ABC法亲和素与生物素系统的操作流程

蛋白质浓度是指在给定体积的溶液中所含有的蛋白质的量。

常用的蛋白质浓度测定方法包括比色法、生物素-亲和法和BCA法等。

1.比色法:
●原理：利用蛋白质与某种化学试剂发生反应后产生颜色，并通过测量溶液的吸光度
来推算蛋白质浓度。

常用的试剂有布拉德福德试剂、劳氏试剂和二酰肼试剂等。

●步骤：将待测样品与试剂混合后，在特定波长下测量吸光度，然后通过标准曲线或
计算公式来确定蛋白质浓度。

2.生物素-亲和法:
●原理：利用生物素-亲和素相互作用原理，通过检测生物素与亲和素的结合程度来
测定蛋白质浓度。

生物素可以与亲和素（如珠蛋白素）非常稳定地结合，并且该结
合可以被检测方法所测量。

●步骤：将待测样品中的蛋白质与生物素标记的亲和素结合，经过洗涤去除未结合物
质后，使用特定方法（如酶联免疫吸附法）测量结合的生物素含量，并通过标准曲
线或计算公式来确定蛋白质浓度。

3.BCA法（双硫键还原法）:
●原理：利用蛋白质中的还原性氨基酸（如半胱氨酸）与BCA试剂发生反应，在碱
性条件下生成紫色络合物，可以通过测量溶液的吸光度来推算蛋白质浓度。

●步骤：将待测样品与BCA试剂混合后，在适当温度下反应一段时间，然后通过测
量吸光度来确定蛋白质浓度，一般使用分光光度计进行测量。

这些方法都有其优缺点和适用范围，在选择蛋白质浓度测定方法时应根据实验目的和条件综合考虑。

主管检验师资格考试临床免疫学和免疫检验复习习题第十一章生物素-亲和素放大技术（附答案解析）一、A1型题1、每个亲和素能结合生物素分子的数目是（）A、4B、2C、1D、3E、82、以下关于生物素-亲和素系统（BAS）的说法错误的是（）A、1个亲和素分子可结合4个生物素分子B、1个生物素分子可以结合多个亲和素分子C、生物素易与抗体、酶、多聚核苷酸结合D、亲和素易与酶、铁蛋白、荧光素、核素结合E、亲和素和生物素.有极强的亲和力3、免疫组化技术的优点不包括（）A、高特异性B、高敏感性C、形态学的直观性D、精确定量分析E、能对抗原表达情况进行分析4、BAS在ELISA技术中应用最广泛的反应模式是（）A、ABAB、ABCC、BRABD、BAE、LAB5、免疫组化染色前，对标本进行固定的目的是（）A、保存组织细胞的抗原性B、防止细胞脱落C、防止细胞自溶D、终止胞内酶的活性E、使细胞内蛋白质凝固6、ABC-ELISA将酶标记在（）A、亲和素B、生物素C、抗体D、补体E、抗原7、关于亲和素-生物素系统的错误描述是（）A、用于间接包被B、用于终反应放大C、用于酶免疫测定D、用于胶体金测定E、不用于荧光免疫测定8、ABC-ELISA将酶标记在（）A、亲和素B、生物素C、抗体D、补体E、抗原9、关于生物素标记蛋白质的注意事项，下列说法错误的是（）A、根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类以及分子的理化性质，选择相应的活化生物素和反应条件B、活化生物素与待标记抗原或抗体可以为任意比例C、在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构可减少空间位阻影响D、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性E、生物素标记酶时会影响其免疫活性10、亲和素和生物素结合的特点是（）A、免疫反应B、不属于免疫反应C、特异性弱D、亲和力小E、不够稳定二、B型题1、 A.ABCBC.BABD.直接法BASE.间接法BAS<1> 、标记亲和素-生物素的方法为（）；<2> 、亲和素-生物素化酶复合物技术为（）；<3> 、生物素化第二抗体为（）；<4> 、生物素化第一抗体为（）。

abc elisa原理ABC ELISA原理ABC ELISA（Avidin-Biotin Complex Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的酶联免疫吸附实验方法，用于检测特定抗原或抗体的存在。

该方法利用亲合性较高的生物素与亲合性较高的亲和素（例如抗体）结合，形成稳定的复合物，从而实现对目标分子的检测。

ABC ELISA的原理是基于酶标记的间接免疫法。

在实验中，首先将待测样品加入到酶标板孔中，使目标抗原或抗体与酶标抗体结合。

然后，通过一系列洗涤步骤去除未结合的物质，以减少背景信号的干扰。

接下来，加入生物素标记的二抗（biotinylated secondary antibody）。

生物素与亲和素（例如亲和素化酶标抗体）结合，形成稳定的复合物。

这样，目标分子就被生物素标记，便于后续的检测。

随后，加入辣根过氧化物酶标记的亲和素（例如辣根过氧化物酶标记的亲和素化酶标抗体）。

辣根过氧化物酶（HRP）能够与生物素结合，在酶标抗体的作用下，HRP会与基质反应产生显色产物。

加入底物溶液，通过底物与HRP的反应，产生可见的颜色变化。

根据颜色的强度可以判断样品中目标抗原或抗体的含量或活性。

ABC ELISA方法具有高灵敏度、高特异性和较低的背景信号，被广泛应用于医学、生物学和生物化学等领域。

它可以用于检测血清中的抗体水平、病毒或细菌感染的诊断以及药物研发等。

然而，ABC ELISA方法也存在一些限制。

首先，该方法需要多个步骤和试剂，操作较为繁琐，需要一定的实验技术。

其次，由于标记物的加入，可能会影响目标分子的结构和活性，造成检测结果的偏差。

此外，该方法对样品的处理和存储条件要求较高，以避免样品中其他物质的干扰。

ABC ELISA是一种常用的酶联免疫吸附实验方法，通过亲合素的结合和酶标记的作用，实现对特定抗原或抗体的检测。

该方法具有高灵敏度和高特异性，被广泛应用于生命科学研究和临床诊断中。

生物素-亲和素系统ELISA法是一种基于生物素和亲和素之间高度特异性和高亲和力的免疫检测方法。

这种方法利用生物素和亲和素之间的结合反应，将抗原或抗体与生物素结合，再通过亲和素与生物素之间的结合反应，将抗原或抗体固定在固相载体上。

在ELISA中，生物素-亲和素系统可以用于提高检测的灵敏度和特异性。

首先，亲和素与生物素之间的结合反应非常稳定，可以减少非特异性结合，提高检测的特异性。

其次，每个亲和素可以结合4个生物素，使得反应信号放大，提高检测的灵敏度。

生物素-亲和素系统在ELISA中的应用有多种形式，包括用于固相化抗体或抗原的制备、用于ELISA终反应的放大等。

在固相化抗体或抗原的制备中，先将亲和素（或链霉亲和素）包被于固相载体，抗体或抗原也先与生物素结合，然后通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗原固相化。

在ELISA终反应的放大中，用生物素化的抗体替代常规ELISA中的酶标抗体，然后连接亲和素-酶结合物（BA-ELISA）、或亲和素及酶标生物京（BAB-ELISA）或ABC试剂（ABC-ELISA），从而使反应信号放大，提高检测灵敏度。

总之，生物素-亲和素系统ELISA法是一种灵敏度高、特异性好的免疫检测方法，可以用于各种抗原或抗体的检测。

亲和素与生物素系统的基本原理1979年，Guesdon及其同事首先将生物素—亲和素应用于免疫组化技术中，并成功地建立了标记亲和素—生物素技术(LAB)和桥亲和素—生物素技术(BAB)。

1981年，Hsu在LAB法和BAB法的基础上，先后建立了生物素—亲和素间接法及ABC法。

近年来，由于双重免疫组化标记技术的发展，除ABC-HRP试剂外，还制成了ABC-AKP和ABC-GOD试剂，进而发展了ABC-AKP等技术。

同时人们又对ABC法进行改进，相继出现了快速ABC法、二步ABC法、PAP和ABC连用等技术。

随着链霉亲和素(streptavidin)的应用又出现了LSAB、S-P、SABC等方法。

1．标记亲和素—生物素法(1abeledavidinbiotin，LAB)将亲和素与标记酶(HRP)结合，一个亲和素可结合多个HRP；将生物素与抗体(一抗或二抗)结合，一个抗体分子可连接多个生物素分子，抗体的活性不受影响。

细胞的抗原(或通过一抗)先与生物素化的抗体结合，继而将酶标记亲和素结合在抗体的生物素上，如此多层放大提高了检测抗原的敏感性。

2．桥接亲和素—生物素法(bridgedavidinbiotin，BAB)先使抗原与生物素化的抗体结合，再以游离亲和素为“桥”物素连接，也可达到多层放大效果。

将生物素化抗体与酶标记生3．亲和素—生物素—过氧化物酶复合物法(avidin-biotin-peroxidasecomplex，ABC)此方法为前两种方法的改进，即先按一定比例将亲和素与酶标生物素(或称生物素化酶)结合，形成亲和素—生物素—过氧化物酶复合物(ABC复合物)。

抗原先后与特异性一抗、生物素化二抗、ABC复合物(此ABC复合物不能饱和，即亲和素上的4个结合位点最多允许3个位点与生物素化酶结合，留1～2个位点与生物素化二抗结合)结合，最终形成巨大复合体。

因该复合体网络了大量酶分子，从而提高了检测的灵敏度。