生长。

3.生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形杆菌）。

触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。

[讲义编号NODE70103300140100000105：针对本讲义提问]4.抗原构造﹥﹥表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包绕在O抗原外的不耐热的多糖抗原，可阻断O抗原与相应抗体之间的反应，加热处5.变异﹥菌落S～R变异﹥鞭毛H～O变异﹥耐药性变异﹥生化反应性质的改变6.抵抗力不强。