NDM系列样本

弗劳地枸橼酸杆菌中质粒介导的KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶基因结构分析林迪;方颍;张嵘;陈功祥【摘要】目的对携带blaNDM-1和blaKPC-2的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析.方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性;特异性PCR扩增和序列测定分析碳青霉烯酶耐药基因和ESBLs耐药基因、接合试验、耐药基因周围序列分析对菌株的耐药机制进行分子水平研究.结果 4株细菌仅CF-05对阿米卡星敏感,所有菌株对其他检测药物全部耐药;PFGE 结果显示4株细菌不同源;特异性PCR扩增和序列分析显示2株(CF-35、CF-43)同时携带blaNDM-1和blaKPC-2、另2株(CF-05、CF-17)仅携带blaNDM-1,CF-35同时携带blaCTX-M-15;其中3株细菌(CF-05、CF-17、CF-43)接合成功,CF-05、CF-17接合子(CF-05-1和CF-17-1)携带blaNDM-1,CF-43获得2种接合子(CF-43-1携带blaKPC-2、CF-43-2同时携带blaNDM-1和blaKP-2);分析blaNDM-1和blaKPC-2周围序列发现,4株细菌周围序列分别与国内报道携带blaNDM-1和blaKPC-2的肺炎克雷伯菌质粒pNDM-HN380和PK048周围序列高度相似.结论在4株弗劳地枸橼酸杆菌中检测到NDM-1型碳青霉烯酶,其中2株同时携带KPC-2型碳青霉烯酶,blaNDM-1周围序列和blaKPC-2周围序列与国内已知肺炎克雷伯菌相关耐药基因周围序列高度相似.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)006【总页数】5页(P423-427)【关键词】弗劳地枸橼酸杆菌;碳青霉烯酶;NDM-1;KPC-2【作者】林迪;方颍;张嵘;陈功祥【作者单位】浙江大学医学院附属第二医院检验科,杭州310003;解放军第117医院检验科,杭州310013;浙江工业大学药学院,杭州310014;浙江大学医学院附属第二医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第二医院检验科,杭州310003【正文语种】中文【中图分类】R446.5随着碳青霉烯类药物的广泛应用和新型碳青霉烯酶的流行和传播，耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌不断涌现，给临床抗感染治疗和院内感染控制带来极大挑战。

生物工程学报Chin J Biotech 2010, November 25; 26(11): 1461−1472 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@©2010 CJB, All rights reserved.人类与病原菌的军备竞赛：NDM-1耐药基因与超级细菌孙明伟1,2，郑焙文1,3，高福1,4，朱宝利11 中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室，北京 1001012 中国科学技术大学生命科学学院，合肥 2300273 中国科学院研究生院，北京 1000494 中国科学院北京生命科学研究院，北京 100101摘要:在人类历史上，每一次诸如鼠疫和肺结核病等瘟疫的大流行，都曾给人类的生存带来巨大的威胁。

抗生素的应用使人类掌握了抵抗细菌感染的锐利“武器”，但同时病原菌也通过突变和水平基因转移等方式产生了诸多耐药基因，从而获得了应对抗生素杀伤的坚固“盾牌”；于是人类又不断地开发新式抗生素“武器”来破解病原菌的耐药“盾牌”——一场“军备竞赛”愈演愈烈。

近来研究发现，携带编码NDM-1基因的耐药质粒不仅可以在细菌间转移，而且能使所在宿主菌成为可以耐受几乎全部抗生素的超级细菌。

但是，凭借着日益进步的科技和医学，以及科学的用药策略，我们一定可以再次战胜超级细菌。

关键词: NDM-1，超级细菌，军备竞赛，耐药基因Arms racing between human beings and pathogens: NDM-1 and superbugsMingwei Sun1,2, Beiwen Zheng1,3, George F. Gao1,4, and Baoli Zhu11 CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China2 College of Life Sciences, University of Science and Technology of China, Hefei 230027, China3 Graduate University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China3 Beijing Institutes of Life Science, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, ChinaAbstract:Throughout human history, pandemic bacterial diseases such as the plague and tuberculosis have posed an enormous threat to human beings. The discovery of antibiotics has provided us with powerful arsenal for the defense against bacterial infections. However, bacteria are acquiring more and more resistance genes to shield off antibiotics through mutation and horizontal gene transfer. Therefore, novel antibiotics must be produced and the arms race between bacterial pathogens and antibiotics is becoming increasingly intense. Recently, researchers have found that plasmids carrying a new metallo-β-lactamase gene, bla NDM-1, and many other antibiotics resistance genes can easily spread through bacterial populations and confer recipient stains resistance to nearly all of the current antibiotics. It is a threat to the human health and a great challenge for our medical science, which we are facing. We need to find new ways to fight and win this arms racing.Keywords:NDM-1, superbugs, arms racing, resistance geneReceived:September 14, 2010; Accepted: September 27, 2010Supported by: National Natural Science Foundation of China (No. 30770060),Foundation for Innovative Research Groups of the National Natural Science Foundation of China (No. 81021003).Corresponding author: Baoli Zhu. Tel: +86-10-64807362; E-mail: zhubaoli@国家自然科学基金项目（No. 30770060），国家自然科学基金创新研究群体科学基金（No. 81021003）资助。

基金项目：广州市科技计划项目（２０１８０４０１０３７０）麦荣嘉　马丹娟　邓文喻　刘　倩　郑华仪　林鑫源　林雨诗：广东省妇幼保健院　广东广州　５１００１０通信作者：麦荣嘉磷霉素、多粘菌素Ｂ等抗菌药物对儿童感染ＮＤＭ－１肺炎克雷伯菌的体外药敏研究麦荣嘉　马丹娟　邓文喻　刘　倩　郑华仪　林鑫源　林雨诗 【摘　要】　目的　评价磷霉素、多粘菌素Ｂ、美罗培南和氨曲南四种抗菌药物对产新德里金属β－内酰胺酶（ＮＤＭ）肺炎克雷伯菌的作用。

方法　收集广东省妇幼保健院２０１９年的儿科ＰＩＣＵ的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（ＣＲＫＰ），使用ｍＣＩＭ和ｅＣＩＭ初步筛查ＣＲＫＰ的类型，并ＰＣＲ鉴定ＮＤＭ基因序列。

同时ＰＣＲ检测ＮＤＭ－ＫＰ携带磷霉素耐药基因Ｆｏ ｓＡ。

采用浓度梯度扩散法法测定磷霉素、多粘菌素Ｂ、美罗培南和氨曲南抗菌药物以及联合对ＮＤＭ－ＫＰ的最低抑菌浓度（ＭＩＣ），并计算分级抑菌浓度指数（ＦＩＣ）。

结果　根据ｍＣＩＭ和ｅＣＩＭ初步筛查以及ＰＣＲ结果，获得８株携带ＮＤＭ的肺炎克雷伯菌株。

以上８株ＮＤＭ－ＫＰ对磷霉素或多粘菌素Ｂ均敏感，而氨曲南和美罗培南均耐药。

磷霉素联合美罗培南存在协同作用，以及磷霉素联合多粘菌素Ｂ表现出部分协同作用，而其他联合方案对ＮＤＭ－ＫＰ显示无相关作用。

８株ＮＤＭ－ＫＰ均未检测出磷霉素耐药基因ＦｏｓＡ。

结论　磷霉素或多粘菌素Ｂ，对ＮＤＭ－ＫＰ有较好的抗菌效果；磷霉素联合美罗培南，以及磷霉素联合多粘菌素Ｂ对ＮＤＭ－ＫＰ具有协同作用。

【关键词】　磷霉素；分级抑菌浓度指数；新德里金属β－内酰胺酶 中图分类号：Ｒ７７１ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－３３２Ｘ．２０２１．０４．０４２ＳｔｕｄｙｏｎｖｉｔｒｏｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎａｎｄｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢｔｏｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＮＤＭ １ｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎＭＡＩＲｏｎｇｊｉａ，ＭＡＤａｎｊｕａｎ，ＤＥＮＧＷｅｎｙｕ，ＬＩＵＱｉａｎｇ，ＺＨＥＮＧＨｕａｙｉ，ＬＩＮＸｉｎｙｕａｎ，ＬＩＮＹｕｓｈｉ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎ，ｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢ，ＭｅｒｏｐｅｎｅｍａｎｄａｚｔｒｅｏｎａｍｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｎＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇＮｅｗＤｅｌｈｉｍｅｔａｌｌｏ ｂｅｔａ ｌａｃｔａｍａｓｅ（ＮＤＭ ＫＰ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｃａｒｂａｐｅｎｅｍｒｅｓｉｓｔａｎｔＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＣＲＫＰ）ｉｎｔｈｅｐａｅｄｉａｔｒｉｃＰＩＣＵｏｆＧｕａｎｇｄｏｎｇＭａｔｅｒｎａｌａｎｄＣｈｉｌｄＨｅａｌｔｈＨｏｓｐｉｔａｌｉｎ２０１９ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｔｙｐｅｓｏｆＣＲＫＰｗｅｒｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｓｃｒｅｅｎｅｄｕｓｉｎｇｍＣＩＭａｎｄｅＣＩＭ，ａｎｄｔｈｅＮＤＭｇｅｎｅｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ＴｈｅＦｏｓＡｇｅｎｅｏｆｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ．Ｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ｏｆｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎ，ｐｏｌｙ ｍｙｘｉｎＢ，ＭｅｒｏｐｅｎｅｍａｎｄａｚｔｒｅｏｎａｍｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｇｅｎｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｆｏｒＮＤＭ ＫＰｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔｄｉｆｆｕｓｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｆｒａｃｔｉｏｎａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＦＩＣ）ｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｍＣＩＭａｎｄｅＣＩＭａｎｄＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓ，８ｓｔｒａｉｎｓｏｆＮＤＭ ＫＰｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ．ＦｏｓｆｏｍｙｃｉｎｏｒｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢｗｅｒｅａｌｌｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏ８ｓｔａｉｎｓｏｆＮＤＭ ＫＰ，ｗｈｉｌｅａｚｔｒｅｏｎａｍａｎｄｍｅｒｏｐｅｎｅｍｗｅｒｅａｌｌｒｅｓｉｓｔａｎｔ．ＦｏｓｆｏｍｙｃｉｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈＭｅｒｏ ｐｅｎｅｍｓｈｏｗｅｄａｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ，ａｎｄｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢｓｈｏｗｅｄａｐａｒｔｉａｌｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ，ｗｈｉｌｅｏｔｈｅｒｃｏｍｂｉｎｅｄｓｃｈｅｍｅｓｓｈｏｗｅｄｎｏｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ．ＦｏｓＡｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｅｗａｓｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎａｌｌ８ｓｔｒａｉｎｓｏｆＮＤＭ ＫＰ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＦｏｓｆｏｍｙｃｉｎｏｒｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢａｌｏｎｅｈａｄｂｅｔｔｅｒａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｎＮＤＭ ＫＰ．ＦｏｓｆｏｍｙｃｉｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈＭｅｒｏｐｅｎｅｍａｎｄｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢｈａｄａｃｅｒｔａｉｎｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎＮＤＭ ＫＰ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】　Ｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎ；ＦｒａｃｔｉｏｎａｌＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ；ＮｅｗＤｅｌｈｉＭｅｔａｌｌｏ ｂｅｔａ Ｌａｃｔａｍｓ 【Ａｕｔｈｏｒ′ｓａｄｄｒｅｓｓ】 ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＭａｔｅｒｎａｌａｎｄＣｈｉｌｄＨｅａｌｔｈＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００１０，Ｃｈｉｎａ 肺炎克雷伯杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ＫＰ）属革兰阴性杆菌，是人体上呼吸道和肠道的常见菌，可引起局部或全身性的感染性疾病。

卫生部发布诊疗指南替加环素可抗超级细菌2010年10月11日09:42重庆商报我要评论(6)字号：T|T转播到腾讯微博滥用抗生素催生“超级细菌”本报讯中国卫生部对“超级细菌”高度关注，近日已会同总后卫生部和国家中医药管理局共同组织专家制定发布了《产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南(试行版)》，并专门召开视频会议指导医疗机构应对。

主要引起肺部尿路感染国家卫生部9日提供的《指南》称，此类细菌对青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类药物广泛耐药。

最早报道的产NDM-1细菌为肺炎克雷伯菌，是2008年在一位印度裔瑞典尿路感染患者中发现，对所有β-内酰胺类抗生素耐药，对环丙沙星也不敏感，仅对粘菌素敏感。

研究显示，该细菌携带一种新型金属β-内酰胺酶，根据患者可能感染地点命名这种酶为NDM-1。

据流行病学调查发现，产NDM-1肠杆菌科细菌占所监测细菌的1.2%~13%，主要菌种为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。

这些细菌主要引起尿路、血流、伤口、肺部和导管相关感染等。

在美国、加拿大、日本、韩国、澳大利亚、比利时以及中国香港、台湾地区等都已有感染病例报道。

五类人群容易感染超级细菌根据患者感染情况及细菌本身特点，专家认为,产NDM-1细菌可能主要通过密切接触感染。

易感人群包括疾病危重、入住重症监护室、长期使用抗菌药物、插管、机械通气等患者。

专家强调，当感染患者抗菌治疗无效，特别是碳青霉烯类治疗无效时，需考虑产NDM-1细菌感染可能，应及时采集临床样本进行细菌检测。

医院要加强抗菌药物合理使用管理，重视医院感染预防与控制。

要加强医务人员手卫生、严格实施隔离措施、切实遵守无菌操作操作规程、加强医院环境卫生管理，减少院内感染发生几率。

超级细菌感染治疗方案抗菌药物：1.替加环素（tigecycline）：四环素类衍生物，超广谱抗菌药物。

临床研究单用或联合用药产碳青霉烯酶细菌感染有一定疗效。

2.多粘菌素（polymyxins）：属多肽类抗菌药物，包括多粘菌B和粘菌素两种。

[作者单位] 西安交通大学医学院第二附属医院感染科,陕西西安710004专家论坛超级细菌 再认识程延安,李梅[摘 要] 超级细菌 是含有新德里金属 内酰胺酶(ND M 1)基因的多重耐药菌的统称。

自2009年7月首次报道后,先后在印度、巴基斯坦、英国、美国、日本及中国等均有报道。

初步研究认为该菌对现存的多种抗生素耐药,应对措施不全,对公众健康具有潜在威胁;合理使用抗生素是预防 超级细菌 感染的有效方法。

[关键词] 超级细菌;新德里金属 内酰胺酶(N D M 1);抗生素;耐药性[中图分类号] R 378.1 [文献标识码] A[文章编号] 1001-7089(2010)12-1081-02G et to K no w Sup erger m s B etterC H E NG Y an an ,L I M ei(D epart m ent of Infectious D iseases ,t he S econd A ff ili ated H osp ital of M e d ical Schoo l of X i an J i ao T ong Un i vers it y,X i an 710004,China)[Ab stract] Superger m s are m ulti p le drug resistance bacter i a wh i ch conta i n the N ew D e l h i m eta ll o lacta m ase gene .S i nce reported i n July 2009,ND M 1has been f ound in Ind i a ,P ak i stan ,UK,U SA,Japan and China .Thepre li m i nary research shows that it has resistance to m ost anti biotics .A t present ,m ank i nd can no t properly dea lw it h NDM 1.It m ay be a g reat potenti a l pub lic hea lt h prob l em.T he m ost i m portant and effi c i ent pre cautions i s reasonab le use o f anti biotics .[K ey words] Superger m s ;N e w D e l hi m etall o lacta m ase ;A nti b i o ti cs ;D rug to l erance1 超级细菌 的出现2010年8月11日, 柳叶刀 刊登了一篇关于印度、巴基斯坦、英国等地出现的新型抗生素抗药性机制的分子学、生物学、流行病学的研究报告。

㊃论 著㊃[收稿日期]2023-01-11[基金项目]邢台市重点研发计划项目(2021Z C 111)[作者简介]薛云(1987-),女,河北邢台人,河北省邢台市第三医院主管检验师,医学学士,从事病原微生物研究㊂*通信作者㊂E -m a i l :37044209@q q.c o m N G -T e s t C A R B A5在血培养肠杆菌科细菌碳青霉烯酶检测中的优势及其检测效能薛 云,刘向芹,张 凯*(河北省邢台市第三医院检验科,河北邢台054000) [摘要] 目的探讨N G -T e s tC A R B A5在血培养肠杆菌科细菌碳青霉烯酶含量检测的应用价值㊂方法收集我院临床标本中分离培养的已知基因型别的62株肠杆菌目细菌,包含耐碳青霉烯肠杆菌科细菌38株和对碳青霉烯敏感的肠杆菌科细菌24株,分别采用N G -T e s tC A R B A5试剂盒㊁C a r b aN P 和m C I M 试验检测待测菌株的主要碳青霉烯酶,并采用P C R 法对碳青霉烯酶基因表型进行测序确认和K a p p a 一致性检验;再从38株耐碳青霉烯菌株中随机取出20株菌株进行模拟血培养,并对其进行N G -T e s tC A R B A5试剂盒㊁C a r b aN P 法和m C I M 法检测和K a p p a 一致性检验分析㊂结果38株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株的耐药药物均为美罗培南和/或亚胺培南,P C R 扩增测序结果表明,分别有33株菌株携带有耐药基因,5株菌株未携带常见耐药基因㊂N G -T e s tC A R B A515m i n内检测到K P C ㊁N D M ㊁I M P ㊁K P C +N D M 以及N D M+I M P 的敏感度和特异度均为100%㊂C a r b aN P 法和m C I M 法的敏感度分别为93.94%㊁96.97%,特异度分别为80.00%㊁100.00%,与基因测序结果一致性K a p pa 值分别为0.857㊁0.902(P <0.05)㊂20株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌模拟血培养,大肠杆菌㊁阴沟肠杆菌㊁肺炎克雷伯菌㊁产酸克雷伯菌分别有6株㊁5株㊁4株㊁5株,N G -T e s tC A R B A5敏感度和特异度均为100.0%,与基因测序结果一致性K a p p a 值为1.000;C a rb aN P 法和m C I M 法的敏感度分别为87.50%㊁93.75%,特异度均为100%,与基因测序结果一致性K a p p a 值分别为0.812㊁0.898(P <0.05)㊂结论N G -T e s tC A R B A5检测过程简单㊁高效,检测结果准确度高,大大简化了临床上检测碳青霉烯酶的复杂流程,有助于增强院内感染控制和及时指导临床治疗㊂[关键词] 碳青霉烯酶;N G -T e s tC A R B A5;C a r b aN P 试验 d o i :10.3969/j .i s s n .1007-3205.2023.11.017 [中图分类号] R 37-33 [文献标志码] A [文章编号] 1007-3205(2023)11-1334-06A d v a n t a g e s a n d e f f i c a c y o fN G -T e s t C A RB A5i n t h e d e t e c t i o no f c a r b a pe n e m a s e i nb l o o d c u l t u r e d e n t e r o b a c t e r i a c e a e b a c t e r i aX U EY u n ,L I U X i a n g -qi n ,Z H A N G K a i *(D e p a r t m e n t o f C l i n i c a lL a b ,t h eT h i r d H o s p i t a l o f X i n g t a i C i t y ,H e b e iP r o v i n c e ,X i n gt a i 054000,C h i n a )[A b s t r a c t ] O b je c t i v e T oe x p l o r et h ea p p l i c a t i o n v a l u eof N G -T e s t C A R B A 5i nt h e d e t e c t i o no fc a r b a pe n e m a s ec o n t e n t i nb l o o dc u l t u r e de n t e r o b a c t e r i a c e a eb a c t e r i a .M e t h o d s A t o t a lo f62s t r a i n so fe n t e r o b a c t e r i a c e a eb a c t e r i a w i t h k n o w n g e n et y p e s w e r ec o l l e c t e df r o m c l i n i c a l s p e c i m e n s o f o u r h o s p i t a l ,i n c l u d i ng 38s t r a i n s o f c a r b a p e n e mr e s i s t a n t e n t e r o b a c t e r i a c e a e b a c t e r i a a n d24s t r a i n so f c a r b a pe n e m s e n s i t i v ee n t e r o b a c t e r i a c e a eb a c t e r i a .N G -T e s tC A R B A5k i t ,C a r b aN Pa n dm C I Mt e s t sw e r e u s e d t o d e t e c t t h em a j o r c a r b a pe n e m a s e s of t h e s t r a i n s t ob e t e s t e d ,a n dP C R w a s u s e d t os e q u e n c e t h e c a r b a p e n e m a s eg e n e ph e n o t y p e s f o r c o n fi r m a t i o na n d K a p p a c o n s i s t e n c y t e s t .T h e n20s t r a i n sw e r er a n d o m l y s e l e c t e df r o m 38c a r b a pe n e m r e s i s t a n t s t r a i n sf o r s i m u l a t e db l o o dc u l t u r e ,a n dt e s t e dw i t h N G -T e s tC A R B A5k i t ,C a r b aN P m e t h o da n dm C I M m e t h o da n dK a p p ac o n s i s t e n c y t e s t .R e s u l t s T h ed r u g r e s i s t a n c eo f 38c a rb a p e n e m ㊃4331㊃第44卷第11期2023年11月河北医科大学学报J O U R N A L O F H E B E I M E D I C A L U N I V E R S I T YV o l .44 N o .11 N o v . 2023r e s i s t a n tE n t e r o b a c t e r i a c e a es t r a i n s w e r e m e r o p e n e m a n d/o r i m i p e n e m.P C Ra m p l i f i c a t i o na n d s e q u e n c i n g r e s u l t ss h o w e dt h a t33s t r a i n sc a r r i e dd r u g r e s i s t a n c e g e n e s,a n d5s t r a i n sd i dn o tc a r r y c o mm o nd r u g re s i s t a n c e g e n e s.T h es e n s i t i v i t y a n ds p e c if i c i t y o fN G-T e s tC A R B A5i nd e t e c t i n g K P C,N D M,I M P,K P C+N D M a n d N D M+I M P w i t h i n15m i n w e r e100%.T h e s e n s i t i v i t y o fC a r b aN P m e t h o da n d m C I M m e t h o dw a s93.94%a n d96.97%,r e s p e c t i v e l y,a n d t h e s p e c i f i c i t y w a s80.00%a n d100.00%,r e s p e c t i v e l y.T h eK a p p av a l u e sw e r e0.857a n d0.902 (P<0.05),w h i c h w e r ec o n s i s t e n t w i t ht h er e s u l t so f g e n es e q u e n c i n g.T w e n t y c a r b a p e n e m r e s i s t a n tE n t e r o b a c t e r i a c e a eb a c t e r i aw e r e c u l t u r e d i n s i m u l a t e db l o o d.T h e r ew e r e6,5,4a n d5 s t r a i n s o f E s c h e r i c h i a c o l i,E n t e r o b a c t e r c l o a c a e,K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e a n d K l e b s i e l l a a c i d o g e n e s,r e s p e c t i v e l y.T h e s e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y o fN G-T e s t C A R B A5w e r e100.0%,a n d t h eK a p p av a l u e w a s1.000,w h i c h w e r ec o n s i s t e n tw i t ht h er e s u l t so f g e n es e q u e n c i n g.T h e s e n s i t i v i t y o fC a r b aN P m e t h o da n d m C I M m e t h o dw e r e87.50%a n d93.75%r e s p e c t i v e l y,a n d t h e s p e c i f i c i t y w a s100%.T h e K a p p av a l u e s w e r e0.812a n d0.898(P<0.05),w h i c h w e r e c o n s i s t e n tw i t ht h er e s u l t so f g e n es e q u e n c i n g.C o n c l u s i o n T h ed e t e c t i o n p r o c e s so fN G-T e s t C A R B A5i ss i m p l e,e f f i c i e n ta n da c c u r a t e,w h i c h g r e a t l y s i m p l i f i e st h ec o m p l e x p r o c e s so f c l i n i c a l d e t e c t i o n o f c a r b a p e n e m a s e,a n d i s h e l p f u l t o e n h a n c e h o s p i t a l i n f e c t i o n c o n t r o l a n d t i m e l y g u i d e c l i n i c a l t r e a t m e n t.[K e y w o r d s]c a r b a p e n e m a s e;N G-T e s tC A R B A5;C a r b aN P t e s t全身性血流感染作为一种较为严重的感染性疾病,具有病情发展迅速和预后差等临床特征,其中产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌(c a r b a p e n e m p r o d u c i n g e n t e r o b a c t e r a l e s,C P E)数量不断增加[1]㊂碳青霉烯酶编码基因主要位于细菌的质粒㊁转座子等基因元件上,这种基因水平转移的传播方式大大增加了C P E的致病率和病死率[2]㊂因此,快速对C P E菌株进行确认与鉴定具有重要临床意义㊂目前临床上确认和鉴定C P E菌株的主要方法包括C a r b aN P试验和碳青霉烯灭活试验(M o d i f i e d C a r b a p e n e m I n a c t i v a t i o n M e t h o d,m C I M)等,较传统的H o d g e 试验操作时间已明显缩短[3-4];N G-T e s tC A R B A5是一种已经商品化的胶体金试剂,可以快速有效检测C P E[5]㊂本研究以聚合酶链式反应(p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n,P C R)扩增碳青霉烯酶耐药基因结果作为金标准,通过采用三种检测方法对C P E菌株的五种主要碳青霉烯酶基因(K P C㊁N D M㊁V I M㊁I M P㊁O X A)进行检测,并对比检出能力和临床应用价值,以期为临床诊断㊁治疗C P E提供有效参考依据㊂1资料与方法1.1菌株来源收集我院自2021年1月 2022年10月临床标本中分离培养的已知基因型别的62株肠杆菌目细菌,包含耐碳青霉烯肠杆菌科细菌38株和对碳青霉烯敏感的肠杆菌科细菌24株,38株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌的亚胺培南和美罗培南最小抑菌浓度均ȡ4n g/L㊂经鉴定,共包含肺炎克雷伯杆菌13株,阴沟肠杆菌11株,大肠杆菌8株,产酸克雷伯杆菌6株㊂38株不敏感菌株标本来源共包括痰液标本22株,血液标本4株,脓液标本3株,穿刺液1株,引流液2株,尿液标本6株㊂24株敏感菌株标本来源共包括痰液标本14株,血液标本2株,脓液标本2株,引流液1株,尿液标本5株㊂本研究中患者知情同意,且已获得医院伦理委员会批准㊂1.2菌株鉴定与药敏试验方法采用质谱仪(生产厂家:布鲁克公司,型号:MA L D T-T O F)鉴定所有菌株;采用V I T E K2c o m p a c t药敏卡进行药敏实验检查,药敏试验过程和药敏结果均参照美国临床实验室标准委员会进行㊂1.3碳青霉烯酶基因检测细菌D N A抽提试剂盒提取D N A,并根据特异性引物进行P C R扩增㊂所有操作均按照说明书进行,然后对细菌碳青霉烯酶主要基因(K P C㊁N D M㊁V I M㊁I M P㊁O X A)进行筛查㊂P C R的反应体系的总体积是25.0μL,包括D N A模板1.0μL(100m g/L)㊁去离子水9.5μL㊁M i x12.5μL以及引物各1.0μL(10μm o l/L)㊂P C R反应条件为:94ħ5m i n完成预变性;94ħ45s完成循环,55ħ45s完成退火,共36个循环, 72ħ延伸10m i n㊂采用2%琼脂糖凝胶电泳进行P C R产物凝胶成像及观察㊂见表1㊂㊃5331㊃河北医科大学学报第44卷第11期表1P C R引物序列T a b l e1P C R p r i m e r s e q u e n c e基因正向引物序列(5'~3')反向引物序列(5'~3')目标片段长度(b p) b l aK P C G T A T C G C C G T C T A G T T C T G C G G T C G T G T T T C C C T T T A G C C638b l a I M P T G A G C A A G T T A T C T G T A T T C T T A G T T G C T T G G T T T T G A T G740b l aV I M T T A T G G A G C A G C A A C C G A T G T C A A A A G T C C C G C T C C A A C G A920b l aO X A-48G C G T G G T A A G G A T G A A C A C C A T C A A G T T C A A C C C A A C C G438b l aN D M-1G G T T T G G C G A T C T G G T T T T C C G G A A T G G C T C A T C A C G A T C6211.4模拟血培养实验取健康成年人血10m L,加入细菌接种物103C F U/m L,混匀后注入树脂需氧血培养瓶中,于全自动血培养仪中孵育24h㊂从血培养阳瓶中抽出试样300μL,接种于20m LL B肉汤中,继续在37ħ振荡培养箱中孵育2h,然后采用离心机于4000r/m i n转速下离心15m i n后将细菌颗粒收集㊂将细菌颗粒沉淀重新悬浮于1.5m L去离子水中,接种在体积为100μL/孔的12个孔板中㊂配置N G-T e s tC A R B A5㊁C a r b aN P和m C I M 的a液和b液,不稀释加入孔内,37ħ孵育2h,由两位工作人员读取结果㊂1.5 N G-T e s tC A R B A5试验将约150μL提取滴入无菌离心管中,然后加入一环细菌样本,混合振荡10s后吸取100μL加入到检测卡盒中标记 S 的样本孔,室温放置15m i n后读取结果㊂1.6 C a r b aN P试验准备E P管A(对照管)㊁E P 管B(试验管),加入100μL细菌蛋白抽提液;将血平皿上35ħ培养的待测菌株分别接种于A㊁B管,涡旋震荡5s,分别加入100μL检测液A(p H7.8酚红硫酸锌溶液)㊁100μL检测液B(6g/L亚胺培南+p H7.8酚红硫酸锌溶液),37ħ孵育,每30m i n 观察颜色变化,直至孵育2h,其中颜色由红色变成黄色或者橙色则判为阳性,表示待测菌为产碳青霉烯酶㊂见图1㊂1.7 m C I M试验皿上待测菌株接种于T S B肉汤中,涡旋震荡10s,每管放入一张无菌纸片(含10μg 美罗培南),35ħ孵育4h㊂生理盐水制备0.5麦氏浊度的大肠埃希菌A T C C25922菌悬液,将菌液均匀涂布在MH A平板上;取出无菌纸片,贴于试管内壁,挤去纸片多余水分,取出无菌纸片后贴于MH A 平板上,倒置平板,35ħ孵育18~24h,量取抑菌圈直径㊂结果判断:抑菌圈直径为6~15mm或16~ 18mm但抑菌圈内散步菌落,表示碳青霉烯酶阳性;抑菌圈直径ȡ19mm则表示阴性㊂见图2㊂1.8统计学方法应用S P S S22.0统计软件分析数据㊂以P C R和基因测序结果为 金标准 ,分别计算N G-T e s tC A R B A5㊁C a r b aN P以及m C I M实验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的准确度㊁敏感度㊁特异度㊂分别对以上3种实验与基因测序结果进行K a p p a一致性检验㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂图1C a r b aN P试验检测结果F i g u r e1C a r b aN P t e s t r e s u l t s图2m C I M筛选产碳青霉烯酶菌株结果(阳性对照为A T C C1705;阴性对照为A T C C1706;1㊁2分别表示待测菌株结果为阳性)F i g u r e2S c r e e n i n g r e s u l t s o f c a r b a p e n e m a s e-p r o d u c i n g s t r a i n s b y m C I M(p o s i t i v e c o n t r o l w a sA T C C1705;A T C C1706 w a s t h en e g a t i v ec o n t r o l.1a n d2i n d i c a t e p o s i v i t i t y o ft h e s t r a i n t ob e t e s t e d r e s p e c t i v e l y)2结果2.1 N G-T e s tC A R B A5㊁C a r b aN P法和m C I M实㊃6331㊃河北医科大学学报第44卷第11期验结果38株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株的耐药药物为美罗培南和(或)亚胺培南,纸片法药敏测试结果和最小抑菌浓度值检测结果见表2㊂分别有33株菌株携带有耐药基因,5株菌株未携带常见耐药基因㊂N G-T e s t C A R B A515m i n内检测到K P C㊁N D M㊁I M P㊁K P C+N D M以及N D M+I M P 的敏感度和特异度均为100%㊂C a r b a N P法和m C I M法的敏感度分别为93.94%㊁96.97%,特异度分别为80.00%㊁100.00%,与基因测序结果一致性K a p p a值分别为0.857㊁0.902(P<0.05)㊂见表3㊂P C R扩增电泳图见图3㊂表238株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌N G-T e s t C A R B A5㊁C a r b aN P法和m C I M实验结果T a b l e2E x p e r i m e n t a l r e s u l t s o f38s t r a i n s o f c a r b a p e n e mr e s i s t a n t E n t e r o b a c t e r i a c e a eb y N G-T e s t C A R B A5,C a r b aN Pm e t h o da n dm C I M组别细菌种类最小抑菌浓度(m g/L)亚胺培南美罗培南纸片法药敏(mm)亚胺培南美罗培南阳性菌株(33株)K P C(9株)肺炎克雷伯杆菌(9株)ȡ168~ȡ166~86~8N D M(20株)大肠杆菌(6株)4~ȡ164~ȡ167~186~17阴沟肠杆菌(10株)8~ȡ162~ȡ166~186~19肺炎克雷伯杆菌(2株)ȡ164~814~1810~16产酸克雷伯杆菌(2株)8~ȡ164~81512~16I M P(2株)产酸克雷伯杆菌(2株)ȡ162~516~1914~16K P C+N D M(2株)肺炎克雷伯杆菌(1株)ȡ162~416~1814~15产酸克雷伯杆菌(1株)851514阴性菌株(5株)大肠杆菌(2株)ɤ0.25~0.50ɤ0.25~8.0015~2510~25阴沟克雷伯杆菌(1株)ɤ0.25ɤ0.2568肺炎克雷伯杆菌(1株)851617产酸克雷伯杆菌(1株)ɤ0.25ɤ0.252015表3不同试验方法敏感度㊁特异度等比较T a b l e3C o m p a r i s o no f s e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y o f d i f f e r e n t t e s tm e t h o d s(%)试验方法敏感度特异度阳性预测值阴性预测值N G-T e s tC A R B A5100.00100.00100.00100.00C a r b aN P93.94480.0096.8866.67m C I M96.97100.00100.00583.332.220株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌模拟血培养N G-T e s tC A R B A5㊁C a r b aN P法和m C I M实验结果测序结果表明,15株阳性,5株阴性㊂其中1株P C R扩增阴性的大肠杆菌C a r b a N P法和m C I M 法结果为阳性,其余菌株的表型检测结果均与基因测序结果一致㊂N G-T e s tC A R B A5敏感度和特异度均为100.0%,与基因测序结果一致性K a p p a值为1.000;C a r b aN P法和m C I M法的敏感度分别为87.50%㊁93.75%,特异度均为100%,与基因测序结果一致性K a p p a值分别为0.812㊁0.898(P<0.05)㊂见表4~5㊁图3㊂表420株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌N G-T e s t C A R B A5㊁C a r b aN P法和m C I M实验结果T a b l e4E x p e r i m e n t a l r e s u l t s o f20s t r a i n s o f c a r b a p e n e mr e s i s t a n t E n t e r o b a c t e r i a c e a eb y N G-T e s t C A R B A5,C a r b aN Pm e t h o da n dm C I M分组细菌种类模拟血培养:阳性菌株数/测试菌株数(例数,%) N G-T e s tC A R B A5C a r b aN P m C I M阳性菌株(15株)K P C(2株)肺炎克雷伯杆菌(2株)2(100)2(100)2(100) N D M(9株)大肠杆菌(4株)4(100)4(100)4(100)阴沟肠杆菌(4株)4(100)4(100)4(100)产酸克雷伯杆菌(1株)1(100)1(100)1(100) I M P(2株)产酸克雷伯杆菌(2株)2(100)2(100)2(100) K P C+N D M(2株)肺炎克雷伯杆菌(1株)1(100)1(100)1(100)产酸克雷伯杆菌(1株)1(100)1(100)1(100)阴性菌株(5株)大肠杆菌(2株)0(0)0(0)0(0)阴沟克雷伯杆菌(1株)0(0)0(0)0(0)肺炎克雷伯杆菌(1株)0(0)0(0)0(0)产酸克雷伯杆菌(1株)0(0)0(0)0(0)㊃7331㊃河北医科大学学报第44卷第11期表5不同试验方法敏感度㊁特异度等比较T a b l e5C o m p a r i s o no f s e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y o f d i f f e r e n t t e s tm e t h o d s(%)试验方法敏感度特异度阳性预测值阴性预测值N G-T e s tC A R B A5100.00100.00100.00100.00C a r b aN P87.50100.00100.0066.67m C I M93.75100.00100.0080.00图3P C R扩增电泳图(1㊁2㊁3㊁4㊁5㊁6㊁7㊁8泳道分别代表D N A标志物㊁K P C基因阳性肺炎克雷伯菌A T C C B A A-1705㊁K P C基因扩增阴性肺炎克雷伯菌A T C C B A A-1706㊁K P C和N D M基因扩增阳性肺炎克雷伯菌㊁K P C基因阳性产酸克雷伯菌㊁N D M扩增阳性阴沟肠杆菌㊁K P C基因阴性大肠杆菌㊁I M P基因扩增阳性产酸克雷伯菌)F i g u r e3P C R a m p l i f i c a t i o ne l e c t r o p h o r e s i sd i a g r a m(L a n e 1,2,3,4,5,6,7a n d8r e p r e s e n t D N Am a r k e r s,K P C g e n e p o s i t i v e K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e A T C C B A A-1705,K P C g e n e n e g a t i v e K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e A T C C B A A-1706,K P C a n d N D M g e n e p o s i t i v e K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e a n d K P C g e n e p o s i t i v e a c i d p r o d u c t i o n,K l e b s i e l l a,N D M a m p l i f i c a t i o n p o s i t i v eE n t e r o b a c t e rc l o a c a e,K P C g e n en e g a t i v eE s c h e r i c h i a c o l i,I M P g e n e a m p l i f i c a t i o n i n p o s i t i v eK l e b s i e l l a a c i d o g e n e s) 3讨论临床上对碳青霉烯酶进行迅速检测和鉴定对于预防和控制C P E所引起的多种感染具有重要临床意义,有利于有效切断院内传播和进一步感染[6-7]㊂我国耐药监测网监测数据显示,C P E比例高达97.4%,且其对碳青霉烯类抗生素药物美罗培南的耐药率已高达26.4%[8-9]㊂因此对C P E菌株以及碳青霉烯酶类型进行准确和快速检测,更有助于抗菌药物的合理选择和治疗㊂目前临床实验室开展了改良碳青霉烯灭活试验㊁C a r b aN P和m C I M等多种表型检测方法用于碳青霉烯酶检测[10]㊂C a r b a N P试验操作过程简单,一般在4~6h内可以得到阳性结果,但其检测O X A-48/-23等碳青霉烯酶的敏感度不是非常高,一般在73%~100%[11]㊂近年来,一些基于C a r b a N P试验的商品化试剂大大增加了便捷性,但对于O X A-48/-23型碳青霉烯酶的检测敏感度仍有待提高㊂研究报道m C I M检测碳青霉烯酶敏感度㊁特异度均超过90%[12],但m C I M的严重不足之处是临床试验周期长,且当产生金属β-内酰胺酶和丝氨酸酶菌株同时存在时,m C I M很容易得到假阴性结果[13]㊂有研究表明[14-15],N G-T e s tC A R B A5作为一种胶体金免疫层析法,其检测血培养阳性标本的敏感度可达95.8%~97.7%,特异度可达93.3%~ 96.1%,且一个N G-T e s tC A R B A5试剂盒即可快速检测K P C㊁O X A-48-l i k e㊁I M P㊁N D M和V I M等五种碳青霉烯酶,因此成为快速检测不同酶型碳青霉烯酶基因的关键手段㊂五种酶型作为肠杆菌目细菌中最为常见的碳青霉烯酶型,可有效区分金属β-内酰胺酶和丝氨酸β-内酰胺酶,非常有助于优化抗生素的管理过程,预防耐药现象蔓延,以及改善感染患者预后[16-17]㊂在本研究中,P C R测序检出有33株菌株携带有耐药基因,4株菌株未携带常见耐药基因㊂N G-T e s tC A R B A515m i n内检测到细菌碳青霉烯酶主要基因的敏感度和特异度均为100%㊂同时,测序结果表明,16株阳性,4株阴性㊂其中1株P C R扩增阴性的大肠杆菌C a r b aN P法和m C I M法结果为阳性,而N G-T e s tC A R B A5敏感度和特异度均为100.0%,与基因测序结果一致性K a p p a值为1.000;C a r b aN P法和m C I M法的敏感度分别为87.50%㊁93.75%,特异度均为100%,与前面文献报道结果类似[18]㊂因此N G-T e s tC A R B A5胶体金方法准确性高,操作简单,能快速进行酶型分型,非常有助于简化临床上的碳青霉烯酶检测常规工作流程,从而指导治疗方案优化和完善㊂本文检测菌株中仅涵盖了较为常见的几种青霉烯酶型,存在一定漏检其他碳青霉烯酶类型(如I M I㊁G I M等)可能㊂后续我们将继续收集产V I M型和O X A-48酶型的菌株,以㊃8331㊃河北医科大学学报第44卷第11期期进一步完善N G-T e s tC A R B A5胶体金方法检测碳青霉烯酶性能的全面评估㊂综上所述,N G-T e s tC A R B A5检测过程简单㊁高效,检测结果准确度高,大大简化了临床上检测碳青霉烯酶的复杂流程,适合于大范围初筛产碳青霉烯酶,有助于增强院内感染控制和及时指导临床治疗㊂[参考文献][1]周梦兰,杨启文,于淑颖,等.血流感染流行病学研究进展[J].中国感染与化疗杂志,2019,19(2):212-217.[2] T a mm aP D,A i t k e nS L,B o n o m oR A,e t a l.I n f e c t i o u s d i s e a s e ss o c i e t y o f A m e r i c a g u i d a n c eo nt h et r e a t m e n to fe x t e n d e d-s p e c t r u mβ-l a c t a m a s e p r o d u c i n g e n t e r o b a c t e r a l e s(E S B L-E),c a r b a p e n e m-R e s i s t a n t e n t e r o b a c t e r a l e s(C R E),a n dp s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a w i t h d i f f i c u l t-t o-t r e a t r e s i s t a n c e(D T R-P.a e r u g i n o s a)[J].C l i n I n f e c t D i s,2021,72(7):e169-e183.[3] L a s k o M J,G i l l C M,A s e m p a T E,e t a l.E D T A-m o d i f i e dc a r b a p e n e mi n a c t i v a t i o n m e t h o d(e C I M)f o rde t e c t i n g I M PM e t a l l o-β-l a c t a m a s e-p r o d u c i n g P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a:a na s s e s s m e n to fi n c r e a s i n g E D T A c o n c e n t r a t i o n s[J].B M CM i c r o b i o l,2020,20(1):220.[4] L i uJ,L i n X,B a iC,e ta l.V e r i f i c a t i o na n da p p l i c a t i o no fam o d i f i e d c a r b a p e n e m i n a c t i v a t i o n m e t h o d(m C I M)o nP s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a:a p o t e n t i a ls c r e e n i n g m e t h o d o l o g yo n c a r b a p e n e m a s e s p h e n o t y p e i n B a c i l l u s c e r e u s[J].B i o e n g i n e e r e d,2022,13(5):12088-12098.[5] Z h uY,J i aP,L iX,e ta l.C a r b a p e n e m a s ed e t e c t i o nb y N G-T e s t C A R B A5-a r a p i di mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c a s s a y i nc a r b a p e n e m-r e s i s t a n t E n t e r o b a c t e r a l e sd i a g n o s i s[J].A n nT r a n s lM e d,2021,9(9):769.[6] L iG,Y eZ,Z h a n g W,e ta l.R a p i dL C-M S/M Sd e t e c t i o no fd i f fe r e n tc a r b a p e n e m a 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m b i n a t i o no fm o d i f i e dc a r b a p e n e mi n a c t i v a t i o n m e t h o d(m C I M)a nd E D T A-C I M(e C I M)f o r p h e n o t y p i c d e t e c t i o no f c a r b a p e n e m a s e-p r o d u c i n gE n t e r o b a c t e r i a c e a e[J].B M C M i c r o b i o l,2020,20(1):315.[14] B e n-H a i m O,A z r a d M,S a l e hN,e t a l.E v a l u a t i o no f t h eN G-t e s t C A R B A5k i tf o r r a p i d d e t e c t i o n o f c a r b a p e n e m a s er e s i s t a n t e n t e r o b a c t e r i a c e a e[J].L a b M e d,2021,52(4):375-380.[15] R a t n a y a k e L,A n g H Z,O n g C H,e t a l.A n o p t i m i z e da l g o r i t h m w i t hi m p r o v e dt u r n a r o u n dt i m ef o rd e t e c t i o n o fc a r b a p e n e m a s e-p r od u c i n g E n te r o b a c t e r a l e s u s i n g t h e N GT e s tC A R B A5i na r o u t i n e l a b o r a t o r y[J].JM e d M i c r o b i o l, 2020,69(2):228-232.[16] T a mm aP D,A i t k e nS L,B o n o m oR A,e t a l.I n f e c t i o u s d i s e a s e ss o c i e t y o fa m e r i c a g u i d a n c eo nt h et r e a t m e n to f A m p Cβ-l a c t a m a s e-p r o d u c i n g e n t e r o b a c t e r a l e s,c a r b a p e n e m-r e s i s t a n ta c i n e t ob ac t e rb a u m a n n i i,a n ds t e n o t r o p h o m o n a s m a l t o p h i l i ai n f e c t i o n s[J].C l i n I n f e c tD i s,2022,74(12):2089-2114.[17]任艳丽,王云英,蒋敏,等.不同碳青霉烯酶酶型肠杆菌科细菌感染的治疗策略研究[J].中国抗生素杂志,2021,46(4): 339-345.[18]d eO l i v e i r aS a n t o s I C,d aC o n c e içāoN e t oO C,d aC o s t aB S,e ta l.E v a l u a t i o n o f p h e n o t y p i c d e t e c t i o n o f c a rb a p e n e m a s e-p r o d u c i n g P s e u d o m o n a s s p p.f r o mc l i n i c a l i s o l a t e s[J].B r a z JM i c r o b i o l,2023,54(1):135-141.(本文编辑:刘斯静)㊃9331㊃薛云等 N G-T e s tC A R B A5在血培养肠杆菌科细菌碳青霉烯酶检测中的优势及其检测效能。

产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南(试行版)产NDM—1(New Delhi Metallo—β一lactamase 1，I型新德里金属β一内酰胺酶)泛耐药肠杆菌科细菌(以下简称产NDM一1细菌)是新近报道的泛耐药细菌，由于其广泛耐药性导致感染治疗十分困难。

为指导临床正确认识与诊疗这类细菌感染，特制定本指南。

一、病原与流行情况细菌产生能水解β一内酰胺类抗菌药物的β一内酰胺酶，是细菌对β一内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制。

临床分离细菌大多能产生β一内酰胺酶，已经确定的β一内酰胺酶有数百种；各种酶分子结构和对β一内酰胺类水解能力存在较大差异，一般根据分子结构分为A、B、C、D四大类，其中B类酶在其活性部位结合有锌离子，因此又称为金属β一内酰胺酶。

其水解底物包括青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类等，表现为产酶细菌对这些药物广泛耐药。

金属β一内酰胺酶首先在铜绿假单胞菌、不动杆菌中发现。

近年来，在肠秆菌科细菌，如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等中也有发现。

迄今为止已经确定的金属β一内酰胺酶除NDM一1外，还包括IMP、VIM、GIM、SIM、SPM等型别。

最早报道的产NDM一1细菌为肺炎克雷伯菌，于2008年在一位印度裔瑞典尿路感染患者中发现，对所有β—内酰胺类抗菌药物耐药，对环丙沙星也不敏感，仅对粘菌素敏感，深入研究发现这株细菌携带一种新型金属β一内酰胺酶，并根据患者可能感染地点命名这种酶为NDM一1。

其后还在这名患者粪便中分离到产NDM一1的大肠埃希菌。

根据上述研究结果，英国、印度等国研究人员在印度、巴基斯坦、英国等开展了较大范围的流行病学调查，产NDM一1肠杆菌科细菌占所检测细菌的1.2％一13％，主要菌种为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，其它细菌还有阴沟肠杆菌、变形杆菌、弗劳地枸橼酸菌、产酸克雷伯菌、摩根摩根菌、普罗威登菌等；这些细菌主要引起尿路、血流、伤口、肺部和导管相关感染等。

在美国、加拿大、日本、韩国、澳大利亚、比利时以及我国香港地区等都已经有感染病例报道。

医疗器械产品技术要求编号：碳青霉烯酶检测试剂盒（胶体金免疫层析法）1. 产品型号/规格及其划分说明1.1 产品规格：A型（三型卡）：25人份/盒；B型（五型卡）：25人份/盒。

1.2 划分说明：A型（三型卡）：试剂盒内装有25个检测卡，每盒总测试人份为25人份；B型（五型卡）：试剂盒内装有50个检测卡，每盒总测试人份为25人份。

1.3 适用范围用于体外定性检测来源于人体样本中的细菌经培养后产生的KPC、NDM、IMP、VIM、OXA-48型碳青霉烯酶。

2.性能指标2.1 外观整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；盒上印刷的标识以及瓶签、袋签上的字迹清晰完整，易识别。

2.2 膜条宽度膜条宽度不低于2.5mm。

2.3 液体移行速度液体移行速度不低于10mm/min。

2.4 装量液体试剂装量应不小于标示量。

2.5 阳性参考品符合率用企业阳性参考品检测，结果应均为阳性。

2.6 阴性参考品符合率用企业阴性参考品检测，结果应均为阴性。

2.7 最低检测限本产品的KPC型最低检测限为0.5ng/ml，NDM型最低检测限为0.15ng/ml，IMP型最低检测限为0.2ng/ml。

VIM型最低检测限为0.3ng/ml，OXA-48型最低检测限为0.1ng/ml。

2.8 重复性用企业参考品进行检测，反应结果应一致，显色均一，均为阳性。

2.9 质控品2.9.1 预期结果试剂盒检测质控品，反应结果应一致，显色均一，均为阳性。

2.9.2 质控品批内瓶间差试剂盒检测同一批次质控品，反应结果应一致，显色均一，均为阳性。

2.10 批间差取3个批号的产品检测卡1各10个，检测卡2各10个检测企业参考品，反应结果应一致，均为阳性。

2.11 稳定性2.11.1 效期稳定性试剂盒按要求在2℃～30℃放置，有效期24个月，取过效期的试剂盒进行检测，各项指标仍符合2.5～2.9的要求。

2.11.2 质控品复溶稳定性试剂盒质控品复溶后，在2℃～8℃放置14天后，检测结果均为阳性。